氧化型谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量检测试剂盒说明书
氧化型谷胱甘肽（GSSG微量法货号：BC1185规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体100 mL×1瓶4℃保存试剂二液体130 μL×1支4℃保存试剂三液体20 mL×1瓶4℃保存试剂四液体2.5 mL×1瓶4℃保存试剂五粉剂×1瓶4℃保存试剂六液体12.5 μL×1瓶4℃保存标准品粉剂10 mg×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：有毒易挥发试剂，涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。
2、试剂五：临用前加入2.5 mL蒸馏水，溶解后-20℃分装保存；3、试剂六：液体置于试剂瓶内EP管中。
临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按1:20（V:V）的比例配制备用，现用现配；4、标准品：用1 mL蒸馏水溶解，浓度为10 mg/mL，4℃保存。
产品说明：氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。
GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。
测定细胞内GSH 和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
技术指标：最低检出限：3.211 μg/mL线性范围：3.9-125 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
dtnb检测gsh原理
dtnb检测gsh原理我们来了解一下GSH的基本知识。
GSH是一种三肽，由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成。
它在细胞中广泛存在，并且在许多生物学过程中起着重要的作用。
GSH是一种强还原剂，可以与氧化剂反应，从而保护细胞免受氧化损伤。
DTNB是一种化学指示剂，可以与GSH发生反应。
当GSH与DTNB反应时，它们之间会发生一系列的化学变化。
具体来说，DTNB的硫醇基团（－SH）会与GSH中的硫醇基团反应，形成一种新的化合物，即二硫巴比妥酸（TNB）。
在这个反应过程中，TNB的产生会伴随着颜色的变化。
原本无色的DTNB会转变为黄色的TNB。
这种颜色变化是可见的，可以用肉眼观察到。
这就是DTNB检测GSH的基本原理。
DTNB检测GSH的方法相对简单，可以在实验室中进行。
首先，需要提取样品中的GSH。
这个步骤通常需要使用一些特殊的试剂和技术。
然后，将提取的样品与DTNB混合，使它们发生反应。
反应完成后，观察溶液的颜色变化，并使用光谱仪等设备测量吸光度。
根据吸光度的变化，可以推断出样品中GSH的含量。
DTNB检测GSH的原理简单明了，而且具有一定的灵敏度和准确性。
因此，它被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
例如，科学家们可以利用DTNB检测GSH的含量来评估细胞的氧化应激水平。
在某些疾病的诊断中，GSH的含量也可以作为一个重要的指标。
需要注意的是，尽管DTNB检测GSH的方法简单易行，但它也存在一些局限性。
首先，DTNB只能检测还原型的GSH，而不能检测氧化型的GSH。
此外，DTNB的反应也可能受到其他物质的干扰，需要进行适当的控制和校正。
因此，在进行实际应用时，需要结合其他方法和技术，综合评估GSH的含量和活性。
以DTNB检测GSH原理为基础的方法是一种简单而有效的检测手段。
通过观察DTNB与GSH反应过程中的颜色变化，可以推断出样品中GSH的含量。
这种方法广泛应用于生物医学研究和临床诊断中，为我们更好地了解细胞氧化应激和疾病发生机制提供了重要的工具。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒说明书
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）试剂盒说明书谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。
测定意义：GSHPx是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的重要酶之一、GSHPx不但能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的损害和加添机体抗辐射等本领。
测定原理：GSHPx催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，而NADP+没有；通过测定340nm光汲取减少速率来计算GSHPx活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调整移液器、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保管。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管。
试剂三：液体10μL×1支，20℃保管。
试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保管。
粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
GSHPx测定操作：1.酶标仪预热30min，调整波长到340nm。
2.混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
抗坏血酸谷胱甘肽测定
还原型谷胱苷肽GSH2．试剂配制（1）1mM GSH标准液10mL（现用现配）：称3.0733mgGSH,加蒸馏水至10mL。
(不要)（2）5％磺基水杨酸500mL：25g溶于500mL水中。
（3）6mM DTNB：称取0.118905g DTNB溶于50mL PBS（0.1M，pH7.5）中。
（4）2mM NADPH：18.1mg NADPH溶于10mL PBS中。
（5）1mMGSSG标准液10mL：6.126mg GSSG加PBS至10mL。
(不要)实际配置0.1M PBS(pH 7.5): 3个处理*2个品种*3次重复*0.5ml*3次测定=27ml; （实际配置50 ml）6mM DTNB: 3个处理*2个品种*3次重复*0.2ml*3次测定=10.8ml; （实际配置50 ml，实际用量0.1189g）2mM NADPH: 3个处理*2个品种*3次重复*0.1ml*3次测定=5.4ml;（实际配置50 ml, 实际用量18.1mg）(1U)GRⅢ: 3个处理*2个品种*3次重复*0.1ml*3次测定=5.4ml; （实际配置50 ml, 实际用量10ml）5％磺基水杨酸：3个处理*2个品种*3次重复*0.01ml*3次测定=0.54ml;（实际配置10ml）(实际用量0.5g/10ml)0.5mM PBS: 3个处理*2个品种*3次重复*1.5ml*3次测定=81ml; （实际配置100 ml）乙醚（二乙醚）: 3个处理*2个品种*3次重复*10ml*3次测定=540ml; （实际配置1000 ml）PBS Buffer 0.5mM: 3个处理*2个品种*3次重复*1.5ml*3次测定=81ml; （实际配置150 ml）2-乙烯吡啶: 3个处理*2个品种*3次重复*0.2ml*3次测定=10.8ml; （实际用量20 ml）乙醚: 3个处理*2个品种*3次重复*10ml*3次测定=540ml; （实际用量1000 ml）1．标线制作：配制浓度为0，0.02mM,0.04mM,0.06mM,0.08mM,0.1mM,0.12mM的标准GSH溶液（吸取上述标准液各0.1mL）加入0.5mL 0.1M磷酸钠Buffer（pH7.5）(含5mM EDTA)，0.2mL 6mM DTNB,0.1mL 2mM NADPH,0.1mL(1U)GRⅢ（谷胱甘肽还原酶）(sigma),从0.1mL GSH启动反应，测定650s的A412（OD412），绘制标准曲线。
