实验4 补体结合反应、血清总补体活性测定(CH50法)

取上述混悬液0.1毫升加pH7.4巴比妥缓冲液 0.5毫升，与标本同置37℃ 30min。
结果判断及意义
将50%溶血标准管与各稀释度试管用肉眼比色， 颜色与标准管相同者即为终点。
此管的稀释度乘以5即是标本的每毫升补体含 量。
血清总补体量的正常值为80-160单位/毫升。 正常人血清中的总补体量保持一定范围，补体
CH50法原理
被检血清及各种试剂稀释法
管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
pH7.4 巴比妥缓冲
液(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
病人血清(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃 0.2
血清稀释度
溶血素（ml）
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
5%SRBC（ml）
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
置37℃水浴, 30min
50%溶血标准管的配制：
取5%羊红细胞1毫升，1000转/分离心10分钟， 弃去上清，加入蒸馏水0.5毫升溶解后加入 1.8%NaCl 0.5毫升，充分混匀后再加5%羊红细 胞悬液1毫升，充分混匀。
胞
抗原/抗体
体
溶血素
溶血反应 阳性
2、抗原抗体反应
抗原 补 体
抗体
红细胞 溶血素
阴性
补体结合试验 阴性
阳性
补体结合试验原理
补体 待检系统
指示系统
补体结合试验原理（结果阳性）
补体消耗
待检系统
指示系统（不溶血）
补体结合试验原理（结果阴性）
补体未消耗
待检系统
指示系统（溶血）
•液体混浊呈浅红色为不溶血，液体透明呈红色为溶血。 •第2、3、4管为对照管应溶血，第5管为SRBC对照不应溶血。 •凡第1管红细胞发生溶血者为补体结合反应阴性，而不溶血 者为阳性。
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补体结合试验原理:
是根据抗原和抗体反应所形成的复合物吸附并激活 补体的原理所设计的一种血清学反应。
有5种成分参与，分属于3个系统： ①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗 体（或抗原） ②补体系统 ③指示系统，即SRBC与相应溶血素。
补体结合试验原理
受检系统
指示系统
1、仅有抗原或抗体
红
细
补
1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512
pH7.4 巴比妥缓冲
液(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
血清最后稀释度 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512 1∶1024
实验内容
补体结合反应:结果观察 血清总补体活性测定(CH50法):每人操作
补体参与的反应
补体参与的反应
溶血反应 补体结合反应 血清总补体活性测定(CH50法)
溶血反应
RBC
+
抗RBC抗体 (溶血素) 新鲜血清
溶血
补体结合试验
（complement fixation test,CFT)
量的变化可为某些变态反应性疾病与补体缺陷 病的诊断与预后提供依据。
实验报告要求
补体结合实验 原理、结果观察、结论
CH50法 原理、材料、方法、结果、讨论
血清总补体活性测定 (CH50法)
掌握50%补体溶血试验的原理、方 法、结果判定及临床意义。熟悉 血清补体含量的计算。
CH50法原理
绵羊红细胞与溶血素，在新鲜血清中补体的 作用下，绵羊红细胞可被溶解，产生溶血现 象。
溶血程度与血清中补体量相关，呈一弧形曲 线，但在50%溶血（CH50）附近时，溶血度 与补体量之间呈线性关系，故以50%溶血作 为终点观察指数最为敏感。