(完整版)分析方法开发与验证
检验分析方法的验证和确认ppt课件
的转移率要求在90%以上。
有毒成分及中西药复方制剂中化学药品的含量应规定
上下限，上下限幅度应根据测试方法、品种情况、转移率
及理论值确定，一般应在±5%～±20%之间，并在安全有
效范围内，制定上下限应有充分依据。
4）准确度
系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程 度，一般用回收率(%)表示。
a. 以经典方法的测定值作为真值，建立方法的测定 数据与之比较（该法适用于化学药品）
6）检出限（Limit of Detection，LOD)
检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。 a.非仪器分析目视法
通过对一系列含有已知浓度分析物的样品进行分析，以确定 能够被可靠测定的分析物的最低浓度。 b.仪器法（信噪比法）
该方法仅适用于出现基线噪音的分析方法。信噪比的确定是 通过比较含已知低浓度被分析物样品与空白样品的测试信号，确 定被分析物可以靠被检测到的最小浓度。通常信噪比为3：1或2： 1时，检测限可以被接受。
5）精密度--验证方法
名称
定义
验证方法
在相同条件下，由一个 在规定的线性范围内至少测定9次(例如3 重复性 分析人员测定所得结果 种浓度／每种浓度3次)，或在100％的实
的精密度称为重复性。 验浓度下，至少测定6次。
中间 精密度
在同一个实验室，不同 时间由不同分析人员, 用不同设备测定结果之 间的精密度，称为中间 精密度。
3）范围
实验项目 含量测定 杂质检查 溶出度 释放度
限度
范围
标示量90-110% 测试浓度80-120%
限度值
限度值的50-120%
限度值
限度值的±20%
1小时后20%，
应为标示量的0-110%。
分析方法验证
分析方法验证
要验证一个分析方法的有效性，可以采取以下步骤：
1. 确定目标：明确该分析方法的具体目标，例如检测某种化合物或者评估样品的质量。
2. 设计实验：设计一系列实验来测试该分析方法。
确保在实验中使用的样品种类、样品处理方式、仪器参数等因素与实际应用场景相符合。
3. 准备标准样品：准备一份标准样品集合，其中包含已知浓度或质量的化合物。
这些标准样品用于验证分析方法的准确性和精确性，可以通过使用已建立的分析方法来测定它们的含量或质量，以验证分析方法的可靠性。
4. 进行实验分析：使用该分析方法对标准样品进行分析。
重复分析多次，并记录每次实验得到的结果。
5. 分析结果统计：计算实验结果的平均值、标准偏差和变异系数等统计指标，以评估分析方法的精确性和可重复性。
6. 对比已验证方法：如果已有其他相关的分析方法已经被验证和广泛应用，可以将该方法与已有方法进行比较，以判断其准确性、灵敏度和特异性等方面的优劣。
7. 实际样品测试：使用该分析方法对实际样品进行测试，以验证其在实际应用中的可行性和有效性。
可以将结果与已有方法
的结果进行比较，以确保一致性和可靠性。
8. 结果分析：根据验证实验和实际样品测试的结果，评估该分析方法的准确性、可靠性和适用性。
如果结果符合预期，说明该分析方法是有效的。
需要注意的是，在以上步骤中，应该避免使用与标题相同的文字来进行分析方法的验证，以避免歧义和重复。
分析方法验证
分析方法验证在科学研究和工程实践中，分析方法验证是非常重要的一环。
它可以确保我们所使用的分析方法是准确、可靠的，从而保证我们得到的结果是可信的。
本文将介绍分析方法验证的基本概念、方法和步骤。
首先，我们需要明确什么是分析方法验证。
分析方法验证是通过实验和比较，验证分析方法的准确性、可靠性和适用性的过程。
在验证过程中，我们需要考虑多个因素，包括实验设计、样品准备、仪器设备、分析过程、数据处理等。
只有当这些因素都得到充分考虑和验证后，我们才能确保所使用的分析方法是可靠的。
其次，我们需要明确分析方法验证的目的。
分析方法验证的主要目的是确保所使用的分析方法能够准确、可靠地测量样品中的成分或性质。
这不仅对科学研究具有重要意义，也对工程实践具有重要意义。
只有当我们确保所使用的分析方法是可靠的，我们才能做出正确的决策和判断。
接下来，我们将介绍分析方法验证的基本步骤。
首先是方法建立，即确定所使用的分析方法。
在确定分析方法后，我们需要进行方法评估，即评估方法的准确性、可靠性和适用性。
接着是方法验证，即通过实验和比较，验证所使用的分析方法。
最后是方法确认，即确认所使用的分析方法是可靠的，并对其进行记录和审查。
在进行分析方法验证时，我们需要注意一些关键点。
首先是实验设计，即合理设计实验方案，确保实验结果的可靠性。
其次是样品准备，即合理准备样品，确保样品的代表性和一致性。
再次是仪器设备，即使用合适的仪器设备，确保测量的准确性和可靠性。
最后是数据处理，即合理处理实验数据，确保数据的准确性和可靠性。
总之，分析方法验证是确保所使用的分析方法是准确、可靠的重要环节。
通过本文的介绍，相信大家对分析方法验证有了更深入的理解。
在科学研究和工程实践中，我们都应该重视分析方法验证，确保我们得到的结果是可信的。
分析方法验证的内容
分析方法验证的内容
