疟原虫、检查
疟原虫的显微镜检查
疟疾（Malaria）•系世界六大热带病和我国五大寄生虫病之一，危害极大，非洲每年约100万儿童死于疟疾•疟疾主要分布于热带、亚热带各国，我国的华南、华中(特别是云南和海南)•疟原虫属原生动物亚界--顶复门--孢子纲--疟原虫属•寄生人类的疟原虫有：间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等•疟原虫通过蚊叮咬而感染人，疟疾的典型临床表现是周期性寒战、发热和出汗•疟疾诊断主要靠外周血涂片检查•用磷酸氯喹及磷酸伯氨喹治疗，对于抗氯喹虫株则宜用青蒿素类药物、或与奎宁、咯萘啶、磺胺多辛和乙胺嘧啶等联合用药疟疾的临床症状临床表现•周期性：冷（1-2h)à热(4-6h) à汗。
实际上发作周期多不典型，尤其是儿童、初发时和进入疟区的初患病例•冷：全身颤拦、皮肤鸡皮样、面色苍白，口唇与指甲发紫等；夏天盖几层棉被也不暖•热：面色绯红、皮肤灼热、体温39-40℃可伴头痛\全身酸痛,小儿或严重成人可发生惊厥、谵亡或昏迷•汗：大汗淋漓、体温急降，乏力•贫血：发作次数越多、病程越长贫血越严重。
•脾肿大、硬化：脾切面颜色变深；大可达脐下；重量可达500至1000g.慢性患者脾纤维化，包膜增厚而变硬原因•发作周期和红内期裂体增殖周期一致。
•疟原虫代谢产物(外源性热原质)和裂殖子、残余和变性血红蛋白、红细胞碎片被吞噬细胞吞食而产生内源性热原质•疟原虫对红细胞的直接破坏•脾巨噬细胞吞噬红细胞•骨髓造血受抑制•免疫病理（正常抗疟抗体+红细胞自身抗体）疟原虫的生活周期生活史中的关注点：1.感染阶段：子孢子2.感染方式：蚊虫叮咬和输血3.致病阶段：红内期原虫4.寄生部位：肝、红细胞5.媒介：蚊(为终宿主）6.诊断阶段：红内期原虫疟疾的实验诊断病原检查:1. 血涂片染色取外周血制成厚、薄血膜，经吉氏或瑞氏液染色镜检2. 采血时间•恶性疟：发作时、查环状体，发作数小时后因晚期滋养体寄生虫的红细胞滞留下皮下脂肪及内脏微血管中，不易查见。
疟原虫检验技术
疟原虫检验技术
血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别 的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重 要部分，血涂片制作和染色的好坏足以影 响检查的结果，必须把握好“三关”。
疟原虫检验技术
一、玻片清洁
玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕， 无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落， 薄血膜涂布不均匀。在用手指持玻片时，只 能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表 面，以避免手指上的油污染玻片。
• 6.6 37
63
900
• 6.8 49
51
900
• 7.0 63
37
900
• 7.2 73
27
900
• 7.4 81
19
900
• 在无条件的地方，此时也可用当地的饮用水煮沸过
滤后试染，试染结果如淋巴细胞的胞浆呈兰色红血
球染色不很兰就可使用。
疟原虫检验技术
3.染色步骤：
①固定：用吉氏染液染色须先将薄血膜用甲醇或无水酒精固 定。滴于薄血膜上，也可用玻棒沾取甲醇涂在薄血膜上， 避免甲醇流至厚血膜，误将其固定，可用蜡笔划一条线， 或者是斜放玻片，玻片上的甲醇蒸发干后即可染色。
中。 • 中：薄血膜中，厚血膜好或中。 • 差：薄血膜差，或厚薄血膜均差。
疟原虫检验技术
• 2.血片制作和染色合格率要求：分别以血片 制作、染色和清洁度的好、中、差合并计 算合格率。
• (1)血片制作合格率应在85%以上。 • (2)染色合格率应在85%以上。 • (3)清洁度合格率应在80%以上。
稍冷后，将洁干毛巾擦净后待用。
疟原虫检验技术
②清洁液浸泡法：
清洁液配制如下： • 重铬酸钾 80g • 浓硫酸 100ml • 水(清净水)1000ml
疟疾的检查与诊断
疟疾的检查与诊断病原学检查确诊疟疾最可靠的依据是从受检者的外周血中检出疟原虫。
厚、薄血膜染色镜检是目前最常用的方法。
在高度怀疑疟疾时，如果血液涂片为阴性，应当重复涂片镜检。
