电镜样品处理 - 360文档中心

扫描电镜SEM制样步骤

扫描电镜S E M制样步骤-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN扫描电镜观察制样步骤固定：1、用灭菌镊子挑出少量的的样品（碳粒/碳毡）,放入 5ml 的离心管中,2、加入2.5%戊二醛, 加量为淹没碳粒/碳毡样品为宜,室温固定1小时3、置于 4℃冰箱中固定12小时。

冲洗：用 0.2mol pH 7.4的磷酸缓冲溶液冲洗 3 次，每次 10 分钟。

每次冲洗时先用注射器缓慢吸走上一步骤的冲洗液。

Or 离心脱水：分别用浓度为30%， 50%，75%，90%, 95%, 100% v/v 的乙醇进行脱水，每次10分钟，干燥：将样品放在离心管里，置入干燥器中干燥 12 小时。

粘样：用双面胶将样品观察面向上粘贴在扫描电镜铜板上预处理好的样品放入干净离心管中待检。

SEM上机测样--测定条件参数设置分子克隆实验指南第三版，1568页：25度下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制；先配0.1mol/L K2HPO4，0.1mol/L KH2PO4配PH7.4，100ml磷酸钾缓冲液需：0.1mol/L K2HPO4，80.2ml0.1mol/L KH2PO4，19.8ml混合即是，不用酸碱调PH。

参考文献：DOI:?10.1021/es902165yMicrobial fuel cell?based on Klebsiella pneumoniae biofilmSelecting?anode-respiring bacteria based on?anode?potential: phylogenetic, electrochemical, and?microscopic?characterizationA severe reduction in the cytochrome C content of?Geobacter sulfurreducens?eliminates its capacity for extracellular electron transfer2。

透射电镜生物样本制备流程及注意事项

透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。

它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。

然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。

下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。

一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。

常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。

2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。

通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。

3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。

二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。

超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。

2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。

离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。

三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。

常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。

2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。

通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。

这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。

3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。

树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。

四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。

用扫描电镜对样品或试件进行观察时样品需要做哪些处理

用扫描电镜对样品或试件进行观察时样品需要做哪些处理在进行扫描电镜观察前，要对样品作相应的处理。

扫描电镜样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好，没有变形和污染，样品干燥并且有良好导电性能。

那么接下里就让我们来看看对样品该如何处理吧。

一、样品的初步处理(一) 取材扫描电镜来说，样品可以稍大些，面积可达8mm×8mm，厚度可达5mm。

对于扫描电镜易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等，可固定在滤纸或卡片纸上，以充分暴露待观察的组织表面。

(二) 样品的清洗扫描电镜观察到的部分往往是样品的表面，也就是组织的自由表面。

由于样本取自活体组织，其表面往往附着有血液、组织液或粘液，会覆盖样本的表面结构，影响观察。

因此，在样品被固定之前，这些附件应该被清洁。

(三) 固定固定所用试剂与透射电镜制样所用试剂相同，双固定常用戊二醛和锇酸。

由于样本量较大，固定时间应适当延长。

也可以通过速冻来固定。

(四) 脱水漂洗后，样品用浓度逐步增加的乙醇或丙酮脱水，然后进入中间液，通常用乙酸异戊酯作为中间液。

二、样品的干燥扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。

无论是水或脱水溶液，在高真空中都会产生剧烈地汽化，不仅影响真空度、污染样品，还会破坏样品的微细结构。

因此，样品在用电镜观察之前必须进行干燥。

干燥的方法有以下几种:(一) 空气干燥法空气干燥法又称自然干燥法，就是将经过脱水的样品，让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。

这种方法的优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中，组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。

