免疫组化技术简介及相关临床应用
免疫组化技术在生命科学中的应用
免疫组化技术在生命科学中的应用生命科学一直是人类探索和研究的重要领域之一。
随着科技的进步，生命科学在理论和实践方面都有了很大的发展。
其中，免疫组化技术是一种广泛应用于生命科学中的分析技术。
特别是对于细胞生物学、蛋白质学和癌症等领域的研究，免疫组化技术发挥了重要的作用。
一、免疫组化技术原理免疫组化技术是指利用抗体对物质进行检测、鉴定和定位的分析方法。
抗体是人或动物免疫系统对各种异物或自身物质所产生的一类特异性蛋白质分子。
通过免疫组化技术，我们可以通过利用抗体对物质进行特异性识别和结合来实现定量、定性和定位的目的。
免疫组化技术的基本原理是将待测物质在细胞或组织中的位置、分布和表达状态通过定量和定性的方法进行检测。
其主要步骤包括：标本预处理、抗体标记、抗原-抗体结合、染色和显微镜观察等。
二、免疫组化技术在细胞生物学领域的应用细胞生物学是一门关于细胞结构和功能的研究学科。
在细胞生物学领域中，免疫组化技术被广泛应用于细胞的定位、标记和检测，尤其是在免疫细胞学研究中具有重要的意义。
例如，在显微镜下观察胞器分布和相互作用时，研究人员可以使用荧光标记的抗体识别细胞中的蛋白质和其他分子。
同时，免疫组化技术还可以用于检测细胞中的细胞骨架蛋白、酶、膜受体等生物分子的运输和定位的变化。
除此之外，免疫组化技术还可以用于研究肿瘤细胞的形态特征和表达状态等方面。
通过对肿瘤细胞中的特定蛋白质标记，可以对肿瘤细胞进行分型、分级和预后评估等。
三、免疫组化技术在蛋白质组学领域的应用蛋白质组学领域是强调对蛋白质进行高通量、全面性分析的一门研究。
通过免疫组化技术，可以对蛋白质进行检测和分析，从而实现对蛋白质组的研究和分析。
例如，在蛋白质组研究中，最常用的是两维凝胶电泳与免疫印记技术。
两者结合，可以检测数百至数千个蛋白质，并且在蛋白质家族、修饰和表达水平等方面加深了我们的理解。
此外，免疫组化技术还可以用于广泛的蛋白质质谱相关试验，例如如蛋白质鉴定、结构预测和定量。
免疫组化技术
免疫组化技术免疫组化技术是现代生物学研究领域中一项重要的实验技术，它通过利用抗体与特定抗原的高亲和力结合特异性标记，可以准确地检测和定位分子在细胞和组织中的分布，并在这一基础上进行生物学功能的研究。
本文将对免疫组化技术的原理、应用以及发展趋势进行详细介绍。
一、免疫组化技术的原理免疫组化技术基于生物体对抗原与抗体的免疫反应，利用抗体与抗原的特异性结合来标记和检测感兴趣的分子。
免疫组化技术的关键步骤包括：抗原的固定、抗原的暴露、与抗原的特异性结合和信号检测等。
在免疫组化技术中，抗原通常需要进行固定，以保持其在组织中的形态和位置不变。
一般来说，抗原可通过形成固定化复合物或被共价结合到载玻片或膜上。
随后，我们需要将抗原从组织中溶出，以使其暴露于抗体。
这一步骤通常涉及脱水、脱脂和脱钙等处理。
暴露后的抗原可以与特异抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
为了标记抗原-抗体复合物，我们需要选择适当的检测系统。
目前常用的检测方法包括荧光染色、酶学染色和放射性标记等。
其中，荧光染色技术具有高灵敏度和分辨率，能够利用荧光显微镜直接观察标记物的分布。
二、免疫组化技术的应用免疫组化技术在许多研究领域中广泛应用。
在医学领域，它常用于研究肿瘤形成机制、诊断和预后判断。
通过免疫组化技术，我们可以检测和定位许多肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）和肿瘤相关抗原（CA）等，从而帮助医生进行早期诊断和治疗。
在神经科学领域，免疫组化技术被广泛用于研究神经元发育、突触形成和神经退行性疾病。
通过标记神经元特异性蛋白质，如神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经纤维酸性蛋白（NF）等，可以清晰地观察和研究神经元的结构和功能。
此外，免疫组化技术在细胞和分子生物学研究中也具有广泛的应用。
通过对细胞内蛋白质、DNA和RNA等分子的定位和检测，我们可以研究细胞的生物学功能和基因调控机制。
例如，通过检测特定蛋白质的表达和定位，可以研究调节细胞周期和细胞分化的信号通路。
免疫组化的原理及应用
免疫组化的原理及应用原理免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过特异性抗体与相应抗原的特异性结合，利用染色反应显示出有关蛋白质在组织或细胞中的位置与数量的技术。
简单来说，免疫组化是通过酶标法或荧光法等方法，利用特异性抗体标记目标蛋白质，从而在组织或细胞中检测和定位目标蛋白质的方法。
免疫组化的原理主要包括以下几个步骤：1.抗原修复：免疫组化一般需要在标本切片前对组织进行抗原修复处理，以恢复和增强抗原的免疫活性。
2.阻断非特异性结合：在免疫组化过程中，为了防止非特异性结合的出现，需要使用非特异性抗体或蛋白质进行阻断。
3.抗体结合：将特异性抗体与标本中的目标抗原进行结合，可采用直接法或间接法。
4.信号显示：对于直接法，特异性抗体上已标记有荧光染料或酶标标记，可直接显示信号；对于间接法，再添加与特异性抗体免疫结合的二抗，二抗上标记有荧光染料或酶标标记，用于显示信号。
5.结果观察与分析：利用显微镜观察标本中信号的形态、分布和强度，进行结果判读和分析。
应用免疫组化在生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域都有广泛的应用。
以下列举一些主要的应用：1.细胞定位：通过使用特异性抗体和荧光染料标记目标蛋白质，可以在细胞水平上观察和定位目标蛋白质的分布和表达情况。
2.组织检测：通过在组织切片上应用免疫组化技术，可以检测和定位特定蛋白质在组织中的表达情况，并用于研究组织的结构和功能。
3.癌症诊断：免疫组化在肿瘤诊断中有重要的应用价值。
通过检测肿瘤标志物的表达情况，可以帮助医生判断肿瘤类型、分级和预后，并指导相应的治疗方案。
4.药物研发：免疫组化可以用于评估新药对蛋白质表达的影响，了解新药的作用机制，以及筛选适合的治疗靶点。
5.神经科学研究：免疫组化在神经科学领域的研究中也有广泛的应用。
通过免疫组化技术，可以观察和定位神经元、神经递质和突触相关蛋白质，帮助研究神经系统的结构和功能。
