HPLC色谱条件的优化与色谱

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各国药典关于HPLC色谱条件允许调整范围

各国药典标准中关于HPLC色谱条件允许调整范围的说明
欧洲药典EP
流动相PH值缓冲盐浓度 ±0.2，pH7.6可以在 7.4-7.8之间调整 ±10%，20mM磷酸钾可以在18-22mM范围内，只要 pH值符合要求就行 ±30%，最小组成的比例可以调整30%，但是，任何组成的比例的改变不能超过±10%.60:40乙腈 /水，水的比例可以调整 ±12%（=40*30%），但是这超过了±10%的限制。因此，这个条件下，水的比例只能在30%至 50%之间进行调整。不允许调整 ±70%，150*4.6mm规格的色谱柱，柱长可以改变±105mm ±25%，150*4.6mm规格的色谱柱，内径可以改变±1HP2010
流动相组成比例
紫外可见检测器检测波长色谱柱长度
色谱柱内径
粒径
流速进样体积柱温梯度洗脱
±0.2，pH7.6可以在7.4未明确 7.8之间调整 ±10%，20mM磷酸钾可以在 18-22mM范围内，只要pH值未明确符合要求就行 ±30%，最小组成的比例 ±30%，最小组成的比例可可以调整30%，但是，任以调整30%，但是，任何组何组成的比例的改变不能成的比例的改变不能超过± 超过±10%.60:40乙腈/ 10%.60:40乙腈/水，水的比水，水的比例可以调整± 例可以调整±12% 12%（=40*30%），但是这（=40*30%），但是这超过超过了±10%的限制。因了±10%的限制。因此，这此，这个条件下，水的比个条件下，水的比例只能在例只能在30%至50%之间进 30%至50%之间进行调整。行调整。不允许调整不可改变 ±70%，150*4.6mm规格的色可适当调整谱柱，柱长可以改变± 105mm ±25%，150*4.6mm规格的色可适当调整谱柱，内径可以改变± 1.15mm 可以适当调整；一般 3~10um，粒径更小（约可以降至50%，10um的粒可以降至50%，10um的粒径 2um）可用。孔径：分子径可以调整为5um 可以调整为5um 量小于2000，孔径在150A 以下；分子量大于2000，孔径300A。 ±50%，1mL/min流速可 ±50%，1mL/min流速可以在可以适当调整以在0.5至1.5mL/min范 0.5至1.5mL/min范围内变化围内变化只要精密度和检测限可只要精密度和检测限可以达可以适当调整以达到要求就可以减少到要求就可以减少 10%，最大不超过60℃ 10% 一起系统过大的滞留体积会明显改变分离度，保留时间和相对保留时间

hplc法测定合成色素的方法原理

hplc法测定合成色素的方法原理HPLC法测定合成色素的方法原理HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分离和分析化学物质的方法。

