BD流式细胞仪原理与典型故障分析

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流式细胞仪的构造工作原理及数据分析

04
流式细胞仪的应用
在免疫学研究中的应用
免疫细胞分型
流式细胞仪可以对免疫细胞进行分型，了解不同类型免疫细胞的分布和比例，有助于研究免疫系统的功能和疾病发生机制。
免疫细胞功能分析
通过流式细胞仪可以检测免疫细胞的活性和功能状态，例如检测T细胞和B细胞的增殖、细胞因子的分泌等，有助于研究免疫细胞的应答机制。
光电转换和信号处理原理
光电转换
光电倍增管将荧光信号转换为电信号，以便进一步处理和分析。
信号处理
信号处理系统对电信号进行放大、滤波和数字化处理，以便在计算机上进行分析和显示。
03
流式细胞仪的数据分析
数据获取和预处理
数据获取
流式细胞仪通过激光照射细胞，产生散射光和荧光信号，这些信号被光电倍增管接收并转换为电信号，再通过模数转换器转换为数字信号。
在肿瘤学研究中的应用
肿瘤细胞分型与鉴别
流式细胞仪可以对肿瘤细胞进行分型和鉴别，有助于肿瘤的诊断和分类。
肿瘤细胞耐药性分析
通过流式细胞仪可以检测肿瘤细胞对药物的敏感性和耐药性，有助于制定个性化的治疗方案。
在血液学研究中的应用
造血干细胞研究
流式细胞仪可以对造血干细胞进行分离和鉴定，有助于研究造血干细胞的发育和分化机制。Βιβλιοθήκη VS白血病分型与鉴别
流式细胞仪可以对白血病细胞进行分型和鉴别，有助于白血病的诊断和治疗。
05
流式细胞仪的优缺点及展望
流式细胞仪的优点
高灵敏度与特异性
流式细胞仪能够检测单个细胞，具有高灵敏度和特异性，可对细胞进行精确的定量和定性分析。
快速检测
流式细胞仪采用液流式快速检测，可以在短时间内处理大量样本，适合高通量检测。

BD流式细胞仪全面介绍

Detector Parameter
FL1 FL2 FL3 FL4
Filter
530/30 585/42 670LP 661/16
FCM测量数据的显示与分析
几个概念： —%Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中
阳性细胞的数量。 —脉冲宽度（pulse width）表示细胞的粘连情
况 —脉冲面积（pulse area）主要用于DNA的含
流式细胞仪可检测到的细胞参数
非荧光信号
颗粒度
细胞大小
= 前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积 = 侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相
对复杂性
前向角散射光 ——FSC
Laser
FALS Sensor
侧向角散射光——SSC
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
定量染色荧光信号大小被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
参与信号处理的光学元件
—光电倍增管（PMT），用来检测从细胞发出的不同颜色的荧光信号
—双色反光镜，通过反射一定范围的光，透过其余光来实现分离作用
—滤光片，能透过一定波长的光，但是没有反射功能，放着角度是与光束成90度。
—散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异
- 通常使用“散点图”来看散射光信号 - 散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的数据
荧光信号
— 荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。 – 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） – 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱）
滤光片
Longpass

FACSCount流式细胞仪常见故障及排除共4页word资料

FACSCount流式细胞仪常见故障及排除流式细胞术自70年代中期就成为研究细胞生物学的重要技术，至今己被广泛应用于肿瘤学、免疫学、血液学、药物学等领域[1]。

FACSCount 系统是美国BD公司专门为辅助性T淋巴细胞（CD4细胞）监测而设计的一台经济普及型流式细胞仪，用来计数未裂解全血中的CD4，CD8和CD3T淋巴细胞绝对数值，与传统的流式细胞仪相比，具有完善的CD4、CD8、CD3绝对计数系统；最简化的样本处理过程，全血标本，不需要额外的裂解和洗涤步骤；完善的软件功能，实现样本采集、结果分析和打印的全程自动化；严格完整的质控和对照系统，具有SFDA认证等特点，在CD4+T 细胞监测领域已得到广泛应用和开展。

