(整理)2006年生物化学.

2006年生物化学

1.举5例说明绿色荧光蛋白在生物化学研究中的应用

1活细胞内基因表达与蛋白质-蛋白质相互作用的光学成像与可视化（基于GFP的荧光共振能量转移，信号传导过程）

2小动物体内恶性肿瘤生长过程及药物作用效果的实时光学成像检查，（荧光探针，找出与已知蛋白的配体分子及药物。

3制备融合抗体，具有免疫原性和发射荧光两种特性。

4构建分子感受器的有力工具，这种GFP感受器能被用来检测多种分子

5研究活体细胞的蛋白变他过程，细胞器动力学和内膜运输（动态跟踪，微管的变化，定位在细胞器）

6.GFP基因在生物防治中的应用，评价杀虫剂的毒力。

7GFP 的示踪特性，研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细胞浸润的关系，即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。

8.在微生物学中的应用（与宿主的相互作用，生物膜。基因表达，生物降解，定位等）

2.请说明真核生物中逆转座子的结构特征和生物学意义

通过DNA转录为RNA后，再经逆转录称为cDNA并插入到基因组的新位点上的移动因子。

3.某一蛋白样品在SDS-PAGE上经靠马斯亮蓝染色呈现单一的条带。是否可以认为此蛋白样品只包含一种蛋白？如何进一步鉴定这个蛋白的纯度

不能认为是单一蛋白，SDS-PAGE上仅仅代表的是分子大小一直的条带，可以进行双向电泳（two-dimensional electrophoresis）。它是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，

蛋白质粗制品的获得

选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：等电点沉淀法，盐析法，有机溶剂沉淀法，

样品的进一步分离纯化

用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。

4.简述免疫共沉淀的原理及应用

定义：用抗体将相应特定分子沉淀的同时，与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。

原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

应用：1.信号转导，确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法

2.肿瘤异质性(肿瘤细胞在生长过程中，经过许多代分裂繁殖产生的子细胞，呈现不同的基因改变或其他大分子的改变)的蛋白质分子机制

5.转基因食品渐渐地被摆上餐桌，请根据你的生化知识谈一谈你对转基因食品安全性的认识

实质等同原则。

6.请详细说明真核生物基因表达在不同水平上的调节机制

7.中国科学家2005年在生命科学研究领域获得了大丰收，在

CELL、Science、Nature上发表了多篇原创性文章。请说出其中两篇的主要内容和主要作者或主要作者单位。

2007年生物化学

一、名词解释

1.Alternative Splicing

2.Nonsense mediated decay

3.RNA editing

4.mircoRNA

5.small interfering RNA（siRNA）

二、简述真核生物中分泌型蛋白的转运途径级主要的生理功能

三、请说明真核生物中转座子的两大类型、各自的转座方式及

生物学意义

转座元件是基因组中可移动的DNA分子，分为反转录转座子和DNA转座子两类，

Dna转座子是一段能直接在基因组上移动的DNA序列,它的转座利用切除/修复机制，不会引起宿主基因组的增大。

反转录转座子不同于dna转座子,是以DNA-RNA-DNA的途径来实现转座,在整合酶的作用下新生成的DNA状态的反转录转座子整合到宿主基因组中.这样,反转录转座子在宿主基因组中的拷贝数得到不断积累,从而使基因组增大.根据是否具有编码反转录酶的能力,反转录转座子又分为长末端重复序列(LTR)反转录转座子和非LTR反转录转座子两个亚类,

而DNA转座子分为自主元件、非自主元件和微型反向重复转座元件(MITE)三种类型，都具有两个末端反向重复序列。

生物学意义：目前转座子元件是植物分子生物学操作和植物基因工程中分离

克隆基因和研究基因功能最有力的工具之一，其中的一大类—反转录转座子具有分布广、异源转座高和受组织培养诱导激活等优势，因此它的发现和利用又为转座子标签的应用提供了更广阔的前景。（不了解基因产物的生化性质和表达模式的情况下，分离克隆植物基因，即转座子标签(transposon tagging)），此外通过对现有转座元件的改造以及转座元件作为载体改造的工具，也将大大加速植物基因和功能序列的分离与研究，如利用转座子元件构建启动子捕捉载体，效率比T-DNA标签高

四、简述免疫共沉淀及酵母双杂交实验的原理及个自己的优缺

点

免疫共沉淀优点

（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；

（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；

（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

免疫共沉淀缺点

（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；

（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；

（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。

酵母双杂优点：⑴作用信号是在融合基因表达后，在细胞内重建转录因子的作用而给出的，省去了纯化蛋白质的繁琐步骤。⑵检测在活细胞内进行，可以在一定程度上代表细胞内的真实情况。⑶检测的结果可以是基因表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用。⑷酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，能分析细胞浆、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能的蛋白。

酵母缺点：。⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。另外有些蛋白的正确折叠和功能有赖于其他非酵母蛋白的辅助，这限制了