总的来说，免疫组化技术广泛应用于生命科学研究和临床实践中，为我们研究细胞和组织的结构与功能、研究疾病机制、辅助临床诊断等提供了有力的工具和方法。
免疫组化技术在癌症诊断中的应用
免疫组化技术在癌症诊断中的应用随着医疗技术不断发展，癌症的诊断和治疗已经取得了长足的进步。
其中，免疫组化技术作为一种重要的诊断手段，已经在癌症的早期诊断、鉴别诊断以及疗效预测等方面发挥了极大的作用。
本文将从免疫组化技术的原理、应用以及优缺点等方面进行论述。
一、免疫组化技术的原理免疫组化技术是通过特异性抗体与相关抗原之间的反应来进行癌症细胞的检测。
具体来说，该技术首先要在癌细胞组织中检测出需要的抗原，随后采用抗体标记的显色剂来标记这些抗原。
标记后，抗原的位置就可以通过显微镜观察到，进而得到癌症细胞的信息。
这种技术能够检测出蛋白质、肽类和多肽类分子，因此非常适合用于癌症的诊断。
二、免疫组化技术的应用1. 早期癌症的检测在癌症发生初期，绝大部分癌症细胞都带有一些特定的抗原。
因此，免疫组化技术可以通过检测这些抗原的存在来实现早期癌症的检测。
通过对不同肿瘤的抗原进行研究，可以发现不同种类癌症的标志抗原。
这使得肿瘤的分子诊断成为现代肝癌、结直肠癌等癌症的早期诊断和随访的一种重要手段。
2. 癌症的鉴别诊断在肿瘤细胞组织中，相近的类型和不同类型的细胞之间，往往都存在着分化和表观上的差异。
这些差异可以通过免疫组化技术来检测。
通过检测不同肿瘤细胞中的特定抗原的表达情况，就可以判断不同类型癌症的诊断。
而且随着免疫组化技术的发展，可以同时检测多个蛋白分子，从而提高了诊断的准确性。
3. 疗效预测和分子治疗免疫组化技术不仅可以用于病理组织诊断，还可以用于癌症治疗的预后评估和治疗方案的制定。
通过检测细胞膜上的分子及一些肿瘤标志物（如HER2、EGFR、Ki-67)，可以为癌症药物的合理应用以及分子靶向治疗提供参考依据和指导，从而有效地提高治疗效果。
三、免疫组化技术的优缺点1. 优点①高度特异性：通过抗原特异性的抗体结合，保证检测的准确性。
②直观性强：通过特殊显色剂进行染色，标记目标细胞的位置，直观、易于观察。
③灵敏度高：能够对微量的分子进行检测，因此善于检测癌细胞组织中微弱的信号。
免疫组化技术的应用和发展趋势
免疫组化技术的应用和发展趋势随着科技不断发展，医疗领域也在不断更新换代。
其中，免疫组化技术已经成为现代医学领域中不可或缺的一部分。
利用免疫组化技术，医生们可以更加精确地诊断和治疗疾病，提高疗效和预后。
本文将讨论免疫组化技术的应用和发展趋势。
一、免疫组化技术的应用免疫组化技术是一种基于抗体特异性识别的生化分析方法，利用抗体与目标分子之间的特异性结合作用，检测和定位组织和细胞中的各种分子，如蛋白质、激素、细胞分子等。
在临床诊断和治疗、药物研发和基础医学研究等领域都有广泛的应用。
1. 临床诊断和治疗免疫组化技术可以用于临床诊断和治疗，如癌症、自身免疫性疾病、感染病和神经疾病等。
将不同的抗体标记于组织或细胞上，可以确定疾病的类型和程度，帮助医生选择最合适的治疗方案，提高治愈率和生存率。
2. 药物研发免疫组化技术在药物研发中也有重要应用。
药物研发过程中需要对药物的分子靶点进行深入的了解，免疫组化技术可以在组织和细胞水平上定量和监测药物靶点的表达情况，帮助研发人员确定药物的作用机制和生效条件。
3. 基础医学研究免疫组化技术在基础医学研究中也有广泛的应用，如细胞分化、细胞增殖、基因表达、分子传递等。
研究人员可以利用免疫组化技术确定细胞和分子间的相互作用，以此增进对基础医学的了解，并为新的治疗方法和药物研发提供理论支持。
二、免疫组化技术的发展趋势随着医学科技的不断发展，免疫组化技术也在不断更新和改进。
以下是免疫组化技术发展趋势的几个方向：1. 自动化免疫组化技术现在相对复杂，需要手动执行。
但随着自动化仪器的发展，免疫组化技术将可以更加便利和准确地执行。
自动化将使得医生们更加容易地进行免疫组化实验，并且减少了人为因素和误差，提高了实验结果的准确性和可重复性。
2. 数据共享目前，在临床应用和药物研发领域，免疫组化技术的应用产生了大量的数据。
但是，由于数据的分散和不同机构之间的难以协调，这些数据常常无法得到充分利用。
免疫组化的临床应用.docx
免疫组化的临床应用一、什么是免疫组化？免疫组化是一种通过特异性抗体与细胞或组织中的特定分子结合来检测蛋白质表达的技术。
它可以用于确定肿瘤类型、诊断某些感染性疾病、评估免疫系统功能等。
二、免疫组化的原理免疫组化的原理是利用抗体与抗原间的特异性结合来检测蛋白质表达。
首先，需要制备特异性抗体，然后将其标记上荧光素或酶等物质，使其能够被检测出来。
接着，将标记好的抗体与待检测样本中的蛋白质结合，形成抗原-抗体复合物。
最后，在显微镜下观察样本中是否有荧光素或酶反应产生，从而确定蛋白质是否存在。
三、免疫组化在肿瘤诊断中的应用1 .确定肿瘤类型在肿瘤诊断中，常常需要确定肿瘤类型以制定治疗方案。
通过对肿瘤标本进行免疫组化分析，可以检测出肿詹细胞表面或内部的特定蛋白质，从而确定肿瘤类型。
例如，对于淋巴瘤的诊断，常常需要检测CD20、CD3等标志性分子。
2 .判断预后免疫组化还可以用于判断肿瘤患者的预后。
例如，在乳腺癌中，HER2 阳性患者比HER2阳性患者更容易出现转移和复发。
因此,通过检测HER2的表达情况,可以预测患者的预后。
四、免疫组化在感染皎病诊断中的应用1 .检测细菌感染免疫组化可以用于检测细菌感染。
例如，在肺结核的诊断中，可以通过检测结核分枝杆菌特有的抗原来确定是否感染。
2 .检测病毒感染免疫组化还可以用于检测病毒感染。
例如，在乙型肝炎中，可以通过检测HBsAg和HBeAg来确定是否感染。
五、免疫组化在评估免疫系统功能中的应用1 .检测T细胞T细胞是免疫系统中的重要组成部分，参与体内的免疫反应。
通过检测CD4和CD8等标志性分子,可以评估T细胞的数量和功能状态。
2 .检测B细胞B细胞是免疫系统中产生抗体的主要细胞。
通过检测CDI9、CD20等标志性分子，可以评估B细胞的数量和功能状态。
六、免疫组化的优缺点1.优点(1)高度特异性：免疫组化可以针对特定蛋白质进行检测，具有高度特异性。
(2)高灵敏度：免疫组化可以检测非常小的蛋白质量级。
免疫组化技术在疾病诊断中的应用
免疫组化技术在疾病诊断中的应用随着生物医学领域的飞速发展，疾病的检测和治疗手段也在不断更新换代。