因此，该方法一般只适用于表面较为坚硬的样品。

(二)临界点干燥法临界点干燥法是利用物质在临界状态时，其表面张力等于零的特性，使样品的液体完全汽化，并以气体方式排掉，来达到完全干燥的目的。

这样就可以避免表面张力的影响，较好地保存样品的微细结构。

此法操作较为方便，所用的时间也不算长，一般约2~3小时即可完成，所以是常用的干燥方法。

透射电镜制样流程

透射电镜制样流程透射电镜（Transmission Electron Microscopy，TEM）制样是指通过一系列的化学和物理方法来制取透射电镜所需的样品。

透射电镜是一种高分辨率的显微镜，可以在纳米尺度下观察材料的原子结构和微观形态。

为了获取高质量的TEM图像，制样过程非常关键。

下面将详细介绍透射电镜制样的流程。

1.样品制备：样品可以是纳米颗粒、薄膜、纤维或生物样品等。

首先，准备适宜的基底材料，如碳膜覆盖的铜网格或碳膜覆盖的铜刀片。

样品通常需要制成非常薄的切片，通常在50到100纳米的厚度范围内。

制备方法包括机械切割、电解石蠟切片、离子切割或电离蚀刻等。

2.固定和固化：对于生物样品，需要先进行固定处理，以保持样品的形态和结构。

常用的固定剂包括戊二醛、酸性醛或重金属盐。

然后，固定的样品需要进一步处理以固化，如用过氧化物、树脂或聚合物进行浸渍，以增加样品的稳定性。

3.切割和悬浮：将固化的样品切割成适当的尺寸和形状。

使用超微切割机、离子切割仪或其他切割工具进行切割。

切割后，样品通常会悬浮在水或有机溶液中，以便进一步处理。

4.脱水和对比染色：脱水是将样品从水中逐渐转移到有机溶剂中的过程。

这种处理可以控制样品的体积，以减少对比染色和观察中的伪影。

脱水通常通过渗透固定液逐渐转移，然后通过有机溶剂（如醋酸乙酯、丙酮或丙二醇）进行交换。

5.嵌入：将样品嵌入到透明的聚合物或树脂中。

嵌入过程中，通常采用逐渐增加浓度的树脂混合物，以确保样品得到完全浸透。

然后，将样品与树脂进行硬化，通常在高温下进行。

6.超薄切片：将固化的样品切割成非常薄的切片。

使用超薄切片机和钻磨刀片进行切割。

切割后的切片应尽快收集并转移到透明的铜网格或铜刀片上。

7.超薄切片处理：超薄切片通常需要进行后继处理以增强对比度和解决其他问题。

这可能包括染色、胶层增强或薄膜剥离等方法。

8.观察：将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。

在观察前，样品需要在真空中或过氮气中去除气泡和其他杂质。

透射电镜样品制备方法

透射电镜样品制备方法
首先，样品的准备是透射电镜制备的第一步。

在进行透射电镜
样品制备之前，需要选择合适的样品。

样品可以是固体材料、生物
组织、纳米材料等，根据研究的目的和对象进行选择。

在选择样品
的过程中，需要考虑样品的形态、尺寸、结构等因素，以确保样品
能够满足透射电镜观察和分析的要求。

其次，样品的制备过程需要严格控制。

对于固体材料样品，通
常需要将样品切割成薄片或薄膜，以确保透射电镜的电子束能够穿
透样品并产生清晰的像像。

对于生物组织样品，通常需要进行化学
固定、脱水、包埋等处理，以保持样品的形态和结构。

对于纳米材
料样品，通常需要将样品分散在适当的溶剂中，并在透射电镜网格
上制备成薄膜。

在样品制备的过程中，需要注意避免样品的污染和
损坏，确保样品的原貌和结构不受影响。

最后，在透射电镜样品制备完成后，需要进行适当的检测和验证。

可以通过光学显微镜、扫描电子显微镜等手段对样品进行初步
的观察和分析，以确保样品的质量和完整性。

在透射电镜观察之前，还需要对样品进行真空干燥等处理，以避免在透射电镜中产生气泡
和水膜等影响观察效果的问题。

总之，透射电镜样品制备是透射电镜观察和分析的基础，正确的样品制备方法对于获得准确、可靠的实验结果至关重要。

在进行透射电镜样品制备时，需要选择合适的样品、严格控制制备过程，并进行适当的检测和验证，以确保样品的质量和完整性。

希望本文提供的透射电镜样品制备方法能够对相关研究工作有所帮助。

扫描电镜样品取材须知

扫描电镜样品取材须知介绍扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描，将产生的二次电子用特制的探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体（细胞、组织）表面的立体构像，可照相。