在进行数据分析时，验证分析方法的准确性和有效性是至关重要的。
只有通过验证，我们才能确保我们所采用的分析方法能够正确地解释数据，并且能够得出可靠的结论。
本文将介绍分析方法验证的相关内容，包括验证的重要性、常用的验证方法以及验证过程中需要注意的问题。
首先，让我们来看看验证分析方法的重要性。
验证分析方法的目的是确保所使用的方法能够准确地反映数据的特征和规律。
如果我们在分析数据时采用了错误的方法，那么得出的结论就会是错误的，这将对决策和预测产生严重的影响。
因此，验证分析方法是确保我们能够做出准确决策的重要步骤。
接下来，我们将介绍一些常用的验证方法。
首先是交叉验证方法，这是一种常用的验证方法，它将数据集划分为训练集和测试集，然后使用训练集来训练模型，再使用测试集来验证模型的准确性。
此外，还有留出法验证、自举法验证等方法，它们都是常用的验证方法，可以帮助我们验证分析方法的准确性和有效性。
在进行验证过程中，我们需要注意一些问题。
首先是样本的选择，样本的选择应该具有代表性，能够充分反映整体的特征。
其次是验证指标的选择，验证指标应该能够准确地评估分析方法的准确性和有效性。
最后是验证结果的解释，验证结果应该能够清晰地反映分析方法的优劣，帮助我们做出正确的决策。
综上所述，验证分析方法的重要性不言而喻，只有通过验证，我们才能确保我们所采用的分析方法是准确的、有效的。
在验证过程中，我们需要选择合适的验证方法，注意样本的选择和验证指标的选择，确保验证结果能够准确地反映分析方法的准确性和有效性。
希望本文能够帮助大家更好地理解分析方法验证的相关内容。
药物分析方法的开发与验证
药物分析方法的开发与验证药物分析方法的开发与验证药物分析方法是药物研究的重要环节之一，它的开发和验证对于药物的质量控制和治疗效果的保障至关重要。
药物分析方法的开发和验证需要遵循一定的规范和流程，本文将从这两个方面进行阐述。
一、药物分析方法的开发药物分析方法的开发是指根据药物的特性和需求，设计出一种可靠、准确、灵敏、重复性好的分析方法。
药物分析方法的开发需要进行以下几个步骤：1. 确定分析目标：首先需要确定要分析的药物种类、成分及其含量范围等，以及需要达到的分析指标和要求。
2. 确定分析方法：根据药物的化学特性、分子结构等，选择合适的分析方法，如色谱法、质谱法、光谱法等。
3. 优化实验条件：进行实验前，需要对实验条件进行优化，如样品前处理、色谱柱选择、流速和波长等参数的调整等。
4. 确定分析参数：根据实验结果，确定分析参数，如检测限、定量限、线性范围、精密度和准确度等。
5. 编写操作规程：根据实验结果，编写操作规程，确保实验的可重复性和准确性。
二、药物分析方法的验证药物分析方法的验证是指通过一系列实验，证明该方法能够满足预期的分析指标和要求。
药物分析方法的验证需要遵循以下几个步骤：1. 确定验证参数：根据药物特性和需求，选择适合的验证参数，如精密度、准确度、线性范围、检测限和定量限等。
2. 进行实验验证：根据操作规程进行实验验证，并记录实验结果。
3. 数据处理：对实验结果进行数据处理和统计分析，计算出各项验证参数。
4. 判断结果：根据验证结果，判断该方法是否符合预期要求，并进行合理解释。
5. 编写报告：根据验证结果，编写验证报告，并加以存档。
总之，药物分析方法的开发和验证是药物研究中不可或缺的环节。
只有通过科学规范的方法开发和验证出可靠的分析方法，才能保证药物质量的稳定性和治疗效果的有效性。
因此，在药物研究中，应高度重视药物分析方法的开发和验证工作。
分析方法验证
分析方法验证首先，我们来谈谈分析方法验证的重要性。
在科学研究中，我们常常需要对样品进行分析，以获取其中所含成分的信息。
而分析方法的准确性直接影响着我们对样品的认识和理解。
如果分析方法存在偏差或误差，那么得到的数据和结论就会失去科学的可信度，甚至会对后续的研究和实践造成严重影响。
因此，验证分析方法的准确性显得尤为重要。
那么，我们应该如何进行分析方法的验证呢？常用的验证方法包括与标准方法的比对、重复性和再现性实验、对照试验等。
与标准方法的比对可以帮助我们了解所采用的分析方法与公认的标准方法之间的差异，从而评估其准确性和可靠性；而重复性和再现性实验则可以帮助我们了解所采用的方法在不同条件下的稳定性和一致性，从而评估其可重复性和可再现性；对照试验则可以帮助我们排除其他因素对实验结果的影响，从而更准确地评估所采用的方法的准确性。
通过这些验证方法的综合应用，我们可以全面地评估所采用的分析方法的准确性和可靠性。
然而，在进行分析方法验证的过程中，我们可能会遇到一些问题。
比如，验证过程可能会非常耗时耗力，特别是在对复杂样品进行分析时；另外，验证结果可能会受到实验条件、人为操作等因素的影响，从而导致验证结果的不确定性。
针对这些问题，我们可以通过合理设计实验方案、严格控制实验条件、加强人员培训等方式来尽量减少这些问题对验证结果的影响，从而提高验证结果的准确性和可靠性。
综上所述，分析方法验证是科学研究和工程实践中不可或缺的一步。
通过合理选择验证方法、严格控制实验过程、及时发现和解决问题，我们可以确保所采用的分析方法是准确可靠的，从而保证我们得到的数据和结论具有科学的可信度。
希望本文能对相关领域的研究者和工程师有所帮助，谢谢阅读！。
