flowjo分析细胞周期
Flow Jo软件分析细胞周期样品
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（图一 ）
FlowJo分 析细胞周期数据 的过程
1. 把细胞周期样品拖入FlowJo软件，双击打开原始数据。如(图二)所示：
(图 二 )
X轴选择FSC,Y轴选择SSC。分析细胞周期的细胞选择上图所示的细胞群体进行分析。 2. 在SSC/FSC图中双击分析的细胞群体，如（图三 ）所示：
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Flow Jo软件分析细胞周期样品
细胞周期检 测的原理：
核酸染料可以与DNA分子特异性的结合，细胞周期检测中PI最为常用。PI为插入性核酸荧光染料，能选择 性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流 式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。 细胞周期示意图如（图一 ）所示
已有 1394 次阅读 2012-3-20 12:20 | 个人分类:FlowJo使用 | 系统分类:科研笔记 | 关键词:FLOWJO软件, 流式数据，细胞周期分析，
利用流式细胞术分析细胞周期时相
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。 仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱 了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用
掌 握 用 流 式 细 胞 仪 测 量 细 胞 群 体 DNA 仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱
膜封口。4℃固定过夜（可长至2周）
• 800rpm 15min收集固定细胞，PBS洗2次 • 用0.4mL PBS重悬细胞并转至Tube中轻轻吹打（防止细胞破碎） • 加RNase-A约3µL至终浓度约为50µg/mL ，37℃水浴消化30 min； • 加PI约50µL至终浓度约为65µg/mL ，在冰浴中避光染色30 min。 • 用300目（孔径40~50微米）尼龙网过滤，上机检测 • 样品分析测定及打印
了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用 实验目 的 通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白 质、抗原等物理及化学特征。 实 验 原理
取对数生长期细流胞，式倒细去培胞养液仪，的胰酶工适度作消原化细理胞，是用将培养待液吹测打细，8胞00rp放m ,入离心样15品mi管n去上中清，。 在气体的压力下 实用验300利目进用（流孔入式径充细40胞~满5术0微分鞘米析液）细尼胞的龙周网期流过时动滤相，室上机。检在测 鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷 加RNas出e-A，约3形µL至成终细浓度胞约为柱50。µg/m通L ，过37对℃水流浴消动化液30 m体in；中排列成单列的细胞进行逐个检测，得
流式细胞术分析细胞周期时相 流式细胞术在科学研究中的应用 了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用 仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱
流式细胞检测服务之细胞周期
流式细胞仪分析DNA（细胞周期）通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M/%，借此可以了解细胞的增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
正常细胞具有较恒定的DNA含量，而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异常是很常见的。
这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来，这一指数对于肿瘤的早期诊断，交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅助指标。
细胞周期操作步骤：1. 收获细胞于流式管中，加入3-4ml的PBS清洗细胞。
2. 1000rpm离心10分钟，弃上清。
3. 逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇，涡旋混匀细胞，4°C避光过夜（>18小时）。
4. 1000-1500rpm 离心细胞10分钟，弃上清。
之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。
注：第一次用1x PBS，第二次用染色液（货号：554656）。
5. 细胞染色：每管样本需10^6细胞。
具体操作如下：1) 对于PI/RNase 染色，将细胞重悬于0.5 mL PI/RNase 染色液（货号：550825）。
2) 对于7-AAD染色，将细胞重悬于0.1 mL 染色液（货号：554656），同时加入20 μL7-AAD 染色液（货号：559925）6. 室温避光孵育15分钟。
7. 分析前4°C避光保存样本。
