一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法
蛋清溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。
2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。
3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。
它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。
2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。
将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。
3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。
4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。
重复洗涤2-3次。
5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。
7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。
2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。
根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。
六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。
2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。
树脂吸附法分离蛋清溶菌酶的原理
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鸡蛋提取溶菌酶的方法
鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。
溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。
鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。
2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。
将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。
这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。
3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。
例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。
4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。
5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。
常见的测量方法包括显色法和滴定法等。
鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。
因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。
2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。
在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。
3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。
4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。
需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。
总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。
实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶
实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶各位看官，今天我们来聊聊如何在实验室里从蛋清中提取溶菌酶。
溶菌酶是一种能分解细菌细胞壁的酶，广泛应用于医药、食品等领域。
而我们从蛋清中提取溶菌酶，不仅可以研究其性能，还可以应用于实际生产中。
下面，就让我来为大家详细介绍这个实验的步骤吧。
第一步，将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。
这一步是为了确保蛋清和蛋黄均匀混合，提高提取效率。
第二步，将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。
这一步是为了提供一个适宜的pH环境，有利于溶菌酶的提取。
第三步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。
这一步是为了将混合液中的固体物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。
第四步，取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。
这一步是为了去除蛋清水溶液中的脂溶性物质，提高溶菌酶的提取纯度。
第五步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