分析方法验证报告
分析方法验证报告1. 引言分析方法验证是一项对分析方法进行评估和确认的过程，在药物研发、食品安全、环境监测等领域具有重要意义。
本文将对分析方法验证的步骤和要点进行分析和总结。
2. 分析方法验证步骤分析方法验证包括以下步骤：2.1 确定验证目的和要求在进行分析方法验证之前，首先需要明确验证目的和要求。
验证目的一般包括了解分析方法的适用范围、确定分析方法的精密度和准确度等。
2.2 设计验证方案根据验证目的和要求，设计合理的验证方案。
验证方案应包括验证样品的选取和制备、验证参数的设定和测定、验证方案的可行性和有效性评估等内容。
2.3 实施验证实验根据验证方案，进行验证实验。
验证实验应按照一定的顺序和方法进行，确保数据的准确性和可靠性。
2.4 数据处理和分析对验证实验获得的数据进行处理和分析，计算分析方法的精密度、准确度、线性范围等性能指标。
根据分析结果，评价分析方法的可靠性和适用性。
2.5 编写验证报告根据验证实验和数据分析的结果，编写验证报告。
验证报告应包括验证方法、验证结果、验证数据、验证结论等内容，并应符合相关的法规和标准要求。
3. 分析方法验证要点3.1 精密度精密度是评价分析方法重复性的指标，可通过测定同一样品的多重平行测定来评价。
常用的评价方法包括计算相对标准偏差（RSD）或方差等。
3.2 准确度准确度是评价分析方法准确性的指标，可通过测定已知含量的参考物质（标准品）进行评价。
常用的评价方法包括计算回收率、偏差（bias）等。
3.3 线性范围线性范围是评价分析方法线性关系的指标，可通过测定一系列标准品的浓度与响应（信号强度）之间的关系来评价。
常用的评价方法包括计算回归方程、相关系数等。
3.4 特异性特异性是评价分析方法选择性的指标，即分析方法可以准确地识别和测定目标分析物，而不受其他干扰物的影响。
3.5 确定性确定性是评价分析方法稳定性的指标，即分析方法在不同的实验条件下是否能获得一致的结果。
HPLC分析方法开发与验证
HPLC分析方法开发与验证HPLC（High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于药物研发、环境监测、食品检测等领域。
本文将从方法开发和验证两个方面介绍HPLC分析方法。
一、方法开发方法开发是确定分析物检测条件的过程。
以下是HPLC方法开发的步骤：1.确定分析目标：确定待分析的物质以及其化学性质，如分子量、分子结构等，以便选择正确的色谱柱和检测方法。
2.选择色谱柱：根据分析物的特性选择合适的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换色谱柱等。
3.优化流动相：选择适当的流动相组成，如有机溶剂和缓冲液的混合物，以实现分离效果的最大化。
4.优化柱温：通过改变柱温度来控制分析物的保留和分离，可以提高分离效果和峰形。
5.选择检测波长：根据分析物的特性选择最佳的检测波长，以最大化检测灵敏度和选择性。
6.确定流速和进样体积：通过改变流速和进样体积来优化分离效果和检测灵敏度。
7.优化pH值：对于离子化合物，通过改变缓冲液的pH值可以改变分离效果。
8.创建方法文件：根据上述优化结果，建立最终的分析方法文件，记录分析条件和步骤。
二、方法验证方法验证是确保分析方法可靠和准确的过程，以下是HPLC分析方法验证的主要内容：1.线性范围：检测浓度在一定范围内的线性关系，通过测定不同浓度的标准品并绘制标准曲线来确定。
2.精密度和重复性：通过重复测定样品的相对标准偏差（RSD）来评估分析方法的精密性。
3.准确度：通过添加已知浓度的标准品到已知浓度样品中并测定含量，评估分析方法的准确性。
4.特异性：分析物是否受其他物质的干扰，通过对混合标准溶液进行测定来评估色谱方法的特异性。
5.检出限和定量限：标准曲线下限和浓度下限的浓度，测定方法的灵敏度。
6.系统适应性：测试HPLC仪器系统的重复性和稳定性，包括波长准确性、峰对称性和分离效果。
7.样品稳定性：评估样品在一定时间和条件下的稳定性，包括溶液稳定性和冷冻/解冻稳定性。
分析方法开发及验证
分析方法开发及验证分析方法的开发是指为了解决特定问题或达到特定目标而设计和构建的一系列过程和步骤。
在科学研究和工程应用中，分析方法的开发对于数据处理、问题解决和结果验证都起着至关重要的作用。
本文将介绍分析方法开发的一般步骤，并探讨如何验证分析方法的有效性。
分析方法的开发通常包括以下几个步骤：问题定义、数据收集、方法选择、方法设计、代码实现和结果验证。
首先，问题定义阶段需要明确所要解决的问题或达到的目标。
这一步骤的关键是准确理解问题，并且能够为其设计一个合适的分析方法。
接下来，数据收集阶段是收集和获取所需数据的过程。
在科学研究中，数据的质量和准确性对于分析方法的开发非常关键，因此需要采取合适的数据收集和处理方法，确保数据的可靠性。
在方法选择阶段，需要根据问题的特点和数据的类型选择合适的分析方法。
常见的分析方法包括统计学方法、机器学习方法、数据挖掘方法等。
在选择方法时需要考虑方法的可行性、适用性和效果评估等因素。
方法设计阶段是将选择的方法具体化和细化的过程。