但应用FACSCount流式细胞仪有一个最大的问题，一些标本在FACSCount系统检测不出结果，最终显示为XXXX，这是我们在实际工作中经常遇到和头疼的地方。

1 FACSCount流式细胞仪常见故障原因分析1.1 环境因素FACSCount流式细胞仪对环境要求非常高，最适宜环境为温度20-25℃，湿度68-77%RH。

在南方，湿度过大会导致仪器软盘磁性丧失，仪器不能进入系统正常运转，实验室内应配置冷暖空调和除湿机。

在北方，湿度不够会使过滤泵干燥或上样针结晶，实验室内应配置冷暖空调和加湿器。

仪器安装应接单独可靠地线，接地电阻小于1欧姆，电阻过大会导致流式细胞仪的激光器损坏，同时要可持续电源、稳压器，防止突然断电导致数据丢失、仪器损坏。

1.2 样本因素1.2.1 标本数值超出系统检测可检测范围1.2.2 严重溶血、凝血或坏死，因为死细胞增强标本对荧光染料的非特异性染色，这使背景荧光增多，干扰真正的荧光信号；1.2.3 样品内存在干扰因素，黄疸指数过高、吸毒人员的血样、抗凝剂运用不对等；1.3 操作因素1.3.1 进样时，样品液面没有因为上样而变少，屏幕显示数值缓慢降为0，最终出现XXXX的结果。

流式细胞仪常见故障维修处理方法

流式细胞仪常见故障维修处理方法
流式细胞仪常见故障维修处理方法包括以下几点：
1. 仪器无法打开或无法正常运行：首先检查电源线是否插紧，确保电源供电正常。

同时确认电源开关是否打开。

如果仪器仍无法正常运行，可尝试重新安装软件或重启系统。

2. 数据无法读取或显示错误：检查数据线是否插紧，并确保与计算机的连接稳定。

同时检查仪器软件是否最新版本，可尝试重新安装驱动程序或软件。

3. 样品无法通过流式细胞仪：首先检查样品是否准备好并合适。

确保样品的浓度适当，含有足够的细胞数量。

检查流式细胞仪的流速设置是否正确，可尝试调整流速。

同时检查光源是否正常工作和传感器是否干净，如有需要可以进行清洁或更换。

4. 检测结果与预期不符：首先检查实验条件是否正确设置，包括抗体浓度、荧光染料浓度、细胞浓度等。

确认仪器的设置是否正确，包括激光的波长和光滤波器的选择。

如果结果仍不符合预期，可尝试更换抗体或染料，并重新确定实验参数。

5. 仪器噪音或信号干扰：检查光源和光学系统是否干净，可以使用专业的清洁剂进行清洁。

确保仪器的温度和湿度控制正常，避免影响仪器的稳定运行。

如果仍有噪音或信号干扰，可以尝试更换光源或传感器。

6. 其他故障：如果以上处理方法仍无法解决问题，建议联系仪器制造商或专业维修人员进行维修或咨询。

流式细胞仪的构造工作原理及数据分析

流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
流式细胞仪的流动室和液流驱动系统
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
• (二)激光光源与光束形成系统
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
• 目前台式机FCM，大多采用氩离子气体激光器。激光(laser)是—种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为1μs左右，每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞需要足够的光照强度。
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
• (2)侧向角散射：侧向角散射是指与激光束正交90°方向的散射光信号，侧向散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信息。
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
2．荧光信号
激光的作用原理
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
• 前向角散射光（FSC, Forward Scatter）
细胞相对大小及其表面积
• 侧向角散射（SSC, Side Scatter）
•
细胞粒度及细胞内相对复杂性
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
• (1)前向角散射：前向角散射与被测细胞的大小有关，确切地说，它与细胞直径的平方值密切相关。通常在FCM 应用中，选取FSC作阈值，来排除样品中的各种碎片及鞘液中的小颗粒，以避免对被测细胞的干扰。
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
2024/2/1
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析

流式细胞仪工作原理

流式细胞仪工作原理流式细胞仪（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、高效的分析和排序。

流式细胞仪的工作原理是利用激光照射细胞，测量细胞在流动状态下的荧光和散射信号，从而获取细胞的多种特征信息。

本文将详细介绍流式细胞仪的工作原理，以及其在生物医学研究中的应用。

首先，流式细胞仪的工作原理基于细胞在流动状态下对激光的反射和荧光发射。

当细胞悬浮在流体中通过激光束时，细胞会散射激光光线并发出荧光信号。

流式细胞仪通过收集这些散射光和荧光光信号，并对其进行检测和分析，从而获得细胞的多种信息，如大小、形状、表面标记物、细胞器的含量等。

其次，流式细胞仪的核心部件包括激光系统、光学系统、流体系统和信号检测系统。

激光系统用于产生激光束，不同波长的激光可用于激发不同荧光染料；光学系统用于聚焦激光束和收集散射光和荧光光信号；流体系统用于将细胞悬浮液以单个细胞的方式输送到激光束中；信号检测系统则用于检测和记录细胞发射的光信号。