它基于化学物质在液相中的分配行为，利用固定的填充剂和流动相进行分离。

在合成色素的分析中，HPLC法是一种非常有效的方法，能够精确、快速地测定和分析合成色素。

一、HPLC法的基本原理HPLC法是一种液相色谱法，它利用液态流动相将待测物分离开来并定量测定。

HPLC法有几个重要的组成部分，包括色谱柱、流动相、检测器和流速控制系统。

色谱柱是HPLC法的核心部分，其中填充有固定相，用于分离化合物。

流动相则是在色谱柱中移动的溶液。

检测器通过检测组分的物理性质（如吸光度、荧光强度等）来定量测定化合物。

流速控制系统用于控制流动相的流速，以确保分析的准确性和精确性。

二、HPLC法测定合成色素的步骤HPLC法测定合成色素的步骤可以分为样品制备、色谱柱条件优化、测量参数设置和数据处理等几个基本步骤。

1. 样品制备样品制备是HPLC法测定合成色素的第一步。

在样品制备中，需要将合成色素溶解在适当的溶剂中，以获得可以被HPLC法分析的溶液。

样品制备的目的是将合成色素转化为溶解度良好的溶液，以确保测定的准确性和重现性。

2. 色谱柱条件优化色谱柱是HPLC法分离化合物的关键。

在测定合成色素时，需要选择合适的色谱柱和填充剂，以获得良好的分离效果。

此外，还需要对色谱柱进行优化，包括流动相的选择和比例、温度的控制等。

通过不断调整这些条件，以获得良好的分离效果和分辨度。

3. 测量参数设置测量参数的设置是HPLC法测定合成色素的关键。

这些参数包括进样量、检测器的类型和参数、流动相的流速等。

在进样量方面，应根据样品的浓度和检测器的灵敏度进行适当的调整。

检测器的类型和参数应根据合成色素的特性和需要进行选择。

流动相的流速是影响分离和测定效果的重要因素之一，应根据色谱柱的特性和样品特性进行优化。

4. 数据处理在HPLC法测定合成色素后，需要对测定结果进行数据处理。

HPLC培训(峰与色谱条件)课件

HPLC
高效液相色谱
基本原理
加样
流动相
流动相
A
C
B
B
C
A
固定相 —— 柱内填料，流动相 —— 洗脱剂。
HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。
基本操作
1.打开泵电源，待自检完成后打开“Purge”阀进行排液以除去泵头之前的气泡，排气完成后关闭“Purge”阀。按“Pump”键开启泵，然后按“func”及数字键以0.2ml/min的速度慢慢将流速调1.0ml/min
色谱柱的良好使用规范
溶剂使用前必须过滤运输中变干了的色谱柱要完全浸湿（预处理）如果样品中含有无需考虑而保留强的组分时,必须进行前处理清楚了解色谱柱填料适用的pH范围(3-7)，温度(<60),化学适应性使用新鲜的水溶液,流动相现用现配制定期用强极性溶剂冲洗色谱柱储存色谱柱时,要将缓冲液冲洗干净,并保存在适合的溶剂中,如甲醇、
计算公式
或
重复性
用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。
采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。
相对标准偏差 RSD
采用内标法时，其相对标准偏差应不大于2.0%。
拖尾因子（T）
用于评价色谱柱的对称性。
反应峰
色谱柱故障诊断-- 峰形问题
拖尾峰－－对称因子>1.2
Normal
Tailing
Normal
Tailing
可能的原因
有些峰拖尾
1、二次保留效应，残留的硅羟基影响
2、在大峰的尾部有小峰流出（DAD）

HPLC方法建立和优化

4.样品分离的系统方法
充分用已知样品结构确定以哪种方法开始
普通反相? 离子抑制? 离子对? 还是其他
观察流动相条件改变时色谱峰的移动
根据变化的方向及大小决定下一步干什么
低pH流动相中寿命缩短的主要原因是键合相在酸性条件下水解，这会导致保留时间和峰形的明显改变
2.2 色谱柱常见问题 3、色谱柱的维护

三、色谱分离基础
3.1 溶剂的基础知识
粘度
溶剂粘度：
3.5 3
2.5 2
1.5 1
0.5 0
流动相粘度水百分比
系M列eO1H 系M列eC2N
系Et列OH3 系AMc列eeOtHo4ne 系TH列F 5
a改变 a改变 a改变 a改变 a改变 a改变 a改变 a改变
结果
改变K、a、N 的途径
改变a的途径
改变流动相
改变K、a、N 的途径
改变N值的方法∶
减小填料的颗粒度找到最佳的流速（根据不同内径）合适的温度：粘度低、温度高降低溶剂的粘度增加柱长减小柱外效应
k＝VR’/V0
vR
VR v0
VR’
t0
tR‘
tR
k :用来描述色谱柱中溶质的迁移速度
2.1 色谱柱的性能指标
3、分离因子（ a ）:
a ＝k2/k1
vR
VR v0
VR’
t0
tR‘
tR
a :用来描述和表征两种
不同的溶质在色谱柱里的分离过程
2.1 色谱柱的性能指标
4、峰的对称性（ AS）:
美国药典要求（5％）
32.4% 13.4% 4.4%
tR
W1/2h

