第16章高效液相色谱法#(精选.)
高效液相色谱法测定固体食品中的安赛蜜
高效液相色谱法测定固体食品中的安赛蜜刁玉华，张加稳，陈娴（昆明市食品药品检验所，昆明 650032）摘要：建立一种高效液相色谱法测定固体食品中安赛蜜的方法。
以水为提取溶剂超声波提取安赛蜜，然后在提取液中加入沉淀剂除杂，采用C18反相色谱柱，紫外检测器，以0.02mol/L乙酸铵溶液∶甲醇=90∶10（v/v）为流动相，检测波长225nm，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL进行检测，外标法定量。
安赛蜜出峰时间为4.348min，样品的检出限为0.57mg/kg，定量限1.89mg/kg，线性范围为0.5～50.0μg/mL，相关系数0.9998，安赛蜜的加标回收率在91.3%～99.3%之间，重复性实验的相对标准偏差在2% 以下（n=6）。
建立的前处理方法具有简单、快速、准确、实用性强的特点，可用于固体食品中安赛蜜的检测。
关键词：安赛蜜；高效液相色谱；固体食品中图分类号：TS207.3/TS202.1 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）03-0090-05 doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.03.015Determination of acesulfame K in solid food byhigh performance liquid chromatographyDIAO Yu-hua，ZHANG Jia-wen，CHEN Xian（Kunming Institute for Food and Drag Control，Kunming 650032）Abstract：A high performance liquid chromatography for determination of acesulfame K in solid food was developed. Acesulfame K was extracted using water，assisted by ultrasound，and purified by precipitation. Zinc acetate and potassium ferrocyanide was used for preparation. Acesulfame K was separated on a C18 column using 0.02mol/L ammonium acetate methanol（90∶10，v/v）as mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min and detected by ultraviolet detector at 225 nm. The column temperature was 30℃ and injection volume was 10μL. The quantitative detection was carried out by external standard. The retention time of acesulfame K was 4.348 min. The limit of detection was 0.57mg/ kg and limit of quantification was 1.89mg/kg. The linear range was between 0.5 and 50.0μg/mL with correlation coefficient of 0.9998. The mean spike recoveries for acesulfame K in a blank sample was between 91.3%and 99.3%，with a relative standard deviation below 2%（n=6） . The method was simple，rapid，accurate and practical. It can be used for determination of acesulfame K in solid food.Key words： acesulfame K；high performance liquid chromatography（HPLC）；solid food安赛蜜，学名乙酰磺胺酸钾（Acesulfame-K）是一种健康新型高强度甜味剂。
高效液相色谱荧光检测法测定药物中的氯乙酰氯
化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第30卷，第1期2021年1月V ol. 30，No. 1Jan. 202159doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2021.01.012高效液相色谱荧光检测法测定药物中的氯乙酰氯汤加园，陈向明(滨州医学院药学院，山东烟台 264003)摘要 建立测定药物中氯乙酰氯含量的高效液相色谱–荧光检测方法。
以吖啶酮乙酰肼为荧光标记试剂，对氯乙酰氯进行柱前衍生。
在室温下反应15 min ，衍生产率达到最大。
衍生溶液在XDB–C 18柱上，以水和乙腈为流动相进行分析，激发波长和发射波长分别为255 nm 和429 nm 。
氯乙酰氯浓度在1～1 000 nmol ／L 范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系，线性相关系数r =0.999 9。
方法的检出限为0.35 nmol ／L ，仪器精密度和方法精密度分别为0.52%和0.67%(n =6)。
样品加标回收率为92.5%～95.6%。
该方法简单、准确，精密度良好，可用于测定药物中氯乙酰氯的残留量。
关键词 高效液相色谱；荧光检测；氯乙酰氯中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2021)01–0059–04Determination of chloroacetyl chloride in drug substance by high performanceliquid chromatography with fluorescence detectionTang Jiayuan ， Chen Xiangming(School of Pharmacy ， Binzhou Medical University ， Yantai 264003， China)Abstract A high performance liquid chromatography method coupled with fluorescence detection to determine chloroacetyl chloride in drug substance was developed. Acridone acetyl hydrazine was used as fluorescence labeling reagent and chloroacetyl chloride was derived before column. Optimum derivatization was obtained at room temperature for 15 min. The derivative was separated on a reversed-phase XDB–C 18 column in conjunction with water and acetonitrile as mobile phase. The excitation and