这些部件协同工作，使得流式细胞仪能够高效地对细胞进行分析和排序。

流式细胞仪在生物医学研究中有着广泛的应用。

首先，它可以用于表征和分析不同类型的细胞。

通过对细胞的大小、形状、表面标记物等特征进行分析，可以帮助科研人员更好地了解细胞的功能和特性。

其次，流式细胞仪还可以用于细胞的分选和分离。

科研人员可以根据细胞的特征，利用流式细胞仪将不同类型的细胞进行分选和分离，从而获得纯度较高的细胞群。

此外，流式细胞仪还可以用于检测和分析细胞内的蛋白质、核酸和其他生物分子，对于疾病诊断、药物筛选等方面有着重要的应用价值。

总之，流式细胞仪通过激光照射细胞，测量细胞在流动状态下的荧光和散射信号，从而获取细胞的多种特征信息。

它在生物医学研究中有着广泛的应用，可以帮助科研人员更好地了解细胞的特性，进行细胞的分选和分离，以及分析细胞内的生物分子。

随着技术的不断进步，流式细胞仪将在生物医学研究领域发挥越来越重要的作用。

BD(FACSCalibur)流式细胞仪常见故障分析及处理

BD（FACSCalibur）流式细胞仪常见故障分析及处理于双白安徽省宿州市立医院（安徽宿州 234000）【摘要】内容提要：为了保障检验科室工作，提高设备使用率，降低医院维护成本，对流式细胞仪常见故障的维修方向及方法进行简单介绍，保障设备的维修及时性。

【期刊名称】《中国医疗器械信息》【年(卷),期】2019(025)017【总页数】2【关键词】关键词：流式细胞仪 BDPAC check 蠕动泵样本运行随着医院的发展，医疗设备的维修在医院运行中作用越发明显。

对于设备的维修，首先医疗设备维修工程师要明白医疗设备的运行原理、工作流程和操作方法。

只有明确这些在实际维修工作中才能思路清晰，设备故障判断准确，从而起到提高工作效率，为医院节省成本的作用。

针对这一现象，本文就流式细胞仪（Flow Cytonletry，FCM）进行简单原理介绍和故障分析。

1.流式细胞仪的概念及发展趋势流式细胞仪是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。

概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。

主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。

随着科技的发展，临床流式细胞术发展趋势可归纳为：①流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、高分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪；②对流式细胞术检测荧光参数，从采用荧光单色、双色分析发展为多色分析，目前最多可同时检测15种荧光信号；③从检测参数的相对定量发展为绝对定量；④从检测参数的手动人工分析发展为计算机软件的自动分析；⑤所采用的荧光试剂，从非配套试剂发展为配套的试剂盒试剂。

而这一切，就要求流式细胞仪使用者和科研人员一定要不断地有意识地学习上述各门学科知识，只有这样才能更好地将流式细胞术应用到生物医学的临床实践和基础科学研究工作中去。

流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法

流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法流式细胞仪是一种用于细胞分析的实验室仪器，它能够对单个细胞进行快速而精确的定量和质量分析。

