生化实验课
生化实验

实验一基本技术操作及吸光光度法*********************************************实验须知一、实验目的1、通过实验验证生化的基本理论,巩固所学知识。
2、掌握生物化学及分子生物学基本实验方法。
3、培养严谨、认真、实事求是的态度和正确的思维方法。
二、实验要求1、课前预习,课中认真做笔记。
2、按照实验室要求规范操作,如实记录实验结果。
3、认真,按时(当堂)完成实验报告。
三、试剂使用1、核对标签,切勿拿错试剂。
2、刻度吸管或移液器头(Tip头)与试剂必需一一对应,以免引起试剂的交叉污染。
3、用后盖好瓶盖,归还原处。
切勿张冠李戴。
四、仪器使用1、爱护仪器设备,严格遵守操作规则,注意安全。
2、精密仪器,未经允许,不得动用。
3、仪器出现故障,应立即关闭电源,报告老师。
五、实验室规则1、穿工作服进入实验室,遵守课堂纪律。
2、节约水、电、试剂,实验完毕后,清洗所用器材。
3、注意安全,若发生酸碱灼伤,应立即用大量清水冲洗。
4、值日生负责实验室卫生,倒尽垃圾,关好水电、门窗,收齐实验报告。
基本技术操作一:玻璃仪器的洗涤及干燥:(一)意义:去除干扰物,提高实验结果的准确性。
(二)常用洗涤剂:1.洗衣粉,肥皂,洗洁精,去污粉----用于一般去污。
2.强酸,强碱,尿素------去除蛋白质,核酸。
3.铬酸洗液------见附2。
4.水(自来水,蒸馏水)------用来冲洗容器。
(三)洗涤方法:* 洗涤程序:泡→洗(→泡)→冲→漱1.新仪器的洗涤:2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10遍→蒸馏水漱洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。
2.非定量敞口仪器的洗涤(试管、烧杯等)用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。
生物化学实验课教案1.生化基本功训练

若ρ颗=ρ介,颗粒悬浮
若ρ颗<ρ介,颗粒上浮
若ρ颗>ρ介,颗粒下沉
离心机转动离心力沉降速度V若ρ颗=ρ介,颗粒悬浮
若ρ颗<ρ介,颗粒上浮
普通离心机:最大转速6000转/分
高速离心机:最大转速20000-25000转/分
超速离心机:最大转速50000-80000转/分
3.普通离心机的基本构造
4.普通离心机的使用方法:
检查→配平→放置→离心→结束→关闭
(1)检查:离心机是否平稳,离心管是否完整(2)把待分离的悬浮液加入到试管中,将试管放入离心管中,配平离心管。若不平,用滴管取少量蒸馏水加入到离心套管中,切不可加入到试管中。(3)把配平的离心管对称放入转头中(放稳放到底部),多余的取出,盖上离心机盖子(4)打开电源,调节所需转速和时间,启动离心机,听离心机转速声音,可知是否平稳转动。(5)结束待离心机停稳后方可取出离心管(6)关闭离心机,
A=K.C.L(阐述了物质的吸光度与溶液浓度及液层厚度的关系)
物质的吸光度A
溶液浓度C
液层厚度L
吸光系数K
K是物质的特征性常数,与入射光的波长及其物质性质有关。溶液浓度C和液层厚度L无关,不同物质对同一波长单色光,有不同的吸光系数.
