叶绿素a测定
叶绿素-a测定
叶绿素-a的测定方法原理（荧光分光光度法）用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。
试剂及其配置1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。
2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。
3、盐酸：=1.18g/ml4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。
5、硅胶仪器及设备1、荧光计2、冰箱3、离心机4、电动吸引器5、过滤装置6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜7、具塞离心管：容量10ml8、干燥器9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml11、定量加液器：容量10ml12、镊子一般实验室常用设备分析步骤1、样品制备量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.2、样品提取将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。
若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。
3、样品离心离心速度：（3000-4000）r/min离心时间:10min4、样品测定荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。
将提取的上层提取液注入测定池。
选择相应量程，测定样品的荧光值R b。
加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。
5、仪器校正用标准叶绿素-a校正。
用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
叶绿素a的测定
The determination of chlorophyll a
第八组：四缺一小组
实验目的与意义
初步了解a的测定的原理和常规测 定方法 通过实验水体富营养化水样的前处 理的方法 熟练掌握抽滤装置及分光光度计的 使用
实验原理
浮游植物的主要光合色素是叶绿素，常见的有叶绿素a、b和c.叶绿素a存 在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1~2%是估算浮游植物生物量的 重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物量的重要指标而被 广泛应用。 浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效 液相色谱法（HPLC法）、荧光光度计法和分光光度计法等。高效液相色谱法 能够很精确地测定各种光合色素的含量，但由于仪器昂贵，分析操作步骤繁琐， 一般不能用于野外大量样品的快速分析。荧光光度计也能够精确地测定叶绿素 a的含量，特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受 其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。因此， 分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。 在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和 乙醇法等，再根据比色所用的波长，又分为单色法和多色法（例如单色丙酮法 和四色丙酮法）等。主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。尽管 丙酮现在仍广泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝 藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。 不过，甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为 现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。超声波破碎法因快速、提取效率高等特点 也被研究者所青睐。
时间管理
时间就像海绵里的水，只要愿挤总还是有的! -鲁迅
叶绿素a测定仪使用方法
叶绿素a测定仪使用方法简介叶绿素是一种广泛存在于光合生物中的生物色素，其结构主要由两个部分组成：色素分子和中央离子镁离子（Mg2+）。
其中，叶绿素a是光合作用中最重要的光合色素之一。
叶绿素a的含量检测是研究光合作用强度和生产力的重要手段。