免疫组化技术就是其中之一，它应用了分子生物学、免疫学等学科的核心理论和技术，为疾病诊断提供了强有力的技术支撑。
但是，相对于其他技术来说，免疫组化技术的应用范围和定位可谓是口耳相传，今天，我们就来了解下它的应用。
一、免疫组化技术的原理免疫组化技术是利用抗体与抗原的特异性结合性质，针对被检测物在细胞或组织中的位置和数量进行定位与计量的方法。
免疫组化技术在诊断发育异常，鉴别组织类型，评估分子分型等方面起着重要作用。
通常包括以下三个步骤：1.抗原修复：对组织标本进行脱水、透明化、石蜡包埋、切片处理后，需要将变性的蛋白质抗原复原，使其在免疫反应中保持原有的构象和活性。
2.抗体标记：采用特定的抗体，针对需要检测的抗原进行特异性识别。
通常会利用荧光素、酶等物质与抗体进行标记。
3.染色反应：通过化学反应使标记后的抗体与抗原发生特异性反应，然后利用化学染色方法将反应产物显示出来。
由于该方法产生直接的显色反应，可以直接在显微镜下观测到抗原的位置、数目和类型。
二、1.肿瘤标志物检测肿瘤标志物是特定癌细胞产生的分子，可以通过类似免疫组化的方法进行检测。
凭借其高度特异性的优势，与肿瘤相关的标志物已被广泛运用于临床诊断中。
例如，抗体检测可以用于检测肺癌、鼻咽癌和乳腺癌等常见癌症，可作为确诊和治疗指南的依据。
2.医学遗传学检测用于检测胚胎性基因突变的技术已经应用于不孕不育和男性生殖系统疾病的研究中。
广泛利用的检测技术包括比色法、荧光抗体法和原位杂交法等。
该技术可在多种组织类型中用于检测精子数、精子质量和卵子质量等遗传学特征。
3.炎症诊断炎症标志物可以识别并跟踪炎性疾病的病理过程，如红斑性狼疮和类风湿关节炎。
适当的抗体检测可为长期的追踪和监测提供经济而可靠的方法。
4.神经学和心理学研究镜片染色和FISH技术的应用可以为神经学和心理学研究提供直接的可视化反馈，使分子分型分析更加容易。
免疫组化技术简介及相关临床应用
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淋巴结边缘区Ｂ细胞淋巴瘤 － － － －
结外边缘区Ｂ细胞淋巴瘤
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（黏膜相关淋巴组织淋巴瘤）
垂体腺瘤的免疫组化鉴别诊断
泌乳素细胞腺瘤
LTH GH ACTH PSH/LH FSH CgA
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NSE KER
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生长激素细胞腺瘤
－＋ －
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促皮质激素细胞腺瘤 － － ＋
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20世纪80年代该项技术在国外开始应用 于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即90 年代开始运用于疾病的病理诊断。
最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特别 是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石蜡 切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的应 用。
从开始发展至今，该项技术一直在基础医学和 临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性疾 病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了强 有力的手段。
原暴露有一定的影响，但可进行抗原修 复，是免疫组化中首选的组织标本制作 方法。
常用染色方法
免疫组织化学技术按照标记物的种类不 同可分为： 1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通 过荧光显微镜观察； 2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗 体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前 最常用； 3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋 白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等。
有如下基本特点：
1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合
所用抗体及标本类型
所用抗体类型
常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗 体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分 泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免 疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的 抗原直接免疫动物后，从动物血中所获 得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所 产生的抗体混合物。
免疫组化在临床诊断中的应用
免疫组化在临床诊断中的应用在临床病理诊断中，免疫组织化学（IHe）是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。
但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。
深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。
在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。