(2)待测溶液的浓度的计算:
标准液法:
欲知某溶液的浓度C测,我们可以配制出此物质已知的浓度C标
强调三点一线,边讲边示教
强调轻取重放,边讲边示教
讲一遍后示教
强调配平衡、放对称
举例CUSO4溶液,蓝色,其互补色为黄色,测定它的最大吸光能力,我们就选择黄色光系内的某段波长光为入射光。
画图
按表格操作
示教:
722分光光度计使用方法及其构造
生化实验基本操作ppt课件

5.废弃液体(强酸强碱溶液必须先用水稀释) 可倒入水槽内,同时放水冲走。废纸及其他 固体废物和带有渣滓沉淀的废液都应倒入指 定的垃圾筐内,不得倒入水槽或到处乱扔。
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6.对实验的内常现象 应进行讨论,并大胆提出自己的看法,做到 生动、活泼、主动地学习。
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9.使用浓酸、浓碱,必须极为小心地操作, 防止溅失。用吸量管取这些试剂时,必须使 用橡皮球,绝对不能用口吸。若不慎溅在实 验台或地面,必须及时用湿抹布擦洗干净。 如果触及皮肤,应立即治疗。
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10.如果不慎倾出了相当量的易燃液体,则 应按下法处理:(1)立即关闭室内所有的火 源和电加热器。(2)关门,开启小窗及窗户。 (3)用毛巾或抹布擦拭洒出的液体,并将液 体拧到大的容器中,然后再倒入带塞的玻璃 瓶。
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3.注意保持实验室的整洁。实验完毕,须 将药品试剂排列整齐,仪器要放好,将实验 台面抹拭干净。使用后的玻璃仪器要清洗干 净放好。
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4.要爱护实验仪器,节约使用各种试剂、 物品。使用仪器时,应小心仔细,防止损坏 仪器。使用贵重精密仪器时,应严格遵守操 作规程,发现故障立即报告教师,不要自己 动手检修。仪器损坏时,应如实向教师报告。
实验一 生化实验基本操作
临床生物化学与分子生物学教研室
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生物化学基本技术及应用
一、实验常识 (一)、实验室规则及安全及防护知识 1.自觉地遵守课堂纪律,维护课堂秩序,
保持室内安静。必须穿白大褂,不能穿背心、 拖鞋进入实验室。
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2.要认真、严肃、积极、主动地做实验, 要听从教师的指导。实验过程中要认真做好 观察、记录。完成实验后经教师检查同意, 方可离开。实验完成后要及时的按要求完成 实验报告。
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四、实验室基本操作和常识
基础生化实验 第三个实验 双缩脲

双缩脲法测定蛋白质含量(考核实验)一、教学目的与要求:①加强对蛋白质的有关性质的认识;②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法;③对学生所学进行综合的测试。
二、教学实验原理:蛋白质含有两个以上的肽键,因此有双缩脲反应。
在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关,因此利用此进行比色测定蛋白质含量。
在一定条件下,未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540—560nm下比色,可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度,标准蛋白溶液可以用结晶的牛(或人)血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。
除-CONH-有此反应外,-CONH2-,-CH2-,NH2-,-CS-CS-NH2,等基团亦有此反应。
三、考核主要内容1、标准曲线的制作取6支干净的试管,按0→5编号,然后按下表依次加入试剂,充分混匀,在室温下放置半小时,以管为空白,在550nm波长处测定消光值(OD),以各管蛋白质含量(毫克)横坐标,OD值为坐标,画出标线。
2、样品测定:取样品液1.0 ml,同法进行,测其OD值,对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。
3、分光光度计的使用:规定每组在10min以内全部完成操作(共测6支管);同时注意操作是否规范。
