脂质体制备及包封率检测
根皮素脂质体的制备及性质1试验目的了解脂质体的性质和应用
1实验目的2实验原理脂质体是一种人工制备的携有双层包膜的磷脂质小囊，它具有类似于细胞膜的结构，构成双分子层的类脂亲水性的头部形成膜的表面，而亲脂性的尾部则处于膜的中间，正是由于脂质体的这种结构使其能够携带各种亲水的，疏水的和两性的物质。
它们被包于脂质体内部水相，插入类脂双分子层或吸附连接在脂质体的表面。
随着细胞膜在细胞间物质传递以及细胞识别中功能及地位的确定，脂质体作为药物载体已被广泛研究。
到目前为止，已知对许多药物进行了由脂质体作为载体的实验。
其优越性主要表现在五个方面：(1)可将抗原天然靶向网状内皮系统，优先被巨噬细胞等抗原呈递细胞(APC)所摄取，并对包裹的抗原或药物有缓释作用；(2)副作用少、程度轻，无全身毒性反应,可生物降解，本身无免疫原性；(3)可改变免疫应答的类型和方式，还可产生免疫记忆；(4)通过改变脂质体大小和电荷，可以控制药物在组织内的分布与在血清中的清除率；(5)可用单克隆抗体等配体修饰脂质体,使药物靶向病变部位(即药物导弹)。
因此,脂质体在疫苗、药物输送、基因治疗等方面显示出明显的优越性。
根皮素是国外新近研究开发较多的一种新型皮肤美白剂。
根皮素主要存在于苹果、梨等水果及多种蔬菜的根皮或根茎中；另外，根皮苷水解断裂糖苷键，除去糖基后也可得到根皮素。
本实验采用超声法制备两种根皮素脂质体，用紫外分光光度法、荧光光谱法考察药物根皮素与脂质体的相互作用，并计算包封率，考察β—环糊精（CD）对药物包埋程度的影响；显微观察脂质体结构形态，考察其稳定性。
3仪器及试剂仪器：旋转蒸发器，恒温水浴锅，循环水真空泵，超声波清洗仪，旋涡混合器，紫外可见分光光度计，显微镜，真空干燥箱，PH计，台式高速离心机。
试剂：卵磷脂，根皮素，8—氨基萘—1—磺酸季胺盐（ANS），β—环糊精，其它分析纯试剂：混合磷酸盐，四硼酸钠，甲醇，氯仿等。
4实验步骤4.1 脂质体的制备缓冲液的配制：根据文献配制0.1mol.l-1的HCl(用移液管移取8.3ml分析纯HCl，二次水稀释至1L)；配制0.1 mol.l-1 Tris (称6.0574gTris二次水稀释至500ml)，取500 ml 0.1mol.l-1 Tris 碱溶液和420 ml 0.1mol.l-1的HCL混合，加NaCl 8.775 g, 加水稀释至1000ml。
姜黄素脂质体的制备及包封率测定
姜黄素脂质体的制备及包封率测定吴雪松【摘要】目的：探讨姜黄素脂质体的制备，建立其含量测定方法，测定其包封率。
方法：采用薄膜分散法制备姜黄素脂质体，采用超速离心法分离脂质体及游离药物，采用紫外分光光度法（UV）测定姜黄素含量，计算其包封率。
结果：采用薄膜分散法制得的姜黄素脂质体为黄色，呈圆形或类圆形，平均粒径为0.49μm，分布均匀，脂质体的平均包封率为96.02%，符合2010版《中国药典》的要求。
姜黄素脂质体中姜黄素含量为9.87mg/g，RSD为0.99%。
结论：薄膜分散法可以简单快速地制备姜黄素脂质体，操作流程掌握容易，制备的脂质体形态较好、包封率较高；超速离心法与紫外分光光度法结合可以准确、可靠地测定姜黄素脂质体的含量。
%Objective:TO discuss how to prepare the liposome of Sculellaria barbata flavones,establish the method of total flavonoids determination, and determate its encapsulation rate.Method:By using the film dispersion method to prepare the liposome of Sculellaria barbata flavones,and by using the ultracentrifugation to liposome and free drugs, and by using ultraviolet spectrophotometry (UV) to determinate the total content of flavonoids, and determate its encapsulation rate.Result:The Liposome color is dark brown,round or class round,the average particle size was 0.54 microns, uniform distribution,and the average of liposome encapsulation rate is 94.38%, it is in line with the requirements of "Chinese pharmacopoeia" 2010 version.Conclusion:The film dispersion method is easy and simple to preparate the Sculellaria barbata flavones Liposome,the operation is easy to grasp,the morphology of liposomes prepared well andhigh encapsulation rate;The Ultracentrifugation method combined with UV can be accurate, reliable to determinate of the encapsulation rate.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】2页(P8-8,9)【关键词】姜黄素;脂质体;制备方法;含量测定【作者】吴雪松【作者单位】泰州市人民医院泰州 225300【正文语种】中文【中图分类】R283药用植物姜黄的主要药效成分是姜黄素，主要存在于根茎中，属于酚类物质，橙黄色，毒性较低[1]。
