微生物实验室

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冰箱、冷冻柜
用于存放商品化、分装后的培养基、试剂 、菌种等。 常配置：4℃、-20℃、-80℃各一个。
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低温高速离心机
可控制转速、时间、温度和相对离心 力。 用于分离细胞器、病毒、核酸、蛋白 质、多糖等。
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微生物实验室的消毒处理方法
2 无菌室臭氧消毒 封闭无菌室内，无人条件下，采用20mg/m3浓度的臭氧，作用时 间应≥30min。消毒后臭氧浓度≤0.2mg/m3时方可入内操作。 按照GB/T18202的规定，检测室内臭氧浓度。
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微生物实验室的消毒处理方法
3 甲醛熏蒸 40%甲醛溶液加高锰酸钾。配制的量：每m3需甲醛10ml，高锰酸 钾5g。 最好的条件是温度为24℃~40℃,湿度在65%以上。房间熏蒸消毒 时间为12小时以上，消毒结束后打开门窗通风。 对居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3，可对熏蒸后的空间进 行检测。
微生物实验室分级
根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室安全防护水平 （bio-safety level，BSL）分为1~4级，BSL-1防护水平最低。 病原微生物
一类 二类 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·
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天平
最大量程：100g、120g等 可读性精度：0.1mg
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精密电子稀释仪
样品量：0.5-1000g（依靠系数调整） 稀释系数：2-1000 液流速度：950ml/min 重量误差精度：<1% 能够准确释放稀释液的重量。 借助经过消毒的均质袋，可对样本进行 准确的稀释，最大程度地减少手工接触 操作，避免样品污染。
微生物实验室的消毒处理方法
1 紫外线消毒 在室温20℃~25℃时，220V 30W 波长253.7nm紫外线辐射强度应 ≥70μW/cm2，低于此值时应更换。适当数量的紫外灯，确保平均 每立方米应不少于1.5W。 紫外线消毒时，无菌室内应保持清洁干燥。 在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时间应≥30min，室内温 度＜20℃或＞40℃、相对湿度＞60%时，应适当延长照射时间。 用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射 ，且应达到足够的照射剂量。 人员在关闭紫外灯后至少30min方可入内操作。 按照ISO18953的规定，评价紫外线的消毒与杀菌效果。
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GB4789.1-2016总则：2.3 实验设备
2.3.1实验设备应满足检验工作的需要，常见设备见A.1。 2.3.2实验设备应放置于适宜的环境条件下，便于维护、清洁、 消毒与校准，并保持整洁与良好的工作状态。 2.3.3实验设备应定期进行检查和/或检定（加贴标识）、维护 和保养，以确保工作性能和操作安全。 2.3.4实验设备应有日常监控记录或使用记录。
------《中国药品检验标准操作规范》
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洁净室分级
洁净度级别 尘粒最大允许数/立方米 ≥0.5μ m尘粒数 3,500 350,000 3,500,000 10,500,000 ≥5μ m尘粒数 微生物最大允许数 浮游菌/立方米 5 100 500 1000 沉降菌/皿 100级 10,000级 100,000级 300,000级 0 2,000 20,000 60,000 1 3 10 15
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恒温水浴锅
RT+5～99℃ 恒温波动度 ±0.5℃ 用于实验备用培养基或试剂的保温。 常配置：37℃、42℃、56℃各一个。
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恒温培养箱
控温范围：室温+5℃～65℃ 温度波动度：±0.2℃ 定时范围：0～999分钟
用于细菌、霉菌和酵母菌的培养 常配置：28℃、36℃、42℃、56℃各一 个。
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均质机
将样品和稀释液加入到无菌的均质袋中 ， 然后将均质袋放入拍击式均质器 中，关上 门即开始和完成样品的处理。 拍击时间：0.1～99分钟。
拍击速度：3～12次/秒实际拍击次数显示 ，系统自动调节拍击速度。
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电热鼓风干燥箱
RT+10℃~250℃； 均匀度±1% 温度波动±0.5℃。 用于玻璃器皿等耐热物品的烤干和灭 菌。玻璃器皿等物的灭菌，温度 160℃~165℃，灭菌2小时。
三级
四级
7或8
7或8
12或15
12或15
≥30
≥60
≥10
≥25
18~25
18~25
30~70
30~70
≤60
≤60
300
300
-----------GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范
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BSL-2
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洁净室
应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同 等级别的超净工作台 室内温度控18~26℃，相对湿度45%~65% 缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的 消毒装置， 空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区） 与室外大气的静压差大于10Pa。 无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不 低于300lx。