由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床治疗中的作用。
1.免疫组化技术观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂（酶、荧光素、同位素、金属离子等等）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。
IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本最常用、最基本的方法是石蜡切片。
石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存；石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
2.免疫组化技术在临床诊断中的作用目前免疫组化技术应用于临床主要有以下几个方面：2.1肿瘤良恶性的判断对于反应性增生还是肿瘤性增生，可用免疫球蛋白（Ig）的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。
在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白（bc1-2）,be1-2阴性；而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上肿瘤性滤泡细胞有bc1-2的高表达，bc1-2阳性。
免疫组化技术在医学中的应用
免疫组化技术在医学中的应用免疫组化技术是一种生物学技术，是利用抗体和其他细胞和分
子标识特定分子和细胞组织的一种技术。
它的应用范围非常广泛，包括医学、生物学、遗传学、病理学、免疫学等领域。
在医学中，免疫组化技术主要用于疾病诊断、治疗和预后判断
等方面。
它可以对细胞和组织进行免疫染色，得到大量信息，如
细胞类型、分化程度、增殖状态、代谢状态、分泌状态等。
并且
还能够在分子水平上进行分析，如检查基因突变、蛋白质表达等。
在疾病诊断方面，免疫组化技术可以帮助医生诊断各种疾病和
病理状态。
例如，肿瘤组织标本可以用免疫组化技术检查癌细胞
的类型、分化程度、蛋白质表达等，有助于病理诊断和治疗选型。
另外，免疫组化技术还可以检测某些肿瘤抗原，如PSA、CEA等，在肿瘤早期筛查和诊断中有一定的应用。
在治疗方面，免疫组化技术可以帮助医生选择合适的治疗方案。
例如，HER2阳性乳腺癌患者可以接受靶向治疗药物，而HER2阴
性患者则不适用该药物。
免疫组化技术可以检测HER2表达情况，从而指导治疗。
在预后判断方面，免疫组化技术可以评估疾病预后。
例如，某些肿瘤组织标本中，如果出现Ki-67阳性细胞数量较多，那么预后可能不太乐观，治疗要足够积极。
此外，对于乳腺癌患者，ER、PR受体阳性与否也是评估预后的一个指标。
总的来说，免疫组化技术在医学诊断和治疗方面具有重要的应用价值，可以为患者的治疗和预后提供有力的支持。
未来，随着技术的不断发展，免疫组化技术的应用会越来越广泛，成为医学研究和临床诊疗中不可或缺的一部分。
免疫组化在医学中的应用
免疫组化在医学中的应用免疫组化技术是一种重要的生物医学检测手段，也是现代医学研究和诊断中不可缺少的工具之一。
贯穿着整个医学领域，免疫组化已经广泛应用于肿瘤学、病理学、免疫学、医学生物化学、分子生物学、分子遗传学等多个领域。
本文就免疫组化在医学中的应用进行一些讨论。
一、免疫组化技术的基本原理免疫组化技术是一种基于免疫学原理的标记技术, 主要利用内生性和外源性抗体的亲和性和特异性相结合，通过染色方法来检测样本中感兴趣的蛋白分子或细胞标记。
利用常规的组织学或细胞学方法，采用特定的免疫抗体和检测试剂，通过可视化所特异结合的物质而进行定位，从而达到检测、定量和定位某些蛋白分子或其他生化分子的目的。
通过免疫组化技术，研究者可以检测出肿瘤标志物、病毒蛋白、暴露于抗原后细胞物质等等，有助于对一些疾病的了解和筛查，以及对疾病的诊断和治疗进行指导和支持。
二、免疫组化在肿瘤学中的应用免疫组化技术在肿瘤学中有着重要的应用。
在肿瘤病理组织实验室中，常用免疫组化检测肿瘤标志物，如 cytokeratin、CD68、E-cadherin、vimentin 等，以辅助肿瘤分类和分级、确定肿瘤原发部位和病程，在肿瘤治疗中也有很大的作用。
免疫组化技术还可以检测癌症中的分子标记物，为癌症诊断、分期、治疗和预后判断提供支持。
三、免疫组化在病理学中的应用病理组织学是诊断疾病的重要工具，在病理诊断中，免疫组化技术有助于鉴定病理组织中存在的各种蛋白质、生长因子等标记物，为疾病诊断和治疗提供帮助。
免疫组化检测也可用于证实是否存在所谓的免疫复合体沉淀，从而协助诊断自身免疫病和感染病。
四、免疫组化在免疫学中的应用在免疫学研究中，免疫组化技术扮演了至关重要的角色。
免疫组化技术可用于检测免疫相关蛋白和抗体，如抗原/抗体、CD3、CD8、CD20、FOXP3和CD68等，这些蛋白和抗体在了解免疫系统、生态演化、气味感知和抗体反应等方面扮演了重要的角色。
免疫组织化学及其在病理诊断中的应用
3. 改善组织的透过性 原因：当待检抗原是存在细胞内或有膜
被、而抗体是大分子的时候，抗体 就很难通过细胞的质膜顺利达到接 触抗原。
办法：用净化剂（即表面活性剂三硝基甲 苯）TritonX－100溶解于PBS中，液 体浸洗组织切片或涂片。
第二部分
免疫组化在临床中的应用
一、免疫组化临床应用的范围及意义
各1支；相应的吸嘴。 磨砂玻片； 空调1台； 恒温箱1台； pH计1台(PHS-25型)。
免疫组化室常用设备
全自动免疫组化染色机
二、免疫酶标技术
20世纪70年代建立 80年代为发展高峰 90年代在国、内外病理科广泛应用
1.免疫酶标技术原理：
将抗原和抗体反应与酶的催化反应相结合 而建立的一种免疫检测技术。
对肿瘤临床有意义的主要有： c-erbB：肿瘤恶性度高→阳性率↑ c-myc：核内瘤蛋白，高表达预示促进肿瘤生 长、发展→ 易出现浸润、转移 p53：通常检测的为突变型，高表达→ 预后差。
组织脱水、浸蜡、包埋等） 缓冲液及有关试剂的配制 抗体的稀释 内源性过氧化物酶的阻断 非特异性染色的消除 实验对照及结果的观察分析等。
基本过程（SP法）