1小时之内上流式细胞仪检测。
正常细胞周期分析细胞周期检测所需产品：使用说明：DNA染料，尤其是PI，具有较强的粘性。
样本上机检测之后，应遵照仪器说明书仔细清洗流式细胞仪，以免对下一位操作者结果造成影响。
固定好的细胞可保存长达12个月(储存于70-80% 的乙醇，置于-20°C保存).。
流式分析细胞周期
流式分析细胞周期
最近在做加药物的细胞周期，做了好几次，出现如下图的流式拟合图，师姐们都说你这样的拟合是强行的拟合，s期不明显，需要重新做，可是做了好多次还是这样的结果。
望专家教教我是哪里出错。
做细胞周期的步骤是：
1. 先铺板，2E5/孔。
过夜培养后加药（24h）
2. 再经过24h后可以进行测量。
3. 收集上清，并用PBS洗涤，再用胰酶消化，接着用PBS再洗一遍（在15ml管子中进行）
4. 1500转离心，小心去除上清，加入1ml的预冷PBS（记得要冲洗一下管壁），混匀后吸到1.5ml管中，再次在大厅中的离心机1500转4-5min（经过这样的一遍洗涤即可）
固定
5. 用枪吸走上清，剩余50ul左右，切勿吸走细胞，随后➕300ul 预冷PBS（用左手拿着EP管小拇指抵住涡旋震荡仪，右手拿住吸有700ul的乙醇的枪）缓慢打入其中，（这个过程尽量要慢）
6. 置于-20°冰箱中20min（有的说1h），若是过夜要要置于4°（有的说4h以上）
7. 1500转离心3-5min，小心吸上清
8. 加入1ml预冷PBS，重悬
9. 1500转离心3-5min，吸取上清，轻弹
染色
10. 0.5ml/管的碘化丙锭染色液（PI）缓慢加入，并充分的混匀
11. 37°避光30min
先配好染色的溶液
12. 4°避光存放2h
13. 上流式仪。
流式细胞仪检测细胞周期
流式细胞仪检测细胞周期
周期分析
操作篇
写在前面
流式细胞术的原理篇我先卖个关子，先来个简单的周期分析操作篇~
通过流式细胞术进行DNA周期分析，可以测定细胞的DNA含量哦~
准备工作☞☞☞制备单细胞悬液于200 μl的PBS缓冲液中；加入2 ml预冷的70%乙醇，4 ℃保存；
步骤
1.肿瘤细胞按300,000-500,000细胞/孔接种于6孔板中；24小时后，加入药物；24-72小时后，EDTA消化并收集细胞，取单细胞悬液1-2×106个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中；
2.1500 rpm离心5分钟，弃上清，反复两次；
3.重悬细胞于0.5 ml PBS缓冲液中（第二次在eppendenf管中）；
4.加入1 ml冷75%乙醇，混匀，保存于4 ℃（或-20 ℃），至少30分钟。
在-20 ℃条件下可保存2-3周；
5.1500 rpm离心5分钟，去上清，用500 μl PBS重悬细胞，加入5 μl RNaseA消化，去除RNA影响；
6.加PI染液5μl重悬细胞，室温避光20-30分钟；
7.若有明显的黏附，需再用筛网过滤；
8.上机检测。
488 nm激发波长测定。
注意：
1.根据实验的要求，固定剂也可选用1-3%多聚甲醛；
2.将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0-4 ℃；
3.细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓
度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时）；
4.单细胞浓度应为106/ml，以免影响CV值和检测结果。
利用流式细胞术分析细胞周期时相
细胞生物学实验
流式细胞术分析细胞周期时相
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
实
验
目
的
பைடு நூலகம்
掌握流式细胞仪的工作原理 掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA 含量分布的方法 了解流式细胞术在细胞生物学研究中 的应用
细胞周期时相分析
细胞周期时相分析
仪器、材料与试剂
仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱 材料：HeLa细胞，5ml注射器，离心管，封口膜，微量移液器，Tips 试剂：70％乙醇（保存于4℃），RNase-A （10mg/ml,-20℃保存），
PI （650µg/ml，避光保存于-20℃），PBS(pH 7.4，保存于4℃)
实
验 原 理
流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下 进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷 出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得 到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋 白质、抗原等物理及化学特征。 细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA 含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪 对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
细胞周期时相分析
实验报告及思考题
实验报告
标明你所测定的样品中各周期时相的百分比？
思考题
1. 2.