盐酸吉西他滨脂质体的制备及含量和包封率的测定学性质
中 图分 类 号 ： Ｒ ７ ． ９ ９ ９１ ＋ 文献标识码： Ａ
Ｐｒ ｐａ ａ ｉ ｎ ａ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｆｔ ｅｃ ｎ ｅ ｎｄ ｅ ｒ ｐｍ ｅ ｔｅ ｃｅ ｃ ｅ ｒ ｔｏ ｎｄ ｄｅｅ ｍ ｎａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｏ ｔ ｎｔａ ｎｔａ ｎ ｆ ｉｎ ｙ ｉ
法进行 了初 步研究 。
１ 仪 器与试 药 Ｕ － １ ０ 外 分光 光度 计 （ Ｖ９０紫 北京 瑞利 分 析仪 器 公 司） ０１ ；９ —型恒温磁力搅拌器（ 上海精科实业有限公司） ； Ｒ ．２ Ａ型旋 转蒸 发器（ Ｅ５ Ａ 上海 亚荣生 化仪 器厂） ；岛津 高效液相色谱仪（ Ｃ １Ａ 泵 ，Ｓ Ｄ．０ Ｌ ．０ Ｔ Ｐ １Ａ紫外检测器） ； 粒 度 分析仪 （ ｅｋ ｎＣ ｕｔｒ ｏｐ ；透 析袋 （ 口分 Ｂ ｃ ｍａ ｏ ｌ ｒ） ｅＣ 进
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｇｅ ｉ ｂ ｎ ｙ ｒ ｃ ｌ ｒ ｅ ｌ ｏ ｏ ｓｐ ｅ ａ ｅ ｒ ｕ ｈ ａ ｍｅｈ ｄ ｏ ｖ ｒｅ ｐ ａ ｅ ｅ ａ ｏ ａ ｉｎ ｓｒ ｃ ｍｃｔ ｉ ｅｈ ｄ ｏ ｈ ｏ ｉ ｉ ｓ ｍｅ ｗａ ｒ ｐ ｒ ｄ ｔ ｏ ｇ ｔ ｏ ｆＲｅ ｅ ｓ — ｈ ｓ ｖ ｐ ｒ ｔ ， ａ ｄ ｐ ｈ ｏ ａ ｄ ａ ＨＰ Ｃ ｍ ｅｈ ｄ ｆ ｒｔ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｄ ｅ ｔａ ｍ ｅ ｔｅ ｃｅ ｃ ｆｇ ｍｃ ｔｂ ｎ ｙ ｒ ｃ ｌ ｒ ｅ ｎ Ｌ ｔ ｏ ｏ ｅ ｅ ｍｉ ａｉ ｆｔ ｏ ｔｎ ｎ ｎ ｒ ｐ ｎ ｆ ｉ ｎ ｙ ｏ ｅ ｉ ｉ ｅ ｈ ｄ ｏ ｈ ｏ ｉ ｈ ｏ ｈ ｉ ａ ｄ ｌ ｏ ｏ ｓ ｓａ ｌ ｈ ｄ Ｉ ｗａ ｏ ｄｔ ａ ｅ ｒ ｐ ｒ ｄｇ ｍｃｔ ｂｎ ｙ ｒ ｃ ｌｒｄ ｐ ｓ ｍｅｗａ ｌ ｄ ｓ ｂ ｔｄ ｗｉ ｉ ｓ ｍｅ ｐ ｗａ ｔｂ ｉ ｅ ． ｔ ｓｓ ｗｅ ｔ ｈ ｅ ａｅ ｅ ｉ ｉｅｈ ｄ ｏ ｈｏ ｉ ｅｌ ｏ ｏ ｓ ｅ ｓ ｈ ｈ ｔ ｐ ａ ｉ ｗｅｌ ｉ ｒ ｕ ｅ ｔ — ｔ ｉ ｈ ａｓ ｈ ｒｃ ｌ ｈ ｐ ． ｈ ｖ ｒ ｇ ｎ ｒ ｐ ｎ ｆ ｃ ｅ ｃ ｆ ｈ ｐ ｓ ｍｅｗａ ．％． ｎ ｅａ ｅ ａ ｅｓｚ ｓ １ ７５ ｎｎ ｅ ａ ａ ｅ Ｔ ｅａ ｅａ ｅｅ ｔａ ｍｅ ｔ ｉ ｉｎ ｙｏ ｔ ｅｌ ｏ ｏ ｓ １２ ａ ｄｔ ｖ ｒ ｇ ｉ ｅ ｐ ｉ ｓ ｅ ｉ ８ ｈ ｗａ ８ ． ｌ ． Ｋ ｅ ｒ ｓ Ｇｅ ｉ ｂ ｎ ｙ ｒ ｃ ｌ ｒ ｅ Ｌｉ ｏ ｏ ； Ｅ ｔａ ｍｅ ｔｅ ｃ ｅ ｃ ； Ｒｅ ｅ ｓ ｄ ｐ ａ ｅ ｅ ａ ｏ ａ ｉ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ｍｃ ｔ ｉ ｅ ｈ ｄ ｏ ｈ ｏ ｉ ； ｐ ｓ ｍｅ ａ ｄ ｎｒ ｐ ｎ ｆ ｉｎ ｙ ｉ ｖ ｒｅ — ｈ ｓ ｖ ｐ ｒｔ ｏ
液相法测定盐酸沙拉沙星脂质体含量和包封率
药物的含量和 包封率 。
一
方 量的大豆 卵磷脂 、 胆固醇 ， 溶于适量 的无水 乙醇中 ， 得到
类脂溶液。取盐酸 沙拉沙 星溶 液于圆底烧瓶 中 ， ６ ０ ￣ Ｃ 水浴 加热。在搅拌下 ， 缓缓将上述类脂溶液滴注到盐酸 沙拉 沙 星溶液 ， 搅拌 １ ０ ａｉ ｒ ｎ ， 旋转蒸发除去 乙醇 ， 过０ ． ４ ５ １ Ｔ Ｉ 滤膜 ， 灌装 ， 充氮气 ， 封 口， 即得盐酸沙拉 沙星脂质体。
ＭＳ － Ｐ Ａ数显加热型磁 力搅拌器 ， 上海 沃元科技有 限公司 ； 循 环 水 式 多 用 真 空 泵 ，郑 卅Ｉ 长城 科工 贸有限公 司 ； １ ＜ Ｅ 一 ５ ２ ９ ９ 旋转 蒸发器 ， 上海 亚荣生化仪器 厂 ； 微量可调加 样器 ， 德国 Ｅ ｐ ｐ ｅ ｎ ｄ ｏ ｆ公司。
培公司研制的动物专用的第三代氟喹 诺酮 类抗 菌药物 ， 具 有抗菌谱广 ， 抗菌活性强 ， 对革兰氏阴性菌 、 革兰 氏阳性菌
及霉形 体等均表现 出 良好的抗菌作 用 ，尤 其是对大肠 杆 菌、 沙 门氏菌 、 克雷伯氏菌 、 变形杆菌 、 多杀性巴氏杆菌 、 弯 曲杆菌等肠杆菌 。由于盐酸沙拉沙星溶解度小 ， 化学稳定 性差 ， 有引湿性 ， 遇光 、 热色渐变深 。市信 的盐酸 沙拉 沙星 注射液 ｐ Ｈ高 ， 肌 肉注射后刺激性较大。 目前 ， 临床现有的
相， 定容 至刻度 ， 用 ０ ． ４ ５ ｕ ｍ 滤膜 过 滤， 吸取上清 液 ２ ０ ｕ Ｌ ， 按照 以上 色
１
．
空岛糍艇 体
谱条件 ， 测定药物含 量。 标准 曲线 的绘 制 称取 沙拉沙
星对 照品 ２ ５ ． ０ ｍｇ ，溶于 Ｏ ． １ Ｍ 氢氧 化钠溶液 中 ， 配制成 １ ０ ０ ｕ ｇ ／ ｍＬ的
实验十五 脂质体的制备.