血液涂片的染色常使用Giemsa染液、Field染液或其他Romanowsky染色劑。
镜检疟原虫时应当同时对厚血涂片和薄血涂片进行检查。
薄血涂片应迅速风干，用无水甲醇固定后染色，然后在油镜（放大1000倍）下检查膜尾红细胞，以每1000个红细胞的寄生红细胞个数表示。
厚血涂片很可能会不均匀，涂片时应充分干燥和染色，不得固定。
计数寄生虫和白细胞（至少200个），并根据总白细胞数目计算单位体积内的寄生虫数目。
在判断厚血涂片为阴性前，应在油镜下检查100～200个区域。
薄血涂片和厚血涂片有着各自的优点和缺点。
薄血涂片中疟原虫的形态完整而典型，容易识别和鉴别虫种，但疟原虫密度低时，容易漏检;厚血涂片制作过程中多层的红细胞相互重叠并且被溶解，因此可以使疟原虫集中（比薄血涂片集中40～100倍），提高检出灵敏度，但由于染色过程中红细胞溶解，疟原虫形态有所改变，虫种鉴别困难。
因此，最好在一张玻片上同时制作两种血涂片，如果在厚血涂片查到疟原虫而鉴别虫种困难时，可再检查薄血涂片。
恶性疟在发作开始时，间日疟在发作后数小时至10余小时采血能够提高检出率。
免疫学检查目前已经广泛使用的恶性疟原虫抗体诊断棒或诊断卡能够快速、简单、敏感和特异地对恶性疟原虫特异性、富含组氨酸的蛋白2（NHRP2）、乳酸脱氢酶或醛缩酶抗原进行检测，并借此将恶性疟和其他危险性较低的疟疾区分开来。
此外，常用的方法还有间接荧光抗体试验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等。
由于抗体在患者治愈后仍能存在一段时间，且广泛存在个体差异，因此检测抗体主要用于疟疾的流行病学调查、防治效果评估及输血对象的筛选，在临床上仅作辅助诊断。
分子生物学技术聚合酶链式反应（PCR）和核酸探针已用于疟疾诊断。
分子生物学检测技术的最突出优点是对低疟原虫血症的检出率较高。
【2017年整理】厚、薄血膜法查疟原虫
厚、薄血膜法查疟原虫基本原理：疟原虫寄生于红细胞，经制片、染色后，显微镜下可以鉴别疟原虫的虫种和虫期。
试剂器材：75%酒精棉球、采血针、载玻片、甲醇、pH7.0~7.2 PBS缓冲液、姬氏染液（或瑞氏染液）、显微镜等。
操作方法：(1)采血：①采血时间在普查时，一般无法考虑采血时间。
在临床上，对现症病人一般可随时采血，但为了提高检出率，就应当考虑采血的适当时间。
对典型发作的间日疟及三日疟患者，应选择发作后数小时至10余小时采血为好。
此时疟原虫发育至环状体乃至大滋养体，虫体大，疟色素已形成，受染红细胞也出现变化，有利于疟原虫的检出。
恶性疟原虫大滋养体和裂殖体是在皮下、脂肪和内脏微血管中发育的，通常在外周血液中不易查到，配子体在环状体出现1周后方能见于外周血液，故在发作时采血。
②采血部位从患者耳垂或指尖（以左手无名指为宜）取血，婴儿通常从大姆趾第二趾骨腹面针刺采血。
③采血方法用75%乙醇棉球消毒取血部位皮肤，待干后用左手拇指和食指捏住采血部位，右手持针迅速刺入皮肤，待血液流出或轻轻挤出血滴，供制作涂片用，采血完毕用干棉球轻压伤口止血。
(2)制片：①薄血膜的制作取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘平整、光滑的载玻片作推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点与血滴接触，并与载玻片呈30o~45o夹角，待血滴沿推片边缘向两侧展开后，立即由右向左迅速推成薄血膜。
理想的薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，其末端凸出呈舌尖形。
注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推片，以免造成血膜断裂或厚薄不匀。
如取血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角可大些。
②厚血膜的制作用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载玻片上，并从里向外作旋转涂布，使成直径为0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均匀，然后平置桌上，待自然干燥。