emission wavelengths were 255 nm and 429 nm respectively. The concerntration of chloroacetyl chloride had good linear ralationship with the chromatographic peak area in the range of 1–1 000 nmol ／L, the linear correlation coefficient r =0.999 9. The instrument precision and method precision were 0.52%, 0.67%(n =6)，respectively. The detection limit of the method was 0.35 nmol ／L ，and the recoveries were in the range of 92.5%–95.6%. The method is simple ，accurate and showed good repeatability ，which can be used to determine the content of chloroacetyl chloride in drug substance.Keywords high performance liquid chromatography; fluorescence detection; chloroacetyl chloride药物中的遗传毒性杂质是一类能损伤细胞遗传物质并引起基因突变或体内诱变的物质，较少的摄入量就能够对身体健康产生严重的损害［1–2］。
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用_唐玲玲
1 HP LC 基本原理
HPLC 由液体输送系统、进样系统、色谱柱和检 测系统 4 部分所组成。输液泵将流动相以稳定的流速 （或压力） 输送至分析体系，在进入色谱柱之前通过 进样器将样品导入，流动相将样品带入色谱柱，在色 谱柱中各组分依照分配系数、吸附力大小、带电性 质，乃至分子量大小的差异而被分离，并依次随流动 相流至检测器，将检测到的信号送至数据系统记录、 处理或保存。随着 HPLC 技术的日趋成熟，它已成为 分离和检测蛋白质的重要工具。
Samira Roufik 建立了用 HPSEC 分析多种乳清蛋 白组成的方法，可以作为食品中添加乳清蛋白配方的 依据[12]。由于 HPSEC 相对温和的色谱条件，不会导 致蛋白质和多肽的变性，故常用作一些乳源性生物活 性多肽的制备，如用乳白蛋白和酪蛋白制备血管紧张 素抑制肽[13]，在对 β- 乳球蛋白体外降解的组分进行 分离分析时，采用 HPSEC 能够较好地保持产物多肽 的物理化学性质[14]。 2.5 高效疏水色谱 （high performance hydrophobic iinteraction chromatography，HPHIC）
高效液相色谱法测定制麦中阿魏酸含量
３．Ｏ７
Ｍ ３ ５７ ．７６
．
０ Ｏ０ ２ Ｏ０ ４．Ｏ０ ６．Ｏ０ ８ Ｏ０ １０ Ｏ０ １２ Ｏ０１４ Ｏ０１６．Ｏ０ １８ Ｏ０ ２０ ００ 时 间／ｒａｉｎ
（ａ）流 动 相为 乙腈 ：００８５％磷 酸 为 ｌ７：８３
６．５８
７ ２０
１ ＼ ９ １４
３ ８８４．８８
９６
一
Ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄｂｙ ｈｐｌｃｄｕｒｉｎｇ ｍａｌｔｉｎｇ ｆｏｒ ｗｈｅａｔ Ｄ ＩＮ Ｇ Ｘｉａｏ—ｍ ａｎ，ＺＨ ＡＮ Ｇ Ｗ ｅｉ—ｗ ｅｉ，Ｄ ＯＮ Ｇ Ｙｉ－ｎｉｎｇ，Ｃ Ｈ Ａ Ｉ Ｘｉｎ－ｙｉ，Ｈ Ｅ Ｘｉａｏ—ｗｅｉ，ＬＩ Ｓｈｕａｎｇ—ｆａｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈｕｚｈｏｕ Ｕ ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｕｚｈｏｕ ２３９０００，Ｃｈｉｎａ） Ａ ＢＳＴＲＡＣＴ ：Ｔ ｈｅ ｓｔｕｄｙ ｗ ａｓ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ Ｈ ＰＬＣ ｍ ｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｍ ａｌｔ． Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗ ｅｒｅ ａｓ ｆｏＩｌｏｗ ｓ：ｔｈｅ ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍ ｎ ｗ ａｓ Ａ ｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６ ｍ ｍ × ２５０ ｍ ｍ ，５ ｕｍ ），ｍ ｅｔｈａｎｏｌ—ｇｌａ— ｃｉａｌ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（６Ｏ ：４０，ｐＨ ３．０）ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗｉｔｈ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ ｍｌ／ｍｉｎ，ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍ ｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３５℃ ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ３２０ ｎｍ ａｎｄｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ａｍｏｕｎｔ ｗａｓ ２０ ，ａ１．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ０．２５～ ２００ ，ａｇ／ｇ （Ｒ。一 ０．９９９ ９）．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｄｕｒｉｎｇ ｍａｌｔｉｎｇ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ （Ｐ＜ Ｏ．０５），ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎ ｍａｌｔ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｍｏｒｅ ｓｉｍ ｐｌｅ ａｎｄ ｆａｓｔｅｒ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｄｕｒｉｎｇ ｍ ａｌｔｉｎｇ ｆｏｒ ｗ ｈｅａｔ． Ｋ ＥＹＷ Ｏ ＲＤＳ：ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ；ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｍ ｅｔｈｏｄ；Ｈ ＰＬＣ ；ｄｕｒｉｎｇ ｍ ａｌｔｉｎｇ ｆｏｒ ｗ ｈｅａｔ
仪器分析 第十五-第十九章思考题
第十五章思考题1.色谱法具有同时能进行分离和分析的特点而区别于其它方法，特别对复杂样品和多组份混合物的分离，色谱法的优势更为明显。
2.按固定相外形不同色谱法是如何分类的？是按色谱柱分类：①平面色谱法：薄层色谱法、纸色谱法②柱色谱法：填充柱法、毛细管柱色谱法3.什么是气相色谱法和液相色谱法？气体为流动相的色谱称为气相色谱。