在这一阶段，需要根据选定的方法，设计相应的模型、算法或流程图，并考虑各种可能的情况和异常处理。
代码实现阶段是将设计好的方法转化为计算机可执行的代码的过程。
在这一阶段，需要根据所选的编程语言和开发环境，编写代码并进行测试和调试，确保分析方法的准确性和有效性。
最后，结果验证阶段是对于分析方法的有效性和可靠性进行评估和验证的过程。
在验证过程中，通常采用对比实验、交叉验证、模拟实验等方法来比较和验证分析方法的优劣和性能。
总之，分析方法的开发是一个复杂而重要的过程，需要深入理解问题、合理选择方法、设计有效的算法和模型，最终通过验证来证明方法的有效性。
只有经过充分测试和验证的分析方法才能在实际应用中取得良好的效果，并且为解决问题提供准确可靠的结果。
分析方法的开发和验证是科学研究和工程应用中不可或缺的一环，对于推动科学进步和提高工程技术水平都起着重要的作用。
分析方法的验证ppt课件
1
内容：
一、介绍 二、分析方法验证 三、常见问题
2
一、介绍
方法分析：是为完成检验项目而设定和建立的测试方法，它 详细描述每一个分析试验所必须的步骤。 一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、供试品溶 液与对照品溶液等的制备、测定、计算公式及限度要求等。
3
一、介绍 分析方法确认或验证相关指南
通过实验室之间的检测来评价；
如果方法需要标准化如收载到药典中的 方法，则应考虑重现性。这些资料不是 申请上市文档的三部分。
协作标定 能力验证 药品标准的实验 复核
24
5）精密度
系统重复性：相同条件下，同一分析人员对同一样品溶液多 次测试结果的接近程度。 同一均匀标准样品溶液，连续重复测定六次，计算各组分响 应值与平均值之间的相对标准偏差。 方法重复性：相同条件下，同一分析人员对同一个均匀样品 ，多次取样测定所得结果的接近程度。 同一样品，至少称取六份，再测定每一份样品含量，计算每 一次测定的含量与平均含量间的相对标准偏差。
中其他成分（如防腐剂等）的含量，溶出度与释放度等检 查中的溶出量，以及含量均匀度。 化学药品/中药制剂中其他需控制成分(如残留物、添加剂 等）的测定
7
二、分析方法验证
5、分析方法验证的具体内容
1）专属性 2）线性 3）范围 4）准确性 5）精密度 6）检测限 7）定量限 8）耐用性 9）系统适用性
(完全辨别)，在此情况下，建议采用两种或两种以上的分 析方法以达到所需的辨别水平。
9
1）专属性
含量测定目的是得到样品中被分析物的含量或效价的准确 结果。
对于色谱法和其他分离方法来说，应当用具有代表性的色 谱图来证明专属性，并在图上适当地标出每一种成分。色谱 法的分离度应符合要求。
分析方法研究与验证思路PPT课件
各实验参数的建立过程
波长：取主成分、合成中间体和降解产物对 照品，配成一定浓度后进行紫外扫描。通 过DAD/PDA检测器扫描各物质的紫外吸收 图，确定各物质吸收相近的波长测定
如采用主成分最大吸收波长，需进行各杂质 校正因子的测定。
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各实验参数的建立过程
• 供试品溶液浓度的确定
首先确定LOD, 向上推至少10000倍，即为 供试品溶液浓度
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各实验参数的建立过程
• 最小峰面积的设定
一般设置为主峰峰面积的0.01%-0.05%
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测定方法中的浓度关系
浓度
进样量
有关物质供 0.1mg/ml 10ul 试品溶液浓 度
含量测定浓 10ug/ml 10ul 度
自身对照溶 1.0ug/ml 10ul 液浓度
最低检出限 10ng/ml 10ul
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分析方法验证
• 精密度 • 适用与有定量要求的杂质检查。 • 重复性 配制6份杂质浓度（限度浓度）相同
的供试品溶液，由一个分析人员在相同的 条件下进行测试，所得6份供试液杂质含量 的相对标准差应不大于10%。
24
分析方法验证
• 中间精密度 • 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供
试品溶液，分别由两个分析人员使用不同 的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数 据的相对标准差应不大于15%。
• 同时需要将强制破坏试验供试品分析。
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流动相的选择和优化
• 中性成分 • 一般选择甲醇-水、乙腈-水两种系统。乙腈
-水系统由于粘度小，通常可以得到良好的 柱效。
• 被测物为极性较大的中性成分时，系统中
甲醇或乙腈的比例可适当小些。被测物为 极性较小的中性成分时，可适当增大甲醇 或乙腈的比例。
分析方法验证ppt课件