流式细胞术在科学研究中的应用 本实验为何要采用对数生长期的细胞？
细胞周期时相分析
细胞周期时相分析
流式分析方法
Flowjo 是现在最受欢迎的流式数据分析软件，由于它简朴易用并且十分有效。
则本文将其基本操作以及对细胞凋亡和细胞周期的 Protocol 分享给大家。
1.打开 Flowjo 软件双击桌面 FlowJo 软件图标，进入软件工作台。
或软件工作台由菜单栏、惯用工具栏、组空间和样本空间构成。
2.F lowjo 分析单标样本单标记样本数据惯用的显示方式是单参数直方图。
普通横坐标能够是线性标度或对数标度，代表着所检测的荧光或散射光的强度；纵坐标表达的是横坐标某一特定荧光强度的细胞数，有时也用相对比例来体现。
以 3 color comp 文献夹中的 CyPE comp.fcs 进行分析演示。
将此文献夹移至桌面，并把该数据文献夹从桌面拖入 Flowjo 中的组空间中。
在组空间中单击选中“3 color comp”组，此时在样本空间里显示“3 color comp”组中的全部样本。
而后在样本空间中双击“Cy5PE comp.fcs”，出现图形窗口。
此为二维点图，X 轴选择 SSC（侧向散射，细胞内颗粒构造越复杂，质量越大，SSC 越大，反之越小。
）Y 轴选择 FSC（前向散射，细胞越大，FSC 越大；反之越小。
）选择设门工具（矩形门、椭圆门、多边形门、自动门）中的任意一种，在二维点图中选中淋巴细胞。
在图形窗口中双击选中的淋巴细胞，生成新的图形窗口。
在 X 轴选择 Cy5PE:CD4，Y 轴选择 Histogram，选择设门工具（区域门、双分门）中任意一种，在单参数直方图中设门。
3.F lowjo 分析多色标样本多色标记样本，包含双标记、三标记及以上的样本。
横坐标和纵坐标分别代表与细胞有关的两个独立参数，平面上的每一种点表达含有对应坐标值的细胞。
以三标记样本为例，选择 3-color-experiment 文献夹中的 931115-B02- Sample01.FCS 进行分析演示。
同样，在在样本空间中双击“931115-B02-Sample01.FCS”样本，出现图形窗口，显示为二维点图。
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤欧阳学文取对数生长期的A549细胞，按1×106 cells/mL以1mL接种于100mm培养皿内↓24h后，进行所需的处理（比如加药,照射）↓特定时间后终止培养，进行下一步的实验↓收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml离心管中↓1000rpm离心5min（短时低速离心）↓弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细胞悬液内的细胞碎片↓加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀后，于4℃固定30min,或20℃长期保存。
↓1000r/min,离心5min↓将乙醇吸除，加PBS清洗混匀↓1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去↓吸除离心管内PBS，加入200ul PBS和2ul的RNA酶（0.25mg/ml）(37℃下孵育30min)↓加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min↓将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP 管中（PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP 管↓提前一天网上预约↓开机（先开仪器后开软件）↓流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。
↓检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上↓流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱↓液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm激发光源）↓荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例）↓在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出结果分析——Modfit软件分析图片拷贝：直接Ctrl+C——Flowjo软件分析FCMDNA 量分析 1 个细胞增殖群时，可将DNA 含量分布组方图分为三部分，即 G0/1、S、G2M。
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤(仅供参照)
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤取对数生长期的A549细胞，按1×106 cells/ mL以1mL接种于100mm培养皿内↓24h后，进行所需的处理（比如加药,照射）↓特定时间后终止培养，进行下一步的实验↓收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml离心管中↓1000rpm离心5min（短时低速离心）↓弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细胞悬液内的细胞碎片↓加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀后，于4℃固定30min,或-20℃长期保存。