这一步是为了将混合液中的乙醚和脂溶性物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。
第六步，取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。
这一步是为了保存提取得到的溶菌酶，避免其降解。
总的来说，从蛋清中提取溶菌酶的实验步骤如下：1.将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。
2.将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。
3.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。
4.取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。
5.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
6.取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。
这样，我们就成功从蛋清中提取出了溶菌酶。
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究一、引言蛋清是一种富含溶菌酶的天然源，溶菌酶具有广泛的应用价值，在医药、食品、环境等领域发挥着重要作用。
因此，高效提取蛋清中的溶菌酶，并开发可靠的定量测定方法具有重要意义。
二、蛋清中溶菌酶的提取方法研究进展2.1 传统提取方法1.直接破碎法–原理：将鸡蛋或鸭蛋直接破碎，通过离心等方法分离溶菌酶。
–优点：简单、快速。
–缺点：溶菌酶的提取率和纯度较低。
2.盐析法–原理：通过加入适量的盐类使溶菌酶沉淀，然后进行后续纯化。
–优点：提取率较高。
–缺点：纯化过程繁琐，提取时间较长。
2.2 新型提取方法1.超声提取法–原理：利用超声波作用下产生的微小气泡破坏细胞结构，释放溶菌酶。
–优点：提取效率高，提取时间短。
–缺点：对溶菌酶活性有一定影响。
2.酶解法–原理：使用特定酶解剂使蛋清中的蛋白质部分降解，释放溶菌酶。
–优点：提取效率高，对溶菌酶活性影响较小。
–缺点：酶解过程需要精确控制条件。
三、蛋清中溶菌酶的定量测定方法3.1 比色法1.基于物质的变化–原理：溶菌酶对某种物质具有催化作用，该物质的变化可以被检测器测定。
–优点：操作简单，成本较低。
–缺点：适用范围有限。
2.酶联免疫吸附法–原理：利用特异性抗体与溶菌酶结合，通过测定抗体与酶的结合程度来定量溶菌酶。
–优点：高灵敏度，高特异性。
–缺点：实验操作复杂。
3.2 光学测定法1.比色法–原理：溶菌酶具有特定的吸收光谱，在特定波长下可以测定其浓度。
–优点：操作简单，结果准确。
–缺点：需要专用仪器。
2.荧光法–原理：利用溶菌酶在特定条件下的荧光特性来定量测定其浓度。
–优点：高灵敏度，高选择性。
–缺点：试剂成本较高。
四、结论通过对蛋清中溶菌酶的高效提取方法和定量测定方法的研究，我们可以得出以下结论： 1. 新型提取方法如超声提取法和酶解法可以提高溶菌酶的提取率和提取效率。
2. 定量测定方法如酶联免疫吸附法和荧光法具有高灵敏度和高特异性。
鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法[发明专利]
![鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d26dbb286ad97f192279168884868762caaebbc9.png)
(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510423983.4(22)申请日 2015.07.17C12N 9/36(2006.01)(71)申请人泰州苏鹏蛋业生物科技有限公司地址225500 江苏省泰州市姜堰区白米镇工业集中区(72)发明人宋锡铭 姚永鹏 夏海峰 杭小伟(54)发明名称鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法(57)摘要本发明涉及鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法。
主要步骤如下：收集新鲜鸡蛋蛋清，按比例加入缓冲液，均匀搅拌，静置后离心除去除沉淀得上清液A，将其pH 调至6后上样到装有CM-琼脂糖离子交换介质的层析柱中，用1M 氯化钠溶液洗脱，将洗脱液调至pH5.5后离心去除沉淀，向所得上清液B 中加入聚乙二醇2000至其浓度达20～25％，搅拌后离心，向所得上清液C 中加入饱和硫酸钠溶液至其浓度达15～20％，混匀后离心，对所得上层清液D 进行超滤，对超滤所得溶液进行真空冷冻干燥，得到溶菌酶。
本发明分离纯化方法将离子交换法、双水相萃取法和膜分离法结合使用，克服了单一分离纯化方法存在的纯度和收率低下的缺陷，而且适合规模化生产。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 106701717 A 2017.05.24C N 106701717A1.一种鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)收集新鲜鸡蛋清，按蛋清与缓冲液体积比为1∶2的比例加入PH4.6的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，均匀搅拌，冷处静置过夜；(2)8000rpm离心去除沉淀，收集上清液A，用0.5M氢氧化钠溶液将pH调到6；(3)将CM-琼脂糖离子交换介质装柱，预处理成钠型后用pH 6的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液平衡；(4)按照上样液和介质体积比为3∶1的比例上柱，用去离子水清洗未交换蛋白，最后用1M氯化钠溶液洗脱2个柱体积，收集洗脱液；(5)用1M盐酸将洗脱液调至pH 5.5，均匀搅拌1小时，8000rpm离心去除沉淀，收集上清液B；(6)向所得上清液B中加入聚乙二醇2000，至聚乙二醇的质量浓度达20～25％，再搅拌1小时，8000rpm离心，收集上清液C；(7)向所得上清液C中加入饱和硫酸钠溶液，至硫酸钠的质量浓度达到15～20％，混匀后于6000rpm离心，收集上清液D；(8)对所得上清液D，以膜截留分子量为3000～5000Da的超滤膜进行超滤，对超滤所得溶液进行真空冷冻干燥，得到白色粉末，即为溶菌酶。