Elabscience
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®还原型谷胱甘肽(GSH)比色法测试盒Reduced Glutathione (GSH) Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K030-S产品规格：50 assays(48 samples)/100 assays(96 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计（420 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清、血浆、动植物组织样本及培养细胞中GSH的含量。
检测原理还原型谷胱甘肽（GSH）可与二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反应产生硫代硝基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（反应式见下图），硝基巯基苯甲酸是一种黄色化合物，在420 nm处，可进行比色定量测定还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。
本试剂盒检测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用考马斯亮蓝法（货号：E-BC-K168-S）提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计（420 nm）、涡旋混匀仪、磁力搅拌器、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、烧杯（250 mL）耗材：枪头（1000 μL，200 μL，10 μL ）、EP管（5 mL、2mL）、吸水纸、擦镜纸、磁力搅拌子试剂：双蒸水或去离子水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。
试剂准备①检测前，试剂盒中的试剂平衡至室温。
谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种：
1. 埃尔曼（Ellman）法：这是最常用的谷胱甘肽测定方法，其原理是谷胱甘肽在DTNB（二硝基苯磺酸）的作用下，生成具有黄色的DTNB-SH，通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
2. 弗斯特（Foster）法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力，通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
3. 比色法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力，通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽，通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。
5. 荧光光谱法：这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱，通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。
以上方法都有其优点和缺点，选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。
还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。
谷胱甘肽过氧化物酶的检测及意义
等)在技术上比较困难.而通过检测血液中抗氧物
(酶)及FR氧化产物的含量(酶活力)，来间接反映
氧白由从的存在，则比较容易，这也是当前氧白由从
研究中最普遍应用的方法.本文重点介绍一种抗过氧
化物酶—谷眺甘肤过氧化物酶的检测及意义.l谷胶甘肚过级化物酶及其盆要生理功能〔，·2，
GSH的消耗量，以反映酶活性.ZGSH+DTNB一卜
GssG+ZTNB.Gross〔5〕首先报道osH一PX宁舌力以
每克Hb每分钟GSH以一级反应速度(K)表示，
即
K一〔，·，‘忿2一:)·，二(GSHGSH
Haffcman〔‘，以单位时间内一09〔GsH〕降低量表示加
46
GsH中X活性，称为Haffeman单位.唐琼华等在
生一系列血液流变学的改变.
2.GSH一PX的检测
GSH一PX活性检测有直接法和问接法两种.
2.1直接法即测定GSH一PX的墓质GSH的消耗
量或GSSG的生成量.以反映其活性.
2.1.1紫外分光度法〔，，osH在波长255nm处呈
最大吸收，通过酶与基质作用，从255nm吸光度的
降低计算GSH的消耗量，从而判断酶活性.此法仅
成，在GSH一PX作用下，LOOH转化为无活性的
LoH.osH一px参与前列环素(，GIZ)和血栓素
(TxAZ)的合成，而LooH抑制pGI:合成酶的活
性，从而破坏了PGT:和TxA:之介，]的平衡.Lo0H
与TxA:呈正相关，PGI:与LooH呈负相关.将引
起血小板聚集和血管收缩，红细胞膜通透性降低，发
Faraji(.)对几种osH甲X测定方法进行T比
氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书
氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态，也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理：利用2-VP法测GSSG含量。
自备仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体300μL×1支，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：液体30μL×1瓶，-20℃保存。
临用前加入0.6 mL试剂三稀释，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入40 mL试剂三溶解，现配现用。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）的蒸馏水混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
测定操作:1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3. 测定管：取1 mL EP管，加入100 μ L上清液，5μ L试剂二，盖紧后混匀，置于37℃水浴30min；依次加入100 μ L试剂四，10 μ L试剂五，700 μ L试剂六，迅速混匀后，立即测定30 s和150 s光吸收A1和A2，计算ΔA=A2-A1。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
总谷胱甘肽检测试剂盒
50 μl
50 μl
50 μl
b. 加入50微升0.16mg/ml NADPH溶液，混匀。
c. 立即用酶标仪测定A412，每5分钟测定一次或实时测定，共测定25分钟，测得5个数据。(说明：为了简化实验步骤，可 以在加入NADPH溶液混匀后25分钟，仅测定一次A412)。如果仪器可以设置温度，把温度设置在25℃，否则就在室温
2. Xiao-Long W, Chuan-Ping Y, Kai X, Ou-Jv Q. Selenoprotein W depletion in vitro might indicate that its main function is not as an antioxidative enzyme. Biochemistry (Mosc). 2010;75(2):201-7.