而叶绿素a测定仪可以通过测量植物样品中叶绿素a的吸光度来确定其含量。
本文将介绍叶绿素a测定仪的使用方法。
准备工作所需材料•叶绿素a测定仪•磷酸缓冲液•丙酮•高纯度乙醇•点滴管•显微量移液管•水浴•紫外-可见分光光度计设置光度计首先，需要设置光度计的检测波长。
由于叶绿素a的最大吸收波长为665 nm，因此需要将光度计的检测波长设置为665 nm。
1.打开光度计，在主界面中找到“波长”或“WL”一栏；2.按下调节键（通常是▲/▼）将波长设置为665 nm；3.关闭显示器保护功能（通常按“mode”键）。
注意：在设置波长后，需要进行零点校正。
具体方法请参考光度计的使用说明书。
实验步骤制备样本1.取出所需数量的植物样品，并洗净水分；2.将样品粉碎，并加入适量的磷酸缓冲液；3.混合均匀后，放入80℃水浴中加热10-15分钟，使叶绿素a脱离蛋白质和叶片结构；4.将样品离心分离出上清液，即可进行下一步操作。
取样与添加试剂1.取出约2 mL的上清液，并加入适量的丙酮，使样品溶解；2.用高纯度乙醇将测量池清洗干净，加入约2 mL的丙酮；3.加入1-2滴磷酸缓冲液，搅拌均匀；4.将样品溶液加入测量池中，搅拌均匀。
测量吸光度1.将测量池放入光度计中心；2.关闭图像显示器保护功能；3.按下“测量”键，记录测量值。
注意：每次测量前都需要进行零点校准。
具体方法请参考光度计的使用说明书。
计算结果计算叶绿素a浓度将所记录的吸光度值（A665）代入下列公式：叶绿素a浓度（mg/L）=8.02 × A665计算叶绿素a含量将样品体积（mL）乘以叶绿素a浓度（mg/L），即可得到样品中叶绿素a的含量（mg）。
浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定地表水是指地球表面流动或静止的水体，是人类生活和生产所必需的重要资源之一。
地表水的质量直接关系到人类的健康和生存环境，其中叶绿素a是一种能够反映水体叶绿素含量的重要指标。
本文将对地表水叶绿素a的测定进行浅析，以期为相关工作者提供一定的参考。
一、地表水叶绿素a的概述叶绿素a是光合作用中最主要的光合色素，也是植物和浮游植物的绿色素。
它是一种重要的生物标志物，是测定水质的重要指标之一。
叶绿素a的含量可以反映水体的营养盐含量、浊度和有机物质等。
一般情况下，水体中含有叶绿素a的浓度越高，其水质也就越差。
测定地表水中叶绿素a的含量对于评价水质具有重要意义。
二、地表水叶绿素a的测定方法1. 比色法比色法是测定叶绿素a含量的常用方法之一，可以根据样品的吸光度值来计算出叶绿素a的浓度。
具体测定步骤为：首先将样品经过预处理后，用特定的波长的光源辐射，测出样品的吸光度值，然后根据已知的标准曲线来计算叶绿素a的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精密准确的测定方法，通过色谱柱的分离和检测系统的测定，可以快速准确地测定出叶绿素a的含量。
这种方法的优点是测定结果准确可靠，可以应用于对于叶绿素a的精确测定。
3. 荧光法荧光法是一种快速灵敏的测定方法，通过叶绿素a在光照下的荧光特性来快速准确地测定其含量。
这种方法的优点是操作简便，结果迅速，适用于对叶绿素a含量的快速筛查。
三、地表水叶绿素a的影响因素1. 光照条件光照条件是影响叶绿素a含量的重要因素之一，充足的光照可以促进叶绿素a的生物合成，有利于提高其含量。
2. 营养盐含量水体中的营养盐含量是影响叶绿素a含量的关键因素之一，过高或过低的营养盐含量都会影响叶绿素a的生物合成。
3. 温度水体中的温度也会对叶绿素a的含量产生一定的影响，适宜的温度条件有利于叶绿素a的稳定合成和积累。
4. pH值水体的酸碱度也会对叶绿素a的含量产生一定的影响，过高或过低的pH值都会影响叶绿素a的生物合成和稳定性。
水质 叶绿素a 的测定 荧光分光光度法
标题：水质中叶绿素a的测定——荧光分光光度法一、概述水是生命之源，保持水质清洁对人类健康和生态环境至关重要。
叶绿素a是植物和浮游生物体内的主要叶绿素成分，它对于水体中的生物和化学过程具有重要影响。
对水体中叶绿素a的测定具有重要意义。
在众多叶绿素测定方法中，荧光分光光度法以其快速、灵敏、准确的特点而受到广泛关注。
二、荧光分光光度法原理及优势1. 荧光分光光度法原理荧光分光光度法是通过叶绿素a在特定激发光波长下产生荧光信号，并测定荧光光谱的强度来间接测定叶绿素a的浓度的一种方法。
其原理是叶绿素a在特定波长范围内吸收光线后发生激发态转变为基态过程中发射荧光。
通过检测叶绿素a的荧光强度，可以推断水体中叶绿素a的浓度。
2. 荧光分光光度法优势a. 灵敏度高：荧光分光光度法对叶绿素a含量的检测具有高灵敏度，能够在较低浓度范围内进行准确测定。
b. 非破坏性：该方法无需对样品进行破坏性处理，不影响样品原有特性，适用于连续监测和长期调查。
c. 快速准确：荧光分光光度法测定简单快速，结果准确可靠。