-----------GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范
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无菌室的管理
无菌室在使用前和使用后应进行有效的消毒。
无菌室的消毒效果应至少每两wk.baidu.com验证一次。
应制定清洁、消毒、灭菌、使用和应急处理程序。
应建立环境监测结果，并归档保存。
不符合规定时应立即停止使用。
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高压灭菌锅
样式大小分为手提式高压灭菌器、立 式压力蒸汽灭菌器、卧式高压蒸汽灭 菌器等。 手提式高压灭菌器为18L、24L、30L 立式高压蒸汽灭菌器从30L~200L 用于器皿、培养基和废气污染物的灭 菌。
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灭菌锅的使用
首先，检查锅内蒸馏水量是否充足，第二，检查个个阀门及开关是否工作正 常。第三，将待灭菌的物品用一层牛皮纸或两层报纸包好，一定要包完整！ 放入锅内，物与物之间一定要有空隙。第四，盖好锅盖，螺母对称拧紧，打 开放气阀，关闭阀门。第五，打开电源观察放气阀是否有蒸汽流出，确定后 关闭放气阀，待压力表到达0.1-0.15kpa（温度121℃左右）时计时，15-30 分钟，关闭开关。第六，待压力表指针归零后，打开放气阀，按对称方式打 开锅盖，取出物品。 注意事项: 1.锅内水必须用蒸馏水或纯化水。 2.锅盖螺母必须对称拧紧。 3.一定要在放气阀出大量蒸汽在关闭 。
实验室
四级 三级
生物安全柜
· · · · · · · · · · ·
三级
三类（食品致病菌）· · · · · · · · · · · · · · ·
四类
二级
· · · · · · · · · · · 二级
· · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · 一级
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病原微生物分类
国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度， 将病原微生物分为四类： 第一类 指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我 国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。（天花病毒） 第二类 指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间 接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。（甲、乙型肝 炎病毒） 第三类 指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物 或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严 重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。（沙门氏菌） 第四类 指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 6
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超净工作台和生物安全柜
超净工作台和生物安全柜 最大的区别在于送风的方式。 生物安全柜是一种负压的 净化工作台，正确操作生物安 全柜，能够完全保护工作人员 、受试样品并防止交叉污染的 发生；而超净工作台只是保护 操作对象而不保护工作人员和 实验室环境的洁净工作台。
（二级A2型）
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电子显微镜
以显微原理分类分为偏光显微镜、光学 显微镜与电子显微镜和数码显微镜。 常用物镜可按放大率分为低倍(4×)、中 倍(10×或20×)、高倍(40×)和油浸物 镜(100×)。 用于观察微生物的形态，便于菌种的鉴 定。
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微生物实验室主要技术指标
级别 静态洁净 最小换 与室外大气 与相邻区域 温度℃ 相对湿 噪声 度级别 气次数 压的压差值 压差值(Pa) 度% dB(A) (次/h) (Pa) 一级 二级 _ _ 可开窗 可开窗 _ _ _ _ 18~28 18~27 ≤70 30~70 ≤60 ≤60 最低照 度lx 200 300
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微生物实验室的分区
一般分为下列区域:
接样室、样品保存室、培养基配制室、洁净室、生化室 、培养室、仪器室和洗刷消毒室，此外还有办公室。
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实验室核心工作间的照度不低于350 lx,其他区域照度不低于 200 lx，宜采取吸顶式防水洁净照明灯。
实验室的温度宜控制18℃~26℃范围内。 实验室的相对湿度宜控制30%~70%范围内。 在安全柜开启情况下，核心工作间的噪声应不大于68 dB(A)。 ------GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
微生物实验室布局及仪器设备
GB4789.1-2016总则：2.1环境与设施
2.1.1实验室环境不应影响检测结果的准确性。 2.1.2实验区域应与办公区域明显分开。 2.1.3实验室工作区域面积和总体布局应能满足从事检测工作需 求，实验室布局应采用单方向工作流程，避免交叉污染。 2.1.4实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作 要求。 2.1.5食品样品检验应在洁净区域进行，洁净区域的应有明显标 示。 2.1.6病原微生物分离鉴定工作应在二级或以上生物安全实验室 进行。