实验十五脂质体的制备一、实验目的1. 掌握注入法制备脂质体的工艺。
2. 掌握脂质体包封率的测定方法。
二、实验原理60年代初 Banghan 等发现磷脂分散在水中可形成多层囊,并证明每层囊均为双分子脂质膜组成且被水相隔开,称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。
197l 年Ryman 等人提出将脂质体作为药物载体, 即将酶或药物包囊在脂质体中。
近年来脂质体作为药物载体在传递给药系统中的研究有了迅速的发展。
脂质体系一种人工细胞膜, 它具有封闭的球形结构, 可使药物被保护在它的结构中, 发挥定向作用。
特别适于作为抗癌药物载体,以改善药物的治疗作用,降低毒副作用等。
脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂, 如豆磷脂,卵磷脂等;合成磷脂,如二棕榈酰磷脂酰胆碱,二硬脂酰磷脂酰胆碱等。
磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。
磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。
当较多的磷脂加至水或水性溶液中, 磷脂分子定向排列, 其亲水基团面向两侧的水相, 疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层, 并进一步形成椭圆形或球状结构——脂质体。
常用的附加剂为胆固醇,它也是两亲性物质,与磷脂混合使用,可制备稳定的脂质体,其作用是调节双分子层流动性,减低脂质体膜的通透性。
其它附加剂有十八胺,磷脂酸等,这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。
脂质体可分为三类:小单室(层脂质体,粒径在 20~50nm,凡经超声波处理的脂质体混悬液, 绝大部分为小单室脂质体; 多室(层脂质休, 粒径约在 400~1000nm; 大单室脂质, 粒径约为 200~1000nm,用乙醚注入法制备的脂质体多属这—类。
脂质体包封率的测定包封率的定义可用下式表示:包封率% =(W总 - W游离 / W总 x 100式中W 总——脂质体混悬液中总的药物量。
W 游离——未包入脂质体中的药物量。
影响脂质体包封率的因素有多种, 如磷脂质的种类, 组成比例, 制备方法及介质的离子强度等。
脂质体的质量控制与评价
一、脂质体的制备1、注入法:主要用于制备单室脂质体，少数为多室脂质体，其粒径绝大多数在2m 以下。
2、薄膜分散法：主要用于制备多室或大单室脂质体，超声后以单室脂质体为主。
3、超声波分散法：主要用于制备以单室为主单室脂质体。
4、逆相蒸发法：将磷脂溶于有机溶剂，加入含药物的缓冲液，超声使成稳定w/o 乳剂，减压除去有机溶剂在旋转器壁上形成薄膜，加入缓冲液使凝胶脱落，制得水性混悬液，通过凝胶色谱法或超速离心法，除去未包入的药物，即得大单室脂质体。
5、冷冻干燥法：适合于热敏感的药物。
6、重建脂质体：单室或多室型。
是目前国外应用最为广泛的制备方法之一。
其具有工艺稳定、适合于工业化生产、质量易于控制、产品稳定性好等特点。
二、脂质体的质量控制与评价1、形态、粒径及其分布采用扫描电镜、激光散射法或激光扫描法测定。
根据给药途径不同要求其粒径不同。
如注射给药脂质体的粒径应小于200nm，且分布均匀，呈正态性，跨距宜小。
2、包封率和载药量包封率：包封率＝（脂质体中包封的药物/脂质体中药物总量）×100％一般采用葡聚糖凝胶、超速离心法、透析法等分离方法将溶液中游离药物和脂质体分离，分别测定，计算包封率。
通常要求脂质体的药物包封率达80%以上。
载药量：载药量＝[脂质体中药物量/（脂质体中药物＋载体总量）]×100％载药量的大小直接影响到药物的临床应用剂量，故载药量愈大，愈易满足临床需要。
载药量与药物的性质有关，通常亲脂性药物或亲水性药物较易制成脂质体。
3、脂质体的稳定性1)、物理稳定性:主要用渗漏率表示。
渗漏率＝（放置前介质中药物量－放置后介质中的药量）/制剂中药量x100% 胆固醇以加固脂质双分子层膜，降低膜流动，可减小渗漏率。
2)、化学稳定性：(1)磷脂氧化指数：氧化指数＝A233nm=A215nm；一般规定磷脂氧化指数应小于0.2。
(2)磷脂量的测定：基于每个磷脂分子中仅含1个磷原素，采用化学法将样品中磷脂转变为无机磷后测定磷摩尔量（或重量），即可推出磷脂量。
药物制剂中纳米纳米脂质体的制备与表征
药物制剂中纳米纳米脂质体的制备与表征药物制剂中纳米脂质体的制备与表征随着纳米技术的发展，纳米脂质体作为一种新型的药物载体逐渐受到关注。
纳米脂质体具有较小的粒径、良好的生物相容性和可调控的药物释放性能，因此在药物制剂领域具有广阔的应用前景。
本文将介绍纳米脂质体的制备方法和表征技术，以期为药物制剂研究提供参考。
一、纳米脂质体的制备方法纳米脂质体制备的方法多种多样，常用的包括薄膜溶液法、超声法、溶剂沉淀法等。
1. 薄膜溶液法薄膜溶液法是一种较常用的制备纳米脂质体的方法。
其步骤包括：将药物和脂质按一定比例溶解于有机溶剂中，制备成薄膜后，通过旋转膜、蒸发溶剂等方式制备纳米脂质体。
该方法制备的纳米脂质体具有较小的粒径和较好的药物包封率。
2. 超声法超声法是一种制备纳米脂质体的非常有效的方法。
该方法通过超声辐射的效应，使药物和脂质均匀混合，并形成纳米级的乳液，最终制备纳米脂质体。
超声法制备的纳米脂质体具有较高的药物负载量和可控的释放性能。
3. 溶剂沉淀法溶剂沉淀法是制备纳米脂质体的一种简便方法。
该方法通过将脂质和药物溶剂共溶于有机溶剂中，再将混合溶液滴加到大量非溶剂中，形成纳米级的乳液，最终通过离心、冻干等方式制备纳米脂质体。
此方法制备的纳米脂质体操作简单，并具有较好的稳定性和生物相容性。
二、纳米脂质体的表征技术1. 粒径分布测定纳米脂质体的粒径是评价其性能的重要指标之一。
常用的粒径分布测定方法包括动态光散射法（DLS）和激光粒度分析法。
DLS可以通过测量散射光的强度和散射角度，计算得到纳米粒子的平均粒径和粒径分布。
激光粒度分析法则通过测量光散射峰的强度和位置来确定纳米粒子的粒径。
2. 形态表征纳米脂质体的形态表征可以采用透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）等技术。
这些技术可以观察到纳米脂质体的形貌特征，并评估其形态的均一性。
3. 药物包封率测定药物包封率是评价纳米脂质体药物负载能力的指标。
常用的测定方法包括高效液相色谱（HPLC）和紫外分光光度法。
药剂学实验脂质体的制备及包封率的测定
06
实验注意事项与改进建议
实验安全注意事项
实验室安全
01
确保实验室通风良好，佩戴适当的防护装备，如实验服、手套
和护目镜。
化学品安全
02
熟悉并遵守所有化学品的安全数据表（SDS）指南，特别注意
有毒、易燃或腐蚀性物质的正确处理和存储。
设备安全
03
正确使用实验设备，遵循制造商的操作指南，确保设备维护和
其他制备方法
复乳法
将药物水溶液与磷脂等膜材制成W/O型乳剂 后，再分散到外水相中形成W/O/W型复乳 ，除去有机溶剂后可得脂质体
熔融法
将磷脂等膜材在高于相变温度条件下熔融成液晶态 ，加入药物溶液进行搅拌，然后冷却固化得到脂质 体
超声波分散法