液体为流动相的色谱称为液相色谱。
4.保留时间（tr）、死时间（t0）及调整保留时间（t’r）的关系是怎样的？t’r = tr - t05.从色谱流出曲线可以得到哪些信息？①根据色谱峰的个数可以判断样品中所含组分的最少个数；②根据色谱峰的保留值可以进行定性分析；③根据色谱峰的面积或峰高可以进行定量分析；④色谱峰的保留值及其区域宽度是评价色谱柱分离效能的依据；⑤色谱峰两峰间的距离是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。
6.分配系数在色谱分析中的意义是什么？①K值大的组分,在柱内移动的速度慢，滞留在固定相中的时间长，后流出柱子；②分配系数是色谱分离的依据；③柱温是影响分配系数的一个重要参数。
7.什么是选择因子？它表征的意义是什么？是A，B两组分的调整保留时间的比值α= t’r（B）/t’r（A）＞1意义：表示两组分在给定柱子上的选择性，值越大说明柱子的选择性越好。
8.什么是分配比（即容量因子）？它表征的意义是什么？是指在一定温度和压力下，组分在两相分配达到平衡时，分配在固定相和流动相的质量比。
K=ms/mm意义：是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数；9. 理论塔板数是衡量柱效的指标，色谱柱的柱效随理论塔板数的增加而增加，随板高的增大而减小。
10.板高（理论塔板高度H/cm）、柱效（理论塔板数n）及柱长（L/cm）三者的关系（公式）？H=L / n11.利用色谱图如何计算理论塔板数和有效理论塔板数（公式）？12.同一色谱柱对不同物质的柱效能是否一样？同一色谱柱对不同物质的柱效能是不一样的13.塔板理论对色谱理论的主要贡献是怎样的？(1)塔板理论推导出的计算柱效率的公式用来评价色谱柱是成功的；(2)塔板理论指出理论塔板高度H 对色谱峰区域宽度的影响有重要意义。
高效液相色谱法教学【全】精选全文
例: 流动相极性变化对组分k’的影响
②更换色谱柱（改变N）
措施： a.选择长柱子(N=L/H) b.填料颗粒尽量小 c.低流速(溶质传质阻力小，峰扩展小) d.低的溶剂粘度(提高柱效)
高效液相色谱法
High Performance Liquid
Chromatography （HPLC）
前言:
HPLC是70年代以后发展最 快的一个分析化学分支，现 已成为生化、医学、药物、 化学化工、食品卫生、环保 检测等领域最常用的分离分 析手段。
我国：
开始仅为少数研究实验室拥有， 现很多的生产、研究、质检部门都拥有。 广泛应用于： 质量控制、分析化验、制备分离。 讲课目的：入门 教材：《实用色谱法》（詹益兴 编著） 学习要求：记好笔记，
ⅰ大分子，扩散系数小 ⅱ小分子，扩散系数大
5. 影响分离的因素与提高柱效的途径
• 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，在高效液
相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略 不计，即 H = A + C u
• 降低传质阻力是提高 柱效主要途径。 •气相和液相Ｈ－ｕ区别
§１－４ 分离度 (Rs)
于世林编著)
第一章 高效液相色谱法基本原理 §1－1 概述 一、色谱法
混合物最有效的分离、分析方法。 是一种分离技术。 混合物分离过程：试样中各组分在 固液两相间不断进行着的分配。 一相固定不动，称为固定相。 另一相是携带试样混合物流过固定 相的液体，称为流动相。
液相色谱仪
高效液相色谱仪流程图
(1) 存在着浓度差，产生纵向扩散;
(2) 扩散导致色谱峰变宽，H↑(Ｎ↓)，分离变差; (3) B/u与流速有关：流速↓→ 滞留时间↑→ 扩散↑
高效液相色谱法测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑和甲氧苄啶的含量_熊久林
续表1序号保留时间t /min化合物名称分子式分子量相对含量(%)79.3213-octadecenoic acid(Z)(Z)-13-十八碳烯酸C 18H 34O 228221.6289.73octadecan oic acid 十八烷酸C 18H 36O 228433.46910.6210,13-octadecadienoic acid 10,13-十八碳二烯酸C 18H 32O 22800.131010.7910-noadecen oic acid 10-十九烯酸C 19H 36O 22960.091111.26noadecanoic caid 十九烷酸C 19H 38O 22980.281212.7211-eicosenoic acid 11-二十碳烯酸C 20H 38O 2310 2.101313.23eicosanoic acid 二十碳烷酸C 20H 40O 2312 1.771417.42docosanoic acid 二十二碳烷酸C 22H 44O 23400.18由表1可以看出,从中药材木鳖子中共鉴定出14种脂肪酸,占脂肪酸总含量的89.23%,其中饱和脂肪酸7种,占总脂肪酸含量的47.32%不饱和脂肪酸7种,占脂肪酸总量的41.91%。
3 讨论木鳖子中不饱和脂肪酸以亚油酸(19.85%)、(Z)-13-十八(碳)烯酸(21.62%)、11-二十(碳)烯酸(2.10%)为主。
近年来的研究表明不饱和脂肪酸对人体有降低血脂、胆固醇和血压,抗血栓、抗动脉硬化,预防心血管疾病,增强记忆力,预防老年痴呆症,防癌等多种作用[3]。
木鳖子是一种常见的中药,对中药木鳖子的研究已较深入,但对其脂肪酸的研究还未见报道。
本实验方法具有简单、准确、脂肪酸检出率高等优点,其结果将对木鳖子的深层次的开发和应用提供科学依据。
参考文献:[1] 宋立人,洪 恂,丁绪亮,等.现代中药大辞典,上册[M ].北京:人民出版社:349-351.[2] S.R..Heller ,G.W.A.M iline.EPA/NIH M ass Spectral date[M ].U .S.Washington D.C.,1978:1-4.[3] 周永红.火麻仁油中脂肪酸的GC-M S 分析[J ].中国油脂,2004,29(3):72-72.收稿日期:2004-11-12; 修订日期:2005-02-12作者简介:熊久林(1956-),男(汉族),湖北黄梅人,现任湖北省黄石市药品检验所副主任药师,主要从事药品检验工作.高效液相色谱法测定复方磺胺甲唑片中磺胺甲唑和甲氧苄啶的含量熊久林,孙仲葆,黎 源,马锦星,运 委,张 晶(湖北省黄石市药品检验所 435000)摘要:目的:建立同时测定复方磺胺甲唑片中磺胺甲唑和甲氧苄啶含量的高效液相色谱法。
高效液相色谱分析HPLC
高效液相色谱
第18页
第7讲
高效液相色谱
第19页
§3-4 液相色谱法固定相
色谱柱是色谱法的心脏，固定相及装柱技术是关键。 一、液-液色谱法及离子对色谱法固定相 1.全多孔型担体：直径小于10µm（75/-4） 2.表面多孔型担体，目前不用。 3.化学键合固定相（P76及P69） a.成相：用化学的方法通过化学键把有机分子结合 到担体表面。常用18碳柱 b.特点76/-5：4点. 4.分离机制77/2：既不是全部吸附过程，亦不是典型 的液-液分配过程，而是双重机制兼而有之，只是 按键合量的多少而各有侧重.
第7讲
高效液相色谱
第16页
离子对色谱分离过程示意图
第7讲
高效液相色谱
第17页
五、离子色谱法 1.固定相:离子交换树脂 流动相:电解质溶液 检测器:电导检测器 主配件：抑制柱 2. 流程图：fig3-2 3.分离机制 （阴离子为例） a.双柱型：化学抑制型离子色谱法； b.单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液； 4.应用：从无机和有机阴离子到金属阳离子，从 有机阳离子到糖类、氨基酸等均可用该法分析.