接受标准：原料药方法验证时，平行六份样品的 RSD≤ 1.0%，两人之间的 平均值之差≤ 1.0% ；制剂方法验证时 ，平行六份样品的 RSD ≤ 2.0%，两人之间的 平均值之差 ≤ 3.0% ；杂质方法验证是，平行六份样品的 RSD ≤ 20%
重现性（Reproducibility） 在不同实验室由不同 分析人员测定结果的精密度。
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
重复性（Repeatability）
是指在同一条件下对同一批样品，从样品液制备 开始，制备至少六份以上供试品溶液(即 n ≥ 6), 或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试溶液，进行测定，计算其含量的平均值和 相对标准偏差RSD。
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
回收率（Recovery）
加样回收试验 已准确测定含量P的真实样品+已知量A的对照品（或 标准品）测定，测定值为M
M P R 100 % A
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
1） 样品中的待测物全部溶解 2） 待测物全部从检测器tional Trading (Shanghai) Co. Limited
如何进行准确度的验证？
准确度的测定至少选取包括标准浓度在内的至少3个浓度 级别（通常选取80%、100%和120%），每个浓度级别 至少测定3次，计算测定结果的回收率。
分析方法开发与验证流程
分析方法开发与验证流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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确定分析的目的，例如定量、定性或半定量分析。
方法学验证培训资料完整版
方法学验证（LC、GC）123分析方法学验证的类型分析方法学验证的内容分析方法学验证中的其他问题各类型方法学验证的具体内容和要求4关于分析方法验证类型分为以下几类：A 杂质的定量试验----有关物质B 杂质的限度检查----残留溶剂C 原料药、制剂或者药品组分样品中选定的活性成分或选定组分的定量检测----含量、溶出度等D 鉴别试验1分析方法学验证的类型内标法外标法面积归一化法含量外标法：有杂质对照品自身对照法：没有杂质对照品或未知杂质的测定内标法：可能带入杂质或内标与杂质重叠，很少使用面积归一化法：杂质量大，且主成分量与峰面积成线性有关物质（残留溶剂）常用验证类型1、专属性（方法摸索）2、系统适用性3、精密度（重复性、中间精密度、重现性）4、准确度（回收率）5、检测限6、定量限7、线性及范围8、耐用性（含稳定性）分析方法学验证的内容2分析方法学验证的内容3方法学验证的具体内容和要求3.1含量方法学(外标法)ICH 定义为“当预料到一些组分可能存在时，准确无误地检测被分析物的能力。
通常这些可能存在的组分有杂质、降解产物、基质等”。
含量测定和杂质检查试验比较目标成分与杂质、降解产物及辅料等的实验结果（即目标成分与杂质、降解产物及辅料中的色谱峰互不干扰），强制破坏试验。
一、专属性检测要求内容①溶剂1针；②阴性空白（制剂）1针；③对照品溶液1针；④供试品溶液1针；进样单样单针结果溶剂、阴性空白应无干扰分离度≥2.0（黄晓龙）；拖尾因子：0.8—1.5之间（EP）；保留时间拖尾因子理论塔板数分离度***的峰面积溶剂阴性空白对照品溶液供试品溶液数据结果表格一、专属性[1]黄晓龙，含量测定分析方法验证的可接受标准简介. 国家食品药品监督管理局药品审评中心电子刊物. 2006年检测要求内容①溶剂1针；②系统适用性溶液（如标准中有要求）1针；③对照品溶液×6针结果峰面积的RSD （n=6）＜1.5%(≤2.0% CHP)主峰保留时间的RSD＜1.0%（n=6）（CDE审评原则、黄晓龙）分离度＞1.5（CHP）拖尾因子：0.8—1.5 （EP）（≤2.0黄晓龙）二、系统适用性系统重复性：S/N ＞1000，RSD ＜1.5%1000＜S/N ＞100，RSD ＜2.0%[1]黄晓龙，有关物质/含量测定分析方法验证的可接受标准简介. 国家食品药品监督管理局药品审评中心电子刊物. 2006年表2---系统适用性（对照品溶液）保留时间***的峰面积理论塔板数分离度拖尾因子123456RSD(%)///二、系统适用性表1 ---系统适用性溶液（如标准中有要求）保留时间分离度理论塔板数拖尾因子峰面积系统适用性溶液检测要求内容①溶剂1针；②阴性空白溶液1针；③对照品溶液1针；④验证---含量相近的测试溶液（阴性溶液+检出限对照品），三样单针；结果♦信噪比（S/N)一般要求2-4:1；♦峰面积RSD＜15%(n=3）♦结果---本测定条件下检测限为***ng/ml,相当于供试品溶液进样量***%(检测限浓度/供试品溶液浓度）。
分析方法的验证与确认
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三、分析方法的验证与确认在实践中的具 体应用
