液相色谱基础

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液相色谱的原理以及操作要点

液相色谱的原理以及操作要点液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离和分析技术，它基于不同物质在流动相中的分配行为来实现分离。

本文将介绍液相色谱的原理，同时探讨液相色谱的操作要点。

一、液相色谱的原理液相色谱的原理主要基于两个关键概念：分配系数和吸附性质。

1. 分配系数分配系数（Distribution coefficient）是指样品在固定相和流动相之间的分配比例。

它是液相色谱中物质分离的基础。

分配系数的大小决定了物质在固定相上停留的时间，从而实现了不同成分的分离。

2. 吸附性质液相色谱还涉及到物质在固定相上的吸附行为。

当样品溶液通过固定相时，固定相表面上的吸附剂与样品物质发生相互作用，使得物质被吸附，从而发生分离。

二、液相色谱的操作要点为了有效地进行液相色谱实验，以下是一些操作要点需要注意：1. 样品制备样品制备是液相色谱分析的首要步骤。

样品应准备恰当，并考虑到溶解度、稳定性以及待分析物之间的相互干扰。

此外，样品需要经过适当的前处理（如过滤、稀释等）以达到分析要求。

2. 流动相选择流动相的选择对液相色谱分离效果起到至关重要的作用。

合适的流动相应能够与待分析物有良好的相容性，并且具有适当的溶解性和流动性。

常用的流动相包括水、有机溶剂和缓冲溶液。

3. 固定相选择固定相是液相色谱中的另一个关键部分。

不同的固定相具有不同的化学性质，因此会影响到分离的选择性和效果。

根据待分析物的特性，选择合适的固定相对于分离效果至关重要。

4. 色谱柱选择色谱柱是液相色谱系统中用于分离的核心组成部分。

不同的色谱柱具有不同的长度、直径和固定相材料，这些参数会影响到分离性能和分析时间。

根据待分析物的特性和分离要求，选择合适的色谱柱尤为重要。

5. 色谱条件优化为了获得最佳的分离效果，需要进行色谱条件的优化。

例如，可以调整流速、梯度程序和柱温等参数，以达到更好的分离和峰形。

6. 数据处理和解释液相色谱实验完成后，需要对得到的色谱图进行数据处理和解释。

液相色谱基础知识

电导检测器
原理： ☼ 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法。离子色谱法。
☼ 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，
梯度洗脱。梯度洗脱。缺点：对温度变化敏感，每升高1℃, ℃,电导率增加 ☼ 缺点：对温度变化敏感，每升高 ℃,电导率增加 2%-2.5%。
液相色谱基础知识
■ 溶剂等级
☼鬼峰的出现
洗脱曲线
☺水/MeOH梯度 ODS ODS柱 1ml/min在 0~10Mins内 MeOH 0~100% 线性变化后保持15Min
鬼峰
液相色谱基础知识
■ 溶剂等级
在微量分析和梯度洗脱时建议使用HPLC级溶剂和纯化水级溶剂和纯化水在微量分析和梯度洗脱时建议使用
0.001~9.999
岛津VP系列液相色谱仪岛津VP系列液相色谱仪 VP
柱塞和密封圈的关系
水出口单向阀密封圈吸液移动柱塞杆送液移动入口单向阀泵头清洗流路流动相
岛津VP系列液相色谱仪岛津VP系列液相色谱仪 VP
手动进样阀7725i原理
岛津VP系列液相色谱仪岛津VP系列液相色谱仪 VP
☺无在线脱气机应注意：
1 每天脱气 2 如使用氦脱气，对混合好的溶剂脱气时间不能过长。
液相色谱基础知识
梯度形式的选择
洗脱模式：高压梯度
低压梯度用两台输液泵将两种流动相混合并进入系统常压下用比例阀将流动相混合，单泵进入系统
☺线性梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成线性变化（增或减） ☺指数梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成指数关系（增或减） ☺折线梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间无规则变化