1.切片脱蜡至水。 2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 3.水洗。 4.抗原修复。 5.PBS洗3次，1分钟/次。 6.加入血清孵育10分钟。 7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。 8.PBS洗3次，每次2分钟。 9.加入二抗，孵育20分钟。
1.基本原理
维生素H（biotin，生物素）缺乏症：给动 物喂养大量卵蛋白，会导致动物出现维生 素H缺乏症，即蛋白质伤害。
卵蛋白（avidin）与生物素有极高的亲和力， 且具有与其它示踪物质（荧光素、铁蛋白、 过氧化酶等）相结合的能力。
免疫组化技术在病理诊断中的应用
免疫组化技术在病理诊断中的应用1 免疫组化技术的基本原理免疫组化技术是一种广泛应用于病理诊断的检测方法，它利用特异性抗体与组织标本中目标蛋白相互作用，从而能够检测出组织标本中特定蛋白的存在和分布情况。
该技术的基本原理是将已知特异性抗体标记在组织切片或细胞涂片上，形成复合物，再用酶学或光学等方法进行检测，从而确定蛋白质的存在性、定位、表达量及亚型等相关信息。
免疫组化技术广泛应用于病理诊断、细胞生物学、分子生物学等领域，对临床医生进行准确定位、病理分级和治疗方案的选择等方面起到了重要的作用。
2 免疫组化技术在病理诊断中的应用在病理诊断中，免疫组化技术可以根据肿瘤组织中的多个标志物进行识别和定位。
例如，在乳腺癌的诊断中，HER2、ER和PR等标志物的表达情况可以指导临床医生进行针对性的治疗。
在肺癌的诊断中，TTF-1和Napsin A等标志物的表达情况可以帮助鉴别原发性和转移性肺癌。
在淋巴瘤的诊断中，CD20和CD30等标志物的表达情况可以帮助鉴别不同类型的淋巴瘤。
因此，免疫组化技术在肿瘤组织识别和定位中具有重要作用。
除了肿瘤组织的诊断外，免疫组化技术在许多疾病的诊断中也起着重要作用。
例如，在肝病的诊断中，HBsAg和HCV抗体可以用于检测肝炎病毒感染情况。
在免疫性疾病中，抗核抗体和抗磷脂抗体可以用于诊断类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等疾病，从而指导合理的治疗方案。
在肾病的诊断中，IgG、IgA和IgM等免疫球蛋白的表达情况可以用于鉴别不同类型的肾小球肾炎。
免疫组化技术可以成为一种可靠的工具，有助于诊断和治疗。
3 免疫组化技术的优缺点免疫组化技术的优点是可以提供高度特异性和灵敏度的蛋白检测。
它与常规病理检查相比，具有更高的准确性和敏感性，能够识别很小的组织病变和微小病理变化。
同时，免疫组化技术还可以提供蛋白表达的定位信息，有助于对组织基本结构和功能的理解。
免疫组化技术的缺点之一是存在假阳性和假阴性结果的可能性。
临床分析中的免疫组化技术在肿瘤诊断中的应用
临床分析中的免疫组化技术在肿瘤诊断中的应用在肿瘤诊断中，临床分析中的免疫组化技术发挥着重要作用。
免疫组化技术通过检测组织或细胞中特定蛋白的表达情况，能够帮助医生判断肿瘤的类型、分级以及预后，从而为患者提供更准确的诊断和治疗方案。
一、免疫组化技术简介免疫组化技术是一种在组织学切片或细胞标本中检测特定蛋白表达的方法。
它利用免疫荧光染色、免疫酶染色等技术手段，通过与特定抗体的结合反应来检测目标蛋白的表达情况。
这些特定抗体可以通过单克隆或多克隆制备得到，能够与肿瘤细胞特定的抗原结合，形成可视化的颜色或荧光信号。
二、免疫组化技术在肿瘤诊断中的应用1. 肿瘤类型鉴别免疫组化技术可以帮助医生鉴别不同类型的肿瘤。
例如，对于不明原发肿瘤的患者，通过检测特定蛋白的表达情况，可以判断肿瘤的组织来源。
比如，通过检测CK7和CK20的表达情况，可以区分胃癌和胰腺癌，为临床定位提供重要依据。
2. 肿瘤分级和分期免疫组化技术还可以帮助医生进行肿瘤的分级和分期。
例如，对于乳腺癌患者，通过检测ER、PR和HER2的表达情况，可以帮助医生将肿瘤分为不同的分子亚型，从而确定合适的治疗方案。
此外，免疫组化技术还可以检测Ki-67的表达水平，评估肿瘤的增殖活性，对于预测肿瘤的预后也有一定的价值。
3. 肿瘤预后评估免疫组化技术在肿瘤的预后评估中也发挥着重要作用。
例如，在结直肠癌患者中，检测BRAF和KRAS基因突变以及MSI状态可以预测患者的预后和对化疗的敏感性，从而为个体化治疗提供依据。
此外，检测肿瘤中PD-L1的表达情况，可以预测免疫治疗的疗效，为患者选取合适的治疗方案。
4. 肿瘤复发和转移监测免疫组化技术还可以用于监测肿瘤的复发和转移。
通过检测循环肿瘤细胞(CTC)中特定蛋白的表达情况，可以确定患者是否存在隐匿转移，及时调整治疗方案。
此外，免疫组化技术还可以检测肿瘤标志物如CEA、CA125等的表达水平，对于评估治疗效果和预测复发风险也具有重要意义。
免疫组化技术在疾病诊断中的应用
免疫组化技术在疾病诊断中的应用免疫组化技术是一种基于抗体与抗原相互作用的技术，在生物医学研究和临床疾病诊断中发挥了重要作用。
其原理是利用与特定抗原结合的抗体来检测或定位蛋白质、细胞、组织或器官中的某种成分，然后通过染色或检测荧光等方式来观察和分析样本中的相应物质。
免疫组化技术可以用于诊断和治疗多种疾病，例如癌症、自身免疫性疾病、传染病和神经系统疾病等。
其中最广泛应用的是癌症诊断和治疗。
癌症免疫组化分析可通过检测特异性肿瘤抗原(tumor-specific antigen, TAA)、免疫分子、细胞表面标记和转录因子等蛋白质的表达来确定癌细胞类型、程度和分化程度，从而为患者制定更加个性化的治疗方案。
在肿瘤中，免疫组化技术可用于检测和定量特异性肿瘤标记物的表达。
特异性肿瘤标记物是某类肿瘤细胞的特定表面或内部分子，放射性硫代谷氨酸 (SPECT) 或荧光标记等用于在体内追踪该标记物的影像学探针等是临床上最常用的手段。
除了检测肿瘤标记物外，免疫组化技术还可以检测胚胎顺序性抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、铁蛋白、癌胚抗原 (carcinogenicembryonic antigen, CEACAM1) 等其他广泛应用于肿瘤诊断和治疗的抗原。
除了癌症外，免疫组化技术还可应用于自身免疫性疾病的诊断与治疗。
免疫组化检测包括自身抗体（例如抗核抗体和抗磷脂蛋白抗体等）和免疫规则紊乱（例如 CD4 和 CD8 细胞表达水平的不平衡）等。
此外，免疫组化技术也可检测细胞因子、趋化因子等蛋白质，这些分子在免疫系统的调节中发挥关键作用。