HPLC分离条件的优化步骤以及定量计算公式的选择

不同柱子其保留性差异很大，相同条件，不同柱子比例会不一样。不同色谱柱需合适的pH范围，一般在2.57.5之间，有的色谱柱比较耐碱，kromasil可以到 10，而杂化xterra在1－12,XDB在pH3-11.
3.分离条件的优化
3.1 容量因子和死时间的测量
在HPLC分析中，容量因子k′是一个非常重要的参数，对如何选择流动相的溶剂组成、改善多组分分离的选择性都发挥着重要的作用。 k′=t ′R／t M
式中，Ai—组分i的峰面积；
ƒ′i—i组分的质量校正因子
4.定量计算公式的选择
二、标准曲线法（外标法 / 直接比较法）在HPLC中比较常用，是一种简便、快速的绝对定量方法（归一化法是相对定量方法）测定样品中组分含量时，根据峰面积和峰高在标准工作曲线上直接查出进入色谱柱中样品组分的浓度，也可通过下式计算 pi / % = f i / A i(h i) 式中，A i(h i) —i组分的峰面积（峰高） f i—i组分标准工作曲线的斜率
3.分离条件的优化
2.由色谱柱的操作参数进行计算 t M =ΦηL2/△pd p2 式中，Φ为阻抗因子；η为流动相的动力黏度；L 为柱长； △p为柱压力降；d p为固定相粒径 3.依据经验公式计算当dc/dp≥10 时，可按下述公式计算 t M： t M =L / u 对全多孔固定相对非多孔固定相 u=1.5F/dc2 u=3F/dc2
3.分离条件的优化
对组成复杂、由具有宽范围k′值组分构成的混合物，需用梯度洗脱技术，才能使样品中每个组分都在最佳状态下洗脱出来。（采用梯度洗脱通常能将组分的k′值减小至原来的1/10~1/100，从而缩短了分析时间。）
3.4 相邻组分的选择性系数和分离度的选择

icg的hplc测定方法

icg的hplc测定方法
HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析化学技术，用于分离、鉴定和定量化合物。

ICG（吲哚青绿）是一种常用的生物染料，
常用于生物医学研究和临床诊断。

下面我将从样品准备、色谱条件
和数据处理等多个角度来介绍ICG的HPLC测定方法。

首先，样品准备非常重要。

对于ICG的HPLC测定，样品的准备
包括样品的溶解和处理。

ICG通常是以固体形式存在，因此需要将
其溶解在适当的溶剂中，如甲醇或乙腈。

溶解后的样品需要通过滤
膜过滤，以去除悬浮物和杂质，确保样品纯度和稳定性。

其次，色谱条件对于HPLC测定至关重要。

选择合适的色谱柱、
流动相和检测波长是关键。

针对ICG的测定，常用的色谱柱是C18
反相色谱柱，流动相可以是水和乙腈的混合物，检测波长通常选择
在600nm左右。

在确定了色谱条件后，需要进行系统的优化，以获
得最佳的分离效果和分析速度。

最后，数据处理也是HPLC测定中不可或缺的一部分。

通过
HPLC仪器得到的数据需要经过处理和分析，包括峰识别、峰面积计
算和浓度计算等步骤。

这些步骤需要借助专业的数据处理软件完成，
以确保结果的准确性和可靠性。

综上所述，ICG的HPLC测定方法涉及样品准备、色谱条件和数据处理等多个方面。

通过合理的样品准备、优化的色谱条件和准确的数据处理，可以实现对ICG的高效、准确的测定。

当然，在实际操作中，还需要根据具体情况进行进一步的优化和验证，以确保测定结果的可靠性和重复性。

希望这些信息能够对你有所帮助。

高效液相色谱碘试剂柱后衍生测定粮油样品中黄曲霉毒素B_(1)的条件优化

160!"与油%2021346食品安全与检测效液试后定样品中黄曲B1的条件优化刘倩，马饪(上海科茂粮油食J质量检测有限公司，上海200333)摘要：优化了高效液相色谱测定粮油样J中黄曲霉毒素B1含量的检测方法&粮油样J中的黄曲霉毒素B1用甲醇：水体积比70德0的混合溶液提取，提取液经免疫亲和柱净化和富集，净化液稀释和过滤后，以甲醇：水体积比50:50为流动相，等梯度洗脱,通过高效液相色谱-碘试剂柱后衍生-荧光检测器进行测定，外标法定量。

