实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定

实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定

芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。

槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。

槐花米中主要化学成分的结构及性质：

1.芦丁(Rutin)

淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。

溶解度：

水：1:100(冷)，1:200(热)

甲醇：1:100(冷)，1:9(热)

乙醇：1:650(冷)，1:60(热)

吡啶：1:(冷)，易溶(热)

不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。

2. 槲皮素(Quercetin)

即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。溶解度：

乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)

可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。

3. 皂甙

粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。

(1) 白桦脂醇(Betulin)

无色针晶，℃~252℃。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、

苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。

(2) 槐二醇(Sophoradiol)

无色针晶，℃~220℃或224℃。能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。

4. 槐属甙(Sophoricoside)

mp.298℃。易溶于热乙醇、热醋酸、吡啶、稀碱液；难溶于水；冷乙醇、冷醋酸；难溶于乙酸乙酯、丙酮中。

5. 槐属黄酮甙(Sophoraflavonoloside)

mp.207℃~208℃。可溶于热水及乙醇，难溶于冷水、乙酸乙酯、丙酮，不溶于乙醚等低极性有机溶剂。

6. 槐属双甙(Sophorabioside)

针状结晶，mp.156℃~160℃(含结晶水)，无水物mp.248℃。易溶于吡啶，能溶于热乙醇、丙酮，稍溶于热水，不溶于弱极性有机溶剂。

一、实验目的

1. 掌握酸碱法提取黄酮甙的一般原理及方法。

2. 掌握黄酮甙（包括甙元）的鉴定方法。

3. 学会纸色谱的操作技术。

二、实验原理

1. 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐花米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。

2. 利用芦丁可被稀酸水解，生成甙元和糖，通过颜色反应，薄层层析及纸层析进行检识和确认芦丁和槲皮素。

三、实验内容

（一）芦丁的提取

1. 于1000m1烧杯中加500m1蒸馏水加热煮沸后，称取40g槐花米粗粉，投人沸水中，直火加热煮沸5分钟，在搅拌下小心加入石灰乳至pH 8～9，加热保持微沸20-30分钟，趁热用棉花过滤，滤渣再用调pH 8～9的石灰水200m1煮10分钟，趁热过滤，合并两次滤液，稍冷(60-70℃)用浓盐酸调至pH2～3左右，放置过夜

2. 减压过滤，沉淀用水洗二次，然后用少量乙醇洗二次，抽干，称重______g，即得芦丁粗品。

（二）芦丁的精制

1. 将芦丁粗品置烧杯中，按(1：200)加蒸馏水，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜；

2. 减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2-3次，抽干，即得芦丁精品，称重______g，计算提取率______

（三）芦丁的水解

1. 取精制芦丁2 g，尽量研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%硫酸250ml，于直火加热微沸回流小时，放冷

2. 减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，称重______g；滤液保留作糖部分的鉴定。

3. 取水解母液约20m l，小心地用BaOH细粉中和至近中性，自然过滤，滤液蒸干，加2～3ml乙醇溶解，作为糖的供试液。

（四）检识

1. 理化鉴别

（1）. 莫氏(Molish)反应

取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇溶解，再加10% α-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。

(2). 盐酸----镁粉反应

取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。

(3). 醋酸镁纸片反应

取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，黄酮类应呈黄色荧光。紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。(4). 三氯化铝纸片反应

取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%三氯化铝甲醇溶液两滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。

2. 色谱鉴定

（1）芦丁和槲皮素的纸色谱

支持剂：新华层析滤纸

点样：1. 自制精制芦丁乙醇液

2. 自制精制槲皮素乙醇液

对照品：3. 芦丁标准品乙醇液

4. 槲皮素标准品乙醇液

展开剂：正丁醇－醋酸－水(4:1:5) (上层)或15%醋酸水溶液

显色：(1) 可见光下显黄色斑点，紫外光下观察荧光斑点。

(2) 用氨熏后再观察。

(3) 喷1%三氯化铝试液后再观察。

（2）糖的纸色谱鉴定

支持剂：新华层析滤纸

点样：自制糖的供试品溶液及葡萄糖、鼠李糖对照品

展开剂：正丁醇－醋酸－水(4:1:5) (上层)

显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂（喷后105℃烘10min显色）

画出图谱，计算Rf值。