通过检测这些蛋白质的表达水平和类型，可确定患者是否存在免疫疾病，从而为治疗和预后评价提供依据。
同时，免疫组化技术在传染病的诊断中也有非常重要的应用。
例如，有抗体特异性的病原体可辅助诊断多种传染病，如艾滋病、肝炎、梅毒、结核病、瘤胃炎等。
此外，免疫组化技术也可用于相关病原体或感染细胞中特定抗原或相应抗体的检测和定位，从而确定感染来源、感染者的免疫状态等信息。
临床分析中的免疫组化技术与应用
临床分析中的免疫组化技术与应用免疫组化技术在临床分析中的应用免疫组化技术是一种通过检测特定抗原和抗体的相互反应，来对生物样本进行病理性质、诊断和预后进行评估的方法。
通过该技术，我们可以更准确地了解细胞和组织的分子性质以及疾病的发生机理，从而指导临床治疗和疾病管理。
本文将对免疫组化技术在临床分析中的应用进行分析。
一、免疫组化技术的基本原理免疫组化技术主要基于抗原-抗体相互作用的原理，通过标记抗体和待测物相互结合，利用可视化、光学或化学方法来检测并定量目标物质。
该技术常用的标记物包括酶、荧光物质和金颗粒等。
通过对待测样本中目标抗原的特异性识别和检测，可以对细胞、组织甚至分子进行定位和表达分析。
二、免疫组化技术在疾病诊断中的应用1. 肿瘤诊断与分子分型免疫组化技术在肿瘤诊断中具有广泛应用价值。
通过对肿瘤标志物的检测，可以帮助医生判断肿瘤的类型、分化程度以及存在的分子变异等信息，为肿瘤的诊断和治疗提供依据。
例如，HER2免疫组化检测在乳腺癌中被广泛应用，可以筛选出适合接受靶向治疗的患者，提高治疗效果。
2. 感染性疾病的诊断免疫组化技术在感染病原体检测中也具有重要意义。
通过对感染病原体相关抗原或抗体的检测，可以帮助医生快速准确地诊断感染性疾病。
例如，乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫组化检测可用于乙型肝炎的早期诊断和疫苗有效性的评估。
3. 免疫性疾病的诊断免疫组化技术在免疫性疾病的诊断中有着广泛的应用。
通过检测免疫球蛋白、抗核抗体等免疫指标，可以帮助医生判断疾病的种类、活动程度和预后，并指导治疗方案的选择。
免疫组化技术在类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等免疫性疾病的诊断和治疗中发挥了重要作用。
三、免疫组化技术在药物研发与评价中的应用免疫组化技术在药物研发与评价中也有着重要的应用价值。
通过对药物分子的免疫组化检测，可以评估药物的药效、毒性以及药物与靶点之间的相互作用等。
这对于新药的研发和临床前药物评价具有重要意义。
免疫组化在病理诊断中的应用
免疫组化在病理诊断中的应用免疫组化技术是一种通过检测组织或细胞中特定蛋白的表达和定位，来判断生物组织或细胞类型的方法。
免疫组化技术在病理诊断中得到广泛应用，成为病理诊断的重要手段之一。
一、免疫组化技术简介免疫组化技术是一种利用抗体特异性结合抗原，在生物医学领域广泛应用的技术手段。
其基本原理是利用特异性抗体识别并结合组织或细胞中的抗原，再通过染色反应来检测这种结合。
一般来说，在对生物样本进行染色前，首先用抗体对样本中的目标蛋白进行特异性识别和结合，然后用染色反应来标记这些结合的目标蛋白。
最终，针对样本中的目标蛋白进行可视化、定量化、或者定位分析。
二、免疫组化技术在病理诊断中的应用病理诊断是基于组织学病理学的专业诊断，其核心是对患者组织样本的各种形态学和变化的观察、分析和诊断。
免疫组化技术的应用为病理诊断提供了可靠的支持和手段。
（一）肿瘤病理诊断免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的应用非常广泛，可以用于确定肿瘤的类型、源头和生长模式等。
比如，利用CK、EMA、TTF-1等抗体，可以区分出肺癌和乳腺癌；利用P63、34βE12等抗体，可以区分出膀胱癌和乳头状腺瘤；利用CDX-2、Villin等抗体，可以区分出结直肠腺癌和胃癌。
（二）血液病病理诊断免疫组化技术在血液病病理诊断中的应用也非常广泛。
例如，利用CD3、CD20等抗体，可以明确T细胞淋巴瘤与B细胞淋巴瘤；利用CD138、Kappa、Lambda等抗体，可以区分出浆细胞病。
（三）神经系统和肌肉系统病理诊断免疫组化技术在神经系统和肌肉系统的病理诊断中也有非常重要的应用。
比如，在多发性硬化病的病理诊断中，免疫组化技术可以用来观察和分析炎症反应细胞和钙结合蛋白在病变区域的分布，以及观察和分析病变是否与某些病原体相关。
而在肌肉系统的病理诊断中，免疫组化技术可以用于检测肌肉细胞和神经元细胞中的钙调素、神经元特异性烯醇化酶和肌钙蛋白等。
三、免疫组化技术的发展随着生物医学领域不断发展和推进，免疫组化技术也不断得到改进和发展。
免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用
• 免疫组化技术简介 • 免疫组化技术在病理诊断中的应用 • 免疫组化技术在研究中的应用 • 免疫组化技术最新进展与展望
01 免疫组化技术简介
定义与原理
定义
免疫组化技术是一种利用抗原-抗 体反应原理，通过标记抗体来检 测组织或细胞内特定抗原物质的 方法。
鉴别诊断
对于形态相似的肿瘤，免疫组化技术 可以通过检测不同的抗原表达，帮助 医生进行鉴别诊断，提高诊断的准确 性。
肿瘤分型与分级
分型
根据肿瘤细胞抗原的表达情况，可以 将肿瘤分为不同的亚型，有助于制定 更加个性化的治疗方案。
分级
免疫组化技术可以通过检测肿瘤细胞 增殖相关抗原的表达情况，评估肿瘤 的恶性程度和预后，为临床治疗提供 参考。
探索疾病发生机制
确定疾病发生过程中的关键分子
通过免疫组化技术，可以检测和定位疾病发生和发展过程中涉及的关键分子，如生长因子、细胞因子和信号转导 分子等。
揭示疾病发病机制
通过分析特定分子在疾病组织中的表达和定位，有助于深入了解疾病的发病机制，为开发新的治疗策略提供理论 依据。
药物靶点筛选与验证
筛选潜在药物靶点
免疫治疗效果评估
通过分析免疫治疗前后肿瘤组织中相关分子表达的变化，有助于评估免疫治疗的疗效和 机制，为优化治疗方案提供依据。
04 免疫组化技术最新进展与 展望
高灵敏度与特异性抗体研发
01
针对肿瘤标志物、细胞因子等 关键分子，研发更具有高灵敏 度和特异性的抗体，提高免疫 组化检测的准确性。
02