结果表明：黄曲霉毒素B[在质量浓度0.03~5ny/mL范围内与响应峰面积呈现良好的线性关系，线性回归方程为==2.47x106X+1.39x105%相关系数r=0.9994、加标回收率为93.0%-101.0%、相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.41%-3.15%、方法检出限和定量限分别为0.018"g/ky和0.06"g/ky。

该方法相对于GB5009.22—2016第三法处理更简化，且未降低灵敏度，好，靠，为检测机构日常粮油样晶中黄曲霉毒素B1的检测方法&关键词：高液相色谱;粮油样J;黄曲霉毒素B1Optimization of conditions for determination of afatoxin B1 in grain and ot samples by high performancc linuin chromatography wit iodine reagent derivatization after columnLIU Qian,MA Yu(Shanghai Kemao Cereals,Oils and Foodstuffs Quality Testing Co.,Lid,Shanghai200333,China) Abstract:A method for Ox determination of aUatoxin B[in grain and oil samples by high performance liquid chromatography was optimized.The aUatoxin B[in grain and oil samples was extracted with mixed solution of methanol:water70：30by volume.The extracted solution was puffied and enfched by immu-noa e onotycoiumn.Thepueoeoed6oiutoon wa6doiuted and eoite eed.The mob oie pha6e wa6methano i：wate e 50:50by volume.The content of aUatoxin B[was determined by HPLC with iodine reagent post-column derivatization and quantified by extemal standard method.The results showed that the—was a good linear relationship between aUatoxin B[concentration and response peak area in the range of0.03〜5ng/mL.The linear mg—ssion equation was as follows:==2.47x106E+1.39x105,the cot—1/Wn coefficient r=0.9994,We standard recove—rate was93.0%〜101.0%,the relative standard deviation(RSD) was0.41%〜3.15%,The limits of detection and limits of quantification we—0.018"g/kg and0.06"g/kg,pared with the third method of GB5009.22—2016,the method was sim-pie,had good eepeataboioty,accueateand eeioabie,and couid beused asthedetectoon method oeaeiatoton B1on daoiygeaon and ooisampiesoedetectoon onstotutoons.Key words:high performance liquid ch—mUoymphy;grain and oil samples;aUatoxin B[中图分类号：TS207.5文献标志码：A文章编号：1008-9578(2021)06-0160-03黄曲霉毒素是一类由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物，主要包括黄曲霉毒素'1%收稿日期：2020-10-23作者简介：刘倩（1992—）,女，本科，学士，研究方向为食J检测。

二)液相色谱方法建立和优化

42
常用流动相
反相体系有机相：ACN、MeOH等水相：H2O、磷酸缓冲盐(pH2、7、12)、醋酸缓冲盐(pH4.5)、硼酸缓冲盐(pH9、13) 、三羟甲基氨基甲烷(Tris，pH8)等改性剂：三氟乙酸(TFA)、三乙胺(TEA)等
正相体系正己烷、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯等乙醇、异丙醇等
10
第一步干什么?
想办法得到各种信息向同行了解是否做过此类样品，或有否类似样品的分析方法查文献和方法，如CA,AA,AOAC,EPA--仪器制造商的文献，如Dionex,Waters
对色谱柱有足够的了解掌握分离机理，自己开发方法
充分了解您自己的样品
11
分析时要了解哪方面的情况？
O O
O
O
H3C
维生素及衍生氨
NH
O
基酸
O
生物技术及制药
O CH3
O
CH3 O
CH3
黄曲霉毒素氨基甲酸酯类杀虫剂
29
示差折光（Refractive Index）检测
示差折光检测器（RI）是第一个商品化的液相色谱检测器（上世纪六十年代末、七十年代初）通常被认为是一种通用检测器检测溶液中所有被溶解的溶质－非特异性
8
HPLC的应用领域
化妆品行业要控制和分析：防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；
在公安、刑警破案工作需要投毒药物、毒品分析等
在环境污染分析中的应用废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚类、胺类和二恶瑛的检测
在无机离子分析中应用 –饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析
如图所示
90% MeOH 1 mL/min 30 ºC