它主要通过将细胞悬浮液注入到仪器中，利用激光器照射细胞并检测经过细胞的光线散射和荧光信号，从而获取大量有关细胞形态、大小、复杂度、表面标记以及内部分子的信息。

它可同时测量多个参数，并具备高通量性能，能够快速分析数以万计的细胞，并提供详细的统计学数据。

它广泛应用于免疫学、细胞生物学、药理学、肿瘤学等领域的研究和实验中。

然而，在分析流式细胞仪得到的荧光结果时，常常会遇到一些问题，如信号强度弱、背景高、细胞群分布异常等。

本文将介绍常见问题，并提供相应的解决方法。

一、信号强度弱1. 信号补偿不正确：检查流式细胞仪上的单色阳性对照是否设置正确，并确保门控和补偿设置正确。

2. 用于检测的抗体不足：增加抗体的量或浓度。

二、荧光强度高1. 抗体浓度过高：减少每个样本中添加的抗体量。

2. 过量抗体被捕获：洗涤步骤要充分，并在洗涤缓冲液中加入吐温或Triton，以保持细胞的透化作用。

3. 封闭不足：在抗体混合液中加入1%-3%的封闭剂，并增加封闭步骤。

三、背景高/阳性细胞百分比高1. 增益设置过高/补偿过低：使用阳性对照正确设置流式细胞仪，并使用补偿减少小颗粒背景信号和降低增益。

2. 抗体过量：降低抗体的浓度，并在洗涤缓冲液中加入去污剂，确保洗去过量的抗体。

四、在应该只有一个细胞群的情况下观察到两个或多个细胞群1. 表达靶蛋白的细胞群不止一个：检查样本中包含的细胞类型预期的蛋白表达水平，并确保细胞充分分离。

2. 出现细胞双峰：细胞双峰显示为第二大细胞群，其荧光强度大约是单细胞荧光强度的两倍。

在染色前用移液枪将细胞轻柔混匀，并在细胞仪中运行之前再次混匀。

五、侧向散射背景偏高（来自小颗粒）1. 细胞裂解：确保样本中的细胞没有裂解和破碎，样本应新鲜并正确制备，避免高速离心或激烈涡旋的操作。

bd流式细胞仪原理

bd流式细胞仪原理
BD流式细胞仪是一种常用的细胞分析仪器，原理主要包括荧
光信号的激发、细胞悬浮液的传递和荧光信号的检测三个部分。

1. 荧光信号的激发：通过激光器（通常为氩离子激光器）产生高能的激光束，通过透镜系统将激光束汇聚到待测样品（细胞）上。

激光束与细胞接触后的发生相互作用，激发细胞内所标记的荧光染料或表达的荧光蛋白，使其发出荧光信号。

2. 细胞悬浮液的传递：细胞悬浮液通过压力或重力传递到流动池中，并按单个细胞顺序通过激光束的焦点区域。

为了使细胞单独通过，可通过流速控制或产生涡流效应避免细胞之间的相互干扰。

3. 荧光信号的检测：细胞通过激光束的焦点时，荧光信号被收集和分析。

通常通过使用多个荧光滤光片或光栅分光器将发射光分成不同的波长范围，然后由光电倍增管或光电二极管（PMT或APD）接收并将荧光信号转化为电信号。

电信号经
放大和转换后，可以由计算机进行数字化处理和分析。

综上所述，BD流式细胞仪通过激发荧光信号、传递细胞悬浮
液和检测荧光信号的方式，实现对细胞的多参数分析，如细胞数量、大小、表面标记物的表达水平等。

该原理在免疫学、细胞生物学等领域具有广泛的应用。

BD流式细胞仪全面介绍

10 67 10 .0 8 81 6.86 46 8.89 52 91 49 .9 8 19 .5 7 4.41 39 75 37 .5 5 41 8.80 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
—单参数直方图每一个细胞单参数的测量数据可整理成分布统计，以分布直方图 (distribution histogram)来显示。
Detector Parameter
FL1 FL2 FL3 FL4
Filter
530/30 585/42 670LP 661/16
FCM测量数据的显示与分析
几个概念： —%Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中
阳性细胞的数量。 —脉冲宽度（pulse width）表示细胞的粘连情
况 —脉冲面积（pulse area）主要用于DNA的含
流式细胞仪的工作原理
待测细胞以单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色，放入样品管，吸入流动室。
流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱。
流式细胞仪的工作原理
液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。
定量染色荧光信号大小被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
参与信号处理的光学元件
—光电倍增管（PMT），用来检测从细胞发出的不同颜色的荧光信号
—双色反光镜，通过反射一定范围的光，透过其余光来实现分离作用
—滤光片，能透过一定波长的光，但是没有反射功能，放着角度是与光束成90度。
流式细胞仪的遗传学应用
细胞DNA, RNA 含量的测定染色体倍体分析染色体分离基因表达产物的生物活性研究基因转染表达的生物效应基因表达调控研究细胞内基因定位酵母转基因株的筛选报告基因的定性定量检测植物遗传学研究 ••••••

BD流式细胞仪工作原理

BD流式细胞仪工作原理流式细胞仪的工作原理是：将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。

在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。

流式细胞仪通常以激光作为发光源。

经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。

这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。

光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。

计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。

单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。

一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。

对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。

在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。

将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

对分选出的细胞可以进行培养或其它处理，做更深的研究。

美国BD C6型流式细胞仪首先C6流式细胞仪能避免操作新手的一个容易犯的错误;--;调整电压，同步化不同的细胞。

BD流式细胞仪脱机数据处理系统的建立(全文)