三、荧光分光光度法测定叶绿素a的步骤1. 样品采集样品来源于自然水体或实验室模拟水体。
应在样品收集后尽快进行实验分析，或进行样品的冷冻保存。
2. 仪器调试根据仪器操作手册调试荧光分光光度仪，确定最佳激发波长和检测波长。
3. 样品处理将样品进行预处理，如滤过滤膜去除颗粒物，或使用溶解剂提取叶绿素a。
4. 校准仪器利用标准叶绿素a溶液校准荧光分光光度仪，确定荧光强度和叶绿素a浓度的线性关系。
5. 测定样品放置校准后的仪器测定样品荧光强度，根据标准曲线计算叶绿素a 的浓度。
四、荧光分光光度法在水质监测中的应用荧光分光光度法在水质监测中具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 监测水体富营养化程度：叶绿素a是水体富营养化的重要指标之一，荧光分光光度法可以快速准确地测定水体中叶绿素a的含量，从而评估水体富营养化程度。
2. 生态环境评估：荧光分光光度法可对水体中微生物的活性和生态环境进行评估，对水体生物多样性和生态平衡的研究具有重要意义。
叶绿素A的测定
叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于 水，但溶于有机溶剂（通常采用丙 酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈 黄绿色，二者同时被提取出来。在可 见光的范围，两者分别在663nm和 645nm处波长有最大吸收。
叶绿素A的测定方法
利用分光光度法，将所得的上清液在 分光光度计上，用1cm光程的比色皿， 分别读取在 750nm,663nm,645nm,630n m波长处的吸光度，并以90%的丙 酮作空白吸光度测定，对样品吸光度 进行校正。
叶绿素a的测定叶绿素a的测定方法叶绿素a的测定国标叶绿素a叶绿素a测定方法叶绿素a的测定标准叶绿素a的测定公式水体叶绿素a的测定叶绿素含量的测定叶绿素含量测定
目录
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叶绿素A的测定原理
叶绿素A的测定方法
叶绿素A的测定步骤
叶绿素A的测定影响
叶绿素A的测定原理 有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 的叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用 相关公式计算其含量。 叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前 者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素 B分子式为C55H70O6N4Mg。
将所测的对应波长的吸光度，代入如 下公式计算： 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630D750)*V1
式中:D为所测的吸光度 V为水样体积 V1为提取液定容后的体积 L为比色皿光程
叶绿素A的测定步骤
测定叶绿素A时，样品应该尽快测定， 防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温 弱光条件下进行。
控制好提取时间，使得提取更充分，保 证较高的提取效率。
这个实验叫做叶绿素A的测定方法探 讨，实验误差较大，最佳的方法还在 不断地深入研究中，有兴趣的同学可 以查阅相关资料，开动大脑马达，提 出自己的见解。
叶绿素a的测定原理
叶绿素a的测定原理叶绿素a是一种存在于植物和藻类细胞叶绿体中的绿色色素，它起到了光合作用中接受和传递光能的关键作用。
测定叶绿素a的浓度对于研究光合作用的机制以及评估植物和藻类的生长状态具有重要意义。
在实验室中，存在多种方法来测定叶绿素a的浓度，其中包括光度法、荧光法和高效液相色谱法。
下面将重点介绍常用的光度法测定叶绿素a的原理和步骤。
光度法是一种通过测量溶液对特定波长的光的吸收来确定溶液中某种组分浓度的方法。
对于叶绿素a的测定，通常使用的波长为650nm或663nm。
叶绿素a在这两个波长的光下有很强的吸收能力，而溶液中的其他组分对该波长的光吸收较小。
因此，测定叶绿素a的浓度可以通过测量溶液对650nm或663nm光的吸光度来间接确定。
下面是光度法测定叶绿素a浓度的一般步骤：1. 样品制备：将待测样品中的叶绿素a提取到有机溶剂中，一般使用甲醇、乙醇或二氯甲烷等极性较强的有机溶剂作为提取剂。
提取的方法可以根据需求选择，包括搅拌法、超声波法或研磨法等。
提取过程需要避光，以防叶绿素a被光降解。
2. 溶液制备：将提取出的叶绿素a溶解在适当的溶剂中，一般使用甲醇或乙醇等有机溶剂。
溶液中的叶绿素a浓度可以通过分光光度计测定吸光度来确定。
3. 吸光度测定：使用分光光度计，在650nm或663nm的波长下测量样品吸光度。
为了获得准确的测量结果，一般需要对比测量待测样品和纯溶剂的吸光度，以消除对溶剂的吸光干扰。