③厚薄血膜同片制作用目测法将载玻片从右到左等分成6格，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部，第1、2格可用于贴标签，制作厚、薄血膜方法同上。
疟原虫检验技术
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断和流行病学调查。
优点
恶性疟原虫免疫荧光染色法
优点
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断、药物治疗监测和流行病学调查等。
原理
以疟原虫特异性DNA片段作为引物，通过聚合酶链反应扩增特异性DNA片段，然后将扩增产物进行电泳分析，以检测疟原虫的存在。
局限性
不同种疟原虫的DNA序列存在差异，因此需要针对不同种疟原虫设计不同的引物。
聚合酶链反应（PCR）
对疟原虫的基因序列进行分析，可了解疟原虫的种群结构、遗传变异和抗药性。
核酸序列分析
分子生物学检验
体外培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊细胞或其它传代细胞系中，进行体外培养，用于分离和鉴定疟原虫。
体内培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊体内，进行体内培养，用于分离和鉴定疟原虫。
流行病学调查
通过对疟疾疫源地进行分析，找出传染源和传播途径，有助于制定针对性的防控措施，控制疫情扩散。
疫源地分析
流行病学调查与疫源地分析
结论与展望
06
疟原虫检验技术的重要性和意义
疟原虫检验技术是疟疾诊断、治疗和防控的关键手段，对于减少疟疾传播、保护人民健康具有重要意义。
疟原虫检验技术的发展和应用，有助于提高疟疾防治效果，降低疟疾发病率和死亡率，为国家和人民节省了大量医疗资源和社会成本。
xx年xx月xx日
疟原虫检验技术
目录
contents
疟原虫检验概述疟原虫检验技术分类各种疟原虫检验技术介绍疟原虫检验技术的应用范围与局限性疟原虫检验的实际应用案例结论与展望
疟原虫检验概述
01
疟原虫检验是指通过实验室手段对患者的血液、组织、排泄物等进行检查，以确诊疟疾感染和评估病情严重程度。
疟原虫检测 血涂片镜检法
ICS11.020C62WS 中华人民共和国卫生行业标准WS/T 569—2017疟原虫检测血涂片镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准起草单位：海南省疾病预防控制中心、江苏省寄生虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、云南省寄生虫病防治所、海南省农垦总局医院。
本标准主要起草人：王善青、高琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李雨春、刘莹、欧阳范献。
疟原虫检测血涂片镜检法1 范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1疟原虫Plasmodium spp疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等。
2.2血涂片 blood films将血液涂制于载玻片上制成的涂片。
供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。
3 仪器和器材3.1 生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）。
3.4 推片。
3.5 血片染色架。
3.6 血片干燥架。
3.7 玻片盒。
3.8 染色盘和染色缸。
4 试剂和材料4.1 吉氏染色原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）。
疟原虫检测 血涂片镜检法
疟原虫检测血涂片镜检法1 范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1疟原虫Plasmodium spp疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等。