↓1000r/min,离心5min↓将乙醇吸除，加PBS清洗混匀↓1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去↓吸除离心管内PBS，加入200ul PBS和2ul的RNA酶（0.25mg/ml）(37℃下孵育30min)↓加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min↓将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP管中（PI 具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管↓提前一天网上预约↓开机（先开仪器后开软件）↓流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。
↓检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上↓流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱↓液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm激发光源）↓荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例）↓在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出结果分析——Modfit软件分析图片拷贝：直接Ctrl+C。
流式细胞术检测细胞周期
流式细胞术检测细胞周期
流式细胞术检测细胞周期（PI染色）操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。
2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。
4、离心，弃上清液。
5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。
6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。
7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。
8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。
9、混匀，过300目筛网，置流式管中，4℃冰箱保存，待测。
10、用流式细胞仪检测细胞周期
11、用Flowjo软件分析流式细胞仪检测数据，并导出细胞周期分析结果
备注：
1、RNase A：贮液浓度：1mg/ml ；
工作液配制：加1 mg/ml贮液10ul于500ul 1×PBS中，使终浓度为20ug/ml。
2、PI：贮液浓度：2.5mg/ml；
工作液配制：加2.5 mg/ml贮液10ul于500ul 1×PBS中，使终浓度为50ug/ml。
4、检测样品细胞浓度1x106 /ml。
细胞实验技术之细胞周期检测
细胞实验技术之细胞周期检测导读细胞周期是指细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的时间，它代表着生命从一代向下一代传递的连续过程，与前几期我们介绍过的细胞学实验（细胞增殖、克隆形成等）一样，细胞周期也是评价细胞增殖功能的重要实验。
流式细胞仪是检测细胞周期最常用的方法，然而我们会碰到细胞量不够、细胞碎片太多等原因，导致实验一次次重复，本文就一起看看如何把细胞周期的数据变的更加漂亮，准确！一、细胞周期简介主要分为以下2大过程：1.分裂间期：间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）；2.分裂期M期：细胞分裂期，指细胞分裂开始到结束。
细胞周期图（来自网络）•注：G0期是指某些细胞在分裂结束后会暂时离开细胞周期，停止细胞分裂；但在一定适宜刺激下，又可进入周期；•因为分裂间期持续的时间远远比分裂期持续时间长，在一个正常细胞周期中，分裂间期时间会占整个细胞周期的90%～95%；•不同类型细胞的G1期时间长短不同，所以其细胞周期时间存在差异。
如：人类胃上皮细胞为24小时，骨髓细胞为18小时，HeLa细胞为21小时。
二、常用的实验方法细胞周期常用检测方法有流式检测法、BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)掺入法及同位素标记法等，其中流式检测法因适用于大量样品检测，可快速分析单个细胞的多种特性，是目前最为常用的测定细胞周期的一种方法，下面就详细介绍如何利用流式细胞仪进行周期分析。
1. 流式检测的实验原理由于细胞周期各时相的DNA含量不同，因此，可通过特异性与DNA结合染料来检测细胞内的DNA含量来测定细胞周期。
流式中常用碘化丙啶(Propidium，简称PI)与DNA结合，其荧光强度与DNA 含量成正比。