NADPH。每检测一个样品需50微升0.16mg/ml NADPH。
2. 标准品的准备：
把10mM GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成50μM GSH溶液。然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取
50、25、15、10、5、2μM GSH溶液六个点做标准曲线。注意：由于GSH在蛋白去除试剂S溶液中不太稳定，用蛋白去除
b. 细胞样品的准备。请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定。PBS洗涤细胞一次，离心收集
细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂S溶液，即如果细胞沉淀为10微升，则加入30微升蛋白去除
试剂S溶液，充分Vortex。(细胞沉淀的体积可以根据细胞沉淀的重量进行估算。收集细胞前后分别对离心管进行称
等处理，而直接加入适量蛋白去除试剂S溶液进行匀浆)。4℃放置10分钟后，10,000g 4℃离心10分钟，取上清用于总
凯基谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒
注意
注 1：空白管、标准管一般只需做 1-2 只。
注 2：最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同，其 GSH-PX 活力不一。根据酶的百分抑制率与酶的活 力呈抛物线关系，各种测定样品取样量及取样浓度不一样，在每测定一种新的样品前最好选择一个最佳取
样量及最佳取样浓度。
最佳取样浓度的摸索
测试前先预试以确定最佳取样浓度：当您第一次使用本试剂盒测试某一种新的样品时最好先做三只不同浓
4℃或室温保存 6 个月
4℃保存 6 个月 4℃避光保存五天
4℃保存
GSH 的分子量为 307，每次测定前将 1 支 3.07mg 的 GSH 标准品粉剂加到 GSH 标准品的溶剂应用液 中，定容至 10ml 即为 1mmol/L 的 GSH 溶液，现用 现配。
取 1mmol/L GSH 溶液 2ml 加 GSH 标准品溶剂应用 液 18ml 定容至 20ml，作标准曲线用，若不做标准 曲线可以不配。
保存条件 4℃
3 5 7
GSH 应用液的配制： 1mmol/L GSH 溶液
100u mol/L GSH 溶液 20umol/L 的 GSH 标准溶液
试剂二应用液的配制：将已配好的 甲乙两种混合。此为过饱和溶液， 室温静置冷却后，如有结晶，则取 上清进行实验。 加蒸馏水 100ml 溶解 每支加蒸馏水 10ml 溶解 标准品溶剂应用液：GSH 标准品 溶剂贮备液：双蒸水=1：9 即 10 倍稀释配成应用液；按所需量现用 现配。
二．试剂盒的组成和配制
25 Tests (50 Tubes)试剂盒的组成和保存： 试剂编号 1
2
3 4 5
名称 贮备液
甲粉 乙液 粉剂 液体 粉剂
6
GSH 标准品粉剂
【doc】几种谷胱甘肽的检测方法
几种谷胱甘肽的检测方法2007.3(总第146期)几种谷胱甘肽的检测方法陈俭梅周琳(1.山东师范大学生科院济南250014)(2.山东大学医学院济南250014)摘要测定谷胱甘肽含量的方法有多种,目前还没有一种既快速,稳定,特异,又十分灵敏,经济的测定方法.本文对谷胱甘肽的各种测定方法作一综述.关键词谷胱甘肽检测GSH存在于所有生物细胞中,而以酵母,谷物种子胚芽,人体和动物的心脏,肝脏,肾,红细胞和眼睛晶状体中含量较高.正常人体内还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的比例为100:1,全血中GSH的正常浓度约为371mg/dl,人体的肝脏和肾脏是GSH主要的合成,代谫}和排泄器官.谷胱甘肽的主要生物学功能是保护生物体内蛋白质的巯基进而维护蛋白质的正常生物活性,同时它又是多种酶的辅酶和辅基.GSH的重要生物学功能与谷胱甘肽的分子结构有密切关系,例如GSH分子中的巯基参与中和氧自由基,解毒等重要助能;所含的Y一谷氨酰胺键能维持分子的稳定性并必参与转运氨基酸;GSH中的甘氨酸和半胱氦酸残基参与胆酸的代谢等….近年来,随着对GSH的生理,乍化等_片面研究的深入,GSH在医学,食品,保健,防衰老等方面正引起人们日益广泛的注意.谷胱甘肽(GSH)用途广泛,用基因工程微生物生物合成方法是生产谷胱甘肽的主要方式.作为前之一?,胱氯酸的浓度较高,对谷胱甘肽的测定有干扰.已有几种方i=_去用于半胱氨酸存在时谷胱甘肽的测定:酶分析方法可测高达1000倍半胱氨酸存在时谷胱甘肽的含量,结果较准确,但需价格昂贵的辅酶Ⅱ和谷胱甘肽还原酶,并且后者活力变化严重影响测量结果;色谱法冗长费时;Jocelyn采用将样品仁硫酸中煮沸lh的方法,不太安全;Wronski方法效果较好,但需用对羟基汞苯甲酸和萤光黄;荧光法容易受干扰,误差较大;乙二醛酶法需要复杂的技术和殴备J.日前测定谷胱甘肽含量的方法有多种,如嗨循环法,比色法,荧光光度法,流式细胞仪法,滴定法,高效毛细管电泳法和近些年发展的高压液相色谱法等,这些方法备有其优点,但也都有不足,日前还没有一种既快速,稳定特异,又…t分敏,经济的测定方法,谷胱甘肽的测定方法有待进…步的发展和完善.下面埘日前常用的儿种主要的测定方法做?介绍,比较和评价.1酶循环法其测定原理为氧化一还原反应:GSH被DTNB(5,5一dithiobis一2一nitrobenzoicacid;5,5一二巯一2一硝基苯酸)氧化,生成GSSG和稳定的TNB(5一thio一2一nitrobenzoicacid;5一巯基一2一硝基苯酸); GSSG与GSSG还原酶及NADPH(还原型烟酰胺嘹嘿呤■核苷酸磷酸)反应,还原成GSH.在NADPH与GSSG还原酶维持GSt?l总最不变的条件下,GSH和DTNB反应生成TNB的速率与样本中总谷胱甘肽成比.TNB于412nm波长处有最大吸光度,可以通过分光光度计来测定总谷胱甘肽水平(GSH+GSSG)-31.酶法测定谷胱甘肽,样本的制备要迅速,为GSH很容易氧化而使其浓度降低.本法还可测定GSSG水平.酶循环法最初由Owen和Belcher提出,之后由Shandon9FocdFerrnerH童tion246…期)…一一一…………………一.