利用超声波的空化作用将磷脂膜材分散成脂 质体
03
包封率测定原理及方法
02
直至形成稳定的W/O型乳剂，减压蒸发除去有机溶 剂
03
形成脂质体，加入缓冲液，通过凝胶色谱法或超速 离心法除去未包封的药物
注入法
1
将类脂质和脂溶性药物溶于有机溶剂中，然后把 此药液经注射器缓缓注入加热至相变温度以上的 磷酸盐或醋酸盐等缓冲液
2
类脂质排列成整齐的脂质双分子层而形成脂质体
3
该方法可制备粒径较大且粒径分布均匀的脂质体
包封率定义及意义
包封率定义
包封率是指脂质体中药物包裹量与投 药量之比，是评价脂质体制备工艺和 药物包裹效果的重要指标。
包封率意义
高包封率意味着更多的药物被有效地 包裹在脂质体内，有利于提高药物的 稳定性和生物利用度，减少用药剂量 和副作用。
测定原理
分离原理
通过物理或化学方法将脂质体中的游 离药物与包裹药物分离，然后分别测 定两者的含量，计算包封率。
脂质体包封率的测定方法
脂质体包封率的测定方法
脂质体包封率的测定方法主要包括以下几种：
1. 分子排阻色谱法：利用脂质体与游离药物分子质量和粒径大小的差异进行分离，常用的分离介质是葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶。
先将溶胀好的凝胶装入柱子中，用洗脱液冲洗柱子至平衡后，将脂质体上柱，洗脱。
脂质体由于粒径较大先被洗脱下来，而游离的药物粒径较小，渗透到凝胶的内部空隙，后被洗脱下来，使得脂质体与游离药物分开。
2. 测定公式法：通过公式计算包封率，包括百分包封率和包裹容积的测定。
公式为：包封率=(1-游离药物的量/纳米粒或脂质体悬液中药物的总
量)×100%。
3. 透析法：利用半透膜分子大小差别，通过及时更换外相达到分离的目的。
该法简单、准确，重复性好，缺点是耗时较长，所耗介质较多，易造成药物渗漏。
4. 超速离心法：利用游离药物与含药脂质体的重力差异进行分离，计算包封率，该法适用于亚微米级粒子，可用于样品浓缩。
这些方法各有优缺点，选择合适的测定方法要根据具体的实验条件和要求来决定。
伊达比星脂质体的制备及其包封率的测定
伊达比星脂质体的制备及其包封率的测定王玲玲;邓盛齐;尹婕;任静【摘要】目的制备伊达比星脂质体,建立伊达比星脂质体包封率的测定方法.方法采用薄膜分散-超声合并挤压法制备伊达比星脂质体,通过葡聚糖凝胶柱色谱分离游离药物和脂质体,用HPLC测定伊达比星含量,计算包封率.结果伊达比星脂质体平均包封率为65.42％,载药量为7.70％.凝胶柱色谱柱回收率99.76％,伊达比星在0.05～30.0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999).结论薄膜分散-超声合并挤压法适用于制备伊达比星脂质体,分析方法准确可靠可以用于伊达比星脂质体包封率的测定.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2014(039)006【总页数】4页(P447-450)【关键词】伊达比星;薄膜分散-超声合并挤压法;脂质体;包封率【作者】王玲玲;邓盛齐;尹婕;任静【作者单位】成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052;成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052;成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052;成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052【正文语种】中文【中图分类】R978.1+9伊达比星(idarubicin，IDA)是柔红霉素(daunorubicin，DNR)的去甲氧基衍生物，是哺乳动物DNA强有力地毒性剂，它的细胞毒性强于DNR或阿霉素，临床上单独或与其它化疗药物结合用于治疗急性白血病、晚期乳腺癌、多发性骨髓瘤、非何杰氏淋巴瘤等，对柔红霉素和多柔比星耐药及复发性和难治性的急性白血病也有效。
但在用药过程中心脏毒性、骨髓抑制以及消化系统反应等不良反应严重限制了其在临床上的广泛和长期使用[1-3]。
脂质体作为抗癌药物的载体具有靶向、高效、低毒、抗耐药性等优越性，结合IDA本身的理化性质，本文采用注射用大豆磷脂和胆固醇为载体材料制备了伊达比星脂质体并采用葡聚糖凝胶柱色谱法测定其包封率，为伊达比星脂质体制剂的进一步开发奠定良好基础。
脂质体的制备
脂质体的制备及检测一.目的要求1.掌握注入法制备脂质体的工艺。
2.掌握脂质体包封率的测定方法。
二.实验原理1. 60年代初，Begkan等发现磷脂分散在水中可形成多层囊，并证明每层囊均为双分子脂质膜且被水隔开，称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。
1971年Rymen 等人提出将脂质体作为药物载体，即将酶或药物包裹在脂质体中。
2. 脂质体系一种人工细胞膜，它具有洋葱似的封闭球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发挥定向作用，特别适于作为抗癌药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。
脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂，卵磷脂等，合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。
磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。
磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。
当较多的磷脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层，形成椭圆形或球状结构一—脂质体。
常用的附加剂为胆固醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流动性，减低脂质体膜的通透性。
其它附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。
3. 脂质体载药系统的优势：1.被动靶向：脂质体进人体内可被巨噬细胞作为外界异物而吞噬，主要被单核巨噬细胞系统的巨噬细胞所吞噬而摄取，形成肝、脾等网状内皮系统的被动靶向性。
2.缓释作用：将药物包封成脂质体，可减少肾排泄和代谢，延长药物在血液中的滞留时间，使药物在体内缓慢释放，从而延长了药物的作用时间。
3.降低药物毒性：药物被脂质体包封后，有效地在肝、脾和骨髓等单核巨噬细胞较丰富的器官中浓集，对心、肾有毒性的药物或对正常细胞有毒性的抗癌药包封脂质体后，可明显降低药物的毒性。
4.提高稳定性：一些不稳定的药物被脂质体包封后，可受到脂质体双层膜的保护。
4. 常用的脂质体制备方法：注入法、薄膜分散法、超声波分散法、逆向蒸发法。
脂质体的制备及包封率的测定