2.2血涂片 blood films将血液涂制于载玻片上制成的涂片。
供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。
3 仪器和器材3.1 生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）。
3.4 推片。
3.5 血片染色架。
3.6 血片干燥架。
3.7 玻片盒。
3.8 染色盘和染色缸。
4 试剂和材料4.1 吉氏染色原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）。
4.5 二甲苯（分析纯）。
4.6 75%酒精。
4.7 一次性采血针。
4.8 一次性手套。
5 检测步骤5.1 血涂片的制作5.1.1 采血部位及取血方法经75%乙醇消毒采血部位，待干后，用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血，婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。
取1张已消毒推片，用拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片左下角刮取血液4μL～5μL用于制作厚血膜，再用该端中部刮取血液1μL～1.5μL用于制作薄血膜。
5.1.2 厚血膜制作取1张载玻片，将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左，由里向外划圈涂成直径0.8cm～1.0cm 的圆形厚血膜,厚度以1个油镜视野内可见到5个～10个白细胞为宜。
疟原虫检测标准操作程序
疟原虫检测标准操作程序疟原虫检测操作程序1.目的与原理1.1 目的：检查血液中是否有疟原虫。
1.2 原理：瑞氏染色原理。
瑞氏染料中含有美蓝和XXX两种染料，前者为碱性，后者为酸性。
它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。
根据瑞氏染色的酸碱物质染色性不同，可将疟原虫各期的形态进行清楚染色，便于观察。
高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫（如间日疟、三日疟、恶性疟），以及疟原虫的各期，如环状体（早期滋养体）、晚期滋养体、裂殖体、配子体等。
2.样本收集和贮存2.1 原始样本：全血。
2.2 标本类型：EDTA抗凝血2ml。
标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。
2.3 保存条件：EDTA抗凝血尽快即时检测。
2.4 病人要求：必须在发烧时采血。
3.试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分：瑞氏染料1.0g、无水甲醇500ml、甘油10ml。
3.1.2 配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解。
将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止。
配制好的染液放在37℃24小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。
3.2 磷酸盐缓冲液PH6.4：3.2.1 脱水Na2HPO4 1份：处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干燥（火燃烘烤）成粉末称量。
3.2.2 无水KH2PO4 2.6份：将脱水Na2HPO4 1份和无水KH2PO4 2.6份充分混合，边研磨边混匀。
3.2.3 将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方可使用。
3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器。
4.仪器显微镜OLYMPUS型号：CX21.4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。