4、成绩的计算:此次的实验占30%(包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质量),平时的五次实验共占70%,每次实验按总分为5分为满分进行打分,总评折合成百分制。
四、实验注意事项:①标准样品的浓度为:10μg/ml;②实验过程中不得过问他人,同组人可以配合进行;③实验报告在课堂上独立完成,同组人数据相同,不得抄袭他人数据,一旦发现以零分处理;④实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做;⑤对实验结果进行简单的分析.一、实验目的:1.掌握分光光度计的使用方法。
2.掌握标准管法测物质含量的方法。
3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。
生化检测讲课教案

生化检测讲课教案教案标题:生化检测讲课教案教学目标:1. 了解生化检测的基本概念和意义;2. 掌握生化检测的常见方法和技术;3. 能够解释生化检测结果的含义和应用。
教学重点:1. 生化检测的基本原理和方法;2. 常见的生化指标及其检测方法;3. 生化检测结果的分析与应用。
教学准备:1. 教师:准备好相关的教学资料、实验室设备和示范实验;2. 学生:准备好课前阅读材料,以及笔记和实验记录本。
教学过程:一、导入(5分钟)1. 引入生化检测的概念,让学生了解生化检测在医学、生物科学等领域的重要性;2. 提问学生是否了解生化检测的常见方法和技术。
二、知识讲解(20分钟)1. 介绍生化检测的基本原理和方法,包括生物样本的采集、样本处理和检测方法选择等;2. 讲解常见的生化指标及其检测方法,如血液中的血糖、血脂、肝功能指标等;3. 通过示范实验或实验视频展示生化检测的具体操作步骤。
三、案例分析(15分钟)1. 提供一些生化检测的实际案例,让学生分析和解释检测结果的含义;2. 引导学生思考生化检测结果在临床诊断、疾病预防和药物疗效评估中的应用。
四、小组讨论(15分钟)1. 将学生分成小组,让他们共同讨论并总结生化检测的优势和局限性;2. 鼓励学生提出自己的观点和问题,并与小组成员进行交流。
五、总结与拓展(10分钟)1. 总结本节课的重点内容,强调生化检测在医学和生物科学中的应用价值;2. 引导学生进一步了解生化检测的发展趋势和新技术。
教学延伸:1. 鼓励学生自主进行生化检测实验,加深对生化检测原理和方法的理解;2. 布置相关的课后作业,如阅读相关文献、撰写实验报告等。
教学评估:1. 课堂参与度:观察学生在课堂讨论和实验中的积极参与程度;2. 课后作业:评估学生对生化检测知识的掌握和应用能力;3. 小组讨论表现:评估学生在小组讨论中的合作和表达能力。
教学资源:1. 生化检测实验视频或示范实验材料;2. 生化检测相关的教材、参考书和期刊文章;3. 生化检测仪器设备和实验室用品。
生物化学实验教案

O C
O C + 3H2O
度过大时甚至不显色。 3、黄色反应 芳香族氨基酸和所含芳香族氨基酸的蛋白质 OH黄色物质
含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸遇硝酸后,可被硝化成黄色的硝基苯的衍生物,该 化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠(加碱后颜色变深可能是由于硝醌酸化合物的生 成) 。 多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以有黄色反应,苯丙氨酸不易硝化,一般情况下几乎 无黄色反应,若同时加入少量浓硫酸,则能得到明显的正反应。皮肤、指甲和毛发等遇浓硝酸变黄
C C C
OH + H2N OH R
H C R COOH
C C
H + NH3 + CO2 + RCHO OH
O
O 还原型茚三酮 O C C C O C O 蓝紫色 此反应的适宜 pH 值为 5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同 pH 条件下的颜色深浅不同,酸 N H C C C O
O C C C O OH H + NH3+ HO HO C
五、操作