因此，通过流式细胞仪对细胞内DNA含量进行检测，同时获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
2. 流式细胞仪的实验步骤A. 收集细胞取适量的对数生长期细胞接种于6cm中，在相应的条件下（如药物）处理相应时间后，倒去培养基，用胰酶适度消化细胞，离心收集细胞，弃去上清；Tips:•细胞数量：一般情况下，由于在细胞周期中分析的细胞数应达到1.0*104~3.0*104才具有统计学意义。
细胞周期检测点的流式细胞术分析
细胞周期检测点的流式细胞术分析一、概述细胞周期检测点的流式细胞术分析是一种先进的生物学研究方法，它结合了流式细胞术的高通量、高精度特点与细胞周期检测点的关键生物学意义，为研究者提供了深入理解细胞生长、增殖和分化过程的强大工具。
细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的全过程，包括DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）以及细胞分裂期（M期）。
在每个周期阶段，细胞都会进行特定的生理活动，如DNA复制、蛋白质合成等。
而检测点则是细胞周期中确保各个阶段顺利进行的关键环节，它们能够监测并应对各种可能影响细胞周期进程的内外因素。
流式细胞术是一种可以对细胞进行快速、定量分析和分选的技术。
通过利用不同荧光物质标记的单克隆抗体，流式细胞术能够检测细胞周期中各个阶段的特异性标志物，从而实现对细胞周期的精确分析。
流式细胞术还具有高通量、高灵敏度和高准确性的优点，能够在短时间内处理大量样本，并获取丰富的数据信息。
细胞周期检测点的流式细胞术分析在多个领域具有广泛的应用价值。
在基础研究中，它可以帮助我们深入了解细胞周期的调控机制以及检测点在细胞周期中的作用在临床医学中，它可以用于诊断肿瘤、评估治疗效果以及预测疾病进展等在药物研发中，它可以作为筛选具有细胞周期特异性作用的药物的重要手段。
细胞周期检测点的流式细胞术分析是一种强大的生物学研究方法，它将为我们揭示细胞周期的奥秘提供有力的技术支持。
1. 细胞周期检测点的重要性细胞周期是生物体细胞生长、分裂和繁殖的基础过程，它确保了遗传信息的准确传递和细胞功能的正常维持。
在这个过程中，细胞周期检测点扮演着至关重要的角色。
检测点是细胞周期中的特定阶段，它们能够监测细胞内的各种条件和状态，确保只有在满足特定条件时，细胞才能继续其周期进程。
细胞周期检测点对于维护基因组稳定性至关重要。
在DNA复制和染色体分离的过程中，任何错误都可能导致基因突变或染色体异常，进而影响细胞的正常功能。
流式细胞仪细胞周期图详解
1
流式细胞术检测细胞周期
1. 纵坐标Cell Number：即计数到的有效细胞数；
2. 横坐标DNA Content：即DNA量，为什么用DNA量来区别各周期
3. G1、G2、S三期在上图已经用箭头标示；
4. 右侧数字含义：Mean G1=19
5.4即G1期DNA含量平均值为
195.4；%G1=73.6即G1期细胞数占总数的73.6%；
1 G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；
② S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期；
2 G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时
间；④ M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。
3
3、流式细胞结果图各参数的意义：
前面讲过，常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的：
G1期：细胞DNA复制还没有开始，也是DNA含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰；
S 期：细胞开始复制，到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程，在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）；
G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍DNA，在流式结果图中的第二个峰；
M期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍DNA，用DNA含量的方法是无法与G2期分开，所以有第三峰明显升高时报告：G2/M期阻滞。
流式细胞仪检测细胞周期
流式细胞仪检测细胞周期9、采用流式细胞仪（FCM）研究MG63细胞周期FCM检测细胞周期原理流式细胞仪(flow cytometry或flow cytomyter，FCM)又称荧光活化细胞分拣器(fluorescence activated cell sorter，FACS)是20世纪60年代后期利用激光器和层流流动室而建立的一种用于测定放射性染色体的新技术。
细胞周期(cell cycle)是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程，包含G1期、S期、G2期、M期四个阶段(图1)。
细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。