4.2 日常维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁。
检查疟原虫染应采集的标,本
检查疟原虫染应采集的标,本
疟疾检测方法:血涂片找疟原虫，检测流程:确定采血对象，采集标本，核对化验单，记录相关登记本，制作血涂片，最后在显微镜下找疟原虫。
1.疟疾检测流程:
(1)采血对象。
临床诊断为疟疾、疑似疟疾和不明原因的发热病人。
(2)化验单，由临床医师开具化验单，嘱咐患者到化验室血检，检验者核对患者信息。
(3)镜检人员对血检对象按照登记本要求进行登记。
(4)消毒采血部位，用75％乙醇对采血部位消毒，采血部位多在手指末端。
也可在耳垂采血。
(5)待采血部位干后，采集血标本。
(6)血膜制作，取清洗过的玻片2张，1张做载片、1张做推片，要求推片的一侧边缘光滑、用右手大拇指和食指夹持推片中部。
(7)血膜染色，建议首选姬姆萨氏染液。
先用甲醇固定薄片。
完全晾干后与厚片同时染色。
如选用瑞氏染色则先滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血至灰白色，倾去水滴、晾干后按说明进行染色。
(8)镜检。
2.风险提示:疟疾为乙类法定传染病，通过按蚊叮咬接触传播，血检阳性，应及时到专科医院进行规范治疗。
疟原虫检验技术
疟原虫检验技术一、疟原虫的生物学特征疟原虫是一类单细胞真核生物，寄生在人类和其他脊椎动物的红细胞内。
常见的疟原虫种类包括恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。
疟原虫的生活史包括在人体内的无性生殖和在蚊体内的有性生殖两个阶段。
在人体内，疟原虫经历了肝细胞内的红外期和红细胞内的红内期发育过程。
了解疟原虫的生物学特征对于选择合适的检验方法具有重要意义。
二、疟原虫检验技术的分类1、显微镜检查法这是疟原虫检验的经典方法，包括薄血膜涂片和厚血膜涂片检查。
薄血膜涂片用于疟原虫形态学观察，可鉴定疟原虫的种类；厚血膜涂片则提高了疟原虫的检出率。
在显微镜下，观察疟原虫的形态、大小、细胞核和细胞质的特点，以及疟色素的分布等，从而确定是否感染疟原虫以及感染的种类。
2、免疫学检测法（1）抗原检测利用免疫层析技术检测患者血液中的疟原虫抗原。
这种方法操作简便、快速，适用于现场检测和大规模筛查。
（2）抗体检测检测患者血清中的特异性抗体。
但由于抗体在感染后一段时间才会产生，且抗体检测不能区分现症感染和既往感染，因此在疟疾诊断中的应用相对有限。
3、分子生物学检测法（1）PCR 技术通过扩增疟原虫特定的基因片段来检测疟原虫。
具有高度的敏感性和特异性，能够检测到极低浓度的疟原虫核酸。
（2）核酸杂交技术利用标记的核酸探针与疟原虫核酸进行杂交，从而检测疟原虫。
4、其他检测方法（1）血常规检查疟疾患者可能会出现贫血、白细胞减少等血常规异常。
（2）血生化检查部分疟疾患者可能会有肝肾功能损害，通过血生化检查可以了解相关情况。
三、显微镜检查法的操作步骤1、采血通常采集患者的末梢血或静脉血。
2、制作血涂片薄血膜涂片：将一滴血液滴在载玻片的一端，用推片以 30°－45°角均匀地推成薄而均匀的血膜。
厚血膜涂片：取较多的血液滴在载玻片上，用推片制成较厚的血膜。
3、固定和染色薄血膜涂片自然干燥后，用甲醇固定，然后用吉姆萨染液或瑞氏染液染色。
疟原虫实验室检查
2. 带状形是 特点
3. 成熟裂殖 体呈菊花 状,内含6
～12个裂
殖子
4. 红细胞不 涨大，略 缩小
5. 有时有西 门氏点
三日疟原虫
三日疟原虫
6-12个裂殖 子，排列较 规则，呈菊 花状，疟色 素在虫体中 央，寄生的 红细胞无变 化
卵形疟（P. ovale）诊断要点
1. 红细胞略涨 大或不变大
染液（原液）配方
吉氏染液: •吉氏（ Giemsa ）染剂粉 •甘油 •甲醇 瑞氏染液: •瑞氏染剂粉 •甲醇 •甘油 （染液配制好后要过滤）
0.5 克 25 毫升 25 毫升
0.2 克 100 毫升 3 毫升
吉氏染液配制
吉氏染剂粉→研钵→甘油→研磨→甲 醇洗去甘油溶液→有色玻璃瓶中→每 日用力摇动5min，室温 一月后应用。 （此染液为原液）
3. 世界卫生组织建议，门诊血片至少厚血膜镜 检 100 个视野，薄血膜 300 个视野。
疟原虫抗原检测
鉴别诊断
