PMP柱前衍生高效液相色谱法的机理
柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成
柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【摘要】The reversed - phase high performance liquid chromatographic ( HPLC) method of pre-column - derivatization with l-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was developed to separate the traditional eight monosaccharides and detect the monosac-charide composition of crystallization solution of xylose. The results showed that crystallization solution of xylose consisted of mannose, rharanose, cellobiose, glucose, galactose, xylose, arabinose, fucose, and the dominant component monosaccharides were glucose, ga-lactose, xylose and arabinose. Peak height was used to quantify. The concentration of eight kinds of monosaccharide was liner with correspond peak area with correlation coefficients (r2) of 0.9897 -0.9994. The detection limit was 0.002 1 -0.003 1 mg/mL. The recovery was 98.4% - 101.0% , and relative standard deviation of detection results was 0.66% -0.21 % (n = 6). The HPLC method is simple, rapid, sensitive, convenient and can be applied to the quality control of crytallization solution of xylose.%采用1-苯基-甲基-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-反相高效液相色谱(HPLC)法建立了8种常见单糖的分离模式,并用于木糖结晶母液单糖组成的定量分析.结果表明:木糖结晶母液至少由甘露糖、鼠李糖、纤维二糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖8种单糖组成,其中以葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖为主.以峰高定量,8种单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系,相关系数r2在0.9897 -0.9994范围内,方法检出限为0.0021-0.0031 mg/mL,回收率为98.4% -101.0%,测定结果的相对标准偏差为0.66%-1.21%(n=6).该方法简单、快速、灵敏,可用于木糖结晶母液的质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P47-49)【关键词】木糖结晶母液;单糖组成;衍生化;高效液相色谱【作者】孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【作者单位】济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204【正文语种】中文木糖、阿拉伯糖作为一种良好的食品添加剂已被广泛应用于食品生产中。
高效液相色谱法原理
高效液相色谱法原理
高效液相色谱（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，基于样品溶解在流动相中，经过固定相柱的相互作用来进
行分离的原理。
HPLC原理的核心是通过样品在固定相柱上的相互作用来实现分离。
固定相柱通常由一种固定在柱内壁上的吸附材料
或包覆分子构成。
样品在通过固定相柱时，分子会与固定
相发生吸附、解吸、交互作用等过程，不同的分子之间在
固定相上的相互作用力不同，因此会导致分子在柱上的停
留时间不同。
HPLC分析过程主要包括样品进样、柱温控制、流动相流动和检测信号记录。
具体来说，样品首先通过进样器进入柱内，然后通过一个泵系统推动流动相（一般是溶液）以一
定的流速通过柱，流经固定相柱时，样品中的分子将被分
离出来。
最后，通过检测器记录从柱中流出的样品信号，
并通过信号处理系统分析得到各个化合物的质量浓度。
HPLC方法可以根据固定相的性质和不同的操作模式来实现不同的分离目的，包括反相色谱、离子交换色谱、手性色谱、气相色谱等。
这些不同的HPLC方法是通过调整柱内固定相的性质以及流动相的组成和流动速度来实现。
总体来说，HPLC方法通过样品和固定相之间的相互作用来实现化合物的分离，具有高分辨率、高灵敏度和广泛适用性的特点，在生物分析、药物研发、环境监测等领域有广泛的应用。