• （4）取预热的PBS 30ml，加至含有磷脂膜的烧 瓶中，65-70℃水浴中搅拌水化10-20min。取出 脂质体液体于烧杯中，置于磁力搅拌器上，室温 下，搅拌30-60min，如果溶液体积减少，可补加 水至30m1，混匀，即得。（整个过程也可在旋转 蒸发仪上完成，其它的脂质体制备也可在旋转蒸 发仪上完成。） • （5）取样，在油镜下观察脂质体形态，画出所 见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径； 随后将所得脂质体溶液通过0.8m微孔滤膜两遍， 进行整粒，再于油镜下观察脂质体的形态，画出 所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体粒径。• • • • • • •
3．盐酸小檗碱脂质体的制备（主动载药法）
【空白脂质体处方】 注射用豆磷脂 0.9 g 胆固醇 0.3 g 无水乙醇 2-20 m1 柠檬酸缓冲液 30 ml 制成约30ml脂质体
• 【制备】主动载药法 • （1）空白脂质体制备 称取磷脂0.9g和胆固 醇0.3g，加入无水乙醇，置于65-70℃水浴中， 搅拌使溶解，于旋转蒸发仪上旋转，使磷脂 的乙醇液在壁上成膜，减压除乙醇。加入同 温的柠檬酸缓冲液30ml，65～70℃水浴中水 化10-20min ，取出脂质体于烧杯中，余下操 作同“1．空白脂质体的制备” 。
•
脂质体的制备方法有多种，根据药物的性质或研究 需要来进行选择。 • (1)薄膜分散法 这是一种经典的制备方法，它可形成多 室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点 是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。 • (2)注入法 有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醇注入 法”是将磷脂等膜材料溶于乙醇中，在搅拌下慢慢滴于 55-65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醇，继续搅 拌1—2h，即可形成脂质体。 • （3）逆相蒸发法 系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂， 如氯仿、二氯甲烷中，再按一定比例与含药的缓冲液混 合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该 法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的 脂质体制备，可提高包封率。
实验十 脂质体的制备及包封率的测定
实验十脂质体的制备及包封率的测定一、实验目的1.了解脂质体的结构和性质；2.掌握脂质体的制备方法；3.利用紫外分光光度计测定脂质体的包封率。
二、实验原理脂质体是由磷脂、胆固醇等成分组成的微粒囊，具有自组装、可逆组装、膜液相晶相转换、局部结构调整、聚合与解聚等一系列特性，同时具有高度转染能力、温和性及低毒性等优点，成为生物医学研究领域广泛关注的研究对象。
脂质体的制备方法多种多样，包括机械法、物理化学法、电化学法等，其中以醇沉法等物理化学法常用于大规模制备。
脂质体的包封率是指在脂质体中包封的药物量与药物总量的比例，通常使用紫外分光光度计在253nm处测定DNA或RNA的含量，根据所加药物与总药物量的比值计算出脂质体的包封率。
三、实验步骤1.制备脂质体将2mg的脂质体乳剂溶解在500μL的氯仿中，并加入10μL的药物（如pDNA），搅拌均匀。
将药物与脂质体混合液滴加入10mL的去离子水中，经过30分钟的振荡均匀搅拌，然后使用转移管将上清液取出。
将上清液倒入50mL的角状离心管中，加入18%硝酸钠，离心6000r/min，弃去沉淀。
将沉淀用去离子水洗涤3次，并用去离子水将沉淀重悬，最后得到脂质体的溶液。
将0.5mL脂质体溶液加入测试池，取另一个测试池作为空白对照。
在253nm处测定样品与空白的吸光度，并计算出脂质体的包封率。
四、实验注意事项1.脂质体的制备应在干燥、无风、无尘、无菌的条件下进行；2.药物与脂质体混合液的浓度应适当，以避免过度分散；3.在吸光度计测定时应注意对空白对照的处理。
五、实验结果与分析经过实验制备得到的脂质体溶液，通过紫外分光光度计测定其在253nm处的吸光度，计算出其包封率。
实验结果与所使用的药物种类和浓度等因素有关系，具体可参考文献资料。
六、实验思考题1.脂质体的结构及在生物医学领域中的应用有哪些？。
脂质体制备试验
实验十脂质体的制备及包封率的测定一、实验目的1．掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。
2．掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。
3．熟悉脂质体形成原理，作用特点。
4．了解“主动载药”与“被动载药”的概念。
二、实验指导脂质体是由磷脂与（或不）与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封闭囊状体。
常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团，将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。
常用的附加剂为胆固醇。
胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。
其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。
脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径为20~50nm，经超声波处理的脂质体，绝大部分为小单室脂质体；多室（层）脂质体，粒径约为400~3500nm，显微镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结构；大单室脂质体，粒径约为200~1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类。
脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。
（1）薄膜分散法：这是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。
此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。
（2）注入法：有乙醚注入法和乙醇注入法等。
“乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中，在搅拌下慢慢滴于55~65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌1~2h，即可形成脂质体。
（3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。
该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。