2、分析方法验证成功的前提条件： （1）仪器已经确认、校正并在有效期内 （2）经过培训的人员 （3）可靠稳定的对照品 （4）可靠稳定的实验试剂 （5）确认受试溶液的稳定性，在规定时间内 无降解。
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三、分析方法的验证与确认在实践中的具 体应用
3、分析方法学验证所要求验证的内容： （1）含量的测定（ GC或HPLC方法验证） （2）杂质的含量测定 （ GC或HPLC方法验证） （3）药物的定性鉴定 （4）药物的含量均匀度测定 （5）药物的微生物检测 （6）药物的细菌内毒素的检测
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三、分析方法的验证与确认在实践中 的具体应用
4、新申报产品的GC或HPLC方法验证 4.1 选择性（或专属性） 选择适当的仪器、相应条件、试剂（包括仪器型 号、GC或HPLC色谱柱，流动相配比等），使原料药生 产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间体，前体 及降解产物）或制剂生产过程中产生的杂质能与主峰 较好地分开，并确保主成份峰中没有其他干扰物质峰 存在，对其检验的专属性进行评价和确认。 可接受的标准为：空白对照应无干扰，杂质峰与主峰 应能完全分离，分离度不得小于1.5。
5.2 系统适应性 按药典方法及客户方法规定操作。 5.3系统精密度、最小检测限、最小定量限、耐 用性、溶液稳定性等分别按4.2.1、4.5、4.6、 4.7及4.8操作。 5.4样品对比检验：对公司自我生产的三批产品 与转让方生产的产品最少一批同条件下进行检 验，应均符合相应质量标准要求。
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四、不同的检验项目在进行分析方法验证 或分析方法确认时须进行的验证或确认内 容参考下表：
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5药典、客户提供的检验方法的转移应 用确认
对新产品的方法验证通常在产品开发阶段 完成；大规模生产后的验证通常包括方法确认 和方法转移 。分析方法确认是指当国家标准 或药典标准已经变化时在本实验室进行的对所 涉及产品是否适用的确认实验 。确认之前应 对新旧方法进行核对，标明所有变更细节检验 样品的信息（批号、规格),变更项目的接收标 准确认试验的样品通常包括正常产品、稳定性 产品。方法转移指检验方法由转移方转移至接 收方时进行的实验 。
分析方法验证报告
分析方法验证报告1. 引言在数据分析领域，为了保证结果的准确性和可靠性，验证分析方法的有效性是非常重要的。
本报告将介绍分析方法验证的步骤和思路，并提供一套基本的分析方法验证流程，以帮助从事数据分析工作的人员更好地验证他们所使用的方法。
2. 步骤2.1 确定验证目标首先，需要明确验证的目标是什么。
这可以是分析方法中的某个具体步骤，也可以是整个分析过程的准确性。
明确验证目标有助于我们设计验证实验和选择验证指标。
2.2 设计验证实验在设计验证实验时，需要考虑到实验的可控性和实用性。
即使是在真实数据集上进行验证，也可以通过控制变量的方式来减少干扰因素，从而更好地评估分析方法的有效性。
2.3 收集数据根据验证目标和设计的实验方案，收集相关数据。
数据的质量和数量对验证结果的可靠性至关重要，因此需要确保数据的准确性和充分性。
2.4 数据预处理在进行实际的分析方法验证之前，需要对收集到的数据进行预处理。
这包括数据清洗、数据转换和特征选择等步骤，以确保数据的可靠性和一致性。
2.5 应用分析方法在这一步骤中，我们需要根据验证目标选择相应的分析方法，并应用到预处理后的数据中。
可以使用统计学方法、机器学习算法或其他合适的方法进行分析。
2.6 分析结果评估根据验证目标，对分析结果进行评估。
这可以包括比较分析方法的预测结果与实际结果的差异，或者比较不同分析方法在同一数据集上的性能表现等。
2.7 结果解释和总结最后，根据分析结果进行解释和总结。
如果验证目标是某个具体步骤，则可以根据验证结果对该步骤的有效性进行评估。
如果验证目标是整个分析过程的准确性，则可以总结分析方法的优缺点，并提出改进建议。
3. 思考导向在进行分析方法验证时，我们应该保持以下几点思考导向：3.1 科学性验证过程应该遵循科学的原则和方法，确保验证结果的可靠性和可重复性。
我们应该选择合适的实验设计、严格控制变量，并使用适当的统计方法进行分析。
3.2 客观性验证过程应该尽可能客观，避免主观偏见的影响。
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效液相分析是控制产品质量的重要手段，其开发与验证对其它行业有很好的借鉴意义。
一、分析方法开发分析方法的开发主要包括色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度的优化几个方面。
目前高效液相多做反相使用，所以本文主要以反相为例进行讲解。