高效液相色谱技术的原理和分析方法
高效液相色谱技术的原理和分析方法高效液相色谱(HPLC)技术是一种广泛应用于化学、生物、环境等领域的分析方法，它以其高效、灵敏、准确的特点被广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍高效液相色谱技术的原理和分析方法，并对其在不同领域的应用进行探讨。
高效液相色谱技术是基于溶液中成分在固定相(常为填充在柱中的颗粒状材料)和流动相共同作用下的分离原理。
在HPLC中，流动相(溶剂)通过高压泵送到色谱柱中，样品溶解于流动相中，通过在固定相上的分配和吸附作用，实现目标物质的分离。
与传统色谱技术相比，HPLC表现出更高的分离效率和灵敏度。
在HPLC中，选择合适的固定相是至关重要的。
常用的固定相有反相色谱柱、离子交换色谱柱等。
反相色谱柱常用于非极性、中极性物质的分离，离子交换色谱柱则常用于带电物质的分离。
根据目标物质的特性和要求，选择合适的固定相能够提高分离效果和分析速度。
在高效液相色谱中，样品的检测通常通过紫外-可见光谱仪进行。
紫外-可见光谱仪通过测量样品在特定波长下的吸光度来获得样品的浓度信息。
除了紫外-可见光谱，还可以使用荧光检测器和质谱检测器等进行检测。
在实际应用中，高效液相色谱常常与其他分离技术结合使用，以提高检测的准确性和灵敏度。
例如，将色谱柱与质谱联用可以更准确地确定目标物质的结构和分子量。
此外，还可以将预处理技术与HPLC联用，例如对样品进行前处理、固相萃取等，以提高样品的净化效果和分析效率。
高效液相色谱技术在不同领域有着广泛的应用。
在药物分析领域，HPLC常常用于制药过程中的质量控制和药物代谢研究。
在环境监测领域，HPLC被用于分析环境中的有机污染物、重金属等。
在食品安全领域，HPLC可以用于检测食品中的添加剂、农药残留等。
总之，高效液相色谱技术因其高效、灵敏、准确的特点，在化学、生物、环境等领域得到了广泛应用。
通过选择合适的固定相、检测方法以及与其他分析技术的结合，可以更好地实现对目标物质的分离和定量分析。
高效液相色谱仪的基本原理
高效液相色谱仪的基本原理关键词：高效液相色谱HPLC基本原理检索途径：维普中文期刊检索baidu google摘要：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
正文：1、高效液相色谱仪的系统组成、工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来HPL C仪器的工作过程为：高压泵将贮液器(或槽、罐)中的流动相溶剂经进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出(通常要回收)。
当注入待测样品时，流经进样器的流动相将样品各组分带入色谱柱中进行分离，分离后的各组分依一定的顺序进入检测器，检测器产生的信号由记录仪记录下来，最后形成液相色谱图。
因此，HPLC仪可分为四个主要组成部分，即：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
⒈高压输液泵这是HPLC仪器中的着急部件之一。
它一般由贮液器、高压输液泵、过滤器等组成。
高压输液泵应该具备密封性好、输出流。
常用的输液泵有恒流泵和恒压泵两种，而恒流泵用的较多(因为它的输出流量能始终保持恒定，与色谱柱引起的阻力大小无关)，而恒压泵用的较少。
高效液相色谱分析原理及流程
高效液相色谱分析原理及流程高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。
通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。
所用的固定相为大于100um的吸附剂(硅胶、氧化铝等)。
这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大，传质扩散慢，因而柱效低，分离能力差，只能进行简单混合物的分离。
而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、传质快、柱效高。
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。
近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。
世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。
高效液相色谱分析原理(一)高效液相色谱分析的流程由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。
被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离(极性范围比较宽)还可用梯度控制器作梯度洗脱。
这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
(二)高效液相色谱的分离过程同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。
分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。
分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。
组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。
若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。