其他血液寄生虫病（丝虫病、锥虫病、巴贝 西虫病、附红体病等）
谢谢！
位于中央 疟色素黑褐色，分布
于核周围
恶性疟原虫雄配子体
腊肠形，两端钝圆 胞质色蓝而略带红 核疏松，淡红色，位于
中央 疟色素黑褐色，小杆状，
在核周围较多
恶性疟（P.falciparum）鉴定 要点
1. 环状体纤细, 红细 胞不涨大
2. 一个红细胞内可有 几个环状体
3. 环状体内可有2个 核
2. 红细胞边缘 呈车轮状
3. 环状体有时 呈现鱼眼状
4. 薛氏点明显
5. 成熟裂殖体 类似三日疟 原虫,但更粗 大
6. 原虫呈卵圆 形
疟原虫检测依据
疟原虫检测依据
疟原虫检测是一种用于诊断疟疾的关键性检测方法。
疟疾是由疟原虫寄生在人体内引起的传染病，因此检测疟原虫的存在是确诊疟疾的关键步骤之一。
以下是常见的疟原虫检测依据：
临床症状：疟疾患者通常会出现周期性发作的高热、寒战、头痛、肌肉酸痛、恶心、呕吐等症状。
虽然这些症状并不特异，但结合疫情流行地区和病史可以引起对疟疾的怀疑。
实验室检测：
血液涂片检查：这是最常用的疟原虫检测方法之一。
通过显微镜检查患者的血液涂片，观察疟原虫在红细胞内的形态特征，包括形态、大小、数量等。
免疫学检测：包括抗原检测和抗体检测。
抗原检测可以检测血液中的疟原虫特异性抗原，而抗体检测可以检测病人体液中的疟原虫特异性抗体，从而确定疟疾的感染情况。
分子生物学检测：包括聚合酶链反应（PCR）等技术，可以检测疟原虫的遗传物质，具有高度的敏感性和特异性。
流行病学史：确定病人是否曾经旅行到或居住在疟疾流行地区，或者是否接触过疟疾感染者，有助于确定诊断。
疟疾流行地区：考虑患者是否居住在或近期旅行到疟疾流行地区，这也是对疟疾进行诊断和筛查的重要依据之一。
综合以上依据，结合临床症状、实验室检测和流行病学史，可以更准确地诊断疟疾，确定疟疾的感染类型（原发性感染、复发性感染等），并指导相应的治疗措施。
及早诊断和治疗对于预防疟疾的严重并发症和传播具有重要意义。
疟原虫检验技术
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少
●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
血片染色
两种染色方法: ●吉氏染色法 ●瑞氏染色法
常用吉氏染色法
吉氏染液(原液)的配置
吉氏染粉 (Azure B typ来自) 5g疟原虫人类四种疟原虫的 基 本特征
感染人的疟原虫有四种:
恶性疟原虫 P. falciparum 间日疟原虫 P. vivax 三日疟原虫 P. malariae 卵形疟原虫 P. ovale
恶性疟 P.falciparum
● 四种疟原虫中致病力最强 ● 无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治
疗可危及生命 ● 在我国主要流行云南省和海南省
2. 显微镜下选择红细胞排列整齐密集，无重迭的视 野（ 300-500红细胞/视野）
3. 按一定顺序移动血片记数红细胞的同时，记录疟 原虫数
4. 如果能见到疟原虫，但是记数5000～10000个红细胞 时却没有感染红细胞，那么设定感染率为＜１％
如何确定疟原虫血片为阴性
● 检查全部厚血膜未查见疟原虫 ● 最少检查100个厚血膜油镜视野未查见
感染红细胞边 缘破碎状
薛氏点明显疟 色素棕黄色,类 似间日疟原虫
种
周 围 血 红细胞形态
疟原虫形态
中发育
阶段
大小
点彩
胞浆
疟色素
裂殖子数
恶 性 疟 原 环状体
虫
配子体
正常
常见 茂氏 点
环状体钎细， 常见２个核
粗黑，配子 体中明显
血涂片检查疟原虫的注意事项
血涂片检查疟原虫的注意事项在这个快节奏的时代，疟原虫的检查有时候被大家忽略了，毕竟谁想要去医院排队呢，对吧？但是，亲爱的朋友们，血涂片检查可不是个小事情，它可是决定你健康的大事！所以，今天我们就来聊聊这个话题，轻松愉快，绝对不让你打瞌睡！准备工作可得做好。
你得明白，这可不是随便来一滴血就能解决的事。
要找个靠谱的医生，预约好时间，别像我一样总是临时抱佛脚，最后却被医生“劈头盖脸”训了一顿！一到医院，轻松点，心态放好，毕竟你又不是来做什么特别的事，只是检查一下而已。
想想今天可能吃到的美味午餐，心情立马就好很多。
