(优选)实验五培养基的使用特点和微生物接种方法

2. 富集培养
富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生 理条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特 定微生物的需要。
常用的选择培养基
S.S琼脂（沙门氏菌、志贺氏菌分离用培养基）
组成成分：乳糖、胆盐、柠檬酸铁、柠檬酸纳、煌绿、 中性红、硫代硫酸钠等，强选择性抑制大肠杆菌，分 离沙门菌 煌绿、胆盐、柠檬酸纳抑制非肠道菌 大肠杆菌分解乳糖而产酸，使胆盐析出，菌落中 心浑浊呈深红色，柠檬酸铁可使产生硫化氢的菌 落呈黑色 硫代硫酸钠缓和胆盐对沙门氏菌的有害作用，中 和煌绿、中性红的毒性，使大肠杆菌的红色菌落 更加鲜艳
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
一、用固体培养基分离纯培养
使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：
1、稀释倒平板法 2、涂布平板法 3、平板划线法 4、厌氧微生物的分离
2、涂布平板法
一、用固体培养基分离纯培养
使用较多的常规 方法，但有时涂 布不均匀！
1、稀释倒平板法
操作较麻烦，对 好氧菌、热敏感 菌效果不好！
常用的选择培养基
麦康凯培养基
乳糖、胆盐，弱选择性，中性红,分离肠道致病菌 中性红指示剂 pH感应范围6.8（红色）到8.0（黄色） 分解乳糖产酸，菌落颜色呈红色 沙门氏菌、志贺氏菌不分解乳糖，菌落颜色与培养基相
同 胆盐有助于沙门氏菌的生长，抑制其他细菌
常用的选择培养基
沙门菌常用的培养基： 亚硫酸铋琼脂平板(BS): 含有煌绿、柠檬酸铋铵、亚硫酸钠、硫酸亚铁， 具有强选择性，分离沙门氏菌 HE（Heetoen)： 柠檬酸铁铵、去氧胆酸盐、硫代硫酸钠、麝香 草酚蓝和复红，分离肠道致病菌
三糖铁琼脂或克氏双糖铁
三糖铁琼脂含有乳糖、蔗糖、和葡萄糖，蔗糖：区别普
通变形杆菌（＋）、沙门氏菌（-）
克氏双糖铁成分 蛋白胨； 牛肉膏 ； 酵母膏 ；乳糖 ；
葡萄糖； 氯化钠 ； 柠檬酸铁铵 ；硫代硫酸钠 ； 琼脂 ； 酚红为指示剂，黄色为产酸，红色为产碱
观察克氏双糖接种后斜面、底层产酸、产气、产H2S的情 况，通常大肠杆菌斜面不产酸、底层产酸产气、不产H2S
微生物大小测量原理（P48）
微生物细胞的大小是其形态特征之一，也是鉴定的依据之一。 在研究工作中有时要测定显微镜下微生物细胞的大小，使用 工具为显微测微尺。
显微测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺。目镜测微尺是一块 可放在目镜内的园形玻片。在玻片中央把5mm长度，刻成 100等分的小格，其目镜测微尺经过镜筒光学系统后，其每格 尺寸随镜筒长度变化而变化，也随放大倍数而变化，因此必 须选定显微镜及放大倍数。然后用已知长度的镜台测微尺来 校准，计算出物镜下接目测微尺每小格的长度。然后才可用 接目测微尺直接测量标本的长度和宽度。镜台测微尺是一中 央部分刻有精确等分线的载玻片，其每格长度为10um，是专 用于校正目镜测微尺每格长度的。
利用L棒进行涂布
3、平板划线法
3、平板划线法
一、用固体培养基分离纯培养
4、厌氧微生物的分离
厌氧罐
厌氧手套箱
二、选择培养分离
对微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化
抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生长更快；
没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切生物 生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。
菌苔（lawn）
无菌操作： 火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行
物（成
进形的
行 分 类 、 鉴 定 的
状 、 颜 色 等 ） ，
菌 落 或 菌 苔 一 般
不 同 微 生 物 在 特
重 要 依 据
可 以 成 为
都 具 有 稳
定 培 养 基
对 该 微 生
定 的 特 征
上 生 长 形
菌落的描述：形态、表面和边缘特征
三、选择培养分离
1. 利用选择平板进行直接分离
高温下培养：分离嗜热细菌； 培养基中不含N：分离固氮菌； 培养基加抗生素：分离抗性菌；
待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制
1. 利用选择平板进行直接分离
牛奶平板：分离蛋白酶产生菌； 颜色反应：分离特定的菌株；
待分离的微生物的生长特 征明显不同于其它微生物
操作步骤
1，先将目镜测微尺装入目镜中，方法是：先拨出目镜，旋 下目镜上的透镜，然后将目镜测微尺的刻度朝下，旋好目 透镜，并装上镜筒。
2，将镜台测微尺放在载物台上，刻度朝上，观察。 3，先低倍再高倍观察，旋转目镜测微尺，使其刻度与镜台
测微尺刻度线平行。移动载物台推动器使目镜测微尺的0点 与镜台测微尺的一条刻度线重合，然后于另一端找重合线， 计算两端重合线之间目镜测微尺和镜台测微尺各有几格， 重复三次，按公式计算出目镜测微尺每格实际长度。 目镜测微尺每格长度（微米）=（镜台测微尺两重合线格数 ×10 ） /目镜测微尺两重合线格数 4，取出镜台测微尺，取酵母菌悬浮液1滴于载玻片上，盖 上盖玻片，放在载物台上，进行测量菌体的大小（测20个 菌体，求平均值）。
液体培养基； 培养基： 固体培养基； 1.5%-2.5%
半固体培养基； 0.2%-0.7ຫໍສະໝຸດ Baidu%
琼脂
一、用固体培养基分离纯培养
菌落（colony）： 单个（或聚集在一起的一团）微生 物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定 程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞 生长群体
众多菌落连成一片
今天的实验
菌种：大肠杆菌、沙门菌、青霉 采用无菌操作进行移植 学会分区划线 所有平皿和试管必须有标记 18－24小时（真菌下周观察）观察试验结
果，描述固体培养和液体培养的细菌培养 特征
步骤
两个人为一组，一个接种大肠杆菌，一个 接种沙门菌
LB液体移植 普通琼脂：分区划线 麦康凯：分区划线 半固体：穿刺 克氏双糖：先穿刺后接种斜面
（优选）实验五培养基的使用 特点和微生物接种方法
微生物培养
Culture：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体 混合培养物：含有多种微生物的培养物； 纯培养物： 只有一种微生物的培养物；
Pure culture 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果
纯培养技术是进行微生物学研究的基础！
一、用固体培养基分离纯培养