～一……一业堕邑蹩+ Tietze和Griffith进行了改进.酶衢环法是一种灵敏,快速的方法,其最火优点是灵敏度高,可测定含量仪0.1mol/L的样品,【收率93%一j06%.Manju等认:为此方法灵敏度高,但特异性不高,这是由于DTNB可与许多含性巯基基团物质反应.但此法不足之处在于其测定的是谷恍甘肽总量(GSH+GSSG),不能分GSH和GSSG;另外样本的准备电比较严格,要求控制采血至测定时问『卣J隔在3min内,否则将影响测定,使实际应受到很大限制.MargaretA.Baker等将酶循环『去与微量滴定板技术相结合,设计了一种快速,敏感,简便的测定大数量生物样本的GSH,GSSG的方法.其最大优点是可时测定大量的样本.为I'提高灵敏度,TamaraMourad等寻酶循环法与生物发光检测技术相结合,测定GSSG,灵敏度达pm(10.)7k平.2比色法郭黎平等_60测定大豆提取液中谷胱肽的含量时,发现在铜(Ⅱ)一新铜试齐JJ一谷胱甘肽一乙醇体系中测定谷胱甘肽的含量,乙醇具有叫显的增敏作用.采用CuSO.溶液和新铜试剂混合液[Cu一新铜试剂(1:2.5,摩尔比)]作为显色剂,检测波长为456nm,枪测限为2.0ug/ml,线性范围为2.0~24ug/ml,【收牢为99.54%,RSD为0.76%.赵旭东等I}艮据甲醛同谷胱甘肽和常见含笳基物质反应速度的不,提出了在含有其它巯基物磺溶液中测定谷胱甘肽含量的方法,通过控制两个相同供试品和甲醛的不『亩J反应时间,测定两者在波长为412nm时的吸收度,根据两者不同的吸收度值得出谷胱汁肽的含量.线性范为0.19～0.95g/L,回收率为96.7%,方法的结果误差小于0.5%.该方法实验成本低,分析快速,简,适于测定生物合成反应液中谷胱廿肽的含量.3荧光法曹新志等I噪用邻苯l¨_:甲醛(o—phthaldialdehyde, OFt)作为络合剂,住磷酸缓冲液(pH8.0)中,应用荧光分光光度讣来测定黄瓜中恍肽的含量.检测限为0.1ug/ml,线性范为0.1~40ug/ml,回收率为99.73%,RSD为1.24%.Hissin等选用OPT作荧兜剂,采用偏磷酸一磷酸钠一EDTA缓冲溶液(pH8.0),用以测定哺乳动物心脏和肝脏中谷胱甘肽的含量,谷胱甘肽的检测限为0,05umol,线性范围为0.05～0.8umol,RSD为4%.张建莹等探讨了金属离子对还原型谷胱"肽(GSH)一邻苯二甲醛(OPA)体系荧光信号的影响,实验结果表明Zn对体系的荧光信号有增强作用,而且zn能够提高GSH—OPA体系的稳定性,据此建立了一种以Zn作为荧光增强剂,快速简便测定还原型谷胱甘肽的新方法.GSH在1.3×10～1.4×10mol/L的范围内其浓度与体系相对荧光强度有良好的线性关系,检出限为1.1×10mol/L.本实验方法比较适合生物样中还原型谷胱甘肽浓度的测定.4高效液相色谱法(HPLC)HPLC是近年测定复杂牛物样本中各种毓基物的最好￡法.HPLC过程足溶质住固定相和流动相之问由于分配系数,吸附能力,亲和力,分子大小不同,进行连续分离的过程.HPLC法优点是可以区分开GSH,GSSG及20多种含巯基氨基酸衍生物.其足是灵敏度高,样本中GSH含量不得低于50umol/L;且样本的前处理过程耗时,测定大样本时不方便,所用的桂特殊. ARodrigueuz—Ariza等州介绍丫一种结合电化学法快速测定谷胱甘肽水平的方法.该法应用一套双通道电化学测定仪,可同时测定GSH,GSSG,还可测定PSSG(蛋白结合谷恍}_f'肽),具有高灵敏度,高选择性,高效的优点.Chung—shiYang等介绍了一种将HPLC与微透析联机测定谷胱甘jj太. 此法缩短r分析测定时间,简化了样本的准备过程,并提供了连续的监测程敬君等采刚KCIi容液一HCI溶液一甲醇一EDTA为流动相,电化学检测器(工作电极为玻碳电极,参比电极为Ag/AgCI,l丁作电为0.9V),测定鼠脯徽透析液中咣甘肽的含,枪测限为10nmol/L,叫收率为87_3%,RSD为1.8%. Brent等用甲醇和乙酸钠溶液(pH7)作为流动相,列'苯■醛(Orthophthalaldehyde,OPA)和恍甘肽络合生成一种高荧光的元环衍生物,荧光检Snar@ongFoodFerrnentatio,,27山东食品发酵2007.3(总第146期)测器,检测限为0.1pmol,线性范围0.1-200pmol,谷胱甘肽的回收率为99.2%,RSD为1.2%.该方法线性范围较宽,而且稳定性较高,适于测定混合组分中谷胱甘肽含量…】.5高效毛细管电泳法(HPCE)HPCE有非常好的分离效果.Frassanito等】采用HPCE测定生物供试品中谷胱甘肽的含量,紫外/可见检测器检测限为0.2ug/ml,线性范围为0.2～100ug/ml,RSD为1%.1987年,有人对HPCE中的电化学检测技术作了改进,克服了紫外-可见吸收检测器所遇到的光程太短的问题.1993年, Thomas等在测定鼠脑组织中谷胱甘肽的含量时,在HPCE系统中采用了Hg修饰Au电极,以pH5.5, 10mmol/L的2.(N.吗啉).乙基磺酸作为缓冲液,在0.15V(VSAg/AgC1)的电势下,检出限为0.53fmol, RSD为2.1%.6流式细胞仪法应用染色剂标记GSH形成GSH的荧光化合,同时使染色剂尽量对其他巯基物产生最小影响,以便判断染色背景的程度及其线形关系,根据GSH含量与荧光强度的一定的比例关系,从而得到GSH的值.对GSH进行标记的最理想染色剂应具有很好的专一性,另外,要求能够进行定量分析测定.而这些染色剂的专一性是相对的,一个常见问题是它们还可标志细胞内的其他巯基物,尤其是蛋白巯基.Durand和Olive通过对流式细胞仪巯基染色探针的早期研究,表明monobromobimane对GSH具有合理的专一性.Treumer研究了0一phthaldialdehyde(0PT),表明OPT同时与GSH与蛋白巯基结合形成荧光化合物,RiCe介绍了monobromobimane,目前来讲,这是一个最专一的GSH探针.流式细胞仪的特点是在短时间内可获得大最数据,统计学意义明显,能进行多参数相关测定.7亚硝基铁氰化钠法GSH在NHOH存在下,与亚硝基铁氰化钠发生巯基反应,生成红色化合物.测定中加入硫酸铵可以增加颜色反应的强度.具体操作参照文献.谷胱甘肽在反应显色后,其生成的色泽很不稳定,50-60秒钟时其光密度即见减低.