柱前衍生-反相高效液相色谱法
柱前衍生-反相高效液相色谱法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的背景和意义。
下面是一个概述的范例：正如我们所知，液相色谱法是一种常用的分离和检测分析技术，在化学、药学、环境科学等领域具有广泛的应用。
然而，传统的液相色谱法在某些情况下可能面临一些挑战，如分离效果不理想、分析时间较长等。
为了克服这些问题，柱前衍生-反相高效液相色谱法被提出并逐渐受到关注。
柱前衍生是指在样品处理中，在样品中引入适当的衍生试剂，通过与目标分析物发生化学反应，使其在色谱分析中具有更好的分离性能和检测灵敏度。
反相高效液相色谱法是基于分离样品中不同化学性质的分子在反相色谱柱上的亲水作用，达到分离和定量分析的目的。
柱前衍生-反相高效液相色谱法不仅可以提高色谱分析的分离效果，还能够提高检测灵敏度和减少分析时间。
这对于复杂样品的分析具有重要意义，例如药物代谢产物、环境污染物等。
通过引入适当的衍生试剂，可以有效地改善样品的分离性能，同时提高对目标分析物的响应，从而实现快速、灵敏的定量分析。
本文将对柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理、方法和应用进行详细介绍。
首先，我们将阐述柱前衍生的基本原理和常用的衍生试剂。
然后，重点介绍反相高效液相色谱法的步骤和关键参数。
最后，我们将通过实例和应用案例来阐述柱前衍生-反相高效液相色谱法在药物分析、环境监测等领域的应用前景。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理和实践，为他们的研究和实验工作提供参考和指导。
文章结构部分应包括以下内容：本文主要分为三个部分，即引言、正文和结论。
具体结构如下：1. 引言1.1 概述本部分将简要介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的研究背景和意义。
首先，说明柱前衍生技术在分析化学领域的重要性，该技术可以通过将样品与特定试剂反应生成易于分析的化合物，从而提高液相色谱分析的敏感性和选择性。
其次，介绍反相高效液相色谱法在分析化学中的广泛应用，包括药物分析、环境监测和食品安全等领域。
高效液相色谱分析法的基本原理和基本组成
高效液相色谱分析法的基本原理和基本组成高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，缩写为HPLC）是一种在分析和细胞分离化学领域中最重要的技术手段之一。
在这项技术中，溶剂通过精密的柱型容器内部流动，而溶质则被不同的空气动力学条件（例如压力和温度）穿越柱的表面，进而实现其分离。
高效液相色谱分析法不仅可用于单一物质的分离，也可以用于实现混合物的全分析。
本文将深入介绍高效液相色谱分析法的基本原理和基本组成。
首先，高效液相色谱分析法的基本原理是通过将混合物加入适当溶剂中并在高压动力学条件下推进，而溶质会根据其在柱中的溶解度而被分离出来，实现其分离。
当混合物经过分离处理时，每一种溶质会形成一个独立的峰，最终可以根据峰的位置，形状和大小来对混合物中的溶质进行识别和测定。
此外，实现混合物分离和测定所需要的基本组成也是非常重要的。
首先，必须有一个溶剂，用来混合溶质以及推动它们到HPLC系统中。
其次，柱是HPLC系统中的基本元件，由于其表面状态的不同，可以介导溶质的转移。
最后，还必须有一个泵，通过它可以驱动溶液从柱的入口到出口的流动，以推进混合物的分离。
在开始实验测试之前，必须先根据每一种溶质的特性，设计出适当的HPLC系统，才能得到满意的分离效果。
其中，准备柱是必不可少的，而且也是最重要的一步。
柱的特性取决于其黏度、孔径和长度等参数，而且这些参数取决于柱内吸附体的种类、形状和大小。
因此，在确定柱参数之前，必须先研究柱中添加的吸附体。
除了以上介绍的基本组成，HPLC系统中还必须具备多种检测设备，以及一个控制系统和一个数据处理系统，以便对HPLC系统的运行情况进行实时监测，确保实验的结果可靠可信。
基于以上说明，可以看出，高效液相色谱分析法不仅可用于单一物质的分离，也可以用于实现混合物的测定，其基本原理和基本组成也是至关重要的。
高效液相色谱分析法由于其准确性和灵敏度而备受赞誉，它可以用于医药、食品和环境分析以及其他行业的应用，为科学研究和实践发挥着重要的作用。
高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法的原理主要包括样品的注入、流动相的输送、柱填料的分离和检测器的检测四个步骤。
首先，样品通过自动进样器被注入到色谱柱中，样品中的各种成分在色谱柱中的填料上以不同速度进行分离。
然后，流动相以高压输送，使得样品在色谱柱中快速分离。
柱填料的选择对分离效果有很大影响，通常会选择具有不同亲和性的填料来实现对不同成分的分离。
最后，检测器对分离后的成分进行检测和定量分析。
高效液相色谱法的应用非常广泛，例如在药物分析中，可以对药物的成分进行分离和检测，保证药物的质量和安全性；在环境监测中，可以对水体、大气等样品中的有害物质进行分析，保障环境的安全。
此外，高效液相色谱法还可以用于食品、化工等领域的分析。
总之，高效液相色谱法作为一种高效、灵敏的分析技术，其原理简单清晰，应用广泛。
通过对样品的分离和检测，可以快速准确地获得样品中各种成分的信息，为化学、生物、医药、环境等领域的研究和生产提供了重要的技术支持。
希望本文的介绍对您有所帮助。
PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成
PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成一、本文概述Overview of this article本文旨在介绍一种采用PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化结合高效液相色谱法（HPLC）测定地参多糖中单糖组成的方法。
地参作为一种具有丰富营养价值和药用价值的植物，其多糖成分具有显著的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
因此，对地参多糖中单糖组成的准确分析对于揭示其生物活性机制、优化提取工艺以及质量控制具有重要意义。
This article aims to introduce a method for determining the monosaccharide composition in ginseng polysaccharides using PMP (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone) pre column derivatization combined with high-performance liquid chromatography (HPLC). As a plant with rich nutritional and medicinal value, the polysaccharide components of ground ginseng have significant biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory, and anti-tumor effects. Therefore, accurate analysis of monosaccharide composition inginseng polysaccharides is of great significance for revealing their biological activity mechanisms, optimizing extraction processes, and quality control.PMP柱前衍生化是一种常用的单糖衍生化方法，通过与单糖上的羟基反应，将单糖转化为具有紫外吸收特性的衍生物，从而便于HPLC 检测。
柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
1引 言
当归多糖是当归的主要水溶性成分。药理学研究表明 [ 1, 2] , 当归多糖具有免疫调节、促进造血、抗 氧化损伤等显著生物活性。而多糖的单糖组成测定是控制多糖质量标准和提供多糖基本信息的最重要 环节。因单糖存在互变异构体、差向异构体、结构相似等特征, 而且往往同一待测样品, 如多糖、寡糖、糖 肽、糖蛋白等, 可能含有许多类型的单糖。所以, 单糖分析有其自身的特点, 必须具有高效的分离技术, 方可实现系列单糖的有效分离。
经传统的干燥过程和未经干燥过程的 PM P 柱前衍生化 H PLC 图, 图中未发现有明显吸收峰改变。 ( 3) 对多糖的含量、组成等定量分析更有意义, 因此过程几乎无糖损失, 多糖水解液可直接进行 PM P 衍生 化, 可在线大批量分析监测。
第 9期
杨兴斌等: 柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
色谱峰的各峰保留时间依次为 PMP、M an、Rha、G lcUA、GalUA、G lc、Gal、Xy l、A ra、Fuc、异亚丙基丙酮 ( M esity l ox ide) 杂质峰 [ 7] , 如图 4( a) 所示。其中, 内标 Fuc与其它单糖有很好的分离, 其作为内标是合 适的。 PMP 衍生化试剂不干扰单糖衍生物的分析, 因为其出峰时间最快; 而 M esity l ox ide杂质峰也不影 响分析结果, 因为其出峰很慢, 远远滞后于各单糖衍生物的紫外吸收峰 [ 7] 。 3. 2 多糖水解样品制备条件优化
采用 Ag ilent 1100 色谱系统。检测波长为 250 nm。柱温为室温; 流速 1. 0 mL /m in; 流动相: 溶剂 A, 15% ( V /V ) 乙腈 + 0. 05 m o l/L 磷酸缓冲液 ( KH 2PO4-NaOH, pH 6. 9) 。溶剂 B, 40% ( V /V ) 乙腈 + 0. 05 m o l/L 磷酸缓冲液 ( KH 2PO4-N aOH, pH 6. 9) ; 梯度模式: 时间梯度为: 0→ 10→ 30 m in, 相应浓度梯度为 0→ 8% → 20% 溶剂 B; 进样体积 20 LL。 2. 5 分析原理与方法 2. 5. 1 定量校正因子 以 Fuc为内标, 测定 8种单糖的定量较正因子 ( f i/ s ) 。精密称取各标准单糖并 配制成 2 mm o l/L 的母液, 用时稀释为 5个不同浓度的单糖溶液, 制备 PMP 衍生物, 并进行 H PLC 分析 ( 线性范围在 1~ 10 nm o l之间 ) 。 2. 5. 2 相关系数与回归方程 以单糖的浓度 X (W i /W s ) 与峰面积 Y (A i /A s )作图, 得回归方程与相关系 数。求出各单糖的斜率 b, 即定量较正因子 f。 f i/ s = ( W i /W s ) / ( A i /A s ) , A S, A i分别为 Fuc内标和标准单 糖的 H PLC 峰面积。 2. 5. 3 摩尔/M (M 为单糖的 分子量 ) , 所得的值之比为摩尔比, 即: R i/s = f i/ s ( A i /A s ) /M。