通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。
在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。
用FCM 进行细胞周期分析是通过测定细胞中DNA量而完成的。
测定DNA含量后，可用FCM配备的细胞周期分析软件(例如Becton Dickinson公司的Cell FIT)对其进行自动分析。
此测定的细胞周期按照DNA的量分可为Go/G1期、S期及G2/M期。
FCM检测细胞周期流程①培养MG63细胞在6 孔板内依次放入对照组和3 个实验组钛片各40 片，接种密度为 4 × 105/ ml。
培养至细胞汇合后，每孔加矿化液2． 5 ml( 含10 nmol/L 地塞米松，10 mmol/L β －甘油磷酸钠，50 μg/ml 抗坏血酸的培养液) 。
分别培养3、5、10、15d 后，每组各取出5 个钛片移至新的6 孔板内，将钛片表面细胞消化离心收集。
② PBS清洗经消化收集的细胞2～3次，调整细胞密度为1×106个/ml;③将细胞悬液100ul转移至试管中;④ 加入FITC标记的annexin V和PI溶液，轻轻混匀;⑤室温避光放置10～15min;⑥ 加入400ul缓冲液，将全部液体转移至FCM分析用试管;⑦ 尽快进行FCM分析（用FCM进行细胞周期分析是通过测定细胞中DNA量而完成的。
Flow Jo软件分析细胞周期样品
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（图五）
细胞周期FCS原始数据下载： 细胞周期A.LMD 细胞周期B.LMD
细胞周期C.LMD
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FlowJo分 析细胞周期数据 的过程
1. 把细胞周期样品拖入FlowJo软件，双击打开原始数据。如(图二)所示：
(图 二 )
X轴选择FSC,Y轴选择SSC。分析细胞周期的细胞选择上图所示的细胞群体进行分析。 2. 在SSC/FSC图中双击分析的细胞群体，如（图三 ）所示：
细胞周期检 测的原理：
核酸染料可以与DNA分子特异性的结合，细胞周期检测中PI最为常用。PI为插入性核酸荧光染料，能选择 性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流 式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。 细胞周期示意图如（图一 ）所示
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（图三 ）
X轴选择FL3-LIN,用来表示PI的线性信号。Y轴选择FL3-PEAK,用来表示PI的峰值信号。本实验数据采集采 用的是贝克曼仪器采集的数据。（如果是BD的仪器采集的数据 ，X轴选择FL2-W,用来表 示PI的宽度 信 号。Y轴 选择FL2-A,用来表 示PI的 面积信号），如上图所示多倍体或异倍体细胞不予分析。
3. 在FlowJo工作台中选中“用于周期分析的二倍体细胞”这个结点，在工具栏的“工具”中选择“细胞 周期”。 如（图四 ）所示
流式检测细胞周期要点
流式检测细胞周期要点：最关键的就是减少细胞碎片和单细胞悬液的制备！1、细胞消化要理想，资料显示最好消化时加EDTA，可使流式做的很漂亮；2、细胞消化后不可吹打过度，减少细胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的细胞容易破碎；3、细胞用PBS洗涤离心，转速不超过1000r/min，有文献用800r/min；可考虑在此过程中用300目的尼龙网过滤一遍细胞（有人主张用钢网，以减少细胞与尼龙网粘连的损失，本人认为钢网易损伤细胞，DNA外溢也会造成细胞粘连，所以在细胞数足够的情况下，首选尼龙网）；4、离心后的固定，标准做法是将细胞悬液加入预冷70％酒精，而不是向细胞中加酒精，这样是为了减少细胞聚集，这一点很重要，很多人都忽视了！5、一般选择4℃固定过夜；6、加染液前的洗涤仍要注意离心转速的问题；7、关于PI染液的组成及配方，应主要以文献为主，PI（作用为DNA染色剂）的浓度从0.5μg/ml,20μg/ml，到50μg/ml都见报道，响应的求助显示都可出良好结果，RNAs酶（由于PI也可染RNA，故要去除RNA）一般浓度为50μg/ml，配方中的Triton-X-100（曲拉通）主要是通透细胞膜使PI能进入细胞核。
8、检测时细胞要达到1～2×106个细胞（实际检测是1万到2万个细胞），为了既保持初始条件相同，又可搜集到足够的细胞，应选用多孔培养板，在搜集细胞时，浓度大、抑制强的组可多搜集些孔，以保证检测的细胞数量。
如果细胞数量太低，技师为了减少对流式细胞仪的损伤，就会选择高速流（一般的检测用低速流，误差小），检测的质量就会大大下降，数据的说服力就下降了！1.收集细胞；2.3000～5000rpm离心5min，收集沉淀，重悬于200ul的PBS中，再次离心收集沉淀；3.75％冰冻乙醇（-20度保存）4度固定过夜or-20度固定1h；4.离心收集沉淀，PBS洗一次（视沉淀量可忽略）；5.沉淀重悬于200～500ul的PBS，加入Rnase A 37度水浴1h；6.400目纱布过滤至流式管，加入PI染色，4度避光30min-1h，上机器。