1、双缩脲反应 取少量尿素结晶,放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时,停止加 热,尿素放出氨,形成双缩脲。冷后,加 10%氢氧化钠溶液约 1mL,振荡混匀,再加 1%硫酸铜溶 液一滴,再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜,否则,生成的蓝色氢氧化铜 能掩盖粉红色。 向另一试管加卵清蛋白溶液约 1mL 和 10%氢氧化钠溶液约 2mL,摇匀,再加 1%硫酸铜溶液 2 滴,随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。 2、茚三酮反应 (1)取 2 支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液 1mL,再各加 0. 5mL0.1%茚三酮水溶液, 混匀,在沸水浴中加热 1~2 分钟,观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。 (2)在一小块滤纸上滴一滴 0.5%甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴一滴 0.1%茚三酮乙醇溶液, 在微火旁烘干显色,观察紫红色斑点的出现。 3.黄色反应 向 7 个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用微火 加热。待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入 10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜色变化。
生化实验报告课题

课题:DNA提取与鉴定一、实验目的1. 学习DNA提取的基本原理和方法。
2. 掌握从动植物细胞中提取DNA的操作步骤。
3. 学习DNA的鉴定方法,包括观察DNA的紫外光吸收特性。
二、实验原理DNA是生物体内的遗传物质,存在于细胞核、线粒体等细胞器中。
DNA提取是将细胞内的DNA与其他成分分离的过程。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA,该方法利用酚和氯仿的相容性将蛋白质等杂质去除,从而获得纯净的DNA。
三、实验材料1. 材料:新鲜鸡血、小麦种子、苹果等。
2. 试剂:酚-氯仿混合液、NaCl溶液、75%乙醇、蒸馏水、10×TE缓冲液、二苯胺试剂。
3. 仪器:研钵、离心机、移液枪、微量离心管、紫外可见分光光度计、显微镜。
四、实验步骤1. 材料准备:取新鲜鸡血、小麦种子、苹果等,分别研磨成匀浆。
2. 细胞裂解:将匀浆加入1.5倍体积的酚-氯仿混合液,剧烈振荡,静置10分钟。
3. 去除杂质:将混合液转移至新的离心管中,12000 rpm离心10分钟,弃去上层酚-氯仿层,保留下层水相。
4. DNA纯化:将水相中加入等体积的75%乙醇,混匀后静置10分钟,12000 rpm离心5分钟,弃去上清液,将沉淀用70%乙醇洗涤一次,12000 rpm离心5分钟,弃去上清液。
5. DNA溶解:将沉淀溶于适量的10×TE缓冲液中。
6. DNA鉴定:a. 取少量DNA溶液,加入二苯胺试剂,观察颜色变化。
b. 使用紫外可见分光光度计测定DNA溶液在260 nm处的吸光度值。
五、实验结果1. DNA鉴定:通过二苯胺试剂,DNA溶液呈现蓝色,证明DNA提取成功。
2. 紫外可见分光光度计测定:DNA溶液在260 nm处的吸光度值为0.45,表明DNA 纯度较高。
六、实验讨论1. DNA提取过程中,酚-氯仿法的操作较为复杂,需要严格控制实验条件,以保证DNA的纯度。
2. 在DNA纯化过程中,乙醇沉淀法是一种常用的方法,可以有效地去除蛋白质等杂质。
检验科讲课—生化课件

06
生化检验的新技术发展
自动化生化分析仪
自动化生化分析仪是生化检验领域的重要技术之一,它能够快速、准确 地完成大量生化样本的检测和分析。
自动化生化分析仪采用先进的机械臂和液体处理系统,实现了样本的自 动加样、混合、分离和检测等功能,大大提高了检测效率。
操作误差等。
03
误差纠正与预防
根据误差分析结果,采取相应的纠正措施,如维修仪器、更换试剂、培
训操作人员等。同时,还需要制定预防措施,防止类似误差再次发生。
05
生化检验的注意事项
患者准备
患者应提前了解生化检验的要 求,如饮食控制、禁食时间等 ,以便做好充分准备。
患者应避免剧烈运动、过度劳 累和情绪波动,以免影响检验 结果。
肾功能指标
评估肾脏功能,反映肾脏 健康状况。
尿素氮(BUN):蛋白质 代谢产物,通过肾脏排泄
。
尿酸(UA):嘌呤代谢产 物,反映肾功能和痛风。
肌酐(CREA):肌肉代谢
尿蛋白(PRO):检测肾
•·
产物,通过肾脏排泄。
脏病变和评估肾功能。
血糖血脂指标
在此添加您的文本17字
监测血糖和血脂水平,预防糖尿病和心血管疾病。
选择合适的质控品,将其与样本一同 检测,并根据质控品的结果评估实验 的准确性。
校准与校准验证
在开始实验前,必须对仪器进行校准 ,确保仪器处于正常工作状态。同时 ,还需要定期对校准结果进行验证, 以确保结果的准确性。
室间质量评价
参加评价计划