高效液相色谱
第1页
第三章
高效液相色谱分析（HPLC）
§3-1高效液相色谱的特点 一、定义：液相色谱法是指流动相为液体的色谱 技术。 二、特点 1.高压: 可达150～350×105 Pa 2.高速: 例，分离20种氨基酸，经典色谱法要20 多小时，用HPLC只需1小时。 3.高效：3万塔板/米（GC2000塔板/米） 4.高灵敏度： 紫外检测器10-9 g 荧光检测器10-11g
高效液相色谱
第Байду номын сангаас页
第7讲
高效液相色谱
第7页
仪器分析第二版课后习题答案
仪器分析第⼆版课后习题答案仪器分析第⼆版课后习题答案【篇⼀：仪器分析课后习题与思考题答案】3章紫外-可见分光光度法ui-visp503.1分⼦光谱如何产⽣？与原⼦光谱的主要区别它的产⽣可以看做是分⼦对紫外-可见光光⼦选择性俘获的过程，本质上是分⼦内电⼦跃迁的结果。
区别：分⼦光谱法是由分⼦中电⼦能级、振动和转动能级的变化产⽣的，表现形式为带光谱；原⼦光谱法是由原⼦外层或内层电⼦能级的变化产⽣的，它的表现形式为线光谱。
3.2说明有机化合物紫外光谱产⽣的原因，其电⼦跃迁有那⼏种类型？吸收带有那⼏种类型？跃迁类型与吸收带3.3在分光光度法中，为什么尽可能选择最⼤吸收波长为测量波长？因为在实际⽤于测量的是⼀⼩段波长范围的复合光，由于吸光物质对不同波长的光的吸收能⼒不同，就导致了对beer定律的负偏离。
吸光系数变化越⼤，偏离就越明显。
⽽最⼤吸收波长处较平稳，吸光系数变化不⼤，造成的偏离⽐较少，所以⼀般尽可能选择最⼤吸收波长为测量波长。
3.5分光光度法中，引起对lambert-beer定律偏移的主要因素有哪些？如何让克服这些因素的影响偏离lambert-beer law 的因素主要与样品和仪器有关。
样品：(1)浓度 (2)溶剂 (3)光散射的影响；克服：稀释溶液，当c 0.01mol/l时, lambert-beer定律才能成⽴仪器：（1）单⾊光（2）谱带宽度；克服：lambert-beer law只适⽤于单⾊光，尽可能选择最⼤吸收波长为测量波长3.9 按照公式a=-lgt计算第5章分⼦发光分析法p1085.3（b）的荧光量⼦率⾼，因为（b）的化合物是刚性平⾯结构，具有强烈的荧光，这种结构可以减少分⼦的振动，使分⼦与溶剂或其他溶质分⼦的相互作⽤减少，即减少了碰撞失活的可能性5.4苯胺的荧光在10时更强，苯胺在酸性溶液中易离⼦化，单苯环离⼦化后⽆荧光；⽽在碱性溶液中以分⼦形式存在，故显荧光。
⼀般ph在7~12发⽣蓝⾊荧光。
超高效液相色谱法检测食品黄曲霉毒素
超高效液相色谱法检测食品黄曲霉毒素发表时间：2012-11-05T16:24:47.420Z 来源：《中外健康文摘》2012年第24期供稿作者：全德甫王晖孙华杰[导读] 黄曲霉毒素(Aflatoxin)是常见霉菌黄曲霉(AspergiUusflavus)和寄生曲(A.parasiticus)中产毒菌株的代谢产物。
全德甫王晖孙华杰（深圳市宝安区观澜预防保健所广东深圳 518110）【中图分类号】R445【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0021-03 黄曲霉毒素(Aflatoxin)是常见霉菌黄曲霉(AspergiUusflavus)和寄生曲(A.parasiticus)中产毒菌株的代谢产物。
主要毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2,其中AFB1是毒性和危害最大的一种,AFB2和AFG2是AFB1和AFG1的双羟基衍生物[1]。
黄曲霉毒素是目前所知致癌性最强的化合物,广泛存在于花生、花生油、大米、玉米、糕点等粮油食品和动物饲料中,严重影响人们的健康,甚至威胁着人们的生命安全[2]。
对黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、二维薄层色谱法等。
近年来,由于超高压液相色谱技术的引进,色谱分析效率、分析时间、灵敏度得到了比较大的提高。
本文建立用超高效液相色谱法（UPLC）同时测定食品中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2分析时间短、灵敏度高,特异性强,结果满意。
1 材料和方法1.1仪器和试剂超高效液相色谱系统：WATERS ACQUITY UPLC型超高效液相色谱仪；色谱柱：WATERS ACQUITY UPLC BEH C18（直径1.7μm，宽×长为2.1mm×50mm）；Mycosep?228黄曲霉毒素多功能净化柱（美国Romer Labs）；LV型自动蒸发浓缩仪；烘干箱；电动振荡器；漩涡混合器；电子天平。
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。
同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。
因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定蛋黄卵磷脂的含量
图 ! " （ "） 蛋黄卵磷脂标准品及 （ #） 样品的色谱图 $%&! ! " ’()*+",*&)"+- *. ,(/ 0(*-0(",%1234(*3%5/ （ " ）-,"51")1 "51（ # ）" )/"3 -"+03/
# ! #" 方法学验证 # B # B !" 标准曲线及检测限 % % 精确吸取标准溶液 $, + ， $, & ， $, # ， $, ( 5’ ， 加正己 烷 # 异丙醇 （ 体积比为 +/ + ） 混合溶剂稀释至 + 5’ ， 在 选定的色谱条件下， 每份标准溶液平行测定 & 次。以 峰面积 ! 的对数为纵坐标， 进样质量 " （ "- ） 的对数 为横坐标 作 图， 得 线 性 回 归 方 程 为 /- ! 0 +, !+# ) ・ /- " 1 &, -&" + ， 相关系数 # ! 为 $, **( * 。线 性范 围为 $, +- 2 +, -+ - > ’ ， 检测限为 $, -" " -（ $ % & 0 & ） 。
B83$%)7$ ：8 9+HI&: J&K HI+ :+H+K96=4H6&= &J +??)$ LI&MLI4H6:$#7I=+ N$ =&K94#)LI4M+ I6?I L+KJ&K94=7+ #6O"6: 7IK&94H&?K4LI$（ (,).,/- ）P6HI +34L&K4H63+ #6?IH M74HH+K6=? :+H+7H6&= （ 0/12 ） P4M :+3+#&L+:’ B LI&MLI4H6:$#7I=+ P4M M"77+MMJ"##$ M+L4K4H+: &= 4 (&34),45 16#674 #" 8 7&#"9=（ &- ) 99 6’ :’ . +(" 99 ，% ! 