4. 计算叶绿素a浓度：根据比色法或校正曲线法，将测得的吸光度转换为叶绿素a的浓度。
比色法是通过比较待测样品吸光度与已知浓度叶绿素a标准溶液吸光度的关系，进行定量测定。
校正曲线法是首先制备不同浓度的叶绿素a标准溶液，然后测定它们的吸光度并绘制出吸光度与浓度的标准曲线，通过待测样品的吸光度在标准曲线上插值得到其浓度。
需要强调的是，在测定叶绿素a浓度时，有几个实验注意事项需要注意。
首先，提取过程需要避光，以免叶绿素a被光降解，影响测量结果。
叶绿素A测定复习试题
叶绿素a测定复习试题一、填空题1.叶绿素a的测定方法有和，环境监测(生物)技术规范中规定用。
答：分光光度法；荧光光度法；分光光度法；2.地表水环境质量标准(GHZB1-1999)中，对控制湖泊水库富营养化的特定项目之一叶绿素a作了明确规定：Ⅰ类水质的标准值为，Ⅱ类水质的标准值为，Ⅲ类水质的标准值为，Ⅳ类水质的标准值为，Ⅴ类水质的标准值为。
答：≤0.001mg/L；≤0.004mg/L；≤0.01mg/L；≤0.03mg/L；≤0.065mg/L。
3.进行生物样品污染物测定的样品处理可概括为二个过程：第一步是将样品、、；第二步是将前一步处理过的样品以消除干扰，提高被测组分的浓度。
答：分离；纯化；浓缩；分解消化或提取。
4.经丙酮浸取含有叶绿素a的溶液，以溶液为参比，在波长、、、下测定吸光度。
在波长测定丙酮溶液的空白值。
丙酮溶液空白值应不大于。
答：丙酮；663nm；645nm；630nm；750nm；0.05。
5.经离心后的样品上清液，在750nm处测定吸光度，用以校正提取液的，当测定用1cm比色皿，吸光度超过时，提取液应。
答：浊度；0.005；重新离心。
二、问答题1. 控制叶绿素a指标值的意义是什么？答：叶绿素a是反映水体富营养化的一个重要指标。
控制叶绿素a就在于控制富营养化和藻类生物量，从而揭示湖库富营养化发生的内在实质。
2. 叶绿素a的涵义是什么？答：指水中藻类具有光合色素的叶绿素。
3.什么叫富营养化？答：营养物质特别是含氮和磷的化合物，在淡水或盐水中的富集。
富营养化加速了藻类和较高等植物的生长。
4.评定水质富营养化的几种类型标准是什么？答：参照国际经济合作与发展组织(OECD)规定和关于评定湖泊富营养化状态的叶绿素a划分标准：以≥78μg/L为重富营养型；11—78μg/L为富营养型；3.0—11μg/L为中营养型；＜3.0μg/L为贫营养型。
5.用于叶绿素a测定的水样应如何保存？答：每升水样加1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。
HJ897-2017水质-叶绿素a的测定验证报告
方法验证报告项目名称：水质叶绿素ａ的测定方法名称：《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况实验室检测人员已通过标准《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到公司技术负责人授权上岗。
表1参加验证人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2主要仪器基本情况1.3 检测用试剂情况表3主要试剂及溶剂基本情况1.4 环境设施和条件情况实验室具有校准合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1方法原理将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定提取液的吸光度，根据公式计算水中叶绿素ａ的浓度。
2.2.样品的采集按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494中的相关规定进行样品的采集。
样品的采集用有机玻璃采水器采集水面下0.5m样品，采样体积为1L，在样品中加入1ml碳酸镁悬浊液，以防止酸化引起色素溶解。
2.2.样品的保存样品采集后应在0℃-4℃避光保存、运输，24h内运送至检测实验室过滤（若样品24h 不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输）。
2.3试样的制备2.3.1过滤在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜。
确定取样200ml（根据水体的营养状态确定取样体积富营养和中营养过滤体积为100-200ml，贫营养过滤体积为500-1000ml），用量筒量取200ml混匀的样品，进行过滤，最后用少量的蒸馏水冲洗滤器壁。
过滤时负压不超过50kpa，在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想一、前言在环境科学研究领域，对于湖泊水质的监测和评估一直是一个重要课题。
其中，富营养化湖泊中藻量的测定是其中的关键环节之一。