以观察组织细胞表面结构为主的样品，应特别要注意保护好观察面，尽量避免取材器械与待观察面的接触，样品可以大一些，但其直径不宜超过5mm，高度控制在3mm内。

以观察细胞内部超微结构的样品，样品大小在直径2mm以内，高度在3mm左右。

同时要做好样品观察面的标记，否则，经过后续处理后会难以辨别观察面的位置。

另外，移动样品可用无齿镊子或用牙签转移，或用镊子借液体的张力移取组织块，注意不可用力夹。

注意事项1、扫描电镜对样品表面的要求非常严格，必须清洗干净，否则，可导致观察困难或错误判断。

2、取材时要做到“动作快、环境冷、部位准”。

固定前清洗的组织离体后应在2~3分钟清洗完毕并投入预冷固定液内；固定后清洗的组织离体后应在1分钟以内投入固定液。

固定液要预冷，取材部位必须准确。

3、实验动物取材部位不宜多，否则会延误取材时间，导致组织自溶等人为假象的发生。

标本清洗：1、固定前清洗法：指表面覆盖有大量黏液和杂质的组织，在3%戊二醛固定之前进行清洗。

清洗之前可用低浓度蛋白水解酶（胰蛋白酶、糜蛋白酶等）或其他具有水解作用的溶液（N-乙酰半胱氨酸）对样品进行黏液处理，之后再选择等渗生理盐水或缓冲液在震荡器中进行清洗或用注射器加压冲洗，冲洗时间可根据样品附着物的情况来定。

2、固定后清洗法：是指表面比较干净的组织，取材后经过戊二醛固定2小时之后，用等渗生理盐水或缓冲液进行冲洗。

3、离心清洗法：指游离细胞、微生物以及其他微小生物样品的清洗。

具体步骤如下：将固定好的样品放入离心管内，注入等渗生理盐水或缓冲液（样品体积20倍的量），轻轻摇匀后，置4℃4000转/分钟离心3~5分钟，弃去上清夜，再注入上述清洗液，同样操作3~4次即可。

由于电镜样本制备过程中会不可避免地损失掉一部分细胞，因此细胞必须达到一定数量，即为离心后细胞量至少为黄豆样大小。

免疫电镜实验步骤

免疫电镜实验步骤免疫电镜（immuno-electron microscopy，IEM）是一种结合了免疫学和电镜技术的方法，能够直接在细胞或组织水平上观察和定位特定抗原。

它是一种有力的工具，可以帮助研究人员研究细胞和组织中的蛋白质相互作用，了解其在亚细胞水平的功能和定位。

免疫电镜实验步骤如下：1. 细胞或组织固定：首先，需要处理样品以使其具有电镜处理所需的高度稳定性。

通常，细胞或组织样本会使用交联剂如戊二醛进行固定。

固定的目的是保持样本的形态和结构，并防止其在后续处理过程中发生破坏。

2. 裁剪：将固定的细胞或组织样品切成适当的尺寸和形状以适应电镜的观察要求。

这通常需要非常小的块，以便于后续处理。

3. 过渡液处理：将样品经过一系列的过渡液处理，以去除残留的固定剂和使样品适应后续处理步骤。

这些过渡液通常是缓冲液，比如磷酸盐缓冲液。

4. 与抗原特异性的抗体结合：将样品与抗原特异性的抗体结合，以实现对特定抗原的检测。

这一步骤是免疫电镜实验的核心。

抗体可以直接标记电镜可见的标记物，如金颗粒，或作为未标记抗体来标记后续参与复合物的二级抗体。

5. 渗透处理：对样品进行渗透处理，旨在增强电镜对样品的可见度。

渗透剂的选择基于具体的研究问题，可以使用醋酸铀、酸酮铀等物质。

6. 样品固化：使用适当的聚合剂，如聚合酮树脂，对样品进行固化，以使其能够保持其形态和结构，并便于切片后的后续处理。

7. 切片：将固化的样品切成极薄的切片，通常在50-100 nm的范围内。

切片过程通常通过使用超微切片机或超声刀来完成。

8. 样品染色：对切片的样品进行染色以增强对抗原的可见度。

可以使用核苷酸染料如乌尔红，或金标记等染色剂。

9. 电镜观察：将样品放置在电子显微镜中，并使用适当的电压和放大倍数进行观察和记录。

通过观察电镜图像，可以获得关于抗原的位置、分布和亚细胞定位的信息。

总结：免疫电镜实验是一种强大的技术，可以帮助研究人员观察和定位特定抗原。

透射电镜生物样品前处理步骤

电镜样品制备步骤1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察spurr包埋剂配制：ERL 2.5gNSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存DER 2.5 gDMAE 0.1g宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。

扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法

扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法扫描电镜是一种常用的高分辨率显微镜，广泛应用于科研、医学、材料科学等领域。

