实验六++植物抗氧化酶活性的测定

8
6
4
2
0
c a llu s
suspension cells
P O D activity of tobacco
李忠光，2009.10
一、实验原理
POD
▪ Peroxidase, POD
▪ （ROS,H2O2）
Polyphennol oxidase, PPO
PPO
抗氧化酶动力学曲线
Absorbance Absorbance
A C
抗氧化酶与植物抗逆性关系
Journal of Experimental Botany, 2009，60（2）：377–390
H2O2
H2O2
Βιβλιοθήκη Baidu1
-1
P O D a c t i v it y m (o l . g F W . m i)n
12
S oluble P O D
10
C W B-PO D
用PBS溶解）2.8 ml， 25 ℃水浴5 min，加入酶液0.2 ml （空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应 30 s和2 min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶 液的量为一个活力单位（U），则：
4、计算
POD activities =
A470
Wt
VTV1 V2
(mol.g-1FWmin-1)
0.7
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 00.0
400 420 440 460 480 500 520 540 560
Wavelength
01.0
B
0.8
0.6
0.4
0.2
525nm 410nm
00.0 0
5 10 15 20 25 30 35
Reaction time (min)
植物抗氧化酶提取和测定参考文献
2、POD测定：取POD反应混合液（10 mmol/L愈创木酚，
5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.90 ml，25 ℃水浴5 min， 加入酶液100 l（空白调零用提取液取代），立即记时，
摇匀，读出反应30 s和3 min时的A470。用ε计算POD活性。 3、PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，
PPO activities =
A410 V1 (U.g-1FW)
0.01Wt V2
5、思考题 5.1 简述植物POD和PPO的生理
意义。 5.2在论述呼吸代谢多途径及其
生理意义。
谢谢聆听！
二、实验方法
1、提取：分别取0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml 提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨 →转入离心管中→用2 ml提取液 洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用 于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。