BD流式细胞仪脱机数据处理系统的建立(全文)1BD流式细胞仪系统介绍和应用问题分析流式细胞术(FlowCytometry,FCM)是七十年展起来的高级科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体。

它可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等；可对群体细胞在单细胞水平上进行分析,在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析。

流式细胞仪主要由五部分构成：①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信号检测与存储、显示与分析系统⑤细胞分选系统其中第四部分是数据处理系统的核心，信号检测与存储是指在流式细胞仪采集获得的信息，以Listmode(列表排队)方式存入计算机硬盘或其他存储介质中；信号显示与分析是指数据采用一维直方图、二维点阵图、等高线图和密度图显示和分析。

我中心自2003年购入美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪，目前日检测样品数近100管，但因该系统不能同时进行信号检测和分析，致使FACSCalibur流式细胞仪的使用率无法提高，检测者不能及时分析数据、获得结果，无法适应日益增长的应用需求。

因此，我们根据实际需要，建立了FACSCalibur流式细胞仪脱机数据处理系统。

2脱机数据处理系统的构想和实施2.1脱机数据处理系统的构想脱机处理是指在不受FACSCalibur流式细胞仪主机控制的外部设备上独立进行数据处理，或与实时控制系统、主机并行的数据处理。

脱机数据处理系统大大提高了现有系统的使用率和数据处理能力,实现了数据检测和数据分析的同时进行。

2.2脱机数据处理系统的构成增加一台苹果计算机来承担系统的信号显示与分析过程的任务；通过HUB和线建立与原有苹果计算机的互联；在苹果计算机上设置数据共享，以实时获得信号检测与存储过程取得的数据。

2.3脱机数据处理系统的实施2.3.1FACSCalibur流式细胞仪数据处理系统的原有配置及技术规格FACSCalibur流式细胞仪数据处理系统（FACStation）基本配置是苹果(Apple)公司的PowerPCG4（MacOSROM9.6.1,Built-inMemory513MB,VirtualMemory513MBusedon FACStation,LargestunusedBlock451.1MB）；17英寸LCD，键盘，鼠标，加密锁；操作系统为MacOS9.2.2；通过一块PCI数据接口卡与FACSCalibur主机连接。

流式细胞仪常见故障及原因

流式细胞仪常见故障及原因流式细胞仪是一种广泛应用于生命科学研究的仪器，它可以对细胞进行精确的分析和分类。

然而，使用流式细胞仪时常常会遇到一些故障，下面介绍一些常见的故障及其可能的原因。

首先，一个常见的故障是流式细胞仪无法启动。

可能的原因包括电源故障、连接错误或仪器未正确开启。

需要检查电源线是否插紧，确认电源是否正常工作并检查仪器连接是否正常。

其次，流式细胞仪的样本流速异常也是常见的故障。

如果样本的流速太慢或太快，可能是由于阀门或泵的故障或者由于样品管路堵塞等原因造成的。

需要检查阀门或泵是否工作正常，并检查管路是否有堵塞或泄漏的情况。

另外，流式细胞仪在分析数据时可能会出现异常的数据分布。

这可能是由于待测样品准备不当、光源问题或仪器校准不准确等原因引起的。

需要检查样品是否被正确处理，确保光源的质量和稳定性，并对仪器进行校准以确保数据的准确性。

此外，流式细胞仪的激发光源可能会出现亮度不足或不稳定的问题。

这可能是由于光源老化、灯丝或激光器故障或者光通量调节问题引起的。

需要定期检查光源的状态，并及时更换老化或故障的部件，确保光源的正常运作。

最后，流式细胞仪在使用过程中可能出现数据传输错误或系统崩溃的问题。

这可能是由于计算机软件故障、数据线连接问题或者计算机系统不稳定等原因引起的。

需要检查计算机和仪器之间的连接，并确保使用稳定的计算机系统和软件。

总结起来，流式细胞仪常见故障及其原因包括仪器无法启动、样本流速异常、数据异常、光源问题以及数据传输错误等。

对于这些故障，需要逐一排查可能的原因，并采取相应的措施来解决问题，以确保流式细胞仪的正常运转和数据的可靠性。

BD公司流式细胞仪介绍

BD公司流式细胞仪介绍---FACSCalibur基本型FACSCalibur分析功能强大，配置灵活，极宽的试剂选择范围、便捷的计算机和软件系统，绝对配合今天高效多能的实验室需要。