要想获得清晰的成像结果，除了设备本身的性能外，样品的处理和成像参数的设置也十分关键。

下面将介绍扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法。

一、样品处理技巧1. 表面清洁：在进行扫描电镜观察之前，首先要保证样品表面的干净和整洁。

可以使用超声波清洗仪或一些特定的溶液进行清洗，去除可能存在的灰尘、油脂等污染物。

2. 干燥处理：为了避免样品表面的水分干扰成像结果，可以通过空气吹干、真空干燥或冷冻干燥等方法进行处理。

不同的材质和尺寸可能需要不同的干燥处理方法，要根据具体情况选择合适的方式。

3. 导电涂层：扫描电镜通常对导电性要求较高，因此对于非导电性的样品，需要进行导电涂层处理。

常用的导电涂层材料有金、铂、铜等，可以使用溅射、喷镀等方式进行涂层。

涂层的厚度应该适中，过厚会影响成像的清晰度。

4. 极性处理：对于有生物学样品，如细胞、组织等，常常需要进行极性处理。

极性处理可以通过化学固定、盐水处理等方式进行，使样品保持其原有的形态和结构。

5. 切片制备：对于一些需要进行截面观察的样品，如材料样品或生物样品的超薄切片等，需要使用显微切片机进行切割。

切片的厚度和质量直接影响到成像结果的清晰度和分辨率。

二、成像参数设置方法1. 加速电压：扫描电镜的成像主要依靠电子束与样品表面的相互作用。

电子束的加速电压是成像参数中的重要参数，不同的样品需要不同的电压。

一般来说，低电压会使成像清晰度增加，但是对于一些厚度较大的样品，需要较高的电压穿透进而成像。

2. 样品离子束扫描电流：样品受到离子束扫描电流的刺激时，会发生荧光反应或散射，产生成像信号。

这个参数需要根据具体样品的离子束离散化程度进行调整，影响着样品的信号强度和噪声水平。

3. 探测器设置：扫描电镜中常用的探测器有二次电子探测器和透射电子探测器。

二次电子探测器对于表面形貌的观察很有帮助，而透射电子探测器可以获得材料内部的结构信息。

电镜测试标本送样须知

常规电镜测试须知1.请在实验前一周内到电镜室取样品固定所需固定液2. 2.5%戊二醛4℃避光保存，2周内有效3. 2.5%戊二醛固定后标本4℃保存2月内有效4.*戊二醛请避免超时使用5.请按照要求取材、固定，做好样品标签6.送样品时须按照200元人民币/例样品缴齐押金，样品测试结束、交齐测试费后，退回押金；1)每例透射样品只随机切一张含有若干标本切片的200目铜网，如需要增加切片数量，按100元/张切片、染色。

2)扫描电镜如仅需要喷镀，则制样费按100元/例收取3)透射样品如在制样周期外要求制样，可选择自行处理或250元/例加急处理4)取材不符合要求，电镜室拒收；如因取材、固定问题导致无满意结果，请自行负责。

5)！！超出预约时间30min未到电镜室，按照100元/小时收取费用。

6)！！固定液：透射电镜工作液500μl/例，超出按10元/ml收费。

7)！！每学期寒暑假前1个月停止制样。

8)有疑问请联系工作人员电话：62789057，内线：89057收费标准1指在电镜下观察标本、拍照2CCD数码照片3透射电镜制样的全套！指由已固定样品到观察前所有步骤4指由已固定样品到树脂块5指a提供树脂块切片，b要求切片数量超出一张范围时a指在电镜下观察标本、拍照c扫描电镜制样的全套指由已固定样品到观察前所有步骤d指由已固定样品到干燥e指干燥的不需处理样品单纯喷镀*校外人员开具税务发票，需另加6%的税点。

测试结束后，带电镜室缴款通知到学校办公楼一楼财务室缴费，自带记账凭证或税务发票到电镜室，退回押金。

扫描电镜用于表面观察，结果图示扫描电镜1生物材料表面生长细胞扫描电镜2肾小球结构透射电镜用于观察细胞内部结构，结果图示透射电镜 1肝糖原聚集透射电镜 2 培养细胞常规透射电镜送样须知-培养细胞请按要求取材1)细胞数：106或25ml培养瓶达到生长面积的80%，贴壁细胞使用细胞刮刮下细胞或消化液消化细胞；2)使用4℃的PBS(0.2M pH7.4)或生理盐水对细胞进行离心漂洗2-3次。