在现有的测定方法中，叶绿素a法作为一种常用的测定手段，被广泛运用于湖泊水质监测中。
本文将针对叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的相关概念和方法进行深入探讨，以期能够从多个角度全面理解这一测定方法的意义和应用。
二、叶绿素a法测定藻量的原理和方法1. 叶绿素a的作用和意义叶绿素a是植物和藻类进行光合作用的关键色素之一，其含量可以反映藻类的生物量和分布情况。
通过测定叶绿素a的含量，可以间接推算出藻类的生物量，从而评估湖泊水体中藻类的丰富程度和富营养化程度。
叶绿素a法成为了一种常用的测定富营养化湖泊中藻量的手段。
2. 叶绿素a法的测定步骤叶绿素a法的具体测定步骤主要包括样品采集、叶绿素提取、叶绿素含量的测定和数据处理等过程。
通过精确的实验操作和数据处理，可以获得准确的叶绿素含量数据，从而推算出藻类的生物量，进而对湖泊水质进行评估和监测。
三、叶绿素a法在富营养化湖泊中的应用1. 优势和局限性叶绿素a法作为测定湖泊藻量的常用方法，具有操作简便、成本低廉、结果快速等优点，因而在一定程度上适用于大规模的水质监测工作。
但叶绿素a法也存在一定的局限性，例如受光照和水体透明度影响大等。
2. 感想和展望通过对叶绿素a法的研究和实践，我深切感受到这一方法的重要性和局限性。
在今后的工作中，我愿意进一步探索和改进叶绿素a法，在提高测定精度的也能够更好地适用于不同类型的湖泊和藻类群落。
四、总结通过本文的探讨，我们全面了解了叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的原理、方法和应用。
也对这一方法的优势、局限性以及未来的发展方向有了更深入的认识。
在今后的工作中，希望能够结合实际情况，不断优化和改进叶绿素a法，并且结合其他测定方法，以期能更准确地评估湖泊的水质和生态环境。
（以上内容仅供参考，具体文章内容仍需根据实际情况进行撰写）：五、叶绿素a法的优势和局限性叶绿素a法作为一种常用的测定湖泊中藻量的方法，具有诸多优势。
叶绿素a测定
实验三富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。
2、比色杯（1cm；4cm）。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。
9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。
采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。
5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定地表水中叶绿素a的测定是评价水质的重要方法之一。
叶绿素a是植物及浮游生物中广泛存在的一种光合色素，它在光合作用中具有重要的作用，同时叶绿素a在水中主要来源于植物和藻类的生长。
测定地表水叶绿素a的方法有很多，常用的方法包括光谱法、高效液相色谱法（HPLC）、荧光法和叶绿素-a水柱吸收光谱法等。
光谱法是一种比较简单的方法，它通过测定地表水样品在特定波长下的吸光度来计算叶绿素a的浓度。
具体操作步骤为：将水样过滤，去除颗粒物质；然后，用乙醇溶解过滤后的样品，使叶绿素a溶解在乙醇中；接下来，利用分光光度计测定溶液在665nm和750nm 波长下的吸光度，根据比例关系计算叶绿素a的浓度。
HPLC方法是一种精确度较高的测定方法，它利用液相色谱仪分离地表水中的叶绿素a，并通过检测峰面积或峰高来计算叶绿素a的浓度。
这种方法需要较为复杂的仪器设备和技术操作，适用于高精度测定和研究。
荧光法是另一种常用的测定方法，它利用地表水样品中叶绿素a的荧光特性来计算其浓度。
荧光法具有操作简单、快速等优点，适用于大规模水质监测。
叶绿素-a水柱吸收光谱法是一种用来测定地表水中叶绿素a浓度的新方法。
该方法通过利用叶绿素a与纳米粒子共吸附在水柱上的原理，实现对地表水样品中叶绿素a浓度的测定。
这种方法具有简单、快速、灵敏度高等特点，是一种有潜力的测定方法。
测定地表水叶绿素a的方法有很多种，每种方法都有其优点和不足。
在实际应用中，可以根据具体需要选择合适的方法进行分析，以评价水体中叶绿素a的浓度，从而了解水体的富营养化程度和藻类生长状况，更好地保护和管理水资源。
叶绿素a测定原理
叶绿素a测定原理叶绿素a测定原理是一种用于测量植物叶片中叶绿素a含量的方法。
叶绿素a 是一种绿色植物色素，它在光合作用中起着重要的作用。
通过测定叶片中叶绿素a的含量，可以了解植物叶片的光合效率和生长状态，对研究植物生理和生态学过程具有重要意义。
测定叶绿素a的原理主要基于叶绿素a的光谱吸收特性。
叶绿素a对可见光波段具有很高的吸收能力，特别是对于蓝色和红色光有较高的吸收峰。
测定叶绿素a含量的方法主要基于两种原理：叶绿素a的吸收光谱特性和叶绿素a与其他光敏色素的色素比。
第一种方法是利用叶绿素a的吸收光谱特性进行测定。