对了，别忘了穿着宽松一点的衣服，方便抽血嘛，像是准备去参加时尚秀一样，别让护士们为你烦恼。
检查前的准备也是关键。
大部分情况下，医生会建议你在检查前避免吃东西，尤其是油腻的食物，搞得像是一场“美食界”的审判！空腹这件事可不是那么简单，想吃早餐又不得不忍着，感觉就像小猫咪看着美味的鱼，心里那个馋啊！不过，你可以喝水，别让自己太干渴，身体可得保持水分，这样才能把最佳状态展现给医生。
然后，到了抽血环节，心态一定要放轻松。
虽然看到针头可能会让人一阵紧张，但想想这只是个小插曲，快速结束就好。
护士的手法可是相当专业的，她们就像高超的魔术师，一会儿功夫就能抽出你需要的血液。
你可以试着和她聊聊天，转移一下注意力。
顺便说一句，别忘了感谢她，毕竟她可是帮你“送信”的人！如果检查结果出来了，别急着紧张。
结果上有很多专业术语，看不懂也很正常。
可以请医生耐心解释，别让自己当个无知的小白兔，了解清楚自己的状况，才能心里有数。
遇到问题也不要害怕，医生的任务就是帮助你，像是一位温暖的大哥哥或大姐姐，给你支持和建议。
检查后别忘了注意休息。
虽然你可能觉得没什么大不了，但身体还是需要一点时间来调整的。
可以选择适当的活动，别让自己疲惫不堪。
适当散步，听听音乐，或者看部轻松的电影，放松一下，享受生活。
反正生活中总有些美好的事情值得期待，不是吗？别忘了定期检查。
02-疟原虫检查
一、项目名称、检验方法名称:项目名称：疟原虫检查检验方法：薄/厚血片法及胶体金法二、方法学原理胶体金法：采用双抗体夹心薄膜免疫层析技术，层析条由质控区、检测区和金标垫三部分构成。
质控区包被了羊抗鼠IgG抗体(C)，作为对检测试剂的质量控制；检测区分别包被了特异性的抗疟原虫乳酸脱氢酶抗体(T1)和抗富组氨酸蛋白抗体（T2）；金标垫中包含有偶联了玫红色胶体金的另一株抗疟原虫乳酸脱氢酶抗体和抗富组氨酸蛋白抗体。
当检测样品中存在针对上述抗体的特异性抗原时，样品中的抗原与金标垫中的标记抗体结合，形成抗原-胶体金复合物，并借助层析作用向上迁移。
当复合物流经检测区时，被相应的包被抗体捕获。
若血样中存在间日疟原虫（Pv）抗原时，在T1区会形成一条玫红色检测线。
若血样中存在恶性疟原虫（Pf）抗原，在T2区会形成一条玫红色检测线，T1区有或无检测线形成。
检测样品中若不存在特异性抗原时，检测区不显色。
质控区出现的玫红色指控线表示试剂有效并且操作正确。
三、试剂品牌、代号、包装规格、内容物：1、薄/厚血片法试剂品牌：珠海贝索生物技术有限公司Baso内容物：瑞氏—姬姆萨复合染色液组成：主要成分瑞氏--姬姆萨A液×2瓶(瑞氏染料、姬姆萨染料)瑞氏--姬姆萨B液×2瓶(PH6.8磷酸盐缓冲液)2、胶体金法：试剂品牌：上海疾控生物科技有限公司内容物：检测卡：20人份（1人份/铝箔袋）洗涤液：1瓶（5ml）四、具体操作步骤（包括主要的仪器测定参数）（一）、薄/厚血片法：1．薄血片：在清洁玻片上用一滴外周血，以常法推制成薄片。
2．厚血片：在清洁玻片上用一滴外周血，制成厚血片，血膜干燥后蒸馏水脱去血红蛋白3．血膜完全干燥后即可染色，染色法（瑞氏法）同白细胞分类检查。
4．染色涂片干后油镜检查，寻找疟原虫。
（二）、胶体金法：1．将检测卡从铝箔袋中取出，平放在工作台上，编号待用2. 使用微量移液器，在加样孔前端缓慢加入5μl待检全血3. 然后在加样孔后端缓慢加入3-4滴洗涤液，待液体完全渗透4. 20分钟内观察检测结果，记录结果5. 胶体金法对恶性疟原虫敏感性为99%，特异性是98%；对间日疟原虫的敏感性是97%，特异性是98%。
疟原虫检测工作方案及流程
疟原虫检测工作方案及流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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11.疟原虫的显微镜检查_1
疟原虫的显微镜检查汪子伟（杭州市第一人民医院中心实验室）疟疾（malaria）是由人类疟原虫(Plasmodium)感染引起的寄生虫病，由雌性按蚊（Anopheles mosquito）叮咬传播。
疟原虫先侵入肝细胞内发育繁殖，再侵入红细胞内繁殖，引起红细胞成批破裂而发病。
临床上以反复发作的寒战、高热、汗出热退为特点，并常出现贫血、肝脾肿大。
因疟原虫虫株、感染程度、机体免疫状况和反应性等差异，临床症状和发作规律表现不一。