通过参加权威机构组织的室间质量评价计划,与其他实验室进行 比对,了解自身实验室的检测水平。
生化实验课的反思报告

生化实验课的反思报告生化实验课的反思报告生化实验课是我在大学期间所修的一门重要的实践课程。
在这门课上,我有幸参与了许多具有挑战性的实验项目,积累了丰富的实验技巧和实践经验。
通过这门课程的学习和实践,在实施实验过程中,我遇到了一些问题,但同时也取得了一些收获。
首先,我发现在实验前准备工作中,理论知识的学习是非常重要的。
在实验课中,老师会提前给我们讲解实验的原理和目的,并要求我们预习相关的理论知识。
然而,有时候由于课业繁忙或者其他原因,我没有充分地预习相关的知识,导致在实验中理论知识不够扎实的情况。
这给我的实验过程带来了很大的困扰。
通过这次的实验课,我意识到理论知识对于实验的重要性,我将会更加重视实验前的学习,尽量确保自己对实验原理的理解。
第二,实验中的团队合作是至关重要的。
在生化实验中,尤其是一些较为复杂的实验项目中,往往需要多人合作才能完成。
而在实验中,我发现与团队成员充分合作,相互协调配合,会使实验过程更加顺利。
以前,我经常习惯独立完成实验,但这常常会给我带来不必要的困难和挫败感。
通过这门实验课,我学会了与团队成员充分沟通合作,共同解决实验过程中遇到的问题,更加高效地完成实验任务。
第三,实验中的仪器操作技巧是需要不断提高的。
在实验中,我发现仪器的正确操作和调试是实验成功的关键。
而在实验中,我也面临过一些操作不熟练的情况,导致实验无法进行或者结果不准确。
通过这次实验,我发现需要不断加强仪器操作的技巧,熟练掌握仪器的使用方法,提高自己的实验能力。
我会更加注意观察仪器操作步骤,多与老师和同学请教相互交流,提高自己的仪器操作技巧。
最后,实验安全意识是非常重要的。
在生化实验中,我们经常接触到一些有毒有害的试剂和溶液,如果在操作过程中不注意安全,就会对自己和他人的健康造成严重的危害。
我在实验中经常听到一些同学的“啊”声,就是因为他们在操作过程中受伤了。
通过这次实验,我深刻意识到实验安全的重要性,并会更加加强自己的安全意识。
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实验步骤: • 莫氏反应(按下表加试剂)
管号
1 1%葡萄糖 /ml 1 1%蔗糖 /ml 1%淀粉 /ml 纤维素 莫氏试剂 2D 浓硫酸 /ml 2 现象
2
3 4
1
1 少许
2D
2D 2D
2
2 2
注意: (1) 莫氏试剂直接加入溶液中,不能滴在试管壁上!
(2) 加浓硫酸时,试管倾斜,硫酸缓缓加入,不要振动溶液!
实验试剂:
Molish(莫氏)试剂:取5g α-萘酚用95%乙醇 溶解至100mL,临用前配制,棕色瓶保存; Sediwanoff(塞氏)试剂:0.5g 间苯二酚溶于1 升盐酸(H2O∶HCl=2∶1)(V/V)中,临用前 配制; 杜氏试剂:称取2g间苯三酚,溶于250mL95% 乙醇中。临用时取此液3mL,缓缓加入15mL浓 盐酸及9mL蒸馏水,临用时配制。
实验室规则(二)
3、取用试剂时,应仔细辨明标签,以免 取错。取完试剂后,应及时将瓶盖盖好, 放回原处,切忌乱拿乱放,“张冠李戴”。 4、注意安全,用吸量管吸取试剂时应使 用吸球,严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀 的试剂更应注意,应避免其直接接触人体 及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火 源,以免发生意外。
重点与难点:氨基酸纸层析的基本原理的 理解是本实验的难点。重点是掌握氨基酸 纸层析的操作方法和运用。 实验安排:4课时,每人独立实验,4人一 个层析缸。
To Index
实验原理
纸作支持物,特点是-OH多,亲水性强。 溶剂系统分成两相:固定相(水)特点是易与OH结合移动慢。移动相(水饱和的有机溶剂)特 点是移动速度快。 不同的氨基酸在不同的相中溶解度不同,不同的 氨基酸在不同的相中移动速度不同,不同的氨基 酸在相同的相中移动速度也不同。 基于以上三点原因,经过层析后,不同的氨基酸 移动的距离不同,从而得到分离。分离度用Rf值 表示如下: Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿 的距离
电泳:接通电源,电泳条件:电压90-110v,电流
0.4-0.6 Ma/cm ,通电时间约60分钟。
染色:电泳完后,将薄膜浸于染色液中3-5分
钟,取出用漂洗液漂洗至背景无色。
漂洗:将漂洗后的薄膜放在透明液中浸泡至透明。
纪录:记下色带的条数及宽度和颜色深浅
结论:带数可知至少有多少中蛋白质,宽度 和深浅说明该处蛋白质的浓度 思考题与习题 影响电泳的因素有哪些?