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(10)授权公告号 (45)授权公告日 2014.11.12C N 103114082B (21)申请号 201310069093.9(22)申请日 2013.03.04C12N 9/36(2006.01)(73)专利权人浙江工业大学地址310014 浙江省杭州市下城区潮王路18号(72)发明人张健 金志敏 夏春年 姚小武张岩(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司 33201代理人黄美娟 王兵CN 1108381 C,2003.05.14,陈若飞.从蛋壳中提取溶菌酶的研究..《沈阳化工学院院报》.2008,卢庆祥.用聚丙烯酸凝聚提取溶菌酶..《化学教学》.1995,M. Sternberg 和D. Hershberger.Separation of proteins with polyacrylic acids..《Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure 》.1974,(54)发明名称一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法(57)摘要本发明公开了一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法：用水将鸡蛋清溶解，调节pH 至4.0～5.0并加热至80℃左右，使杂蛋白沉淀、过滤除去，获得滤液；再在弱酸性条件下，用木质素磺酸钠与滤液中的溶菌酶进行聚合、沉淀；然后，将沉淀物在碱性条件下溶解，用聚丙烯酰胺水溶液使其解离，过滤得滤液；最后，向滤液中加入无水乙醇使其结晶，过滤、干燥即得溶菌酶；本发明使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。
(51)Int.Cl.(56)对比文件审查员 孙彦珂权利要求书1页 说明书5页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利权利要求书1页 说明书5页(10)授权公告号CN 103114082 B1/1页1.一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于所述方法按以下步骤进行：（1）将鲜鸡蛋清用水稀释后，搅拌均匀，调节pH 值至4.0～5.0后立即加热至80～85℃，保温10～15min ，水浴冷却至20～35℃后静置6～10h ，过滤，获得滤液a ；（2）将步骤（1）获得的滤液a 调pH 值至4.5～6.5，搅拌下，缓慢加入木质素磺酸钠至有沉淀生成，静置3～9小时，过滤，取滤饼用Na 2CO 3水溶液溶解完全后，再缓慢加入聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，静置4～8小时，过滤，获得滤液b ；所述木质素磺酸钠以质量浓度10%～20%的木质素磺酸钠水溶液的形式加入，所述木质素磺酸钠水溶液与滤液a 的体积比为0.4～1.2：1；（3）向步骤（2）获得的滤液b 中缓慢加入无水乙醇至产生白色沉淀，静置，过滤，将滤饼冷冻干燥，获得所述溶菌酶。
2.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（1）用质量浓度5%的盐酸来调节pH 值。
3.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）中将步骤（1）获得的滤液a 用质量浓度5%的NaOH 水溶液调pH 值。
4.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中的木质素磺酸钠的相对分子量为4000～10000。
5.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中Na 2CO 3水溶液的质量浓度为3～10%。
6.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中聚丙烯酰胺水溶液的质量浓度为5%～25%。
7.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）加入木质素磺酸钠的温度为15～40℃，所述加入聚丙烯酰胺水溶液的温度为15～40℃。
8.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）中聚丙烯酰胺的相对分子量为300万～800万。
9.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（3）所述加入无水乙醇的温度为15～40℃。
权 利 要 求 书CN 103114082 B一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法（一）技术领域[0001] 本发明涉及一种溶菌酶的制备方法，特别涉及一种鸡蛋清中分离溶菌酶的方法。
（二）背景技术[0002] 溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
溶菌酶在临床上是有效的消炎剂，在食品防腐和基因工程等方面也有广泛的应用。
溶菌酶来源很广，在人、动物、植物和微生物中均有发现，其中鸡蛋清中含量最高，因此，工业生产溶菌酶常以鸡蛋为原料。