液相色谱基础知识

液相色谱—视差折光检测器

检测器组成：光源——透镜——两束平行光——样品池和参比池—— 光电二极管——比较两者信号差值——输出信号。
液相色谱—凝胶色谱
பைடு நூலகம்

凝胶渗透色谱仪（GPC仪）、体积排阻色谱(Size Exclusion Chrom.) 。分离原理：利用多孔物质做固定相，按照待测组分分子尺寸大小进行分离。测定相对分子量大小、分子量分布。
环己烷
正丁醇乙醇水异丙醇
乙酸正丙酯
丙酸甲酯四氯化碳 N,N-二甲基甲酰胺苯
260
260 265 270 280
碘甲烷
二硫化碳硝基甲烷硝基乙烷 2-硝基丙烷
350
380 380 380 380
甲醇
甲苯
285
液相色谱—荧光检测器

荧光检测器：样品中物质分子能在特定波长的光激发后跃迁到高能级状态，在返回到基态的过程中，会发出波长较长的光，称做荧光。荧光强度F=I0Φabc I0——激发光强度 Φ——荧光量子产率
Refractive Index Detector

A valve is opened and pure solvent passes into one half of a cell. The eluate flows through the other half of the cell. The two halves are separated by a glass plate mounted at an angle such that bending of the incident beam occurs if the two solutions differ in refractive index.

液相色谱基础理论知识

一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（T swett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。

又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。

也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压—压力可达150~300Kg/cm2。

色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。

高速—流速为0.1~10.0 ml/min。

高效—可达5000塔板每米。

在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。

同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

分辨率高—可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

液相色谱教程-液相色谱基础知识2

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YOU
拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰
鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰
色谱图名词术语
基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号 – 基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓慢变化 – 基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起的基线波动 – 谱带扩展(Band Broadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象
-25%
液相色谱的应用
目的:得到数据-定性及定量分析
– 灵敏度的要求 – 样品的复杂性 – 样品量的要求 – 精度及准确度的要求 – 容易使用
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液相色谱的应用
制备型液相色谱目的:得到纯品-分离及纯化 • – 化合物的稳定性 • – 样品的复杂性 • – 制备量的要求 • – 纯度的要求，及纯度的鉴定 • – 方法的安全性
半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧相交两点之间的距离
色谱图名词术语
– 峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差(σ)(Standard Error):0.607倍峰高对应峰宽的一半
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色谱图名词术语
死时间(t0)(Dead time):不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间 – 保留时间(tR)(Retention time):组分从进样到出现峰最大值所需的时间

液相色谱基础

：加温操作; HPLC：室温；高压（液体粘度大）较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。 • 4、分析速度和分析最低限差别 • GC：最低限达10-7~10-14g • HPLC：最低限达10-6~10-8g
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。
• 分子筛：属于合成硅铝酸钠盐或钙盐，它具有均匀孔隙结构和大的表面积，分离基于分子筛的极性。一般用来分离永久性气体和无机气体。但要注意，分子筛在常温下对CO2发生不可逆吸附，因而不能用来分离CO2，分子筛在使用前在400~550℃活化2 小时，但很容易吸水失活，在使用过程中要注意防止水气进入色谱柱内。
色谱条件的选择
分离条件(色谱柱)的选择 1. 固定相的选择；2. 柱长的选择
（1）气固色谱固定相： a. 种类：活性炭、活性氧化铝、硅胶、分子筛、高分子多孔
微球（GDX系列）等
b. 特点：
（1）性能与制备和活化条件有很大关系；（2）同一种固定相，不同厂家或不同活化条件，分离效果差异较大；（3）种类有限，能分离的对象不多；（4）使用方便，常用于分离常温下的气体及气态烃类等。
高压输液泵
用于输送流动相，由于色谱柱很细、为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm）、流动液的扩散系数远小于气体，故液体的流动相高速通过时，液体流动时阻力很大，必须要有很高的柱前压力。 3、高压输液泵高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。压力：150～350×105 Pa，高压、高速是高效液相色谱的特点之一。流量稳定（影响重现性及分析精度）、流速可调应具有压力平稳、脉冲小、耐腐蚀等特性

液相色谱法的基本原理

液相色谱法的基本原理
液相色谱法（Liquid Chromatography，LC）是一种基于溶剂流动作为移动相，将样品溶解在溶剂中，并利用样品与固定相之间的相互作用分离的分析技术。

