AKTA 操作

ÄKTA常见问题解决方案

系统（System）

Q：样品与缓冲液怎么脱气和过滤？

A：溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤

瓶过滤（如右图），并且在负压条件下保持10min脱气。脱气的方法还包括：超声15min

以上或者使用注射用水配制缓冲液。对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式，

吸取上清。

Q：系统怎么保存？

A：使用完毕，须用水将系统冲洗干净（关机前，电导检测数值<0.1ms/cm），之后用

20%乙醇清洗系并保存所有的流路。

Q：系统的清洗？

A：按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用中性的缓冲液（例如PBS）和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。

系统泵（Pump）

Q：系统中进了气泡，怎么排除？

A：排除气泡的方式有两种：system control→Manual→Pump→PumppurifierA/B，

进行泵洗，高流速将气泡排出（流速和冲洗的时间系统默认）；或者将空注射

器放置在泵头黑色接头处（如右图），拧开泵头，抽出气泡后，拧紧泵头即可。

Q：泵后润洗系统，如果进入气泡怎么处理？润洗液不循环，怎么处理？

A：润洗系统只是起润滑作用，有小气泡不会影响缓冲液的系统或者进入柱子；

如果有大段气泡影响润滑时，则将润洗瓶中有接头处接空注射器，将气泡抽出即可。

如果润洗液不循环，说明单向阀堵塞或损坏，可以使用超声清洗或更换。

紫外监测器(UV Monitor)

Q：如果紫外检测曲线有噪音或者波动，怎么处理？

A：可以使用注射器推甲醇或1M NaOH注入紫外流动池，停留20分钟，用水

冲洗；或者用注射器推10%的表面活性剂（如Decon90，Deconex11，DBS25，

SDS等）注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗。

Q：怎么查看检测器的使用时间？

A：三波长检测器灯的使用时间：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Run Time（如果>4000h，

需要更换紫外灯）；光栅转动时间：面板菜单-Check-press OK-Check Flip Time （如果>2000h，需要维护）；紫外灯的能量：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity （如果灯的能量<20%，需要更换内部光纤）

固定波长检测器灯使用寿命：（AKTApurifier UPC/FPLC）：灯的使用时间：面板菜单-Check-press

OK-Check Lamp Run Time，如果达到以下使用时间，需要更换相应灯——汞灯在254 nm的

寿命，室温一般为7000h（冷室2000h)；汞灯在280 nm的寿命，室温一般为3500h；锌灯

的寿命，室温一般为2000h；面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity. 如果灯能量

小于以下数值，需要更换相应灯——R <300 mV for 254 nm ；R <150 mV for 280 nm；R

<150 mV for 214 nm。

pH计（pH electrode）

Q：使用前，怎么进行pH校正？

A：使用前校正pH计，将pH计探头放在校正液中（实验室常用的6.86、4.01或者9.18），在system control→System →Calibrate→pH中进行两点校正。

Q：pH的保护液成分是什么？

A：保护液：1:1 pH 4 buffer和 2M KNO3，或pH4.0的饱和KCl溶液）。

Q：怎么清洗pH流通池和电极？

A：清洗流动池：拆下pH电极，用1M NaOH清洗pH和电导流动池30分钟，用水

冲洗。清洗pH电极（响应慢或校正斜率小于80%时）：

1. 盐沉积：0.1M HCl/ 0.1M NaOH/ 0.1M HCl 交替洗数次，间隔5分钟。

2 . 油脂沉积：1%SDS清洗后水洗。

3. 蛋白沉积：1% 蛋白酶于0.1M HCl 溶液中清洗后水洗。

在线滤器（On-line filter）

Q：在线滤膜的材质？怎么进行清洗？

A：滤膜孔径1um ，滤膜安装时没有正反。FPLC和100的系统滤膜是多聚物材质, 是一个耗材，清洗后反复使用5~10次左右； 10的系统/micro是金属材质滤膜，可以反复使用。清洗滤膜的方法：使用1M NaOH浸泡15min，去离子水超声15min，即

可反复使用。

收集器

Q：怎么测量和设定从UV检测池到收集器的延迟体积？（AKTAprime和avant是默认值）

A：延迟体积（delay volume) 测定：从UV检测器到收集器的体积。使用空注射器将UV

检测池以后的管路排空，设置1mL/min，当看到收集器有连续液滴时，Pause，在logbook

中读取体积，在System Control-setting-special-Frac delay volume设定。