因此规定比色需在30秒内完成.谷胱甘肽含量达100mg/ 100ml时,一般其浓度与光密度仍符合比尔定律.半胱氨酸的存在会严重干扰GSH的测定,使测定值明显偏高.刘娟等¨对此方法应用于发酵液中还原型谷胱甘肽的测定稍作改进如下:在测定管中加入1.0g硫酸铵粉末(以使体系中硫酸铵达到过饱和),1m1分析样品,3mL硫酸铵饱和溶液,摇匀.DHo.5mL亚硝酸基铁氰化钠试剂,随UlJDH入0.7mL8mol/L的NHOH溶液,混合,立即用分光光度计在525nm进行比色,读取各管光密度.通过计算或从标准曲线上得出GSH浓度.8四氧嘧啶法GHS在实验条件下与四氧嘧啶作用的生成物在305nm有最高吸收峰,本法也称四氧嘧啶305 法.具体操作参照文献】.四氧嘧啶法中,反应显色后30min以内光密度未见降低,显色稳定.相对误差可以控制在2%以内,相对标准偏差可以控制在4%以内,说明这种方法的准确度和精密度较高,且半胱氨酸不干扰测定结果.刘娟等对此方法应用于发酵液中还原型谷胱甘肽的测定稍作改进如下:在测定管中加入1mL分析样品,1mL0.1mol/L的四氧嘧啶溶液,混合,加入0.5molpH值7.5磷酸盐缓冲液和0.1mol/LNaOH溶液各1 mL,随即混合.计时开始6min,加入1mol/LNaOH溶液,混合后,用紫外分光光度计在305nm测定光密度,读取各管读数.通过计算或从标准曲线上得出GSH浓度.鉴于文献¨中测定的是血液中GSH的浓度,因此采用四氧嘧啶法在测定前需用三氯乙酸或偏磷酸除去蛋白.测定酵母提取液中GSH的浓度,在提取GSH时采用温差破碎细胞,酵母中的蛋白可以以沉淀形式除去,离心后GSH提取液中已经不含有蛋白.因此可以省略原方法中三氯乙酸或偏磷酸除蛋白的过程,原测定步骤也相应简化.9DTNB法28——ShandongFoodFermentation2007.3(总第146期)山东食品发酵GSH和DTNB反应生成黄色的5一硫代一2硝基苯甲酸,在412nm波长有最大吸收峰.方法:样品1式2份,pH8.0条件下分别和甲醛反应2min和60min,各取lmL加入5mLDTNB溶液,25℃反应5min后分别测定在波长412nm的吸光度,算出2者的差值△A,代入标准曲线计算得出谷胱甘肽含量.得到谷胱甘肽浓度在0.19-0.95gL.之间线性关系良好,回归方程为:Y=0.7154X一0.0004,r=0.9999,最大误差不超过6%.本方法成本低廉,简单易行, 特别适合于有干扰物质存在时还原型谷胱甘肽浓度的分析.DTNB法中,反应显色后30min以内光密度未见降低,显色稳定.相对误差可以控制在2%以内,相对标准偏差可以控制在4%以内,说明这种方法的准确度和精密度较高,且半胱氨酸不干扰测定结果.刘娟等¨对此方法应用于发酵液中还原型谷胱甘肽的测定稍作改进如下:将分样品0.5mL加入1.5mL0.15mol/LNaOH溶液中, 摇匀,加入体积分数=0.03,甲醛0.5mL,摇匀,静置2min.加入2.5mLDTNB分析溶液,摇匀,在25℃水浴保温5min,测定在波长412nm处的吸光度A,通过计算或从标准曲线上得出相应GSH 浓度.DTNB法经改进后,其灵敏度比原先提高了三倍.另外,蓝金贵等报道了一种快速,简便和廉价的谷胱甘肽(GSH)含量测定的新方法.利用GSH的还原性将磷钼杂多酸还原成磷钼杂多蓝, 在710nm最大吸收波长处测其吸光度,吸光度与GSH的浓度在3.3×10..一1.3×104mol/L范围内呈线性关系,相关系数r=O.9982,方法检测限为1.6×10..mol/L,相对标准偏差RSD=1.1% (n=6),回收率为97.1%一103.5%.该法应用于药品中GSH含量的直接测定,结果满意.综上所述,目前对于谷胱甘肽的测定还没建立一个既十分灵敏,特异,又十分快速,稳定,经济的方法.谷胱甘肽的各种测定方法各有其优点,有的灵敏度高,有的快速可靠,有的可区分开各种成分;同时也存在各自的不足,有的样本准备过程复杂,有的测定各成分分离不佳,有的需要昂贵设备.一个快速,稳定,特异,灵敏,经济的测定方法,有待进一步建立.参考文献[1]沈亚领,李爽等,谷胱甘肽的应用与生产,工业微生物,2000,30(2):4l一45[2]赵旭东,魏东芝,万群,等,谷胱甘肽的简便测定法[J].药物分析杂志,2000,20(1):34—37[3]AndersonME.Determinationofglutathioneandglu—tathionedisulfideinbiologicalsamples[J].Methodsin enzymology,1985,l13:548—555[4]MouradT,MinKL,SteghensJP.Measurementofoxi—dizedglutathionebyenzymaticrecyclingcoupledtO ioluminescentdetection[J].AnalyticalBiochenistry,2000, 283.:146—152[5]攀跃平,于健春等,谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较,评价,中国临床营养杂志,2003,l1(2): 136—139【6]郭黎平,刘国良,张卓勇,等.铜(II)一新铜试剂一谷胱甘肽乙醇体系显色反应研究[J].光谱学与光谱分析, 2000,20(30):4l2-4l4.[7]曹新志,陈彦.荧光法测定黄瓜中的谷胱甘肽【Jl'资源开发与市场,2000,l6(5):272—273.【8】HissinPJ,HilfR.Afluorometricmethodfordetermina—tionofoxidizedandreducedglutathioneintissue【J】.Anal Biochem,1976,74:2l4—226.[9]张建莹,齐剑英等,锌离子增强荧光光谱法测定谷胱甘肽[J].暨南大学,2004,25(1):88—91[10]ArizaAR,ToribioF,BareaJL-Rapiddeterminationof glutathionestatusinfishLiverusinghigh??performanceliq??uidchromatographyandelectrochemicaldedection[J].Jour—nalofChromatographyB.1994.656:311—318【l】]杨培慧,齐剑英,冯德雄,蔡继业.