计算:
脂肪的酸价= cv×56.1/m 脂肪的碘价=c(B-S)/M×0.1269×100 说明:
B:空白所耗硫代硫酸钠的体积(ml) S: 样品所耗硫代硫酸钠的体积(ml) M :脂肪的质量 C: 硫代硫酸钠的当量浓度
实验五
DNA的提取与凝胶电泳
重点与难点:难点是提取DNA的原理和方
法,重点是琼脂糖凝胶电泳的操作方法。
显色:
喷瓶将茚三酮溶液均匀的喷在滤纸上。在约105℃的 条件下烘烤至各层析斑点显色为止。
记录:
• 将滤纸适当缩小后,将结果画于报告上。
计算Rf值:
• 在计算Rf 值时,用下标表示氨基酸的名称,最好 用每种氨基酸的第一个字标记。例如甘氨酸得Rf 值用Rf甘= 表示。
结论: 提示通过主要比较Rf值的差异,讨论在该 条件下各种氨基酸分离度的大小。 思考题与习题 有哪些因素影响氨基酸的Rf值?
准确称取0.2g的油脂置于碘瓶中,加10ml氯仿作溶剂, 加入Hnaus试剂20ml,塞好瓶塞,轻轻摇动,混匀后置 暗处30分钟,于另一瓶中加同样试剂,不加脂肪,作 空白对照。 30min后,先注15%碘化钾溶液少许于碘瓶口边上,使 碘化钾溶液流入瓶内,继续由瓶口边沿加入碘化钾溶 液,共20毫升,再加水100毫升混匀。随即用标准硫代 硫酸钠溶液滴定。等瓶内液体呈淡黄色时,加1% 淀粉 液数滴,继续滴定,近终点时,可加塞振荡,使之于 氯仿之碘完全作用,继续滴定至蓝色消失为止。记录 标准硫代硫酸钠的用量。同法滴定空白管。
实验室规则(三)
5、注意实验室卫生、整洁。废弃液体 应倒入水槽,放水冲走,实验用过的和棉 花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均 应放入指定容器,不得随意乱扔或丢进水 槽。实验结束后应将实验台整理好。并清 扫、整理实验室。关好水、电、门、窗, 经老师检查同意后,方可离开实验室。
实
•糖的颜色反应
验
目
• 塞氏反应(按下表加试剂)
管号 1%果糖 1%蔗糖 1%葡萄糖 1 2 3 0.5ml 0.5ml 0.5ml
塞氏 试剂
2.5ml 2.5ml 2.5ml
现象(沸水浴 加热)并解释
注意:加热时间要长,观察颜色变化及变化的顺序。颜色 变化顺序用1、2、3标记,深浅用+、++、+++等表示。
• 杜氏反应(按下表加入试剂)
实验四
脂肪酸酸价和碘价的测定
课堂安排:共2课时,2人一组。 课前提问:
什么叫脂肪酸的酸败? 人体必需的不饱和脂肪酸有哪些?
日常生活中油或含脂高的食品变“哈”,为什么?