脂质体包封率测定方法_脂质体包封率测定方法及影响因素
脂质体包封率测定方法_脂质体包封率测定方法及影响因素万方数据伟等”１以透析法分离利福平脂质体与游离利福平，结果显示，粒径在２．５—１０ｐａｎ范围内的占总数的８２．４％，其中５—１０ｔｔｍ的占３３．８％。
包封率３２．８％。
赵荣生等”１用薄膜．超声法制备两性霉索Ｂ脂质体，透析法分离含药脂质体和游离药物。
结果表明，试验制备的脂质体，其包封率为（７２。
９３±０．３４）％，含量为１．７０８±Ｏ．０１０ｒａｇ／ｒｉｄ。
王健松等”’采用透析－ＨＰＬＣ法测定阿齐霉素脂质体的含量和包封率，３个批号样品的包封率分别为７９．２％、７７．５％和８１．１％。
１．２超速离心法：超速离心法利用游离药物与含药脂质体的重力差异进行分离，计算包封率，该法适用于亚微米级粒子。
可用于样品浓缩。
但该方法成本较高，通常需要离心ｌｈ以上，且各批样品间重现性差，药物的包封率不高，原因可能是由于离心过程中造成一部分小脂质体丢失，或离心力导致脂质体中药物渗漏丢失。
穆筱梅等”…用超速离心机将果酸脂质体混悬液分为离心上清和沉淀两部分，分别计算包封率，最大为３５％。
当果酸质量浓度为０．３ｒ／Ｌ对，可以得到较好的包封率。
龚金红等”ＩＪ取利多卡因脂质体冷冻超速离心，计算包封率，结果利多卡因脂质体平均粒径为８８．３１ｉｌｍ，平均包封率为（６６．２１±４．８０）％。
王学清等”“经超速离心测定的包封率，结果分别为８４．４％、８５．５％和８４．８％。
脂质体的包封率均在８０％以上，且重现性良好。
Ｒｏｕｚｉ等””以离心法分离包封于脂质体的质粒ＤＮＡ，然后把脂质体分散在ＰＢＳ中，根据脂质体表面覆盖的￥３５的放射强度，估测脂质体对ＤＮＡ的包封率。
１．３凝胶柱层析法：常用的层析柱为葡聚糖凝胶（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）柱和琼脂糖凝胶（Ｓｅｐｈａｒｍｅ）柱。
利用脂质俸和游离药物相对分子质量的差异进行分离，但存在洗脱时间长、洗脱体积大、药物浓度低等问题。
徐丽君等…１在ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱上以ｐＨ７．０・７９０・中国生物制品学杂志２００７年１０月第２０卷第１０期ＣｈｉｎＪＢｉｏｌｏｇｌｃａｌＢＯｃｔｏｂｅｒ２００７，ＶｏＬ２０Ｎｏ，１０的磷酸盐缓冲液为流动相进行洗脱，分离盐酸小檗碱和游离的盐酸小檗碱。
包封率的测定方法
1.凝胶柱层析法(盐酸小檗碱固体脂质纳米粒的制备)其原理是运用分子筛效应:一个含有各种分子的样品溶液流经色谱柱时,各分子在柱中进行着两种不同的运动:垂直向下的移动和和无定向的运动。
大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布在颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快。
小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从凝胶内扩散到间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断的进入和扩散,小分子物质的下移速度小于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象为分子筛效应。
固体脂质纳米粒混悬液中的游离药物可以渗透到凝胶孔穴中而晚些被洗脱出来,固体脂质纳米粒由于粒径较大,不易或不能进入凝胶内部,因此优先被洗脱出柱。
采用凝胶柱层析法分离BH-SLN 与游离BH，RP-HPLC 法测定包封率与载药量。
1.1 BH-SLN 与游离BH 的分离纳米粒与游离药物的分离以凝胶层析柱为分离介质，采用梯度洗脱技术进行分离。
1.1.1 分离条件层析柱: Sephadex-G50 葡聚糖凝胶柱(1cm×25cm)；上样量0.5ml；梯度洗脱条件：pH7.4PBS溶液洗脱，洗脱速度为1ml·min-1。
1.1.2 分离方法(1) Sephadex-G50 葡聚糖凝胶预处理称取4g葡聚糖凝胶G-50于烧杯中，加过量蒸馏水于沸水浴中溶胀2小时。
倾泻烧杯除去上层漂浮的细碎凝胶，重复3-4次。
操作中避免剧烈搅拌，防止破坏其交联结构。
(2) 层析柱制备a. 安装与检查：检查出口装置中尼龙绸完好干净。
安装层析柱，让其垂直固定于滴定台架上。
对准出口处，放一只250ml烧杯。
向层析柱内灌洗脱剂PBS，打开出口螺旋夹，层析柱无渗漏，出口乳胶管通畅。
b. 排气泡：保持柱内一定的水位，排气完毕，保留柱内1-2cm高水位，关紧螺旋夹。
脂质体包封率的测定步骤
脂质体包封率的测定步骤
1.制备脂质体：将所需的磷脂和胆固醇按照一定比例混合，并加入适量的表面活性剂，通过乳化和超声处理制备脂质体。
2. 确定脂质体的粒径：使用动态光散射仪或扫描电子显微镜等仪器测定脂质体的粒径，从而确定脂质体的形态和大小。
3. 测定脂质体的包封率：将制备好的脂质体与某一种水溶性物质（如荧光染料）混合，使其自发地进入脂质体内部。
然后使用离心等方法将未进入脂质体内部的物质分离出来，最后测定脂质体内物质的含量与总添加量的比值，即为脂质体的包封率。
4. 数据分析：对测定得到的包封率数据进行统计分析，计算平均值和标准差等指标，评价脂质体的包封效果。
总的来说，脂质体包封率的测定步骤需要严格控制实验条件，确保测量结果的准确性和可靠性。
- 1 -。
葫芦素脂质体的制备及包封率测定
２ ２ 葫芦素脂质体的制备 ．
￡ 上 Ｌ。
继 续加乙醇至刻度 。溶液过 ０ ４ ｎ微孔滤膜 ， ．５ｔ ａ 过滤备用。
２ ４ ３ 线性范 围考察 ： 密称取干燥 至恒质量 的葫芦素 Ｂ ．． 精 对 照品 ６ ０ ａ， 于 ５ ，１ｎ 置 ｇ ０ｍＬ量瓶 中， 乙醇溶解并稀释成 用
表 １ Ｌ （ 正交设计的因素水平 ９ ３）
２ ４ 葫芦素脂质体高效液相色谱法测定 ．
２ ４ １ 液相色谱条件 ： ．． 色谱柱 ： ｐｒ ｌ ＳＣ８４ ６ ０ Ｈｙｅｓ ＯＤ ｌ ． ×２ ０ ｉ （ ｍｍ， 粒径 ５ｍ ， 大连依利 特科 学仪器 有 限公 司 ） 流动相 ： ；
维普资讯
山西医药杂志 ２ ０ 年 ８月第 ３ 卷第 ８ ０８ ７ 期
Ｓ ａｘ Ｍｅ ， ｕ ｕ ０ ８ Ｖ ｌ ７ Ｎ ． ｈ ｎ ｉ ｄ Ａ ｇ ｓ ２ ０ ， ｏ ３ ， ｏ８ Ｊ ｔ
・
７ ２１ ・
法、 浸渍法 、 加热 回流 法等进行 了 比较 ， 果表 明超 声提 取 结 法效果较好。因胆红 素不稳定 ， 本实验需避光操作 。
（ 稿 日期 ：０ ８０ —７ 收 ２ ０ —４０ ）
作者 简介 ： 文为 ， ，９８ ８月生 ， 女 １６ 年 副主任 药师， 武汉大 学
人 民 医 院 ，３ ０ ０ ４０６
葫芦素脂质体的制备及包封率测定
中 国 医科 大 学 附属 盛 京 医 院 （ １０ ４ 金 １０ ０ ） 岩 杨 君
实验10脂质体的制备PPT课件
• ①盐酸小檗碱与空白脂质体混合液的制备： 精密量取3mg／m1盐酸小檗碱溶液0.1ml， 置小试管中，加入0.2ml空白脂质体，混 匀，即得。
• ②对照品溶液的制备：取①中制得的混合液 0.1ml置10ml量瓶中，加入95％乙醇6ml，振摇使 之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃去初 滤液，取续滤液4.0ml于10ml量瓶中，加PBS至刻 度，摇匀，即得。