谷胱甘肽的应用及其检测方法[JJ'中国生化药物杂志,2002,23(1):52—54 [12】FrassanitoR,RossiM,DraganiLK,eta1.Newand simplemethodfortheanalysisoftheGlutathioneadduct ofatrazine[J].JournalofChromatographyA,l998,795: 53—60[13]ThomasJ,SheaO,LunteSM.Selectivedetectionof freethiolsbycapillaryelectr0ph0resis—electrochemistryUS—ingagold/mercuryamalgammicr0electr0de[J].AnalChem, 1993.65(3):247—250[14]上海市医学化验所.临床生化检验(上)[M】.上海:上海科技出版社,l979[15]刘娟,王雅琴等.发酵液中还原型谷胱甘肽三种测定方法的改进及其比较[JJ.北京化工大学,2004,31(3): 35—38ShandongFoodFermentation——29。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
GSSG。1 U=1000 mU。
c. 对于谷胱甘肽还原酶：1mU/ml＝1nmol NADPH/min/ml＝(A340/min)/0.00622 即相当于：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]=[A340/min(sapmle)－A340/min(blank)]/0.00622 注：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]的单位为mU/ml。
如果A340/min(sapmle)＝0.0255，A340/min(blank)＝0.0006，那么 [检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]= (0.0255-0.0006)/0.00622=4.0mU/ml
[样品中谷胱甘肽还原酶活力]= 4.0mU/mlX10X20/(0.5mg/ml)=1.6U/mg(蛋白)
注意事项：
¾ 本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。另外，硫酸钠、硫酸铵和铁氰化 物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
¾ 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 ¾ 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。 ¾ NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 S0055
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
包装 100次
产品简介：
¾ 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样 品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)活性的试剂盒。谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷 胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清 除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清谷胱甘肽还原酶的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分2.1 外观试剂1a为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂1b为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.5000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0100。
2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[12，184] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[12，50] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5 U/L，在(50，184]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为70U/L时，其吸光度变化率应不超过0.5000。
2.6 线性范围在[12，184] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[12，50]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±7.5U/L，在(50，184] U/L区间内线性相对偏差应不超过±15%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.8 瓶间差试剂1b、试剂2、质控品的瓶间差应≤10%。
还原型谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)简介：谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒，其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB 反应，产生稳定黄色的TNB 和GSSG ，获得样品的GSH 含量。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、 配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。