扫描电镜流程

扫描电镜样品制备流程
1.样品准备与固定（实验室完成）
a)固体培养样品：在固体琼脂平板上培养至合适阶段，用刀片切5mm*5mm大小样
品2至4块，置于预冷的2.5%戊二醛-PBS溶液中，4℃固定2小时以上或过夜；
b)液体培养样品：在液体培养基中摇培至合适阶段，离心去上清，加入预冷的2.5%
戊二醛-PBS溶液，轻轻弹起混匀，4℃固定2小时以上或过夜；
2.样品梯度脱水（实验室或平台）
a)准备50%，70%，85%，95%，100%乙醇溶液；
b)梯度脱水操作：
i.固体样品可以直接置于2ml EP管中操作，液体样品离心后去上清，将样品取
出置于滤纸中包好；
ii.分别用50%，70%，85%，95%乙醇脱水15分钟；
iii.用100%乙醇脱水3次；
3.样品超临界流体干燥（平台）
4.样品喷金（平台）
5.扫描电镜观察（平台）。

透射电镜常规样品制备流程

透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术，普通晶体样品的常
规样品制备流程如下：
1、样品的准备：将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用，并配合温度控制装置使用。

2、样品处理：将样品用接近样品发热点的温度处理，一般为200?C，把样品放入室温保温的石蜡，再将该石蜡分别放入不同的温度槽，如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。

3、镀膜：将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下，镀膜时，将碳
气体经过电子枪加热，形成形状与原子相同的表面。

4、结晶：首先需要将样品放置在一定温度和压力下，进行结晶，再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中，使样品迅速结晶，并在腔内
升温至合适温度，加快结晶过程。

5、夹具的清洗：在滴定液中加入抗蚀剂，夹具进行清洗，确保样品
无几何不良影响。

6、取晶体：用软金属夹具取出晶体，放在清洗过的滴定液中浸泡，
以使样品重新渗透，然后将样品放入滴定液腔中，进行滴定，使样品表面
无污染物。

7、安装样品：用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上，并将其固定，以保证样品的准确安装。

透射电镜生物样品前处理步骤

透射电镜样品制备步骤取材醛类前固定缓冲液漂洗饿酸固定（后固定）缓冲液漂洗脱水剂梯度脱水丙酮/环氧丙烷臵换浸透（先于不同比例包埋剂-脱水剂再纯包埋剂长时间浸透）加热聚合修快超薄切片铀铅染色1、取材：4℃冰块上迅速取材，1mm3大小，立即放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）脑、胰等柔软组织先切成较大厚片于戊二醛固定数分钟增加硬度，再切成小块臵于新的戊二醛固定液小肠、周围神经、肌肉等方向性、易扭曲样本可绑在小波棒上固定，待硬化后纵行方向切成长方形固定2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作）注：饿酸固定时间过长会导致脂蛋白复合体溶解，使组织变脆，不利于切片3、再漂洗：吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察骨组织漂洗后需脱钙，EDTA-2Na脱钙液4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷臵换；Cell的固定脱水无需臵换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，臵换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

植物组织脱水时间延长，100%脱水剂中加入烤干的无水CuSO4、无水Na2SO45、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300 ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

扫描电镜的制样要求

扫描电镜的制样要求
1、固体样品：
表面平整，同一批次的样品高度相同，不能有粉尘出现；
2、土壤样品：
（一）制成粉末颗粒，直接粘贴于双面胶之上，再进行喷
镀处理（或参照粉末制样方式）；
（二）冷冻干燥，切成面积较大（约一个平方厘米大小），高度较低的块状，且需要将样品块的四个棱面和上表面的
棱边全部包裹，只露出上表面中心的一小块，喷镀即可。

3、粉末类样品：
（一）直接粘贴于双面胶之上，再进行喷镀处理；
（二）直接撒在导电碳浆（或是环氧树脂，需喷镀）之上，
烘干即可；
（三）包埋，打磨，抛光；
（四）压片，粘贴，喷镀。

4、玻片类样品：
表面干净（可提前用乙醇清洗一下），透光样品需提前在光
镜下在玻片背面标出感兴趣的区域；不透光的样品表面积
要小，小于一个平方厘米。

5、滤膜类样品：
样品膜面积需要小于双面胶的面积。

备注：可自备碳导电胶、铜导电胶、碳浆、银浆等制样装备。