采用单克隆抗体技术，通过筛 选和优化，获得更具有针对性 的抗体，降低交叉反应和假阳 性率。
结果的判断。
临床应用中免疫组化的使用
临床应用中免疫组化的使用免疫组化是一种在临床应用中常用的实验技术，用于检测和定量分析细胞或组织中特定蛋白质的表达。
通过在组织切片上使用抗体与目标蛋白质特异性结合，免疫组化可以提供关于疾病发生机制、诊断以及治疗方案的重要信息。
在本文中，我们将深入探讨免疫组化的原理、应用以及其在临床实践中的意义。
一、免疫组化的原理免疫组化的原理基于抗体与特定的抗原结合。
抗原通常是指细胞或组织中的一种特定蛋白质。
在免疫组化实验中，首先需要选择适当的抗体，这些抗体能够与目标蛋白质特异性结合，并产生可见的信号。
免疫组织化学实验通常包括以下步骤：1. 组织取材：将人体组织或动物组织切片，使其在玻片上展示出特定的组织结构。
2. 固定和包埋：使用适当的方法固定和包埋组织样本，以保持其形态和结构。
3. 抗原获取：对组织切片进行抗原获取的处理，以暴露目标蛋白质。
4. 抗体与抗原结合：将适当的抗体应用于组织切片上，使其与目标蛋白质结合。
5. 信号检测：使用染色、荧光或其他检测方法，检测抗体与抗原结合所产生的信号。
6. 结果分析：观察和分析免疫组化实验结果，评估目标蛋白质的表达水平。
二、免疫组化的应用1. 疾病诊断：免疫组化在疾病诊断中起着重要作用。
它可以帮助医生判断组织中特定蛋白质的表达情况，从而确定疾病类型和分级。
在肿瘤诊断中，免疫组化可以用于检测肿瘤标志物的表达，与病理学方法相结合，帮助确定肿瘤的类型和分期。
2. 药物研发：免疫组化在药物研发领域也扮演着重要角色。
它可以帮助研究人员评估药物对特定蛋白质的影响，从而确定其治疗潜力。
通过免疫组化，研究人员可以检测药物对细胞信号通路的抑制或促进作用，评估药物的疗效和副作用。
3. 分子标记物发现：在分子医学研究中，免疫组化可以帮助识别和验证潜在的分子标记物。
通过对组织中特定蛋白质的表达进行定量检测，研究人员可以筛选出与疾病相关的标记物，并进一步研究其在疾病诊断和治疗中的潜在应用价值。
三、免疫组化在临床实践中的意义1. 辅助疾病诊断：免疫组化可以与常规病理学方法相结合，提供更准确的疾病诊断。
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结果判断
（表达部位、检测物质及常用标记物）
• 表达部位： 细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核、细胞
多部位及组织等； • 检测物质：
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原 的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖 、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体 等都可用相应的特异性抗体进行检测。
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或FVIII；
2021/1/28
• 组织细胞：CD68、Mac387、溶菌酶等； • 神经内分泌：
1、激素标记物：儿茶酚胺、5－HT、多肽 和肽释放因子等； 2、非激素标记物：NSE、CGA、Syn等； • 神经组织： S－100、MBP、Leu7、NSE、GFAP 、 NFP等； • 淋巴造血组织：CD45（LCA）、CD20（ L26）、 CD79a、CD3、 CD45RO、
2021/1/28
临床应用
• 免疫组化的临床应用主要包括以下几方面： ⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断； ⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位； ⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型； ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的 组 织学分类，因其种类多、组织形态相像，
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有时难以区分其组织来源，应用多种标志 物进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断 是不可缺少的； • ⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案 的确定，包括手术范围的确定。 • ⑹为临床提供治疗方案的选择。
• 20世纪80年代该项技术在国外开始应 用于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即 90年代开始运用于疾病的病理诊断。
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•
最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特
别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石
蜡切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的
应用。
•
从开始发展至今，该项技术一直在基础医学
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• 所用标本类型： 主要为组织标本和细胞标本两大类，
前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片 ）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞 爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组 织标本最常用、最基本的方法，对于组织 形态保存好，且能作连续切片，有利于各 种染色对照观察；还能长期存档，供回顾
2021/1/28