9 ） ，"M6=? I+Q4=+)6M&LK&L4=&#)P4H+K 7&=H46=6=? & ; 47+H67 476:（ &(/ #(/ , ，3 < 3 < 3 ）4M 9&N6#+ LI4M+ 4H 4 J#&P K4H+ &J +- " 9/ < 96=’ *I+ :K6JH H"N+ H+9L+K4H"K+ 4=: 46K 74KK6+K ?4M LK+MM"K+ &J HI+ 0/12 P+K+ M+H 4H (" > 4=: &(" 5,4 ，K+ML+7H63+) #$’ *I+ #6=+4K :+H+7H6&= K4=?+ P4M "- +# 1 +- #+ ? < /（ ! ! 0 "- ))$ ) ） 4=: HI+ #696H &J :+H+7H6&= （ /@2 ）P4M "- #% ! ? P6HI +Q7+##+=H K+#4H63+ MH4=:4K: :+364H6&=（ R12 ）&J &- ! ; （ " 0 ( ） ’ *I+ K+) 7&3+K$ P4M 6= HI+ K4=?+ &J ),- ! ; 1 +!,- ! ; ’ *I+ K+M"#HM 6=:674H+: HI4H HI6M 9+HI&: 6M 477"K4H+ ， K4L6: ，M69L#+ 4=: K+LK&:"76N#+ ，4=: HI"M M"6H4N#+ J&K HI+ 4=4#$M6M &J +??)$ LI&MLI4H6:$#7I&) #6=+ 6= K+4# M49L#+M’ C#6 ?*%53 ：I6?I L+KJ&K94=7+ #6O"6: 7IK&94H&?K4LI$（ .,/- ） ；+34L&K4H63+ #6?IH M74HH+K6=? :+) H+7H6&=（ 0/12 ） ；LI&MLI4H6:$#7I=+（ ,- ） ；+??)$ LI&MLI4H6:$#7I=+（ 0B,- ） * * 卵磷脂是一种 天 然 的 两 性 表 面 活 性 剂， 化学名 称为 磷 脂 酰 胆 碱 （ LI&MLI4H6:$#7I=+ ， ,- ） ， 广泛 存在于动物、 植物体内， 具有重要的生理功能和独特 的乳化性能
分析化学 高效液相色谱法
'
2
W
H eff
L neff
2、 分离度
R 2(tr2 tr1 ) neff • 1 (W1 W2 ) 4
3、 速率方程
H A B Cu u
B 2DM
溶质在液相流动相 中的扩散系数，约 为气相中扩散系数
的万分之一
在大多数情况下， B 0 u
修正的速率方程： H A Cu
柱径：0.9 cm
F：30 mL/h
t分离: >20 h
高效液相色谱仪
经典液相色谱 HPLC
150-200 μm 3-10 μm 重力或低压泵 高压泵
HPL C
t分离：1 h
很慢
快(1-10mL/min)
与经典液相色谱法相比
颗粒极细（一般为10m以下）、规则均匀的固定相，(键合相) 传质阻抗小，柱效高，分离效率高；
注意：
流动相的pH一般应在3-8，否则会引起硅胶溶解；(也有适用宽pH 范围的键合相)。
固定相
固体吸附剂
硅胶－强极性 氧化铝－弱极性 活性炭－非极性 分子筛－强极性 高分子多孔微球(GDX)
硅胶表面结构
硅胶表面结构经热处理发生的变化
二、化学键合相色谱法的流动相
对流动相的要求：
与固定相不发生化学反应。
2、固定相
键合烷基的疏水性随碳链的延长而增 加，溶质的k也增大。 硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶 质的k越大。
3、流动相
极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大
溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂
溶剂比例：水的比例增加，使k增大 中性盐的加入：使中性溶质的k增大
pH：影响弱酸、弱减的离解
流动相的pH降低，弱酸k增大，tR增大； 弱碱k变小。
第16章 色谱分析法概论(共82张PPT)
KAVs Vm
)
tR B
t0
(1
KBVs Vm
)
tR
tR A
tR B
t0(KA
KB
)
Vs Vm
t0(kA kB)
色谱别离的前提
——组分在两相间分配系数 K 不同或分配
第三节 色谱别离机制
一、吸附色谱法 二、分配色谱法
三、 离子交换色谱法 四、空间排阻色谱法
一、吸附色谱法
✓ 别离机制： ✓ 利用吸附剂对不同组分吸附能力差异实现别离
诺贝尔化学奖： 1948年，瑞典Tiselins，电泳和吸附分析 1952年，英国Martin和Synge，分配色谱。
展望：
新型固定相和检测器 联用仪器：GC-MS，HPLC-MS 智能化开展
第一节 概 述
一、定义
色谱法(chromatography)： 对于液相色谱，因Dm 较小，B 项可勿略。
三、色谱法的特点
✓ 缺点：
对未知物分析的定性专属性差
需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS)
第二节 色谱法的根本原理
实现色谱分析的根本条件
相对运动的两相——流动相、固定相
各组分与固定相的作用存在差异
一、色谱过程
色谱过程是物质分子在相对运动的两相分配 “平衡〞的过程。
两个组分被流动相携带移动的速度不同
物质对别离的两种情况
C
C
t
t
提高别离度R
增加tR
பைடு நூலகம்
减小w
第四节 色谱理论根底
组分保存时间：色谱过程的热力学因素控制； 〔组分和固定液的结构和性质〕
色谱峰变宽：色谱过程的动力学因素控制；
〔两相中的运动阻力，扩散〕
高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点
高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点摘要】药品安全与人们的生命健康密切相关，因此，加强药品测定方法的研究，对确保药品安全意义重大。
药品测定中高效液相色谱法（HPLC）在测定药品有关物质时具有较高精准度，优点突出，被广泛应用在药品物质测定中。
本文对药品有关物质测定中HPLC操作要点进行探讨，为提高测定质量提供参考。
【关键词】高效液相色谱法；药品；有关物质；测定【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）16-0322-01药品中的相关物质主要指药物生产、贮存环节引入的有机杂质，不仅给药物纯度造成较大影响，而且影响药物疗效的正常发挥，甚至引起不良反应。
HPLC在当前药品中有关物质测定中应用广泛，如何把握测定操作中的要点，提高测定结果准确性，受到越来越多业内人士的关注。
1.溶液配制及系统适用性试验1.1 配制溶液如使用自身对照法进行测定，应分别配制两份对照溶液、供试品溶液，均需进行两次进样。
当需进行复验、产生边缘数据或采用外标法时在分别配制两份的同时，至少各进行三次进样。
另外，使用外标法时，还需对其中一份溶液进行五次连续进样。
1.2 系统适用性试验系统适用性是否满足规范要求直接影响药品有关物质测定结果准确性，其中拖尾因子、重复性、分离度是系统适用性试验中的重要参数，应引起足够的重视。