高效液相色谱法HPLC

VS
报告结果
整理分析数据，撰写分析报告，提供各组分的浓度、纯度等相关信息，为科研或生产提供决策依据。
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感谢您的观看
实验操作步骤
流动相的准备与平衡
根据实验要求配制流动相，通过泵以适宜的流速通过色谱柱进行平衡。
洗脱与检测
流动相带着样品经过色谱柱洗脱，各个组分依次流出并进入检测器进行检测。
ABCD
进样
将样品注入进样器，通过压力将样品送入色谱柱进行分离。
数据处理与结果分析
对检测器输出的信号进行处理，得到各组分的峰形和峰面积，进行定性和定量分析。
01
02
03
04
进样
将样品注入色谱柱。
分离
在流动相的带动下，样品中的组分在色谱柱中进行分离。
检测
检测器对分离后的组分进行检测，并记录信号。
数据处理
对采集到的数据进行处理、分析和存储。
高效液相色谱仪的维护和保养
定期清洗色谱柱
使用适当的溶剂清洗色谱柱，以去除残留物和杂质。
维护和检查检测器
定期检查检测器的性能和准确性，确保其正常运行。
数据处理系统
用于采集、处理、分析和存储色谱数据，通常采用色谱工作站。
高效液相色谱仪的操作流程
01
02
03
样品准备
将样品进行适当处理，以便注入色谱柱。
流动相制备
根据实验要求，选择合适的流动相，并进行过滤和脱气处理。
系统平衡
在进样之前，确保色谱系统达到平衡状态，以提高分离效果。
高效液相色谱仪的操作流程
样品的预处理
分离
对于复杂样品，需要进行分离操作以去除杂质或提取目标成分。常用的分离方法包括离心、过滤、

液相色谱仪HPLC分析方法验证液相色谱解决方案

液相色谱仪HPLC分析方法验证液相色谱解决方案为了保证分析检测结果精准、牢靠，必需对所接受的分析方法的精准性、科学性和可行性进行验证，以证明分析方法符合检测的目的和要求，这就是分析方法验证。

从本质上讲，方法验证就是依据检测项目的要求，预先设置确定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所接受的分析方法符合检测项目的要求。

方法验证在质量掌控上有紧要的作用和意义，只有经过验证的分析方法才能用于药品生产的分析检测，方法验证是订立质量标准的基础。

方法验证内容包括方法的专属性、线性、范围、精准度、精密度、检出限、定量限、耐用性和系统适用性等，检测目的不同验证要求也不尽相同。

1.专属性专属性是指分析方法能够将产品和杂质分开的特性，也称为选择性。

对于纯度检测，可在标准品中加入产品中的已知杂质，或者直接用粗品，考察产品峰是否受到杂质的干扰，对于过程跟踪，可用反应体系样品来考察有没有其它的杂质干扰。

必要时使用二极管阵列检测器或者质谱检测器进行色谱峰纯度检查。

一般要求产品和杂质之间的分别度大于2.0、2.线性线性是在设定的范围内，检测结果与样品中原材料或产品的浓度呈线性关系的程度。

线性是定量检测的基础，需要定量检测的项目都需要验证线性。

一般用储备液经过精密稀释，或分别精密称样，制备得到一系列被测物质的浓度（5个以上），按浓度从小到大运行序列，以峰面积和浓度的函数作图，用zui小二乘法进行线性回归计算，考察分析方法的线性。