吸收光谱是指物质对于不同波长的光的吸收程度。
叶绿素a在波长范围为400-700纳米的可见光区域内吸收光线，特别是在430-450纳米和660-680纳米的波长区域具有高峰吸收。
通过测定叶绿素a溶液或植物叶片对不同波长光线的吸收程度，可以建立叶绿素a的吸光度与其浓度之间的关系。
一般采用分光光度计或分光光度计对吸光度进行测量，通过测量的数据来计算叶绿素a的浓度。
第二种方法是采用叶绿素a与其他光敏色素的色素比进行测定。
在叶绿素a与其他光敏色素的比例固定的情况下，可以通过测定叶绿素a与其他光敏色素之间的比例来间接推断叶绿素a的含量。
其中，常用的方法是使用高效液相色谱法（HPLC）测定叶绿素a与叶绿素b的比例，从而推算出叶绿素a的含量。
该方法的优点是准确性较高，但需要使用昂贵的仪器设备和耗时的操作。
此外，还有一些其他的衍生方法可以用于叶绿素a的测定，例如光学方法、荧光分析、近红外光谱法等。
这些方法在测定叶绿素a含量方面具有一定的优势，可以根据实际需求选择适合的方法进行测定。
总之，叶绿素a测定方法的原理主要基于叶绿素a的光谱吸收特性和叶绿素a 与其他光敏色素的色素比。
通过选取合适的测定方法和仪器设备，可以准确地测定出植物叶片中叶绿素a的含量，为植物生理和生态学研究提供重要数据。
水质 叶绿素 a 的测定 分光光度法
水质叶绿素 a 的测定分光光度法以水质叶绿素 a 的测定分光光度法为标题叶绿素是植物和藻类等光合生物中的一种重要色素，它在光合作用中起到接收和转换光能的作用。
因此，叶绿素的测定对于研究光合作用、水质监测以及环境保护等方面具有重要意义。
本文将介绍一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法——分光光度法。
分光光度法是通过测量样品在不同波长下的吸光度来确定其中叶绿素 a 的含量。
首先，我们需要准备一定浓度的叶绿素 a 标准溶液作为参照物。
然后，将待测样品中的叶绿素 a 提取出来，通常采用酒精提取法或醚提取法。
提取后的溶液中，叶绿素 a 会表现出特定的吸光度谱，即在特定波长下吸收特定的光线。
接下来，我们需要使用分光光度计来测定叶绿素 a 的吸光度。
首先，调节分光光度计到叶绿素 a 吸收峰值波长，通常为665 nm。
然后，将标准溶液和待测样品溶液分别放入光度计的比色皿中，设置比色皿为空白。
在特定波长下测量样品的吸光度，并记录下数值。
在得到吸光度数值后，我们可以利用标准曲线来计算出样品中叶绿素 a 的浓度。
标准曲线是通过制备一系列已知浓度的叶绿素 a 标准溶液，并测定它们的吸光度得到的。
通过绘制标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度数值，在曲线上找到相应的浓度值。
需要注意的是，分光光度法测定叶绿素 a 的时候，样品中可能存在其他物质的干扰，这会导致测定结果的误差。
为了减小干扰，我们可以采用去色处理，即利用活性炭或其他吸附剂去除样品中的色素。
此外，为了保证测定结果的准确性，我们需要进行多次测定，并计算平均值。
总结起来，分光光度法是一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法。
通过分光光度计测量样品在特定波长下的吸光度，并利用标准曲线计算出叶绿素 a 的浓度。
该方法简单、快速，并且具有较高的准确性和重复性。
在水质监测、环境保护和光合作用研究等领域，分光光度法都发挥着重要的作用。
通过准确测定叶绿素 a 的含量，我们可以更好地了解光合生物的生长状况和环境状况，为相关研究和应用提供可靠的数据基础。
叶绿素a的测定
叶绿素a的测定
叶绿素a是植物细胞中的主要叶绿素类型之一，它在光合作用中起着关键作用。
测定叶绿素a的含量可以揭示植物的光合作用活性和叶片的健康状态。
以下是一种常用的测定叶绿素a的方法：
1. 取少量新鲜的叶片样品。
2. 将叶片样品置于琼脂杯中，加入适量的乙醇。
3. 使用玻璃棒或研钵对叶片进行研磨，使叶绿素a溶解在乙醇中。
4. 将溶液转移到离心管中，使用超高速离心将样品离心，以去除残留的植物细胞。
5. 将上清液取出，加入一定体积的乙醇使溶液体积为10mL。
6. 使用光度计将溶液的吸光度测量在多个波长下，包括
663nm和645nm。
7. 使用下列公式计算叶绿素a的浓度：叶绿素a (mg/L) = (12.25 * A663 - 2.79 * A645) * V/M
其中，A663和A645分别为溶液在663nm和645nm处的吸光度，V为体积（mL），M为叶片的质量（g）。
8. 根据测定结果，可以计算叶绿素a的浓度或相对含量。
需要注意的是，以上方法是一种常见的叶绿素a测定方法，具体测定步骤和浓度计算公式可能会有所不同。
因此，在具体操作时，建议参考实验方法或使用商业化的叶绿素测定试剂盒，以确保准确性和可重复性。
叶绿素a的测定
叶绿素a的测定叶绿素a是一种广泛存在于植物、藻类和某些细菌中的绿色色素。