FACSCalibur性能卓越，不仅通过其用户友好的整体设计帮助临床医生快速实现常规免疫表型，CD4T细胞计数、DNA、网织红细胞、血小板等临床分析，FACSCalibur更以其完美的三色分析功能成为遗传、肿瘤、血液、免疫功能等诸多研究不可或缺的重要工具。

（一）FACSCalibur(基本型)仪器主要特点∙完美的三色分析系统可全自动实现CD4T细胞亚群的百分比和绝对计数的检测,满足HIV筛查和治疗监测的全程需要。

∙自动化程度高FACSCalibur以用户为中心的系统设计，从自动化样本处理、自动上样，到按钮式液流控制、自动化软件获取和分析，每个环节操作都保证简便快捷, 并提供准确客观的实验结果，重复性极好。

∙分析速度快FACSCalibur荧光检测全部采用大型流式细胞仪国际通用的光电倍增管以保证最快的分析速度10000个细胞/秒。

FACSCalibur是目前世界上分析速度最快的台式机之一。

∙DNA分析的解决之道DDM （Doublet Discrimination Module）双粘体辨别模式通过专利技术检测分析区别实体组织标本中的粘连细胞群体，最大程度的减少假阳性，是实体组织标本DNA分析不可缺少的工具之一。

∙唯一的双参数阈值设定最大程度减少无关噪音，增加获取分析速度，从而使含量极微的细胞检测成为可能。

∙开机无需等待开机后即可检测样本。

机器无噪音。

∙设计灵活，提供多种配置供用户选择第二根激光、分选及其浓缩系统、自动进样系统等都可以由用户根据实际需要和资金情况自由选配，进行功能扩展升级。

（二）配套设施1、FACStation数据处理系统采用最先进的Macintoshi苹果计算机系统，用户友好MacOS界面设计，易学易操作；与PC兼容性好，数据可在PC机上分析；网络功能强大，可与Internet 和Intranet连接；不易感染病毒超强图形处理功能，可进行多维多色分析，是处理流式数据最佳的选择。

流式细胞仪故障分析与维修5例

流式细胞仪故障分析与维修5例戚丹【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2017(038)008【总页数】2页(P163-164)【关键词】流式细胞仪;进样针;压力系统【作者】戚丹【作者单位】210029 南京,南京医科大学第一附属医院临床医学工程处【正文语种】中文【中图分类】R318.6;TH776流式细胞仪（flow cytometer，FCM）是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学技术及单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器，可以对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析和分选[1]。

我院有美国BD、Beckman 2个公司的多种型号流式细胞仪，如BD FACSCalibur、Beckman Navios-10等。

由于仪器数量较多，在使用过程中难免会遇到各种问题，本文现介绍5例我院流式细胞仪在使用过程中出现的故障及解决方法。

流式细胞仪基本工作原理为：将染色单细胞或生物颗粒的悬液压入流动池，鞘液在高压下从鞘液管喷出，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

以激光作为激发光源垂直照射在样品流上，荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。

散射光不依赖任何细胞样品的制备技术，称为细胞的物理参数或固有参数。

散射光信号包括：（1）前向角散射光信号（forward scatter，FSC），反映细胞体积的大小；（2）侧向角散射光信号（side scatter，SSC），反映细胞内颗粒的复杂情况。

荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号，代表所标记的被测细胞内部的颗粒信息[2]。

2.1 故障一2.1.1 故障现象美国Beckman公司生产的型号Navios-10流式细胞仪进样启动后计算机软件散点图无计数，前向散射（FS）和侧向散射（SS）均无信号，也未出现荧光信号。

图1为信号正常与无信号散点图比较。

流动细胞分析仪BD法

谢谢！
基本工作原理Biblioteka 本过程流式细胞仪的测量对象
（1）大小：悬浮在溶液中的相互离散颗粒大小范围：0.2uM-300uM
（2）对象类型细胞类型：①高等真核细胞； ②酵母； ③细菌； ④多细胞的聚集体，如胰岛等非生命颗粒：细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等
应用领域
疾病诊断环境监测生物学基础研究海洋微生物研究农业领域应用
（1）液流系统（2）光学系统（3）数据处理系统
（1）液流系统
液流系统示意图
（2）光学系统
光学系统示意图
（3）数据处理系统
待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏性和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。
环境微生物新技术
BD流动细胞分析仪
汇报人：学号：
目录
流式细胞仪的概念
工作原理
基本机构
应用领域
变流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM）是一种对处在液流中的细
胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技
术。流式细胞仪是指：使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。简言之，流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是

