有效磷的测定(Olsen法)

土壤有效磷的测定（Olsen法）

（pH 8.5 0.5molL-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法）

一、实验目的及说明

土壤中有效磷的含量，随土壤类型、气候、施肥水平、灌溉、耕作栽培措施等条件的不同而异。通过土壤有效磷的测定，有助于了解近期内土壤供应磷的情况，为合理施用磷肥及提高磷肥利用率提供依据。

土壤速效磷的测定中，浸提剂的选择主要是根据土壤的类型和性质测定。浸提剂是否适用，必须通过田间试验来验证。浸提剂的种类很多，近20年各国渐趋于使用少数几种浸提剂，以利于测定结果的比较和交流。我国目前使用最广学的浸提剂是0.5molL-1NaHCO3溶液（Olsen法），测定结果与作物反应有良好的相关性[1]，适用于石灰性土壤、中性土壤及酸性水稻土。此外还使用0.03molL-1NH4F-0.025molL-1HCl溶液（Black法）为浸提剂，适用于酸性土壤和中性土壤。

同一土壤用不同的方法测得的有效磷含量可以有很大差异，即使用同一浸提剂，而浸提时的土液比、温度、时间、振荡方式和强度等条件的变化，对测定结果也会产生很大的影响。所以有效磷含量只是一个相对的指标。只有用同一方法，在严格控制的相同条件下，测得的结果才有相对比较的意义。在报告有效磷测定的结果时，必须同时说明所使用的测定方法。

二、方法原理

石灰性土壤中磷主要以Ca-P（磷酸钙盐）的形态存在。中性土壤Ca-P、Al-P（磷酸铝盐）、Fe-P（磷酸铁盐）都占有一定的比例。0.5molL-1NaHCO3（pH8.5）可以抑制Ca2+的活性，使某些活性更大的与Ca结合的P浸提出来；同时，也可使比较活性的Fe-P和Al-P起水解作用而被浸出。浸出液中磷的浓度很低，须用灵敏的钼蓝比色法测定，其原理详见土壤全磷的测定章节。

当土样含有机质较多时，会使浸出液颜色变深而影响吸光度，或在显色出现浑浊而干扰测定，此时可在浸提排荡后过滤前，向土壤悬液中加入活性碳脱色，或在分光光度计800nm 波长处测定以消除干扰。

三、实验仪器

研钵、20目筛子、电子天平（0.0001）、振荡器、722分光光度计、振荡器、勺子、小烧杯、容量瓶

四、试剂配制

（1）0.5mol·L-1NaHCO3(pH8.5)浸提剂42.0gNaHCO3（0.5mol 化学纯）溶于约800ml 水中，稀释至1L，用浓NaOH调节至pH8.5（用pH计测定），贮于聚乙稀瓶或玻璃瓶中，用塞塞紧。该溶液久置因失去CO2而使pH升高，所以如贮存期超过20天，在使用前必须检查并校准pH值。

（2）无磷的活性碳粉和滤纸须做空白试验，证明无磷存在。如含磷较多，须先用2mol·L-1HCl浸泡过液，用水冲洗多次后再用0.5mol·L-1NaHCO3浸泡过液，在布氏漏斗上抽滤，用水冲洗几次，最后用蒸馏水淋洗三次，烘干备用。如含磷较少，则直接用0.5mol·L-1 NaHCO3处理。

（3）钼锑抗试剂（6.5mol·L-1[H+]）20.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]（分析纯）溶于300ml约60℃的水中，冷却。另取180ml浓H2SO4（分析纯）慢慢注入约400ml水中，

搅匀，冷却。然后将稀H 2SO 4液入钼酸铵溶液中，随时搅匀，再加入100ml 0.5% (m/v)酒石酸氧锑钾[K(SbO) C 4H 4O 6·2

1

H 2O]溶液；最后用水稀释至1升，盛于棕色瓶中，此为钼锑贮

备液。 临用前（当天）称取0.50g 抗坏血酸（分析纯）溶于100ml 钼锑贮备液中，此为钼锑抗试剂，在室温下有效期为24h ，在2~8℃冰箱中可贮存7天。 （4）磷标准储备液（Cp = 500g ·L -1） 准确称取45℃烘干4~8h 的KH 2PO 4（分析纯）2.1968g 溶于烧杯中加100ml 水溶解，缓加入5ml 浓H 2SO 4（分析纯），再全部转入1L 容量瓶中，用水定容，该贮备液可长期保存。 （5）磷标准工作液（Cp = 25g ·L -1） 准确吸取磷标准储备液50ml 于1L 容量瓶中，加入30ml 3mol ·L -1H 2SO 4，用水稀释至刻度定容摇匀，此为25磷标准液；用前再准确稀释至2.5g ·L -1,以此液配制磷标准溶液系列。

五、操作步骤 （1）称取风干土样2.00g 置于干燥的250ml 三角瓶中，加入0.5mol ·L -1NaHCO 3浸提剂40ml ，加1平勺无磷活性碳，于往复振荡机上振荡30 1min ，温度设计为25℃。立即用无磷干滤纸过滤到干燥的50ml 烧杯瓶中。 （2）在浸提土样的当天，吸取滤出液5.00ml 放入干燥的25ml 容量瓶中，加2,4-二硝基酚2~3滴，此时溶液显黄色。用3或6mol ·L -1H 2SO 4、0.5mol ·L -1H 2SO 4、1mol ·L -1NaOH 调色至刚好无色为止。再加入2.5ml 钼锑抗显色剂，慢慢摇动，使CO 2逸出。再加入蒸馏水定容，充分摇匀，显色30min 。用1cm 光径比色管在700nm 波长处测读吸光度，以空白溶液（5.00ml 0.5mol ·L -1NaHCO 3溶液代替土壤滤出液，同上处理）为参比液，调节分光光度计的零点。 （3）校准曲线 在测定土样的同时，准确吸取2.5g ·L -1磷标准工作溶液0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml ，分别放入25ml 容量瓶中，加水5~10ml, 再加2,4-二硝基酚指示剂2~3滴，用H 2SO 4及NaOH 调节酸度至刚好无色或浅黄色。再加钼锑抗试剂2.5ml ，定容至刻度，摇匀显色，即得磷标液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg ·L -1。然后同待测液一样进行比色，绘成标准曲线。

六、结果计算 土壤有效磷（P ），mg ·kg -1 = 显色液Cp *显色液体积*分取倍数/ 土样质量

式中 Cp ——从校准曲求得土壤滤出液中磷的浓度，mg ·L -1P 显色液体积------25ml 注释： （1）用0.5mol ·L -1NaHCO 3浸提—钼锑抗比色法测定结果的评价标准如下：

土壤有效P(mg ·kg -1) < 5 5~10 > 10 土壤有效P 供应标准 低（缺磷） 中等（边缘值） 高（不缺磷）

七、数据处理