1.色谱柱的选择原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻，要求检测使用的色谱柱有较高的理论塔板数，能提供更好的分离度，从而对可能存在的杂质有更大的分离的可能性，所以5um 填料的色谱柱长要250mm，3.5um填料的柱长要150mm，基本上都是各个粒径柱长最长的。
我比较喜欢近两年新出的亚二微米填料的色谱柱，50mm柱长就能提供很高的理论塔板数，而且柱长和粒径小了，流速增加很多，能节省很多的分析时间，极大的提高工作效率。
一般选用直径为4.6mm或3.0mm的柱子，太细了可能会增大柱外效应。
填料的孔径对于小分子合成药物不需要考虑，普通的分析柱都在100A左右，能满足分析检测的需要。
对于API分析方法开发，一般要求必须做色谱柱的筛选实验，最少使用三种不同类型的色谱柱，每种类型三只，要来自于不同厂家。
三种类型包括：1)普通的C18或相应的C8色谱柱，如Waters的Symmetry C18或C8，YMC的Pack Pro C18或C8，Agilent的RX C8等，其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱；2)封端处理的或者极性嵌入型色谱柱，如Waters的Symmetry Shield RP18或RP8，XTerra RP18或RP8，YMC的ODS AQ，Agilent的Zorbax SB AQ等，其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱；3)填料用其它官能团修饰过的色谱柱，如苯基柱等，很多公司都有。
一般不同类型的色谱柱在选择性上会有很大的差异，相同类型的色谱柱生产厂家不同在选择性上也会有差异，这个主要是填料的性质和生产工艺决定的，有时候用一只色谱柱分离不好，除了优化梯度和流动相外，换一个厂家的柱子也是一个很好的选择。
相同品牌型号的色谱柱，C18和C8在选择性上没有差异，但是C18保留能力更强，相同的样品分离度更高，我们一般倾向于选择用C18。
我们在筛选色谱柱时尽量选择行业内排名前几位的厂家，柱子品质好，开发分析方法时能省很多力气，做出来的分析方法也有保证。
一个药从开发到上市可能会持续十几年甚至更长时间，厂家有实力，开发方法时选定的柱子在若干年以后需要时还会有的高分析方法的质量，保证检测结果的可信度。
我比较喜欢用的柱子有：Agilent的Zorbax Eclipse XDB-C18、Zorbax Eclipse Plus C18，Waters 的Symmetry C18、XTerra RP18、XTerra MS C18等，YMC的柱子有时会是不错的备用选择，菲罗门的柱子菲罗门的柱子国内外市场占有率较高，但是感觉柱子压力高，寿命短，尽量不用，热电的柱子用的也不少，但没什么感觉。
制剂分析方法选择色谱柱的要求基本和API相一样，对于中间体和生产过程中反应跟踪（IPC）分析方法开发使用的色谱柱，我们一般会根据样品性质直接选取一两只普通C18或者封端处理过的色谱柱，简化筛选过程。
2.流动相的选择常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是有时候样品峰形不好或者分离不好，更换溶剂试试是一个很好的选择，毕竟不同的溶剂提供不同的选择性。
对流动相的优化主要在水相上下功夫，水里可以加酸、加碱、加盐，从而改善峰形、提高分离度。
流动相里加碱的情况比较少，主要还是加酸，常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等，其中最常用的是磷酸和三氟乙酸，磷酸在低波长下没有紫外吸收，而三氟乙酸在低波长下有，但是三氟乙酸易挥发而磷酸不行，所以单纯做液相，低波长下磷酸最合适，三氟乙酸有吸收，运行梯度时基线漂移很严重，而做液质就要考虑首选三氟乙酸了，近些年还比较流行加甲酸或乙酸。
一般情况下这几种酸没有太大区别，我们更多的是考虑通过加酸改变流动相的pH值，从而改善样品的分离度和峰形。
相同进样量样品峰越高则意味着峰形越好，从图中可以看出多数样品在低pH值下峰形都比中性要好，这个主要是由色谱柱本身的性质所决定的。
色谱柱主要都是硅胶基质，现有的填料处理工艺无法将硅胶上残余的硅羟基全部去除，硅羟基会造成样品峰拖尾，一般认为硅羟基的pKa在3.5到4.5之间，低pH值能帮助抑制硅羟基的活性，减小拖尾，从而改善峰形，提高分离度。
水溶液中添加0.1%（体积）的磷酸或者三氟乙酸其pH值大概在2左右，用作流动相正好抑制硅羟基的活性，所以开发液相分析方法时流动相首选水加0.1%的磷酸，在单独用酸不行的时候就要考虑使用缓冲盐，缓冲盐的选择原则是：简单、稳定、缓冲能力强、配制简单，需要调pH值时要有相应的酸或碱。
常用的缓冲盐是磷酸盐，主要是钾盐和钠盐，再有就是醋酸盐，常用的盐浓度在10~20mM左右。
以前因为色谱柱填料生产工艺的问题，往往需要在流动相里添加三乙胺来减少拖尾，但是三乙胺对色谱柱的寿命有很大影响，现在新的色谱柱都不再需要了。
流动相里有时会需要调节pH值到碱性，具体pH要视色谱柱的耐受范围而定，常用NaOH、KOH溶液或氨水做为调节缓冲盐溶液碱性pH的试剂，也可以往水里单独添加氨水做碱性流动相。