高效液相色谱简介
高效液相色谱简介一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。
也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速——流速为0.1~10.0 ml/min。
高效——可达5000塔板每米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
猪苓多糖的PMP柱前衍生化-HPLC指纹图谱研究
猪苓多糖的PMP柱前衍生化-HPLC指纹图谱研究作者：赖戈娜贾文玉罗思婉周昌园黎雄张娴曾星来源：《中国药房》2020年第07期摘要目的：建立豬苓多糖的柱前衍生化-高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并测定其主要单糖组分含量，为猪苓药材的质量评价提供参考。
方法：11批不同产地猪苓药材经水提醇沉、Sevage除蛋白后得到猪苓多糖。
多糖经三氟乙酸（TFA）水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化后，进行HPLC分析。
色谱柱为HypersiL BDS C18，流动相为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.84）-乙腈（84 ∶ 16，V/V），检测波长为254 nm，柱温为30 ℃，流速为1 mL/min，进样量为20 µL。
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012A版）建立11批多糖样品的指纹图谱并进行相似度评价，通过与对照品比对进行色谱峰指认，再采用SPSS 23.0软件进行聚类分析，并测定多糖中主要单糖组分的含量。
结果：11批猪苓多糖样品HPLC 指纹图谱中共呈现出3个共有峰，分别指认为甘露糖、葡萄糖和半乳糖，各批次样品的相似度均大于0.94。
聚类分析将11批多糖样品分为3类，药材编号为S1～S6、S8的样品聚为一类，药材编号为S7、S10、S11的样品聚为一类，药材编号为S9的样品单独聚为一类。
含量测定结果显示，11批样品中甘露糖含量为1.571～8.771 mg/g、葡萄糖含量为26.072～132.194 mg/g、半乳糖含量为3.420～36.593 mg/g。
结论：本研究建立的柱前衍生化-HPLC指纹图谱方法可为猪苓的药材质量评价提供参考;不同批次猪苓多糖中单糖组成相同，指纹图谱特征峰与药材的产地无明显相关性，药材之间的单糖含量存在明显差异。
关键词猪苓多糖;单糖;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮;柱前衍生化;高效液相色谱法;指纹图谱ABSTRACT OBJECTIVE： To establish pre-column derivatization-HPLC fingerprint of Polyporus polysaccharide， and to determine the contents of main monosaccharide components， so as to provide reference for quality evaluation of Polyporus umbellatus. METHODS： Polyporus polysaccharide was extracted with boiling water and precipitated by ethanol and deproteinized by Sevage from 11 batches of P. umbellatus from different producing areas. The samples were firstly hydrolyzed with trifluoro-acetic acid （TFA） and then derivatized by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone （PMP）. HPLC analysis was then conducted. The determination was carried out on HypersiL BDS C18 column with mobile phase composed of 0.1 mol/L phosphate buffer （pH 6.84）-acetonitrile （84 ∶ 16， V/V） by gradient elution at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 254 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 20 µL. The similarity of 11 batches of Polyporus polysaccharide was evaluated by using TCM Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System （2012A edition）， and the contents of main monosassharide components were detected. The peak was identified by comparing with the reference substance， and cluster analysis