首先，使用反相高效液相色谱法测定药品中有关物质时，借助峰面积实现，通常对拖尾因子不做要求，而如果出现严重的拖尾现象，会给测量峰面积以及分离效果造成不利影响，甚至会包含杂质，严重影响测定结果准确性，因此，应注重对拖尾因子严加控制。
其次，重复性。
当杂质含量不足0.5%时，要求峰面积相对标准差不能达到10%；当含有0.5%～2%的杂质时峰面积相对标准差不能达到5%。
当杂质含量超过2%时，峰面积相对标准差应控制在2%以下。
当使用外标法时要求对照溶液进行连续五次的进样，要求峰面积相对标准差不能超过2%。
高效液相色谱与手性分离
对含有多个手性中心的药物使用含多糖类手性固定相的高效液相色谱法进行手性拆分摘要对含有多个手性中心的药物进行手性分离是一项具有挑战性的工作。
这篇文章介绍了用多糖类手性固定相对含有多个手性中心的药物进行分离。
并且，柱转换技术在这种化合物得分离中也被应用。
关键词: 回顾;对映体分离; 手性固定相, LC;多糖; 纳多洛尔; 吲多洛尔; 奈必洛尔;地尔硫卓目录1.介绍2.含两个手性中心的药物的手性分离实例3. 含多个手性中心（多于两个）的药物的手性分离实例4. 结论5. 参考文献1. 介绍手性是一个显著的生物学过程，一个生物活性分子的对映体通常具有不同的生物学特性。
生物学作用中的对映体选择性现象并不局限于药物学，它是所有生物活性试剂（杀虫剂、除草剂、香精香料、食物添加剂等）的一个共同特征。
来源于自然物质的药物通常是光学活性或纯形式的单一异构体。
然而，那些用化学方法合成的药物通常是根据不对称中心的数目由两个，四个或者更多异构体混合而成。
因此，立体选择性在手性药物的生物利用度、分配、与受体的相互作用、异构体活动中的代谢和消除过程中所产生的差异从不期望的毒性到毫无意义增大活性。
在过去的30年中，通过高效液相色谱法（HPLC）进行手性分离已经显得越来越重要。
这可以通过以下两个方面得出：（a）间接进行手性分离的方法，包括在色谱分析法中通过一个非手性柱用一个手性衍生物试剂合成非对映异构体；（b）直接进行手性分离的方法，包括用手性固定相（CSPs）将外消旋药物拆分成相应的对映体。
基于手性固定相（CSPs）的直接分离方法因其可以快速、合适的用于分离外消旋酸盐而深受分析和制备行业的喜爱。
自然形成和合成的手性固定相（CSPs）存在着广泛的多样性，绝大多数是用于商业（超过120种）。
这些手性固定相（CSPs）中的很多在应用方面具有局限性。
因此，多糖类固定相和其它固定相，如：化学键合的蛋白质、环糊精及其衍生物、Π-型和大环抗生素已经被证明是在高效液相色谱法进行手性药物的分离中最有用的固定相。
高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯乙酮的含量
文章编号：1009-220X(2018)04-0060-04
广州化学 Guangzhou Chemistry
DOI: 10.16560/ki.gzhx.20180416
Vol. 43 No. 4 Aug. 2018
高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯乙酮的含量
收稿日期：2018-06-22 作者简介：李法锦（1987~），男，广东云浮人，检测工程师；主要从事化妆品化学检测与研究。lifajin@
第4期
李法锦等：高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯乙酮的含量
61
准确称取磷酸二氢钠，先用少量超纯水在烧杯中溶解，然后定容到 500 mL，用磷酸调节 pH 值（pH＝3.5）， 溶液搅拌均匀后，使用 0.45 μm 滤膜进行抽滤并超声脱气。
KQ-300DE 超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；分析天平 0.1 mg，赛多利斯 Sartorius。
1.2 实验方法 1.2.1 高效液相色谱分析条件
色谱柱为 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相 A 为 0.05 mol/L 磷酸二氢 钠（pH＝3.5），流动相 B 为甲醇，流动相 C 为乙腈，柱温为 25℃，采用等梯度洗脱程序，流动相使用前 经 0.45 μm 有机滤膜过滤；检测波长为 280 nm，进样量为 5 μL，流速为 1.5 mL/min。磷酸二氢钠溶液配制：
1.16%、1.24%和 0.64%。
关键词：化妆品；高效液相色谱法；对羟基苯乙酮
中图分类号：O657.7
文献标识码：A
对羟基苯乙酮是一种天然植物提取物[1]，主要作为有防腐作用的原料在化妆品配方中使用，对羟基苯 乙酮作为化妆品原料不但不在《化妆品安全技术规范》（2015 年版）的可用防腐剂列表当中，并且也不在 《化妆品安全技术规范》（2015 年版）禁止使用物质列表当中[2]。市场上宣称无防腐添加的化妆品里面一 般都会使用对羟基苯乙酮，但对羟基苯乙酮本身就会对眼睛、呼吸系统和皮肤有一定的刺激作用。
氟苯尼考的高效液相色谱检测方法
武汉轻工大学毕业论文论文题目：鸡血浆中氟苯尼考的高效液相色谱检测方法Development of a HPLC for determinationof florfenicol in chicken plasma姓名：吕阳学号： 110703112院（系）动物科学与营养工程学院专业动物生物技术指导教师刘宇2015年6月1日目录摘要 (1)Abstract (2)第一章绪论 (3)1氟苯尼考的研究进展 (3)1.1氟苯尼考的药品信息 (3)1.2氟苯尼考的临床应用 (4)1.3氟苯尼考的检测方法 ..................................................... 错误！未定义书签。
2研究目的与意义 ....................................................................... 错误！未定义书签。
3研究内容 (6)第二章试验研究 ............................................................................. 错误！未定义书签。
1 材料与方法 .............................................................................. 错误！未定义书签。
1.1试验材料 ......................................................................... 错误！未定义书签。
1.2试验动物 ......................................................................... 错误！未定义书签。