• (3)磷脂、胆固醇形成的薄膜应尽量薄。
• (4)60-65℃水浴中搅拌水化10-20min时，一定 要充分保证所有脂质水化，不得存在脂质块。
• 2．盐酸小檗碱脂质体的制备（被动载药法）
• 【处方】
• 注射用豆磷脂
0.6 g
• 胆固醇
0.2 g
• 无水乙醇
2-20m1
• 盐酸小檗碱溶液(1mg／m1) 30ml
脂质体的制备及包封率的测定
药剂学教学实验中心
一、 实验目的
1、掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。 2、掌握用阳离子交换树脂测定脂质体包封
率的方法。
3、熟悉脂质体形成原理，作用特点。 4、了解“主动载药” 与“被动载药” 的
概念。
二、 实验原理
脂质体是由磷脂与(或不与)附加剂为骨 架膜材制成的，具有双分子层结构的封闭囊 状体。
• ③样品溶液的制备：取①中制得的混合液0.1m1 至分离柱顶部，待柱顶部的液体消失后，放置 5min，仔细加入PBS(注意不能将柱顶部离子交换 树脂冲散)，进行洗脱(约需2-3ml PBS)，同时收 集洗脱液于10m1量瓶中，加入95％乙醇6ml，振 摇使之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃 取初滤液，取续滤液为样品溶液。
• （3）另取PBS 30ml于小烧杯中，同置于6570℃水浴中，保温，待用。
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三、
（一）空白脂质体的制备
1．处方 注射用豆磷脂 胆固醇 无水乙醇 磷酸盐缓冲液
实验内容和操作
0.9g 0.3g 1~2ml 适量 制成 30ml 脂质体
2.操作 （1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）0.37g 与磷 酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)2.0g,加蒸馏水适量,溶解并稀释至 1000ml(pPH 约为 5.7)。
沈阳药科大学
实验十
脂质体的制备及包封率的测定
药剂学专论实验
实验十
脂质体的制备及包封率的测定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ一、 实验目的
1．掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。 2．掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。 3．熟悉脂质体形成原理，作用特点。 4．了解“主动载药” 与“被动载药” 的概念。
二、 实验指导
脂质体是由磷脂与（或不）与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封 闭囊状体。常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团，将适量 的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏 水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体。用于制备脂质体的磷脂有天然磷 脂，如豆磷脂、卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆 碱等。常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得 稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。其他附 加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而改变 脂质体的包封率、体内外其他参数。 脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径为 20~50nm，经超声波处理的脂 质体，绝大部分为小单室脂质体；多室（层）脂质体，粒径约为 400~3500nm，显微 镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结构；大单室脂质体，粒径约为 200~1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类。 脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。 （1）薄膜分散法：这 是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。 此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。 （2）注入法：有乙醚注入 法和乙醇注入法等。 “乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中，在搅拌下慢慢滴 于 55~65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌 1~2h，即可形成脂质 体。 （3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定 比例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适 合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。 （4） 冷冻干燥法：适于在水中不稳定药物脂质体的制备。 （5）熔融法：采用此法制备的
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脂质体的制备及包封率的测定
药剂学专论实验
（三）主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体
1.柠檬酸缓冲液： 称取柠檬酸 10.5g 和柠檬酸钠 7g 置于 1000ml 量瓶中， 加水溶解并稀释至 1000ml， 混匀，即得。 2.NaHCO3 溶液： 称取 NaHCO3 50g，置于 1000ml 量瓶中，加水溶解并稀释至 1000ml，混匀，即得。 3.空白脂质体制备： 称取磷脂 0.9g 和胆固醇 0.3g，置于 50ml 或 100ml 烧杯中，加 2ml 无水乙醇， 于 65～70℃水浴中溶解并挥散乙醇，于烧杯上成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液 30ml，65～70℃水浴中搅拌水化 10 分钟，随后将烧杯取出，置于电磁搅拌器上，在 室温下搅拌 30～60 分钟， 充分水化， 补加蒸馏水至 30ml， 所得脂质体溶液通过 0.8μm 微孔滤膜两遍，进行整粒。 4.主动载药： 准确量取空白脂质体 2ml、药液(3mg/ml) 1ml、NaHCO3 溶液 0.5ml，在振摇下依 次加于 10ml 西林瓶中，混匀，70℃水浴中保温 20 分钟，随后立即用冷水降温，即 得。 5.操作注意： (1) "主动载药" 过程中，加药顺序一定不能颠倒，加三种液体时，随加随摇，确 保混合均匀，保证体系中各部位的梯度一致。 (2) 水浴保温时，也应注意随时轻摇，只需保证体系均匀即可，无需剧烈摇。 (3) 用冷水冷却过程中，也应轻摇。