To Index
实验原理:
酸价的测定:
油脂中的游离脂肪酸与KOH发生中和反应,从 KOH标准溶液消耗量可计算出游离脂肪酸的量 。
生物化学实验
海南大学海洋学院水产学系
实验室规则(一)
1、自觉遵守学习纪律,保持实验室肃静, 不得喧哗吵闹、迟到早退,更不得缺席。 2、爱护仪器,厉行节约。试剂、药品、蒸 馏水等应节约使用,不得浪费。如不慎损坏仪器, 应及时报告老师,说明原因,经老师同意后,方 可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪 器,应先熟悉使用方法,在老师的指导下,严格 按操作规程操作,发现故障,应立即报告老师, 不得擅自处理。
实验原理:
DNA要溶于酸性乙醇和10%的氯化钠,用 丙酮使其沉淀而分离出来。从花椰菜中提 取DNA要注意花椰菜要研磨充分。 琼脂糖凝胶电泳的原理:电荷效应和分子 筛效应。
To
取花椰菜的花冠5克剪碎置于研钵中,加8毫升的 酸性乙醇,再加少量的石英砂研磨成匀浆,在 4000r/min的条件下离心20分钟,得上清液,弃沉 淀。 在上清液中加入等体积的丙酮,混匀,观察现象。 提示:有沉淀生成。 在4000r/min的条件下离心20分钟离心上述浑浊液, 得沉淀,即为DNA的粗制品。 将DNA的粗制品溶解于0.5毫升的TBE缓冲液和0.1 毫升的溴酚蓝指示剂。
DNA的凝胶电泳: 胶的制备:取0.2克琼脂糖凝胶,加入20毫升的TBE,
加热溶解后,冷却到50-60摄氏度,加入Goldview 1ul, 混匀后倒入插有16孔梳子的10×10的凝胶槽中。待 凝胶凝固后小心取出梳子,置于电泳槽中,加入TEB 的缓冲液,使液面略高于凝胶面。
加样:用移液器取10ul的DNA样液,小心的注入凝
胶孔中。
电泳:接通电泳仪的电源,在电压不超过5V/cm的
条件下电泳50分钟。待溴酚蓝指示剂移动到凝胶前 沿1-2cm处,停止电泳。
观察现象:在紫外灯254nm下观察有没有DNA显出
的黄色的色带,并纪录结果 。
注意事项
待胶完全凝固后,方可取出梳子,且不能破坏 胶面; 加样时不能捅破胶孔; 紫外灯照射时间尽量短。
碘价的测定:
在适当条件下,不饱和脂肪酸的不饱和间能与 碘、溴或氯起加成反应。但碘与脂肪的加成作用缓 慢,故于Hanus试剂中加入适量溴,是产生溴化碘, 在与脂肪作用。将一定量的溴化碘与脂肪作用后, 测定溴化碘的剩余量,即可求得脂肪的碘价,100g 脂肪所能吸收碘的克数称为碘价。
器材与试剂:
菜油、Hanus试剂、15% 碘化钾、标准硫代硫酸 钠溶液、淀粉液、KOH 标准液、中性醇醚混合 液、1% 酚酞、 碘瓶、 滴定管、电子分析天平、 称量瓶、
• FA系列电子天平
•
高型称量瓶
实验步骤:
酸价的测定: 准确称取1-2g油脂于 100ml三角瓶中; 加入醇醚混合液 50ml ,振瑶溶解至透 明,溶液由红色变为 无色; 继续用标准KOH溶液 滴定至淡红色,1min 不退色为终点。记录 KOH的用量V。
(1)
(2)
(3)
碘价的测定:
实验六 过氧化物酶和过氧化氢酶的作用
重点与难点:
掌握过氧化氢酶和过氧化物酶的作用,同时了解 酶的一些特性。
课堂安排:2课时,1人1组单独实验 主要试剂:2%过氧化氢、1%焦性没食子酸、白
菜、猪肝、研钵、试管、吸管、纱布、漏斗、天 平、剪刀、水浴锅
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实验原理:
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解,产生水及 分子氧。过氧化物酶催化过氧化氢释放出新生氧 以氧化某些酚类和胺类物质。例如氧化溶于水中 的焦性没食子酸生成不溶于水的橙黄色的焦性没 食子橙。同时产生二氧化碳。
实验三
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
重点与难点:
电泳的基本原理,醋酸薄膜电泳的操作。
实验安排:2课时,6-8人一个电泳槽,每人独立
实验。
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实验原理:
带电颗粒在电场的作用下,移动速度计算如下:
据此公式,在同一电场强度和缓冲液条件下,带电的 各种蛋白质成分,移动的速度决定于各蛋白质的带电 量和自身分子的大小。
管号 1 2 3
1%葡萄糖
1D
1%半乳糖 1%阿拉伯糖
杜氏 试剂
1ml
现象(沸水浴加 热)并解释
2D 3D
1ml 1ml
注意:观察颜色变化及变化时间。
思考题
莫氏反应中莫氏试剂为什么要直接加入溶 液中,不能滴在试管壁上? 加浓硫酸时,试管倾斜,硫酸缓缓加入, 为什么不能振动溶液?