它在光合作用中起着至关重要的作用，能够吸收光能并将其转化成化学能，为生物体提供能量。
因此，对叶绿素a的测定具有重要的科研和应用价值。
叶绿素a的测定方法有很多种，其中比较常用的包括光度法、荧光法和高效液相色谱法等。
下面我将分别介绍这几种测定方法的原理和步骤。
光度法是一种通过测量叶绿素a溶液对特定波长光线的吸光度来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液与一定体积的溶剂混合均匀，然后使用分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度。
根据比色法原理，吸光度与溶液中叶绿素a的浓度成正比，通过与标准曲线对比，可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。
荧光法是一种通过测量叶绿素a溶液在受到激发光后发射的荧光强度来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液置于荧光测量仪器中，通过激发光源激发溶液中的叶绿素a分子，叶绿素a分子吸收光能后会发出特定波长的荧光。
测量仪器会记录下荧光的强度，根据荧光强度与叶绿素a浓度之间的关系，可以确定待测溶液中叶绿素a的浓度。
高效液相色谱法是一种通过将待测叶绿素a溶液进行色谱分离并测定其峰面积来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液注入高效液相色谱仪中，通过色谱柱的分离作用，将溶液中的叶绿素a与其他组分分离开来。
然后，通过检测器检测叶绿素a的吸光度，并计算出其峰面积。
根据标准曲线可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。
除了上述几种常用的测定方法外，还有一些其他的测定方法，如超声波法、电化学法等。
这些方法在特定的研究领域或实际应用中具有一定的优势和适用性。
叶绿素a的测定是研究光合作用和植物生长发育等领域的基础工作。
不同的测定方法在原理和步骤上存在一定的差异，但都能够准确地测定叶绿素a的浓度。
科研工作者和应用人员可以根据实际需要选择合适的测定方法，并结合其他相关指标对叶绿素a进行综合分析和评估，为科学研究和实践应用提供有力的支撑。
浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定叶绿素a是植物体中最为丰富的一种叶绿素，也是地表水中微藻类和其他植物生物的重要代谢产物之一。
测定地表水中叶绿素a的含量，对于了解水体中植物生物的生长情况、水体的富营养化程度以及水体的生态环境质量具有重要意义。
本文将对地表水叶绿素a的测定方法进行简要分析和总结，以期为相关研究和监测工作提供参考。
一、叶绿素a的特点叶绿素a是叶绿素家族中的一员，具有吸收蓝光和红光的能力，是植物进行光合作用的重要色素。
它能够将太阳光能转化为植物生长所需的化学能，是植物体内的重要光合色素。
在地表水中，微藻类和其他植物生物通过光合作用产生叶绿素a，因此在水体中叶绿素a的含量可以反映水体中植物生物的生长繁衍情况。
二、叶绿素a的测定方法目前，常用的地表水叶绿素a的测定方法主要包括光谱法、高效液相色谱法、荧光法和光学密度法等。
这些方法各有特点，可以根据具体情况进行选择。
1. 光谱法光谱法是通过光谱仪测定地表水样品在不同波长下的吸光度，从而间接测定叶绿素a的含量。
利用叶绿素a在特定波长下的吸收峰进行定量分析，可以快速准确地测定叶绿素a的含量，是一种常用的测定方法。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪进行测定，通过色谱柱对叶绿素a进行分离和定量。
该方法测定结果准确可靠，但操作较为繁琐，需要较长的分析时间和专业的操作技能。
4. 光学密度法光学密度法是通过光学密度计测定地表水样品的光学密度，进而间接测定叶绿素a的含量。
该方法简单快捷，适用于大批量样品的测定。
三、叶绿素a的测定技术和注意事项在进行地表水叶绿素a的测定时，有一些技术和注意事项需要特别关注。
1. 样品采集和保存在进行地表水叶绿素a的测定前，需要进行水样的采集和保存。
采集水样时要选择代表性的采样点，并根据需要确定采样深度。
采样后要将水样置于4℃的冰箱中保存，避免光照和高温，防止叶绿素a的降解。
2. 样品处理对于含有悬浮颗粒的地表水样品，需要进行沉淀和过滤处理，去除悬浮颗粒和杂质，以保证测定结果的准确性。
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实验三 富营养化湖中藻量的测定（叶绿素 a 法） 、实验目的
富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中
10微克 /升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素 a 浓度，以考查其富营 养化情况。
