糖化酶发酵、提取及活力测定

SHANDONGＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ

发酵工艺学实验报告

糖化酶发酵、提取及活力测定实验

学院：生命科学学院

专业班级：生物工程1602

项目组成员：刘松良、张金中、蔡超、何建雨、周钻钻

指导教师：王丽娟

2018年6月

糖化酶发酵、提取及活力测定实验

何健雨王丽娟

生命科学学院生工1602班

1. 实验目的

(1)了解黑曲霉生长特性,学习糖化酶发酵工艺；

(2)了解黑曲霉生长特性,学习糖化酶发酵工艺。

(3)学习并掌握糖化酶活力测定方法

2. 实验原理

葡萄糖淀粉酶( glucoamylase,EC.3.3.13)系统名为淀粉a-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶,俗称糖化酶,是国内酶制剂中产量最大的品种。糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原性末端切开a-1,4键,也能切开a-1,3键和a-1,6键,生成葡萄糖。

生产糖化酶常用的菌种是黑曲霉,将活化好的黑曲霉制成孢子悬浮液,转接接到三角瓶直接进行发酵,或转接到三角瓶作为种子,进行一次扩大培养后,再转接到发酵罐进行糖化酶发酵。

黑曲霉糖化酶是一种胞外酶。首先采用过滤法将菌体等杂质除去,继而对滤液进行浓缩,最后用有机溶剂如乙醇将酶沉淀出来,对沉淀物进行干燥,加工成成品。

糖化酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解a-1,4键,生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有的醛基能被次碘酸钠氧化,过量的次碘酸钠钠,酸化后析出碘,再用硫代硫酸钠标准溶液标定,计算酶活力。

酶活力定义:1g固体酶粉(或1mL液体酶),于559CpH4.6的条件下,1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖,即为一个酶活力单位,以U/mL(U/g)表示。

3. 实验材料

优质大麦芽粉、大米粉、酒花；耐高温-α淀粉酶、糖化酶；乳酸（磷酸）；

0.025 mol/L碘液；温度计（100℃）、恒温水浴锅、糖度计、布氏漏斗、分析天平、纱布、玻璃仪器。

4. 方法步骤

待测酶液的制备:

称取酶粉1-2g,精确至0.0002g,先用少量的乙酸缓

冲液溶解,并用玻璃棒捣研,将上请液小心倾入容量瓶

中。沉渣部分再加入少量缓冲液,如此捣研3-4次,最后

全部移入容量瓶中,用缓冲液定容至刻度(估计酶活力

在100-250U/mL范围内),摇摇匀。通过4层纱布过滤滤,滤液供测定用。

4. 实验结果

发酵液

110 干酶泥0.03

上清

发酵液上清干酶泥

A 5.3 6.9

B 3.7 6.0

酶活92.84 52.1

5.结论与讨论

结论：干酶泥所需剂量普遍高于发酵液上清，干酶泥酶活更高。

讨论：实验过程中PH调节无法做到精准，可能会造成误差。

实验总结（含实验体会、关键步骤、注意事项等）

实验体会：通过本次实验，了解了糖化酶发酵、提取及活力测定的方法；关键步骤：鲜酶泥一定要完全转移，不可有浪费，否则会导致测量不准注意事项：将鲜酶泥转移到称量纸上进行干燥,勿用滤纸,滤纸会吸附