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小圆细胞肿瘤的免疫组化鉴别诊断
ＣＫ Vim ＥＭＡ LCA NSE
Des S-100 CgA
小细胞未分化癌
＋－ ＋ －
－
－
和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性
疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了
强有力的手段。
•
目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术
检查，我院有待开展此项技术。
2021/1/28
定义及基本原理
定义：
免疫组化，也称为免疫组织化学技术或
免疫细胞化学技术，是应用免疫学基本原 理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性 结合的原理，通过化学反应使标记抗体的
免疫组化技术简介及相关临床应用
2021/1/28
提纲
1、背景知识简介 2、定义及基本原理 3、所用抗体及标本类型 4、常用染色方法 5、操作步骤及结果判断 6、临床应用 7、相关图片 7、开展该项目注意事项
背景知识简介
• 免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原 抗体反应为理论基础发展起来的一门方法 学。
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来，从而达到对组织或细胞中的未知抗原 进行定性，定位或定量的研究。 有如下基本特点： 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合
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所用抗体及标本类型
• 所用抗体类型 常用的抗体为单克隆抗体和多克隆
抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆 分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术 免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后 的抗原直接免疫动物后，从动物血中所 获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆 所产生的抗体混合物。
2021/1/28
操作步骤
• 流程简介如下： 常规石蜡切片→脱蜡→抗原修复（根据
需要）→缓冲液冲洗（3min/2次）→室温下 孵育5min→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温 下孵育5min →缓冲液冲洗（5min/2次）→滴 加一抗37℃孵育1-2小时→缓冲液冲洗（ 5min/2次）→室温下孵育30分钟→滴加二抗 室温下孵育1小时→缓冲液冲洗（5min/2次 ）→滴加DAB液→孵育3-5分钟→自来水充分 冲洗→复染→脱水→透明→封片→出诊断。
性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗 原暴露有一定的影响，但可进行抗原修 复，是免疫组化中首选的组织标本制作 方法。
2021/1/28
常用染色方法
• 免疫组织化学技术按照标记物的种类不 同可分为： 1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通 过荧光显微镜观察； 2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗 体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前 最常用； 3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋 白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等 。
显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素
）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋
白质），对其进行定位、定性及定量的研
究
。
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基本原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异
性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先 将组织或细胞中的某种化学物质提取出来， 以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获 得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或 细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学 显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出
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ห้องสมุดไป่ตู้
CD15、CD30、Bcl—2、Sig(IgM和IgD) 等； • 胚胎性抗原：CEA、AFP等； • 细胞增殖抗原：PCNA、Ki-67等； • 激素：ER、PR、AR等； • 病毒：HBV、EBV、HPV等； • 癌基因和抑癌基因：c-erBb-2、nm23、 P53、P16和Bcl-2等
常用于肿瘤病理鉴别诊断的免疫标记物 （举 例）
• 上皮组织：CK、EMA； • 特异性上皮标记：如TG、 PSA，TTF－1
等； • 间叶组织：vinmentin； • 肌组织：desmin、SMA、MSA、myosin、
myogenin、myoD1； • 血管内皮细胞：CD31、CD34、FVIIIRAg