1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml DTNB 储存液10μl100μl500μl3、 配制标准品：注意：由于GSH 标准在蛋白沉淀工作液中不太稳定，用蛋白沉淀工作液配制的GSH 溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。
4、 配制NADPH 工作液：在本试剂盒提供的10mg NADPH 中加入1ml ddH 2O ，溶解并编号 名称TO1037 100T Storage试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 50mlRT 避光 使用说明书1份混匀，即为NADPH储存液(10mg/ml)。
氧化型谷胱甘肽测定方法
氧化型谷胱甘肽测定方法引言：氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione, GSSG）是一种重要的抗氧化物质，它在细胞内起到清除自由基和保护细胞免受氧化损伤的作用。
因此，准确测定氧化型谷胱甘肽的含量对于了解细胞氧化状态和维持细胞正常功能具有重要意义。
本文将介绍几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
一、梅尔二硫代苯酚法梅尔二硫代苯酚法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用氧化型谷胱甘肽与2,2'-二硫代苯酚反应生成深黄色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法简单、快速，且具有较高的灵敏度和准确性。
二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用高效液相色谱仪对氧化型谷胱甘肽进行分离和测定。
首先将样品中的氧化型谷胱甘肽与还原剂还原生成还原型谷胱甘肽，然后通过高效液相色谱仪进行分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性高的优点，但操作复杂，需要专门的仪器设备。
三、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法是一种基于酶标记技术的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用特异性抗体与氧化型谷胱甘肽结合，然后通过酶标记的二抗与抗体结合，最后通过底物的酶促反应生成产物，通过测定产物的光吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法具有高灵敏度、高特异性和较强的抗干扰能力，但需要较长的操作时间。
四、电化学法电化学法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用电极对氧化型谷胱甘肽进行氧化还原反应，并通过测定电流的变化来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点，但需要专门的电化学仪器设备和操作技术。
结论：氧化型谷胱甘肽测定方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
选择合适的测定方法需要根据实际需求和条件来决定。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验条件和操作步骤，以确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法对读者有所帮助。
dtnb相对分子质量
dtnb相对分子质量DTNB，全称5,5'-二硫代二(2-硝基苯酸)二钠盐（5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) disodium salt）是一种化学试剂，具有广泛的应用领域。
其相对分子质量为396.32，化学式为C14H6N2Na2O8S2。
DTNB作为一种常用的显色试剂，主要用于测定生物体内还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。
谷胱甘肽是一种重要的抗氧化剂，在细胞中起到清除自由基和保护细胞免受氧化损伤的重要作用。
DTNB与还原型谷胱甘肽反应生成黄色产物，可以通过光度计测定其吸光度，从而间接测定谷胱甘肽的浓度。
除了谷胱甘肽测定外，DTNB还可用于测定其他生物活性物质的含量。
例如，它可以用于测定血浆中的白蛋白含量，从而评估肝功能。
此外，DTNB还可以用于测定硫醇类化合物的含量，如半胱氨酸、巯基乙醇等。
在实验室中，使用DTNB进行测定通常需要配制一定浓度的工作溶液。
首先将DTNB溶解在缓冲液中，形成酸性溶液，然后将待测样品加入溶液中，进行反应。
反应完成后，通过光度计测定吸光度，并与标准曲线进行比较，从而得到待测物的浓度。
DTNB的使用具有一定的注意事项。
首先，由于其具有一定的毒性，使用时需要佩戴适当的防护设备，避免直接接触。
其次，DTNB在溶液中的稳定性较差，容易受到光、热和氧的影响，因此在使用时需要保持溶液的暗处保存。
另外，由于DTNB与还原型物质反应生成的产物具有一定的吸光度，测定时需要注意选择合适的波长进行测定，以避免其他物质的干扰。
总结起来，DTNB是一种常用的化学试剂，具有广泛的应用领域。
通过与还原型物质反应生成黄色产物，可以间接测定其浓度，从而实现对生物体内重要物质含量的测定。
在实验室中的应用中，需要注意其毒性和稳定性，以及其他物质的干扰。
DTNB的研究和应用为生物医学科学领域的研究和诊断提供了重要的工具和手段。
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氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)
简介：
谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm 处吸光度，与相应处理的GSH 标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶
解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、 配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合，
即为50×GSH 还原酶。
3、 配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。
1个样品
10个样品
50个样品
编号 名称
TO1043 100T Storage
试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(D): 蛋白沉淀剂 2g RT 避光 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 3ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 100ml
RT 避光 使用说明书
1份
GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml
DTNB储存液5μl 50μl 250μl
4、配制T-GSH检测工作液：按下表配制T-GSH检测工作液。
1个样品10个样品50个样品
GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml
DTNB储存液5μl 50μl 250μl
50×GSH还原酶43.2μl 432μl 2160μl
5、配制标准品：把还原型GSH标准储存液(10mM)用蛋白沉淀工作液稀释成50μM标准
溶液。
然后依次稀释成溶液。
取GSH标准溶液6个点做标准曲线。
6、红细胞或血浆样品的制备：请尽量使用新鲜的血液进行测定。
离心，沉淀为红细胞，上
清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次。
取约红细胞沉淀或血浆，加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置，离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。
①组织样品的制备：取组织用液氮速冻，迅速研磨，按每加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex
振匀，再加入蛋白沉淀工作液，用匀浆器充分匀浆。
4℃孵育10min，4℃10000g离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。
②细胞样品的制备：PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。
加入细胞沉淀3倍
体积的蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ml。
)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上。
10、GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(ml) 空白管标准管测定管蛋白沉淀工作液0.08 ——
系列标准品(2～50μM) —0.08 —
待测样品——0.08
GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6
室温或25℃孵育。
NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4
11、T-GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的T-GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(ml) 空白管标准管测定管
蛋白沉淀工作液0.08 ——
系列标准品(2～50μM) —0.08 —
待测样品——0.08
GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6
室温或25℃孵育。
NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4
12、GSH和T-GSH检测：立即用酶标仪或自动生化分析仪于410nm处每隔2min检测一次，空白孔调零，共检测6min(亦可加入NADPH工作液反应6min后检测，只检测1次)，以检测其反应速率ΔA/min。
如果酶标仪不能检测410nm，可测定405～420nm处吸光度。
计算：
①动力学测定法：根据不同时间点测定得到的吸光度值计算出ΔA410/min，以GSH标准
的浓度为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
根据待测的ΔA410/min，对照标准曲线就可以计算出测定时样品还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)的含量。
GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量
②终点测定法：即反应6min仅测定1次吸光度。
以GSH标准的浓度为横坐标，以Δ
A410/min为纵坐标，做出标准曲线。
样品对照标准曲线即可计算出总谷胱甘肽的含量。
终点测定法比动力学法快捷。
GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量
参考区间：
成年全血GSH 1.02～mmol/L
注意事项：
1、请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下
降。
2、全血GSH与吸烟和锻炼成正比。
3、测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。
4、轻度溶血样本对GSH测定无影响。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。