was performed by using SPSS 23.0 software. RESULTS： In HPLC fingerprints of the 11 batches of samples， 3 common peaks were identified， namely mannose，glucose and galactose. The similarity of all samples was above 0.94. Cluster analysis classified 11 batches of samples into three categories. S1-S6， and S8 were grouped into category 1; S7， S10 and S11 were grouped into category 2; S9 was individually grouped into one category. Results of content determination showed that the contents of mannose ranged from 1.571 to 8.771 mg/g; those of glucose ranged from 26.072 to 132.194 mg/g， and those of galactose ranged from 3.420 to 36.593 mg/g. CONCLUSIONS： Established pre-column derivatization HPLC fingerprints can provide reference for quality evaluation of P. umbellatus. The monosaccharide composition of different batches of Polyporus polysaccharide is the same; there is no significant correlation between fingerprint characteristic peak and the origin of herbs; there is significant difference in the content of monosaccharide of P. umbellatus.KEYWORDS Polyporus polysaccharide; Monosaccharide; PMP; Pre-column derivatization; HPLC; Fingerprint猪苓又名猪灵芝、野猪苓、猪屎苓、鸡屎苓，始载于《神农百草经》，是多孔菌科真菌猪苓[Polyporus umbellatus（Pers.）Fries]的干燥菌核[1]。
柱前衍生高效液相色谱法
柱前衍生高效液相色谱法（Pre-column derivatization HPLC）是一种色谱分析方法，主要用于对样品中的化合物进行衍生化处理，以提高其在色谱柱上的分离效果和检测灵敏度。
在柱前衍生高效液相色谱法中，样品首先与衍生化试剂反应，生成易于色谱柱上分离和检测的衍生物。
衍生化反应通常涉及样品中的官能团（如羟基、羧基、氨基等）与衍生化试剂的反应。
反应后的衍生物再通过色谱柱进行分离，最后用检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）进行检测。
柱前衍生高效液相色谱法的优点包括：
1. 提高分离效果：衍生化处理可以改变样品中化合物的性质，使其在色谱柱上分离得更完全。
2. 提高检测灵敏度：衍生化处理可以增加化合物在检测器上的响应信号，从而提高检测灵敏度。
3. 增加选择性：通过选择合适的衍生化试剂，可以使某些难以分离的化合物产生不同的衍生物，从而实现选择性检测。
4. 扩大应用范围：柱前衍生高效液相色谱法适用于许多不同类型的样品，包括生物样品、食品、环境样品等。
柱前衍生高效液相色谱法在药物分析、生物分析、环境监测等领域得到了广泛应用。
然而，这种方法也存在一定的局限性，如衍生化反应可能受到反应条件、试剂纯度等因素的影响，因此需要仔细优化实验条件以确保分析结果的准确性。
高效液相色谱分析原理
高效液相色谱分析原理作为基于极性流动相和非极性固定相所构成的液相色谱体系，反相液相色谱柱是通过表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，依据一般有机分子的结构中具有非极性的疏水部分，同时疏水部分越大，一般保管值越高的性质，反相液相色谱柱进行相应的工作。
为尽可能削减日常中不正确色谱操作对反向液相色谱柱的损坏，以下收集了目前对反相液相色谱柱的适用与维护注意事项：1.反相液相色谱柱在进行安装拆卸以及更换时，对接口处要拧紧但动作要轻，气力要适度，尽可能防止较强的机械振动，以躲避安装等步骤显现机床空隙。
2.温度和压力的蓦地变更和机械震动会影响反向液相色谱柱的填充情形，因此要掌控好温度以及压力的变更，在进行操作时，对流速的调整也应缓慢进行。
3.在渐渐更改溶剂的构成时，建议不要直接从有机溶剂改编为全部是水，同理也不建议从水直接全部变为有机溶剂。
4.在对反相液相色谱柱的柱内温度进行掌控时，应注意柱内是否有流动相，在柱内通入流动相后再进行升温能躲避对色谱柱的损坏。
5.对于柱内的杂质，一般得针对所使用的反相液相色谱柱是否能进行反冲，只有生产标明该款反相液相色谱柱能进行反冲时才略反冲除去留在柱头的杂质，否则反冲会使柱效降低。
6.对于流动相的选择也应考虑到固定相的性质，选择合适的流动相，以躲避固定相被破坏。
7.对基质较多而杂的样品要进行预处置或在反相液相色谱柱中连接保护柱以躲避反相液相色谱柱。