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脂质体的制备及包封率的测定
药剂学专论实验
五、
思考题
1．以脂质体作为药物载体的机理和特点。讨论影响脂质体形成的因素。 2．如何提高脂质体对药物的包封率？ 3． 包封率测定方法如何选择？本文所用的方法与"分子筛法"、 "超速离心法"相比， 有何优缺点？ 4．设计一个有关脂质体的实验方案如何？本实验方案还有哪些方面有待改进？
柱分离度 1 A样 A 对 2 5
式中 A 样-样品溶液的吸收度，A 对-对照品溶液的吸收度，2.5-对照品溶液的稀 释倍数。 3. 包封率的测定 精密量取盐酸小檗碱脂质体 0.1ml 两份，一份置 10ml 量瓶中，按柱分离度考察 项下（2）进行操作，另一份置于分离柱顶部，按"柱分离度考察"项下（3）进行操 作，所得溶液于 345nm 波长处测定吸收度，按下式计算包封率。
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药剂学专论实验
（2） 称取处方量磷脂、 胆固醇于 50ml 小烧杯中， 加无水乙醇 1～2ml， 置于 65～70℃ 水浴中，搅拌使溶解，旋转该小烧杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜，用吸耳球轻吹 风，将乙醇挥去。 （3）另取磷酸盐缓冲液 30ml 于小烧杯中，同置于 65～70℃水浴中，保温，待用。 （4） 取预热的磷酸盐缓冲液 30ml， 加至含有磷脂和胆固醇脂质膜的小烧杯中， 65～ 70℃水浴中搅拌水化 10min。随后将小烧杯置于磁力搅拌器上，室温，搅拌 30～ 60min，如果溶液体积减少，可补加水至 30ml，混匀，即得。 （5）取样，在油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的 脂质体的粒径；随后将所得脂质体溶液通过 0.8μm 微孔滤膜两遍，进行整粒，再于 油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径。 3.操作注意 （1）在整个实验过程中禁止用火。 （2）磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清，不能在水浴中放置过长时间。 （3）磷脂、胆固醇形成的薄膜应尽量薄。 (4) 60～65℃水浴中搅拌水化 10min 时，一定要充分保证所有脂质水化，不得存在 脂质块。
（二）被动载药法制备盐酸小檗碱脂质体
1. 处方 注射用豆磷脂 胆固醇 无水乙醇 盐酸小檗碱溶液(1mg/ml) 0.6g 0.2g 1～2ml 30ml 制成 30ml 脂质体 2. 操作 （1） 盐酸小檗碱溶液的配制：称取适量的盐酸小檗碱溶液，用磷酸盐缓冲液配成 1mg/ml 和 3mg/ml 的两种浓度的溶液。 （2） 盐酸小檗碱脂质体的制备 按处方量称取豆磷脂、胆固醇置 50ml 的小烧杯中，加无水乙醇 1～2ml，余下操 作除将磷酸盐缓冲液换成盐酸小檗碱溶液外，同"空白脂质体制备" ，即为"被动载 药" 法制备的小檗碱脂质体。 3．操作注意：同前。
(四)盐酸小檗碱脂质体包封率的测定
1. 阳离子交换树脂分离柱的制备： 称取已处理好的阳离子交换树脂适量，装于底部已垫有少量玻璃棉的 5ml 注射器 筒中，加入 PBS 水化阳离子交换树脂，自然滴尽 PBS，即得。 2. 柱分离度的考察： （1） 盐酸小檗碱与空白脂质体混合液的制备：精密量取 3mg/ml 盐酸小檗碱溶液 0.1ml,置小试管中，加入 0.2ml 空白脂质体，混匀，即得。 （2） 对照品溶液的制备：取（1）中制得的混合液 0.1ml 置 10ml 量瓶中，加入 95%乙醇 6ml,振摇使之溶解，再加 PBS 至刻度，摇匀，过滤 ，弃去初滤液，取续滤 液 4ml 于 10ml 量瓶中，加 PBS 至刻度，摇匀，得对照品溶液。
包封率 % AL 100 % AT
式中 AL-通过分离柱后收集脂质体中盐酸小檗碱的吸收度， AT-盐酸小檗碱脂质体 中总的药物吸收度。
四、
实验结果与结论
1. 绘制显微镜下脂质体的形态图，从形态上看，"脂质体"、"乳剂"及"微囊"有何 差别。 2. 记录显微镜下可测定的脂质体的粒径。 最大粒径（μm） 最多粒径（μm） 3. 计算柱分离度与包封率。 4. 以包封率为指标，对"主动载药" 与"被动载药" 法制备的盐酸小檗碱脂质体评 价方法的优劣。
（邓意辉）
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脂质体的制备及包封率的测定
药剂学专论实验
多相脂质体，其物理稳定性好，可加热灭菌。 在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“主动载药” 与“被 动载药”两大类 。所谓“主动载药” ，即通过内外水相的不同离子或化合物梯度进 行载药，主要有 K+-Na+梯度和 H+梯度(即 pH 梯度)等。传统上，人们采用最多的方 法是“被动载药”法。所谓“被动载药” ，即首先将药物溶于水相或有机相(脂溶 性药物) 中，然后按所选择的脂质体制备方法制备含药脂质体，其共同特点是：在 装载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本一致，决定其包封率 的因素为药物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数目 及药脂比(药物与磷脂膜材比)等。对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物， “被动 载药”法较为适用。而对于两亲性药物，其油水分配系数受介质的 pH 值和离子强 度的影响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化。 评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。其中脂质体的包封率是 衡量脂质体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离 心法、超滤法等。本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。 “阳离子交换树脂法”是 利用离子交换作用，将荷正电的未包进脂质体中的药物（即游离药物） ，如本实验中 的游离的小檗碱，被阳离子交换树脂吸附除去。而包封于脂质体中的药物（如小檗 碱） ，由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交换树脂吸附，从而达到分离目的，用以 测定包封率。