《细胞化学与组织化》PPT课件

细胞化学与组织化学实验须知
1．自觉遵守课堂纪律,维持课堂秩序,不迟到、不
早退,保持整洁、安静、有序的实验环境。
2．认真预习实验课内容熟悉实验目的、原理和方
法，了解所需使用仪器。
3．实验台面保持整洁，书包等物品按规定放置整
齐，仪器、药品摆放整齐、有序，公用试剂用毕,
物归原处。地面及水池内不得乱丢废物。
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五、实验中注意事项
(1)用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。 DNA必须 被提取，以使染色质的负电荷下降，用热TCA提取核 酸后，酸性染料（固绿）在碱性pH下，碱性蛋白可以 选择性地被染色，如未被提取，不能染色，或整个切 片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。
(2)染液pH必须高（ pH8.0~8.1），从而使其他蛋白质 染色极微。
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实验报告格式
实验(编号)(实验名称) 1.实验目的和要求 2.实验内容 3.实验原理 4.实验操作方法(或步骤) 5.实验结果与分析
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实验一 细胞内碱性蛋白的显示 - 组蛋白的显示
南昌大学生命科学学院
主讲: 范 丽 华
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一 、实验目的
掌握细胞内碱性蛋白的鉴别方法并了解碱性 蛋白在细胞内的分布。
１）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．
２）中性粒细胞，又称嗜性粒细胞，圆形，有2～5个分叶核．
３）凝血细胞，又称血栓细胞，相当于其他家畜的血小板；凝血细 胞具有典型细胞形态和结构，比红细胞稍小，两端钝圆，核呈椭圆 形．染色质致密．其他细胞与家畜的血细胞相似．
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片人 血 涂
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3.鱼类血涂片
１）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．
２）中性粒细胞，又称嗜性粒细胞，圆形，有2～5个分叶核．
３）凝血细胞，又称血栓细胞，相当于其他家畜的血小板；凝血细 胞具有典型细胞形态和结构，比红细胞稍小，两端钝圆，核呈椭圆 形．染色质致密．其他细胞与家畜的血细胞相似．
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注意：在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回 推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细胞应 成单层均匀排列。
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七、相关理论知识
１．家畜血涂片。低倍镜下观察可见大量圆形而细小的红
细胞。白细胞很少，稀疏地散布于红细胞之间，选白细胞较多 的部位（一般在血膜边缘和血膜尾部，因体积大的细胞常在此 出现） 。
解剖盘，注射器，载玻片，编辑p显pt 微镜,水浴锅等。
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四、实验方法
1．将鲫鱼放入盘中，尾静脉取血,滴一滴血在干净载玻 片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。
2. 将涂片作好标记放在现配制的Carnoy固定液中固定10 分钟，室温晾干。
3．放入现配制的5％三氯醋酸中90℃(10-15分钟)，抽提 出核酸。
4. 将玻片放在70%乙醇中5-10分钟．清水冲洗多次（3分 钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。
5．滤纸吸干玻片上水分。
6. 一张片放入0.1％碱性固绿(pH8.0～8.1)中染色15～20分 钟。
7．清水冲洗（3分钟），盖上盖片镜检。
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对照片
不进入5％三氯醋酸中抽提出核酸。其他步骤同 上。.
红细胞:呈圆盘状,边缘厚,中间薄,无核。 中性粒细胞:是白细胞中较多的一种,体积比红细胞大,核呈杆状
(为幼稚型,胞核细长,弯曲盘绕成马蹄形,S形,W形或U形等多种 形态)或分叶状,一般分3~5叶或更多，跟该细胞年龄有关。 淋巴细胞：有大中小三种类型，其中小淋巴细胞最多，血膜上 很易看到，体积与红细胞相近．具核，核大而圆．大淋巴细胞 在正常细胞中不常见到，体积与单核细胞相近或略小，胞核圆 形，胞质较小淋巴细胞多。
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三、实验用品
1．材料
鲫鱼
2．试剂
1)carnoy固定液(无水乙醇：氯仿：冰醋酸按6：3：1配制)
一次配制1L.
2)0.1%碱性坚牢绿染液：取0.1 g坚牢绿加入100毫升蒸馏
水，再加少量0.1M NaoH 调节pH至8.0-8.1.
3)5% 三氯醋酸
4)70%乙醇
5)香柏油
3．器材
学会制作血涂片并掌握制作技巧。
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二、实验原理
由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目 不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电 荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电 荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白 质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后用不 同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱 性蛋白质显示出来。
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嗜酸性粒细胞：比中性粒细胞略大，数量少，胞核常分两叶．
嗜碱性粒细胞：数量很少体积与嗜酸性粒细胞相近或略小．胞核呈 Ｓ形或双叶状．
单核细胞：是白细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形，马蹄形或不 规则形．细胞质丰富．
血小板：体积小，常三五成群散布在红细胞中．
２．家禽血涂片．鸡血的有形成分与其他家畜比较有以下不同:
血栓细胞
成熟红细胞
鱼血细胞图
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小淋巴细胞
大淋巴细胞
淋巴细胞
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4．使用药品、试剂和各种药品注意节约，爱护器
材。洗涤和使用仪器时应仔细，防止损坏仪器。 严格遵守 仪操作规程，在未知正确操作程序时， 不要独自使用，须在老师的指导下进行。
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5．实验废弃物、毒害性实验材料应倾倒在指定地 点，统一处置。 6．实验时一律穿工作服，不允许穿拖鞋进实验室， 以免溅落的腐蚀性药品或掉下的玻璃器皿伤 及裸露的皮肤。 7．节约水、电、气，燃气灯应随用随关。最后离 开实验室时，要将室内检查一遍，关好水、电、 气，锁好门窗。 8．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准， 严禁携出室外。借物必须办登记手续。 9．实验结束，将实验记录交指导教师审阅并做好 室内清洁工作。
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六、血涂片的制作
１.取一滴鲫鱼新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手 拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端， 在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成
４５°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向
后推为一均匀的薄片。
２.室温下自然晾干。待晾干后进入到Ｃａｒｎｏｙ固 定液中进行固定。