1.3试验方法 (7)2 结果与计算 (8)2.1波长选取 (8)2.1工作曲线 (10)2.2回收率与精密度 ............................................................. 错误！未定义书签。
高效液相色谱法测定地西泮的西药浓度
高效液相色谱法测定地西泮的西药浓度作者：高爽来源：《中国科技博览》2015年第31期[摘要]目的：本文采用高效液相色谱法对地西泮的西药浓度进行了测定。
方法：以甲醇：乙腈：水=20：40：40为流动相，流速为1.0ml/min，以Ywgc18（4.6mm×250mm，10μm）为色谱柱，检测波长为254nm，灵敏度为0.01AUFS。
结果：地西泮在0.125-16μg/ml的范围内有着良好的线性，不同质量的地西泮浓度回收率有着一定差异，地西泮的最低检测浓度为0.05μg/ml。
结论：采用高效液相色谱法检测地西泮的西药浓度具有可行性，这种方法操作简单，测定的结果准确性高，可以大力推广。
[关键词]高效液相色谱法测定地西泮西药浓度中图分类号：P122 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）31-0387-01地西泮属于镇静药物，其在临床治疗中应用比较广，可以发挥出催眠的作用，但是这种药物也有一定毒性，不能滥用或者用量过大，否则会引起中毒现象。
在对中毒患者进行抢救时，首先需要采用常规的抢救措施，然后需要对地西泮西药浓度进行测定，这可以了解药物的特性，还可以了解患者的中毒程度，采用高效液相色谱法测定地西泮的西药浓度有利于掌握患者的病情，还可以制定出有效的治疗方案，对疗效评价提供重要的参考依据。
本文对高效液相色谱法在地西泮西药浓度测定的应用情况进行了分析，对这种测定方法的优缺点进行了介绍，希望可以提高临床检测的效率。
1、材料与方法1.1 仪器Kontron322型高效液相色谱仪与Kontron332型可变紫外检测器（意大利康强公司）；Hs 色谱数据工作站V4.0（杭州英谱科技公司）TCI一16G台式高速离心机（上海医用分析仪器厂）；H一92微型混合器（西巴斯生物技术开发公司）。
1.2 试药地西泮（化学对照品，国家麻醉品实验室）；氯硝西泮（化学对照品，中国药品生物制品检定所）；甲醇和乙腈为色谱纯；乙醚、冰醋酸、正丁胺、氢氧化钠为分析纯；水为重蒸馏水。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第16章高效液相色谱法【16-1】从分类原理、仪器构造及应用范围，简述气相色谱及液相色谱的异同点。
答：二者都是根据样品组分与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。
从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。
同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。
气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。
而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等。
但是二者均可与MS等联用。
二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。
而只要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。
【16-2】高效液相色谱仪由几大部分构成？各部分的主要功能是什么？答：高效液相色谱仪由高压输液系统，进样系统，分离系统，检测系统和记录系统五大部分组成。
高压输液系统：主要是通过高压输液泵将溶剂储存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使试样在色谱柱中完成分离过程。
进样系统：把分析试样有效地送入色谱柱中进行分离。
分离系统：将试样各组分分离开来。
检测系统：对被分离组分的物理或物化特性有响应；对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应。
记录系统：记录被分离组分随时间变化的信号。
【16-3】液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比其主要区别何在？答：液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动的流动相传质、滞留的流动相传质以及柱外效应。
在气相色谱中径向扩散往往比较显著，而液相色谱中径向扩散的影响较弱，往往可以忽略。
另外，在液相色谱中还存在比较显著的滞留流动相传质及柱外效应。
【16-4】何谓化学键合相色谱、正相色谱和反相色谱？答：化学键合相色谱是指在化学键合固定相上进行物质分离的一种液相色谱法。
正相色谱是采用极性键和固定相流的相用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂。
反相色谱采用非极性键和固定相流的相为强极性的溶剂。
【16-5】何谓化学键合固定相？它的突出优点是什么？答：利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面形成的固定相称为化学键合固定相。
优点: 固定相表面没有液坑,比一般液体固定相传质快的多；无固定相流失,增加了色谱柱的稳定性及寿命；可以键合不同的官能团,能灵活地改变选择性,可应用与多种色谱类型及样品的分析；有利于梯度洗提,也有利于配用灵敏的检测器和馏分的收集。
【16-6】什么叫梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同？答：梯度洗脱是指将两种或两种以上不同极性但可互溶的溶剂，随着时间的改变而按一定比例混合。
以连续改变色谱柱中淋洗液的极性，离子强度或pH等，从而改变被测组分的相对保留值、提高分离效率、加快分离速度的一种洗脱方式。
液相色谱中梯度淋洗和气象色谱中程序升温作用相同。
不同的是：在起诉相色谱中通过改变温度条件，达到高效快速分离目的；而液相色谱是通过改变流动相极性来达到目的。
【16-7】指出下列各种色谱法中最适宜分离物质。
（1）气液色谱；（2）正相色谱；（3）反相色谱；（4）离子交换色谱；（5）凝胶色谱；（6）气固色谱；（7）液固色谱。
答：（1）气液色谱：适宜分离气体或易挥发性液体和固体。
（或可转化为易挥发性液体和固体。
）（2）正相色谱：适宜分离极性化合物。
（3）反相色谱：适宜分离多环芳烃等低极性化合物。
（4）离子交换色谱：适宜分离离子型和可离解化合物。
（5）凝胶色谱：适宜分离大分子化合物，（分子量>2000）例蛋白质、氨基酸、核酸等生物大分子。
（6）气固色谱：适宜分离永久性气体及烃类化合物。
（7）液固色谱：适宜分离不同极性的化合物，或不同类型的化合物，特别适合分离异构体。