BD流式分选的原理和应用

细胞凋亡-Annexin Ⅴ/PI双标记法
FITC Annexin V/PI染色和流式细胞仪分析。Jurkat细胞（人T细胞白血病）用6µM的喜树碱或0.1% DMSO（阴性对照）4小时，引导凋亡。细胞根据Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒的染色指南，用FITC Annexin V和碘化丙啶（PI）染色。与DMSO对照组相比，喜树碱处理会增加细胞的早期凋亡（PI阴性， Annexin V阳性），即图中绿色部分。死细胞（PI阳性，红色部分）和活细胞（Annexin V和PI阴性，黑色部分）群体很容易辨别。图中的数据来自BD Accuri C6流式细胞的BD CFlow® Plus。
BD公司流式细胞仪
FACSJazz
FACSAriaII
Influx
FACSCantoII
LSRFortessa
Accuri C6
流式细胞仪特点及检测标本
• 特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析；
• 可检测的样本种类多样
– (1)外周血，骨髓，细针穿刺，洗脱液，实体组织，培养细胞
– (2)血清、血浆、培养上清、细胞裂解液
➢ Sub-G1峰的出现被认为是凋亡细胞的标志之一。
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肿瘤细胞凋亡检测
方法：Jurkat细胞分别用DMSO（对照；<2%）或HU-331（一种诱导细胞凋亡的大麻素； Cayman Chemical Company ）处理6小时。然后用Accuri Cell Cycle Phase Determination Kit (KR-300)固定细胞并染色。
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细胞凋亡-Annexin Ⅴ/PI双标记法
➢ 细胞凋亡时会发生一系列形态学改变。质膜内侧的磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine,PS）重新分布，由胞膜内侧翻转到胞膜外侧，可以通过膜联蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ）来检测。

FACSCount流式细胞仪常见故障及排除-最新文档

FACSCount流式细胞仪常见故障及排除流式细胞术自70 年代中期就成为研究细胞生物学的重要技术，至今己被广泛应用于肿瘤学、免疫学、血液学、药物学等领域[1] 。

FACSCount系统是美国BD公司专门为辅助性T 淋巴细胞（CD4细胞）监测而设计的一台经济普及型流式细胞仪，用来计数未裂解全血中的CD4，CD8和CD3T淋巴细胞绝对数值，与传统的流式细胞仪相比，具有完善的CD4、CD8、CD3绝对计数系统；最简化的样本处理过程，全血标本，不需要额外的裂解和洗涤步骤；完善的软件功能，实现样本采集、结果分析和打印的全程自动化；严格完整的质控和对照系统，具有SFDA认证等特点，在CD4+T 细胞监测领域已得到广泛应用和开展。

但应用FACSCount 流式细胞仪有一个最大的问题，一些标本在FACSCount系统检测不出结果，最终显示为XXXX，这是我们在实际工作中经常遇到和头疼的地方。

1FACSCount 流式细胞仪常见故障原因分析1.1环境因素FACSCount流式细胞仪对环境要求非常高，最适宜环境为温度20- 25℃，湿度68-77%RH。

在南方，湿度过大会导致仪器软盘磁性丧失，仪器不能进入系统正常运转，实验室内应配置冷暖空调和除湿机。

在北方，湿度不够会使过滤泵干燥或上样针结晶，实验室内应配置冷暖空调和加湿器。

仪器安装应接单独可靠地线，接地电阻小于 1 欧姆，电阻过大会导致流式细胞仪的激光器损坏，同时要可持续电源、稳压器，防止突然断电导致数据丢失、仪器损坏。

1.2样本因素1.2.1标本数值超出系统检测可检测范围1.2.2严重溶血、凝血或坏死，因为死细胞增强标本对荧光染料的非特异性染色，这使背景荧光增多，干扰真正的荧光信号；1.2.3样品内存在干扰因素，黄疸指数过高、吸毒人员的血样、抗凝剂运用不对等；1.3操作因素1.3.1进样时，样品液面没有因为上样而变少，屏幕显示数值缓慢降为0，最终出现XXXX的结果。