二、器材与用品
分光光度计（波长选择大于 750nm ，精度为0.5— 2nm ）。
蔡氏滤器；滤膜（ 0.45 微克，直径 47mm ）。
的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素
a 浓度常大于
1、 2、 比色杯（ 1cm ； 4cm ）。
3、 台式离心机（ 3500r/min ）
4、 离心管（ 15ml 具刻度和塞子） ；冰箱
5、 匀浆器或小研钵。
6、 7、 真空泵（最大压力不超过 300kpa ）。
MgC03悬液：Ig MgC03细粉悬于100ml 蒸馏水中。
90％的丙酮溶液： 90 份丙酮＋ 10 份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各 2L.
三、方法和步骤
8、 9、
1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml ,池塘
300ml 。
采样点及采水时间同“浮游植物” 2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤
剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素
a 分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取 500ml 减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入 0.2ml MgCO 3
悬液、摇匀直至抽干水样。
加入 MgCO 3 可增进藻细胞滞留在滤 膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素 a 被分解。
如过滤后的 载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷
（4C ）暗处保存，放置时间最多不能超过 48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加 2 - 3ml90 %的丙 酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻 度离心管中，用 5ml90%丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加 90%丙酮，使管内总体积为
10ml 。
塞紧塞子并在管子外部罩上
遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取 18－24小时。
离心10min ，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管 中，塞上塞子，3500r/min 在离心10min 。
正确记录提取液的体 积。
6、测定光 密度：藻 类叶绿素 a 具有其 独特的吸 收光谱 (663nm )，因此可以用分光光度法测其含量。
用移液管将提取 液移入 1cm 比色杯中，以 90％的丙酮溶液作为空白，分别在 750、663、645、630nm 波长下测提取液的光密度值( OD )。
注 意：样品提取的 O D 663值要求在 0.2与 1.0 之间，如不在此范围
50－ 5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上 3500r/min ，
内，应调换比色杯，或改变过滤水样量。
OD663小于0.2时，应
该用较宽的比色杯或增加水样量；OD663大于1.0时，可稀释提
取液或减少水样滤过量，使用1cm 比色杯比色。
7、叶绿素a浓度计算：将样品提取液在663、645、630nm波长
下的光密度值( OD663 OD645 O D 630)分别减去在750nm 下的光密度值( OD750) ,，此值为非选择性本底物光吸收校正值。
叶绿
素 a 浓度计算公式如下：
(1)样品提取液中的叶绿素a浓度Ca为:
Ca(微克/升)=11.64 (OD663 —OD750)—2.16 (OD645 —OD750)
+0.1(OD630－OD 750
(1) 水样中叶绿素a浓度为: 叶绿素a(微克/升)=Ca x v/(V x L)
叶绿素a(微克/升)=Ca x v/V x L
Ca:样品提取液中叶绿素a浓度（微克/升） v : 90%丙酮提取液体积（ml）
V :过滤水样的体积（L）
L :比色杯宽度（cm）四、实验报告将测定结果记录于表4-1中
表4—1测定结果
根据测定结果，参照表4-1中指标评价被测水样的富营养化程度。
表4-2湖泊富营养化的叶绿素a评价标准
五、思考题
1、比较两种水样中的叶绿素a浓度，通过本实验你的结论是什么？
2、如何保证水样叶绿素a浓度测定结果的准确性？主要应注意哪几个方面的问题?。