作为一种古老的疾病，早在公元二千多年前，《黄帝内经·素问》中即有《疟论篇》和《刺论篇》等专篇论述疟疾的病因、症状和疗法，并从发作规律上分为“日作”、“间日作”与“三日作”。
然而，直到1880年法国人Laveran在疟疾病人血液中发现疟原虫；1897年英国人Ross发现蚊虫与传播疟疾的关系，这时其病因才弄清楚。
疟疾是目前世界六大热带病和我国五大寄生虫病之一，危害极大。
据世界卫生组织统计，目前仍有92个国家和地区处于高度和中度流行，每年发病人数为1.5亿，死于疟疾者150万人。
它主要分布于热带、亚热带各国，我国主要在华南、华中(特别是云南和海南)。
我国1949年前疟疾连年流行，尤其南方，流行猖獗，病死率很高。
解放后，全国建立了疟疾防治机构，广泛开展了疟疾的防治和科研工作，疟疾的发病率已显著下降。
历代战争史实表明疟疾对军事行动影响颇巨，低疟区部队进入高疟区，常发生大量非战斗减员。
疟原虫属原生动物亚界--顶复门--孢子纲--疟原虫属。
寄生人类的疟原虫有：间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。
疟原虫通过蚊叮咬而感染人，疟疾的典型临床表现是周期性寒战、发热和出汗。
疟疾诊断主要靠外周血涂片检查。
疟疾的治疗主要是杀灭红细胞内的疟原虫，目前用的最多的是青蒿素类药物、或与奎宁、咯萘啶、磺胺多辛和乙胺嘧啶等联合用药。
一、疟疾的临床表现间日疟和卵形疟的潜伏期为13～15天，三日疟为24～30天，恶性疟为7～12天。
疟疾诊断的三条标准
疟疾诊断的三条标准
疟疾诊断的三条标准是：症状、实验室检查和流行病学史。
1. 症状：疟疾的常见症状包括发热、寒战、头痛、肌肉和关节疼痛、乏力和恶心等。
疟疾症状可能会周期性地出现和消失，与感染者的疟原虫感染周期有关。
2. 实验室检查：疟疾的确诊需要通过显微镜下观察血液标本来检测疟原虫的存在。
目前常用的方法是血涂片染色法和快速诊断试纸法。
血涂片染色法是将血液标本涂于玻璃片上，用染色剂染色后，通过显微镜观察疟原虫的形态和数量。
快速诊断试纸法使用抗原抗体反应来检测疟原虫。
3. 流行病学史：疟疾的诊断还需要考虑患者的流行病学史，包括旅行史和居住地点。
疟疾主要存在于热带和亚热带地区，如非洲、亚洲和拉丁美洲等。
因此，如果有旅行史或居住在这些地区，并且出现了疟疾的症状，就需要考虑疟疾的可能性。
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血液疟原虫检查
[试验名称] 血液疟原虫检查
[试验方法] 薄血片法或厚血片法
[操作]
1.薄血片法：以常法薄推血片，血膜完全干燥后即可染色。
染色法同白细胞分
类检查
2.厚血片法：在洁净玻片上，滴患者血液2滴，用推片角将血液由内向外转涂
成直径约1cm，厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
不必待干，进行染色，干后镜检。
[结果报告]
查见或未查见疟原虫
[注意事项]
1.采血时间：间日疟级三日疟患者应在发作后数小时至10余小时才学，此时，
早期滋养体已发育至易于鉴别的形态晚期；恶性疟患者，应在发作20小时左右采血。
2.厚血片的溶血要及时，厚血片的放置期限在夏季不超过48h，冬季不超过72h，
否则溶血不完全，会影响检验质量。
3.染色后，水洗时不要先倒去染液，应让清水流进染液，使沉渣飘浮冲走。
4.玻片油镜检查，须找100或100个以上视野才能报告“未检出疟原虫”。
厚
血片至少20个视野以上。
5.疟原虫须分类报告，找到环状体后，须在仔细寻找更为成熟的阶段，以便分
类。
如确实未找到更为成熟的疟原虫，可报告为“检出环状体疟原虫”
6.有可能出现2种或3种疟原虫混合感染时，以间日疟与恶性疟混合感染最常
见，须注意鉴别。
7.注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。
特别是厚血片检查时，缺乏经验者必
须在薄血片上仔细寻找证实，才能报告。
8.除上述3种疟原虫外，在我国云南曾发现过少数卵形疟原虫引起的病例。
卵
形疟原虫的基本形态与三日疟原虫相似，但虫体稍大，受感染的红细胞略胀
大，滋养体后期与裂殖体前期的原虫呈圆形或卵圆形。