[0003] 从鸡蛋中溶菌酶的提取方法报道很多，有直接结晶法、亲和色谱法、离子交换法、沉淀法、双水相萃取、超滤法等。
各种方法优缺点不一，产品的质量和生产成本也有所不同。
目前，沉淀法是一种工业上应用比较成熟的提取方法，其在技术要求和生产成本上都比较好。
[0004] 其中，生吉萍等【中国食品学报，2003年增刊，10～14】用等电点沉淀法，即先将获取的蛋清液用NaCl 溶液稀释，再用1mol/L 的NaOH 溶液将蛋清pH 值调到9.5～11.0，使其接近溶菌酶的等电点，并4℃下静置，从而使溶菌酶沉淀下来。
这种方法操作简单，在工业生产中可以使产品的成本大大降低。
但是其生产周期较长，产率相对偏低，纯度不高，高纯度产品获取过程复杂，需要增加较多步骤。
[0005] 康旭、邓川等采用盐析沉淀法【畜牧与饲料科学，2010，31(5)，91～92】，即用pH 值为6.5的磷酸盐缓冲液(PBS)将蛋清稀释5倍，在搅拌和除去杂蛋白后，用硫酸铵对上清液分级沉淀，取40％～80％饱和度部分的沉淀，得溶菌酶。
得到的溶菌酶纯度达到电泳纯，其中用80％左右饱和度硫酸铵时收率最好。
此法得到的溶菌酶纯度和产率都比较高，但是依旧存在沉淀速度慢及不完全的问题，因而使得溶菌酶的活性降低了很多。
[0006] 陈若飞用聚丙烯酸沉淀法从蛋壳中提取溶菌酶【沈阳化工学院学报，2008年9月第22卷第3期222～225】，在除去杂蛋白后，加入NaOH 溶液调pH 至6.0，加入聚丙烯酸，产生乳白色胶状物。
将聚合物用Na 2CO 3将其溶解，并pH 调至9.5，加入质量分数为5％的CaCl 2液将溶菌酶聚丙烯酸解离，接着过滤得到澄清溶液。
最后加入NaOH 溶液调pH 为10.5左右，使溶菌酶结晶析出。
此法选择性好，得到的溶菌酶纯度很高，但是聚丙烯酸价格较贵，而且水溶液的黏性较大，不方便大规模生产。
[0007] 文章军和钱生球在其专利【一种分离溶菌酶的方法】中描述，以蛋清为原料，加水稀释后，搅拌均匀，用酸调pH 至4.0～5.0，静置，除去沉淀，再将溶液升温至75～80℃，冷却静置，过滤得上清液，然后用碱调pH 至7.5～8.0，加入乙醇至产生沉淀，静置6～10小时后过滤，干燥沉淀溶菌酶。
其工艺步骤简单、生产周期短、除杂蛋白效果较好、收率也比较高，但是最后所得酶的活性不是特别高。
[0008]国外，研究者用N-异聚丙烯酰胺与丙烯酸单体的共聚物从蛋清中，【Journal of Biotechnology ，87(2001)，95～107】，虽然得到的产品纯度高、收率高、活性也比较好，但是生产的成本高，而且操作十分复杂。
[0009] 溶菌酶为白色或微白色冻干粉，可溶于水，不溶于乙醚和丙酮。
相对分子量在14000左右，pI在10.5～11.0，最适存在和反应的pH值为6.5。
酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96℃或pH值为3条件下，15min后活力保持87%。
而蛋清中的其他蛋白的pI在4.0～5.0，在80℃以上的高温下易失活，所以，可以用等电点沉淀法除杂蛋白。
由于溶菌酶的pI太高，此时采用等电点沉淀产生一定量的失活，但溶菌酶在弱碱性条件下，会在乙醇作用下结晶，所以可以用乙醇使其结晶而分离。
[0010] 此外，木质素磺酸钠可以溶解在碱性的水溶液中，而且在实验研究中发现，木质素磺酸钠可以在弱酸条件下与溶菌酶生成聚合物沉淀。
所以本发明就是利用这种聚合沉淀的方法提取分离蛋清中溶菌酶。
[0011] 而聚丙烯酰胺作为水溶性高分子聚合物，具有良好的絮凝性，本身无毒副作用，且聚丙烯酰胺易与木质素磺酸盐生产凝聚物。
蒋成新在研究中，有利用聚丙烯酰胺和木质素磺酸钠复合【石油钻采工艺，1988年专辑（22）2,193～202】，生成复合铬冻胶堵水剂。
而本发明则是利用聚丙烯酰胺水溶液与木质素磺酸钠结合，生成沉淀，而使木质素磺酸钠和溶菌酶的聚合沉淀解离，达到得到分离。
[0012] 所以本发明使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。
（三）发明内容[0013] 本发明目的是提供一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。
[0014] 本发明采用的技术方案是：[0015] 一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，所述方法按以下步骤进行：[0016] （1）将鲜鸡蛋清用水稀释后，搅拌均匀，调节pH值至4.0～5.0后立即加热至80～85℃，保温10～15min，水浴冷却至20～35℃后静置6～10h，过滤，获得滤液a；[0017] （2）将步骤（1）获得的滤液a调pH值至4.5～6.5，搅拌下，缓慢加入木质素磺酸钠至有沉淀生成，静置3～9小时，过滤，取滤饼用Na2CO3水溶液溶解完全后，再缓慢加入聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，静置4～8小时，过滤，获得滤液b；[0018] （3）向步骤（2）获得的滤液b中缓慢加入无水乙醇至产生白色沉淀，静置（15～40℃下静置3～5h），过滤，将滤饼冷冻干燥，获得所述溶菌酶。
[0019] 进一步，步骤（2）中将步骤（1）获得的滤液a用质量浓度5%的NaOH水溶液调pH 值，优选调pH值至5.5～5.8。
[0020] 进一步，步骤（2）中木质素磺酸钠相对分子量为4000～10000。
[0021] 进一步，步骤（2）中木质素磺酸钠以质量浓度10%～20%的木质素磺酸钠水溶液的形式加入，所述木质素磺酸钠水溶液与滤液a的体积比为0.4～1.2：1，优选0.8:1。
[0022] 进一步，步骤（2）中Na2CO3水溶液的质量浓度为3～10%，优选5%。
[0023] 进一步，步骤（2）中聚丙烯酰胺水溶液的质量浓度为5%～25%，优选10～15%。
[0024] 进一步，步骤（2）加入木质素磺酸钠的温度为15～40℃，优选25℃；所述加入聚丙烯酰胺水溶液的温度为15～40℃，优选25℃。
[0025] 进一步，步骤（2）中聚丙烯酰胺的相对分子量300万～800万。