8.对于不同性质的样品，假如条件允许，建议对每一类分析配置专用的反相液相色谱柱。
9.在反相液相色谱柱使用过程中，假如压力上升，要适时处置解决。
10.在使用完反相液相色谱柱后，应对色谱分析系统进行冲洗除杂过程。
11.在对反相液相色谱柱进行保管时，应将色谱柱进行密封并在柱内充足乙腈或甲醇，防止溶剂挥发干燥。
在使用反相液相色谱柱的过程中，操作是否恰当，维护是否到位会直接影响色谱柱的使用寿命和效果，因此了解反相液相色谱柱使用与维护的注意事项非常紧要。
高效液相色谱实验原理
高效液相色谱实验原理
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种分离和分析化合物的技术方法。
它利用样品溶于流动相（通常为液体）后，在固定相（固体或涂覆在固体上的液体固定相）上进行分离。
在色谱柱中，固定相与溶剂中的成分发生相互作用，导致溶质在固定相和流动相之间发生迁移，从而实现溶质的分离。
HPLC的基本原理是通过流动相在色谱柱中进行分隔溶质。
首先，需要准备样品，并将其溶解在流动相中。
流动相被送入色谱柱内，溶质通过柱层产生相互作用，并在其中被分离。
流动相将分离的溶质从柱层向后推进，然后通过检测器进行检测。
在HPLC实验中，选择合适的固定相和流动相非常重要。
固定相常用的是有机物修饰的硅胶或聚合物，具有不同的极性和亲水性，可以选择适合分析的样品分离。
流动相可以是有机溶剂、水或它们的混合物。
根据样品的性质，可以调整流动相的成分和流速，以获得最佳的分离效果。
在HPLC实验中，还需要使用检测器对溶质进行检测。
常用的检测器有紫外-可见吸收检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
检测器可以通过测量溶质在流动相中的吸收、荧光强度或质谱特征来确定溶质的存在和浓度。
总的来说，HPLC实验的原理是利用不同成分在固定相和流动相之间的相互作用来分离和检测样品中的溶质。
通过调整固定
相、流动相和检测条件，可以获得高效准确的分离和定量分析结果。
高效液相色谱柱前衍生化
高效液相色谱柱前衍生化高效液相色谱在检测样品时最常用的是紫外检测器，为了使一些没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测，往往通过衍生化反应在这些化合物的分子中引入有强紫外吸收的基团，如2,4-二硝基苯、苯甲基、对硝基苯甲基、3,5-二硝基苯甲基、苯甲酸酯、对甲苯酰、对氯苯甲酸制、对硝基苯甲酸酯、对甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、对溴苯甲酰甲基等等，这些衍生物可被紫外检测器检测。
大多数紫外衍生反应来自经典的光度分析和有机定量分析，新的衍生化反应和衍生化试剂是随液相发展而发展的，这些反应的原理都来自有机合成，所以就要求操作者对有机合成有所了解。
但是，由于柱前衍生化是为色谱分析准备样品，处理样品的量小（mg级），所用的小型和微型反应器皿又不同于常量的有机合成，而是类似于近年来发展的微量有机合成。
紫外衍生化反应要选择反应产率高、重复性好的反应。
过量试剂和试剂中的杂质如果干扰下一步的色谱分离和检测，则在色谱进样前要进行纯化分离。
还要注意反应介质对紫外吸收的影响。
下面介绍一些经典的衍生化试剂及反应（1）苯甲酰化反应：苯甲酰氯及其衍生物--对硝基苯甲酰氯、3,5-二甲基苯甲酰氯和对甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚类化合物反应，生成紫外吸收的苯甲酸酯类衍生物；（2）2,4-二硝基氟代苯（DNFB）的反应：DNFB与醇的反应产率很低，但可与大多数伯胺、仲胺和氨基酸反应，生成强紫外吸收的苯胺类衍生物；（3）苯基异硫氰酸酯（PITC）的反应：PITC可与氨基酸反应，生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸；（4）苯基磺酰氯的反应：苯基磺酰氯可与伯胺和仲胺反应。
甲苯磺酰氯可与多氨基化合物反应，不仅能提高它们的检测灵敏度，还可改变HPLC的分离度。
（5）有机酸的酯化反应：有机酸很容易与酰溴基反应生成酯，常用的酰溴基试剂有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、对溴基苯甲酰溴和对硝基苯甲酰溴等；酯化反应在极性溶剂（如乙腈、丙酮或四氢呋喃）中进行，有时需要加催化剂，如冠醚加钾离子、二乙胺或N-二异丙基胺等。
高效液相色谱原理
高效液相色谱法（HPLC）一、方法原理1、液相色谱法概述高效液相色谱分析法其工作流程为：高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导人，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理和保存。
HPLC仪器的基本结构2、高效液相色谱法的特点（HPLC）与经典柱色谱原理相同，是由液体流动相将被分离混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异来进行分离。
由于高压输液泵、高灵敏度检测器和高效固定相的使用，提高了柱效率，降低了检出限，缩短了分析时间。
特点是选择性高、分离效能高、分析速度快的特点。
高沸点有机物的分析、离子型化合物、高分子化合物、热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质，弥补了气相色谱法的不足。
高效液相色谱法与气相色谱法相比，各有所长，互相补充。