【16-8】指出下列化合物被液体流动相从氧化铝柱中洗脱的峰序：正丁醇、1-丁基氯、正己酸、正己烷、2-己烯。
答：正己烷，2-己烯，1-丁基氯，正丁醇，正己酸。
【16-9】指出下列化合物从氧化钙柱中流出的顺序：正丁醇、甲醇、正己醇、乙醇。
答：甲醇，乙醇，正丁醇，正己醇。
【16-10】指出下列物质在正相色谱中的洗脱顺序。
（1）正己烷，正己醇，苯；（2）乙酸乙酯，乙醚，硝基丁烷。
答：（1）正己烷，苯，正己醇（2）乙醚，硝基丁烷，乙酸乙酯【16-11】指出习题10中物质在反相色谱中的洗脱顺序。
答：（1）正己醇，苯，正己烷（2）乙酸乙酯，硝基丁烷，乙醚【16-12】指出下列离子从阴离子交换柱中流出的顺序：Cl-，I-，F-，Br-。
答：F-，Cl-，Br-，I-。
【16-13】预测下列离子从阳离子交换柱中流出的可能顺序：Ca2+，Ba2+，Mg2+，Be2+，Sr2+。
答：Be 2+，Mg 2+，Ca 2+，Sr 2+，Ba 2+。
【16-14】 相对分子质量约为120000的蛋白质在1根排阻极限为80000的凝胶柱上的保留体积为15mL ，萘（MW128）在同1根柱上的保留体积为124mL ，某特定试样组分的保留体积为87mL 。
假定萘的相对分子质量小于凝胶的渗透极限，计算总孔容积和试样组分的分配系数。
答：109mL ，0.66【16-15】 用1根以二甲基甲酰胺作为流动相的排阻色谱柱检测聚氧化乙烯的保留体积，试利用表中结果估计保留体积为13.5mL 的聚氧化乙烯聚合物的相对分子质量。
相对分子质量 V /mL 相对分子质量 V /mL 1.1×103 17.2 7.7×104 14.1 5.1×103 16.3 7.0×10512.7 2.0×10415.1解：以相对分子量Mr 取对数logMr 作为纵坐标以保留体积V 为横坐标，求出斜率K341lg 5.110lg1.11016.317.(2)K ⨯⨯=－－10.744K =-442lg 7.710lg 2.01014.1 4.)3(K ⨯⨯=－－20.57K =－1220.657K K K =+=－ 保留体积为13.5mL 的相对分子质量lg7.0105lg 0(.65712.735)1.Mr ⨯=－－－ 解得52.110Mr =⨯ 【16-16】 为了解决下列分析课题，可否采用色谱法（应指出其具体的方法名称）？若不能采用，应当用哪些方法较为合理？（1）液体中的烯烃、炔烃和芳烃三族物质的分类和分析； （2）水溶液中甲酸、乙酸、丙酸和丁酸的总酸度的测定； （3）甲酸、乙酸、丙酸和丁酸混合物中含量的分别测定；（4）某工厂临时购得一批乙醇原料，其中含丙酮约为5%~10%，要求比较准确测出原料中丙酮的含量；（5）混合物中对、间、邻二甲苯含量的分别测定； （6）鉴定某一商品高聚物；（7）生物化学制品，如蛋白质、胆汁酸的分类分析；（8）空气中氟化氢、二氧化硫气体的分析；（9）氯化钾和氯化钠水溶液中两种正离子含量的分别测定；（10）钢铁中为了N2、O2、H2的测定。
【16-17】欲测定下列试样，采用哪种色谱法较为适宜？并指出所选用的固定相、流动相和检测器。
（1）（蒽）和（菲）；（2）CH3CH2OH和CH3CH2CH2OH；（3）Ba2+和Sr2+；（4）C4H9COOH和C5H11COOH；（5）高相对分子质量的葡糖苷；（6）苯和丁酮；（7）丁酮和乙醇；（8）正己烷、正庚烷、正辛烷和正癸烷；（9）分析苯中微量水分；（10）苯乙酮、苯、硝基苯；（11）苯、萘、联苯、菲、蒽；（12）ClOCOOC2H5HH和ClOCOOC2H5HH（13）F-、Cl-、Br-、NO3-；（14）乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸；（15）OH，OHCH3，OHCHO，OHClCl（16）N2和O2；（17）邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯。
解：部分答案如下表：【16-18】电渗流是如何产生的？讨论电渗流在毛细管电泳分类中的意义。
答：电渗现象中整体移动着的液体称为电渗流。
HPCE中通常使用石英作为毛细管材料，石英的等电点约为1.5，因此在常用缓冲溶液中(pH＞3)，管壁带负电，石英毛细管表面的硅羟基(≡SiOH)电离为硅氧基负离子(≡SiO-)，并将溶液中水合离子(一般为阳离子)吸附到毛细管表面附近，形成双电层。
当在毛细管两端加电压时，双电层中的阳离子向阴极移动，由于离子是溶剂化的，所以带动了毛细管中整体溶液向阴极移动，形成电渗流(EOF)。
电渗流在电泳分离过程中的有重要意义。
体现在：①使混合物中的正、负离子和中性分子产生差速迁移而实现分离；②通过EOF的大小和方向的控制，可以提高CE的分离效率、选择性和分离度。
【16-19】毛细管电泳有哪些主要分离模式？答：（1）毛细管区带电泳（CZE）将待分析溶液引入毛细管进样一端，施加直流电压后，各组分按各自的电泳流和电渗流的矢量和流向毛细管出口端，按阳离子、中性粒子和阴离子及其电荷大小的顺序通过检测器。
中性组分彼此不能分离。
出峰时间称为迁移时间（tm），相当于高效液相色谱和气相色谱中的保留时间。
（2）毛细管凝胶电泳（CGE）在毛细管中装入单体和引发剂引发聚合反应生成凝胶，这种方法主要用于分析蛋白质、DNA等生物大分子。
另外还可以利用聚合物溶液，如葡聚糖等的筛分作用进行分析，称为毛细管无胶筛分。
有时将它们统称为毛细管筛分电泳，下分为凝胶电泳和无胶筛分两类。
（3）毛细管等速电泳（CITP）采用前导电解质和尾随电解质，在毛细管中充入前导电解质后，进样，电极槽中换用尾随电解质进行电泳分析，带不同电荷的组分迁移至各个狭窄的区带，然后依次通过检测器。
（4）毛细管等电聚焦电泳（CIEF）将毛细管内壁涂覆聚合物减小电渗流，再将样品和两性电解质混合进样，两个电极槽中分别加入酸液和碱液，施加电压后毛细管中的操作电解质溶液逐渐形成pH梯度，各溶质在毛细管中迁移至各自等电点（pI）时变为中性形成聚焦的区带，而后用压力或改变检测器末端电极槽储液的pH值的办法使溶质通过检测器。
（5）胶束电动毛细管色谱（MEKC或MECC）当操作缓冲液中加入大于其临界胶束浓度的离子型表面活性剂时表面活性剂就聚集形成胶束，其亲水端朝外憎水非极性核朝内，溶质则在水和胶束两相间分配，各溶质因分配系数存在差别而被分离。
（6）毛细管电色谱（CEC）将细粒径固定相填充到毛细管中或在毛细管内壁涂覆固定相以电渗流驱动操作缓冲液（有时再加辅助压力）进行分离。
【16-20】试比较毛细管电泳与高效液相色谱方法。
高效毛细管电泳仪（HPCE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离，是分析科学继高效液相色谱仪（HPLC）之后的又一重大进展，使分析科学从微升级进入到了纳升级水平，不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。