3.范围范围指在能够达到确定的精准度、精密度和线性时，样品中被分析物的浓度区间。

简单的说，范围就是分析方法适用的样品中待测物的浓度zui大值和zui小值。

需要定量检测的分析方法都需要对范围进行验证，纯度检测时，范围应为测试浓度的80%～120%。

4.精准度精准度是指测定的结果与真实值之间接近的程度，所以也叫做真实度，需要定量得分析方法均需要验证精准度。

精准度应在规定的范围内建立，对于原材料药可用已知纯度的标准品或符合要求的原材料药进行测定，必要时可与另一个已建立精准度的方法比较结果。

高效液相色谱法流动相的注意事项

高效液相色谱法流动相的注意事项高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。

在进行HPLC分析时，流动相的选择和使用是非常重要的。

下面将详细介绍关于HPLC流动相的注意事项。

1.流动相的选择：在选择流动相时，要考虑所分离的样品的性质，包括其溶解性、极性、酸碱性等。

一般情况下，流动相可以是纯溶剂或溶剂混合物，其中溶剂混合物可以根据需要进行优化。

常见的HPLC流动相溶剂包括水、有机溶剂（如甲醇、乙腈、二氯甲烷等）以及酸、碱溶液。

2.流动相的pH值调节：流动相的pH值对于样品的分离和检测具有重要影响。

在某些情况下，需要调节流动相的pH值以改变样品的离子状态或结构。

这可以通过加入缓冲剂来实现，一般情况下，可以根据样品的性质选择合适的缓冲剂。

3.流速的控制：流速的选择应根据需要平衡分离效果和分析时间。

流速过快可能导致峰形变宽、分离不理想，而流速过慢则会延长分析时间。

因此，需要根据样品的性质和分离要求合理选择流速，并在实验过程中进行优化。

4.流动相的净化和除气：使用之前，流动相需要经过净化处理以去除悬浮物和杂质。

此外，流动相中的气泡也会对分离效果产生干扰，因此需要除去气泡。

可以通过超声波处理、真空处理或使用气体瓶来除去气泡。

5.流动相的稳定性：流动相的稳定性对于HPLC分析至关重要。

在实验过程中，需要定期检查流动相的配制是否正确，是否出现沉淀、杂质等问题。

另外，一些样品可能会与流动相产生反应或降解，导致流动相的不稳定，需及时调整。

6.流动相的储存和保养：为了确保流动相的质量和稳定性，需要正确储存和保养。

一般情况下，流动相应避光保存，并在使用前用滤膜过滤以去除杂质。

当流动相已经使用一段时间后，可能会积聚杂质或可溶性样品残留，此时需要更换或清洗柱和系统以保持分析结果的准确性。

7.设备和仪器的选择和检查：在进行HPLC分析时，需要选择适当的设备和仪器，并定期检查和维护。

高效液相色谱法的常见问题及解决方法

高效液相色谱法的常见问题及解决方法高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法，这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题，如何解决这些问题呢?1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定;②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等;③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡;关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定;②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出;③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合;2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子;②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子;③可能柱超载，减少进样量;3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量;②样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子;③样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器;④检测器衰减太多。

调整衰减即可;⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数;⑥检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗;⑦检测池中有气泡。

解决办法为排气;⑧记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可;⑨流动相流量不合适。

调整流速即可;⑩检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理;②比例阀失效，更换比例阀即可;③泵密封垫损坏，更换密封垫即可;④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法;⑤系统检漏，找出漏点，密封即可;⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

高效液相色谱知识

根据GB15346-94《化学试剂包装及标志》，化学试剂按照门类分为三种：通用试剂、基准试剂(深绿色)和生物染色剂(玫红色)。

通用试剂按纯度分为三个等级：优级纯(CR深绿色)、分析纯(AR金光红色)和化学纯(CP中蓝色)。

我们所说的化学试剂一般是指通用试剂。

优级纯试剂纯度很高，用于精确的分析研究工作。

分析纯试剂纯度较高，用于一般的分析及研究。

化学纯试剂纯度较差，用于工业分析及化学试验。

除上述三个等级外，还有各种专门用途的高纯试剂，比如：光谱纯、色谱纯、电子纯等；纯度更低的则有实验试剂(LR)、工业纯等。

应根据分析任务、分析方法、对分析结果准确度的要求等，选用不同等级的化学试剂，但不应选用低于分析纯的试剂。

Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识保养事项：高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法液相色谱柱使用及保养高压液相色谱HPLC培训教程(一)高压液相色谱HPLC培训教程(七)高效液相色谱仪中反相HPLC柱子的清洁和再生HPLC对流动相的基本要求高效液相色谱Waters 600E-2487 HPLC系统SOPWaters高效液相色谱系统操作规程高效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项色谱扫盲班Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。