在缓冲盐做流动相时，出峰太早、峰形很差、相似结构的化合物峰因为拖尾或峰型太宽而不能达到基线分离时，可以考虑使用离子对试剂，常用的离子对试剂主要是各种烷基磺酸钠和四丁基铵盐，但是流动相里使用离子对试剂时，系统需要的平衡时间长，样品保留时间不是很稳定，因为离子对试剂的背景吸收基线会很差，且做完样品后需要长时间清洗，所以我们尽量不使用离子对试剂。
使用缓冲盐时要注意流动相混合以后盐可能析出的问题和盐背景吸收导致基线漂移严重的问题，尤其是在流动相里添加醋酸铵以后，在低波长下梯度变化时基线下降非常严重，严重影响对含量较小杂质的准确定量，可以考虑在乙腈里加入10%的水，水中预先加入10倍水溶液浓度的缓冲盐，这样梯度中A、B两项盐的浓度相同，可以避免基线漂移严重的问题。
原料药一般结构式比较大，分子构成比较复杂，开发分析方法时用水加磷酸效果可能效果不好，通常还要求最少尝试2和6.5两个pH值的磷酸盐缓冲溶液，并依据结果对流动相进行pH优化，如效果不理想再进一步尝试其它缓冲盐溶液。
开发中间体或者IPC的分析方法时可以根据经验酌情简化流动相的选择过程。
3.梯度的优化梯度优化主要是通过调节流动相的起始比例和梯度的斜率来调整样品的保留时间，优化样品的分离度。
有机相起始比例越小，样品保留时间越长，随着梯度的改变，样品出峰的先后顺序也有可能改变。
我们做梯度优化时主要调整梯度的起始比例和斜率。
现在的色谱柱或者采用了新的封端工艺，或者内嵌极性基团，耐水的能力都比较高。
在酸性条件下很多化合物都以离子形式存在，极性较大，为了提高样品的分离度，尽量使用大比例的水做梯度的起始。
对于添加缓冲盐的流动相要注意梯度变化过程中流动相组成改变时不能有盐析出。
对于水加0.1%磷酸的流动相，开始时可以采用95%的水做起始，以95%的有机相结束，注防止样品残留到下一针。
梯度的斜率一般采用凹线型的先小后大，梯度变化先慢后快，在此基础上再对梯度进行优化。
使用缓冲盐溶液的梯度水相起始比例一般要从10~20%开始，为了防止盐析出，在梯度最后避免用纯的有机相做冲洗，梯度斜率采用恒定的就可以，在此基础上根据方法运行的情况对梯度进行调整。
一般一个API的样品采集的时间控制在40~50分钟左右，样品出峰在15~20分钟左右比较好，如果有极性非常小的杂质存在可以在最后加一段时间的大比例有机溶剂冲洗色谱柱，最后再设置10分钟左右的重新平衡时间。
中间体和IPC的样品分析方法时间可以根据需要减半或者时间更短。
4.波长的选择做分析方法开发需要二极管阵列检测器，做色谱峰纯度检查和选择检测波长，通过色谱峰纯度检查来保证主峰里没有掩盖其它杂质，做纯度检测对波长选择的要求比较简单，原则是把尽量多的杂质在色谱图上体现出来。
很多杂质只有在低波长下才有紫外吸收，所以我们选择尽可能低的波长，乙腈的截止波长在190~195nm，用乙腈做流动相检测波长可以选择在210~220nm。
也有公司要求分别选取产品紫外吸收最强的波段和210~220nm两个波段做对比，哪个纯度低以哪个为准，这样可以更严格的控制产品的质量。
二、分析方法验证为了保证分析检测结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的准确性、科学性和可行性进行验证，以证明分析方法符合检测的目的和要求，这就是分析方法验证。
从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法符合检测项目的要求。
方法验证在质量控制上有重要的作用和意义，只有经过验证的分析方法才能用于药品生产的分析检测，方法验证是制订质量标准的基础。
方法验证内容包括方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、检出限、定量限、耐用性和系统适用性等，检测目的不同验证要求也不尽相同。
1.专属性专属性是指分析方法能够将产品和杂质分开的特性，也称为选择性。
对于纯度检测，可在标准品中加入产品中的已知杂质，或者直接用粗品，考察产品峰是否受到杂质的干扰，对于过程跟踪，可用反应体系样品来考察有没有其它的杂质干扰。
必要时使用二极管阵列检测器或者质谱检测器进行色谱峰纯度检查。
一般要求产品和杂质之间的分离度大于2.0。
2.线性线性是在设定的范围内，检测结果与样品中原料或产品的浓度呈线性关系的程度。
线性是定量检测的基础，需要定量检测的项目都需要验证线性。
一般用贮备液经过精密稀释，或分别精密称样，制备得到一系列被测物质的浓度（5个以上），按浓度从小到大运行序列，以峰面积和浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归计算，考察分析方法的线性。
3.范围范围指在能够达到一定的准确度、精密度和线性时，样品中被分析物的浓度区间。
简单的说，范围就是分析方法适用的样品中待测物的浓度最大值和最小值。
需要定量检测的分析方法都需要对范围进行验证，纯度检测时，范围应为测试浓度的80％～120％。
4.准确度准确度是指测定的结果与真实值之间接近的程度，所以也叫做真实度，需要定量得分析方法均需要验证准确度。
准确度应在规定的范围内建立，对于原料药可用已知纯度的标准品或符合要求的原料药进行测定，必要时可与另一个已建立准确度的方法比较结果。