如果能用气相色谱法分析的样品，一般不用液相色谱法，因为气相色谱法分析速度更快、更方便、成本更低。
3、高效液相色谱法的固定相和流动相（1）固定相表面多孔型和全多孔型两大类。
（2）流动相（淋洗液）流动相的选择对改善分离效果产生重要的辅助效应。
从实用，选用的流动相具有廉价、易购的特点外，还应满足下列要求：①与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。
②高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。
③与所用的检测器相匹配。
④应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。
⑤具有低的黏度（可减少溶质的传质阻力，提高柱效）和适当低的沸点。
⑥应避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全。
液相色谱法中常用的流动相有正己烷、正庚烷、甲醇、乙腈等。
4、高效液相色谱法的主要类型（1）液—固吸附色谱法①分离原理：基于各组分吸附能力的差异来进行混合物分离的。
②固定相：极性和非极性两种。
极性固定相：硅胶、氧化镁。
高效液相色谱仪的工作原理
色谱图示例
硅胶层析后活性样品的液相分离图谱
操作过程中应注意的事项
• 流动相 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸 水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时 注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2 天），防止长菌变质； 3、 使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用 流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于 混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口 位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、 C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存 放水相流动相。
特点：对电负性物质（例如：卤化物,有机汞，有机 氯及过氧化物，金属有机物，硝基、甾类化合物 等）有很高的灵敏度。属非破坏性检测器。
气相色谱的应用范围
• 卫生防疫、食品卫生、环境检测 • 质量监督、石油化工、精细化工 • 农药制药、矿山等行业及科研。
气相色谱的应用
• 在石油化学工业中大部分的原料和产品都可采用气相色谱 法来分析；
气相色谱法的特点
（1）分离效能高。对物理化学性能很接近的复杂混 合物质都能很好地分离，进行定性、定量检测。有 时在一次分析时可同时解决几十甚至上百个组分的 分离测定。 （2）灵敏度高。能检测出ppm级甚至ppb级的杂质含 量 （3）分析速度快。一般在几分钟或几十分钟内可以 完成一个样品的测定。 （4）应用范围广。气相色谱法可以分析气体、易挥 发的液体和固体样品。就有机物分析而言，应用最 为广泛，可以分析约20%的有机物。此外，某些无机 物通过转化也可以进行分析。
根据色谱流出曲线上得到的每个峰的保留时间， 可以进行定性分析，根据峰面积或峰高的大小，可以 进行定量分析。
气相色谱仪的常用检测器
• 1.TCD（热导检测器） • 2.FID（氢火焰离子化检测器） • 3.FPD（火焰光度检测器） • 4.NPD（氮磷检测器） • 5.ECD（电子捕获检测器）
pmp柱前衍生法
pmp柱前衍生法PMP柱前衍生法PMP（Project Management Professional）是指项目管理专业人员，具有国际认可的项目管理资格证书。
在项目管理中，柱前衍生法是一种常用的项目控制方法之一。
本文将重点介绍PMP柱前衍生法的概念、原理和应用。
一、概念PMP柱前衍生法是一种基于柱前法的项目控制方法。
柱前法是指在项目执行过程中，根据项目的进度、成本和质量等目标，通过对关键路径进行分析和优化，确保项目能够按时、按质、按量完成。
而柱前衍生法则是在柱前法的基础上，通过对项目关键路径的前置任务进行分析和调整，以提前发现和解决可能影响项目进度的问题。
二、原理PMP柱前衍生法的原理主要包括以下几个方面：1. 确定项目关键路径：首先需要对项目的工作流程进行分解，确定各个任务的前置关系和持续时间。
通过网络计划和关键路径法，可以分析出项目的关键路径，即项目的完成时间最长的路径。
关键路径上的任务对项目的进度影响最大，因此需要重点关注。
2. 分析关键路径的前置任务：对于关键路径上的任务，需要进一步分析其前置任务。
即分析该任务所依赖的前置任务是否存在延误或风险，以及前置任务完成的质量是否符合要求。
如果发现前置任务存在问题，可能会导致关键路径上的任务无法按时完成。
3. 调整前置任务的执行顺序：根据前置任务的分析结果，可以适当调整其执行顺序，以减少关键路径上的风险和延误。
例如，可以提前开始某些前置任务，或增加资源投入，以缩短任务的持续时间。
通过优化前置任务的执行，可以有效控制关键路径上的风险，确保项目能够按时完成。
三、应用PMP柱前衍生法在项目管理中具有广泛的应用。
以下是几个常见的应用场景：1. 项目进度控制：通过对关键路径的前置任务进行分析和调整，可以及时发现和解决可能影响项目进度的问题。
例如，如果发现某个前置任务存在延误风险，可以提前调整资源，加快任务的执行速度，以确保关键路径上的任务能够按时完成。
2. 风险管理：在项目执行过程中，可能会出现各种风险。