2、打开1100 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”S amp ling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

二硫氰基甲烷的高效液相色谱分析方法

二硫氰基甲烷的高效液相色谱分析方法二硫氰基甲烷是一种重要的有机物质，在化学、制药、农业、日化等行业中都有广泛的应用，因此，对于它的分析方法非常重要。

本文就二硫氰基甲烷的高效液相色谱（HPLC）分析方法进行探讨，以期为研究者们提供参考。

首先，二硫氰基甲烷可以通过HPLC进行分析，由于它的分子量比较大，而且不能被酸碱性条件下水来分解，因此，有效的梯度洗脱方法很重要，以获得较好的分离效果。

此外，采用偏硫酸铵作为阴离子交换剂，可以有效地抑制二硫氰基甲烷的蒸发，从而降低柱内压力的升高和柱内的内流，使消耗的溶剂量得到控制。

其次，为了获得更好的分析效果，选择有效的检测器，及时低压气相色谱（GC），质谱（MS），紫外吸收（UV），示差移动（RSD）等。

有效的检测器可以实现最佳的检测性能，从而提高二硫氰基甲烷的定性和定量。

此外，色谱条件的优化也是分析二硫氰基甲烷的高效液相色谱的关键。

应尽可能减少HPLC流动相温度，以避免二硫氰基甲烷分子的蒸发，从而可以提高柱运行的效率；并且，可以选择一种高效的柱和静态混合器，或者采用色谱真空泵将压力降低至可控状态，以获得更好的分离条件。

最后，在实际应用中，研究者们可以考虑合理的样品处理方法，以提高分析的准确性和灵敏度。

可以采用不同的前处理技术，如溶剂萃取，可以实现应用溶液中的指定分析物的有效提取和纯化；此外，在样品的加标操作中，也应采用稳定的选择稀释剂，以提高分析的准确性和灵敏度。

综上所述，定性和定量分析二硫氰基甲烷所采用的HPLC分析方法具有良好的可操作性，非常适用于对二硫氰基甲烷的快速定量分析。

但是，由于各种检测器的不稳定性，以及色谱条件优化和样品处理所带来的挑战，研究者们仍需进一步深入研究和优化，提高二硫氰基甲烷分析的高效色谱方法。

以上就是有关二硫氰基甲烷的高效液相色谱分析方法的相关研究。

本文的研究结果对于研究者们精确快速分析二硫氰基甲烷具有重要的参考价值，为相关研究提供了技术支持。

制备HPLC技术

注意问题
制备HPLC技术问题—上样量的选择
上样量主要根据a、柱子的大小b、样品的浓度c、制备是否根据分析条件放大（例如制备柱是否还用分析用填料）
根据内径计算：内径放大N倍，进样量大致可放大N平方倍（柱长一定时）
将分析色谱上的结果放大到制备色谱中：
上样量的调整： mp/ma=lp/la * r2p/r2a L:柱长；m：进样量；r：色谱柱内径 p: 制备柱；a：分析柱
制备HPLC概述—柱容量
• 色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。
制备HPLC概述—分离效能
取决于分离速度、分辨率和上样量。对某一个分离参数进行优化常会影响到其他分离参数。增加洗脱液流速会降低分辨率，分辨率也会因上样量过大而下降。但分辨能力并不总是制备HPLC首要考虑的因素，制备型 HPLC应首先具有经济、快速的生产所需产品的能力。
浓缩法超量载样
VS
体积法超量载样
提高样品的浓度，保持进样体积不变；取决于组分在流动相中的溶解度；生产效率决定于选择性；受固定相粒度大小的影响不大
取决于进样体积，生产效率决定于制备柱直径，需要小颗粒填料。
制备HPLC技术问题—超量载样注意!
应尽可能选用流动相来溶解样品，但应注意样品在流动相中应有良好的溶解度。同时，若样品体积太大，分辨能力就会下降；若样品过浓，则可能在柱的顶部形成沉淀。尽管如此，为每次可分离得到更多的样品，还是应在小体积的流动相中溶解较多的样品。可将样品溶于不同于流动相的溶剂，但用此法时需很谨慎。