液相色谱法的基本原理是将被测物样品通过一个流动相（液体溶剂）推动，使其流过填充在色谱柱中的固定相（固定在柱中的吸附剂或离子交换剂）。

在固定相的作用下，样品中的成分会因为与固定相的相互作用不同而以不同的速度迁移。

通过在柱的出口处测量溶液中组分的浓度或检测样品组分的吸收或发射特性，便可分析出溶液中各个组分的浓度和性质。

液相色谱法的固定相多种多样，根据固定相的不同，可以将液相色谱法分为吸附色谱法和分配色谱法两大类。

吸附色谱法是利用吸附剂（如硅胶）吸附样品中的物质，根据物质与吸附剂之间的相互作用力的不同，实现成分分离；分配色谱法则是以液相中的化学平衡分配作用为基础，将样品中的组分分散分离到不同程度的吸着剂上。

液相色谱法常用的柱型包括常规柱、反相柱、离子交换柱、大小排列柱等。

其中，反相柱是最常用的柱型之一。

使用反相柱时，固定相表面通常被涂覆上一层无极性覆膜，使其具有亲水性，常用的覆膜材料有碳氢化合物。

这样可以使非极性物质在移动相中发生亲水化反应，从而实现其在固定相上的迁移。

总之，液相色谱法的基本原理是利用读取流经柱中的样品与固定相之间的相互作用的不同，通过测量在柱出口处的吸收或发
射特性，实现样品中各个组分的分离和定量分析。

通过选择不同的固定相和柱型，液相色谱法可以适用于不同种类的样品分析。

Shimadzu液相色谱基础

3
性能指标
检测限、线性范围、稳定性等，影响检测结果的准确性。
数据处理系统
作用
01
数据处理系统用于采集、处理、分析色谱数据，提供实验结果
和图谱。
功能
02
包括基线校正、峰识别、定量分析等。
软件应用
03
常用的软件有ChemStation、Empowe
液相色谱操作流程
详细描述
当色谱峰的形状异常，出现拖尾或前延现象时，可能是由于固定相的流失或污染、流动相的配比不当、柱温波动、样品溶剂选择不当等原因造成的。为了解决这个问题，可以更换固定相、调整流动相的配比、保持柱温恒定、选择合适的样品溶剂等方法。
峰分离不完全
总结词
峰分离不完全会导致相邻峰的干扰，影响分析结果的准确性。
流动相
作用
流动相用于携带样品通过色谱柱，与固定相相互作用，实现组分分离。
组成
通常由溶剂和水等组成，根据分离需求选择合适的流动相。
流速控制
流速直接影响分离时间和效果，需精确控制。
检测器
1 2
作用
检测器用于检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号。
类型
常见类型有紫外可见吸收检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
数据处理
对采集到的数据进行基线校正、峰识别、定量计算等处理。
结果分析
根据处理后的数据，对样品中的组分进行分析和比较，得出实验结论。
04
液相色谱条件优化
流动相的选择与优化
总结词
流动相的选择与优化是液相色谱分离效果的关键因素之一。
详细描述
根据样品的性质和分离要求，选择合适的流动相种类、溶剂和比例。优化流动相的pH值、离子强度和粘度，以提高分离效果和降低背景干扰。

液相色谱质谱基础介绍

干燥气作用：加热的干燥氮气反向流动，带走液滴中的中性溶剂分子，从而收缩液滴，直到排斥的静电力超过液滴表面张力，引起库仑爆炸。这个过程不断重复，直到待分析物离子最终变成气态分子离子进入毛细管。注：①被测物质离子化过程在进入离子源前已经完成!!
21
质谱的调谐和校正
调谐：通过把一系列已知质荷比的标准物引入三级四极杆并产生离子，利用这些已知离子，调整离子光学组件上的仪器参数（电压值），以期在全质量范围获得最大传输效率，获得理想信号强度。调谐包括控制skimmer，八极杆，透镜，四极杆和检测器等的参数。
APCI
分析物的极性
极性 25
LC-MS分析条件的选择
2. 正负离子模式的选择
正离子模式（ESI+）： *适合碱性样品分析，可用乙酸（pH=3~4）或甲酸（pH=2~3）对样品加以酸化，降低pH *流动相酸性环境：容易加合质子
负离子模式（ESI-）： * 适应于酸性样品，含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用 * 流动相碱性环境：易失去质子 * 可用氨水或三乙胺（因产生顽固性背景102峰 [M+H]，慎用！）对样品进行碱化，增加pH
缺点：没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。
2
培训目的
认识和了解液相色谱三重四级杆质谱（1290II-6460）掌握MussHunter Data Acquisition参数设定，学会数据采集掌握利用Qualitative Analysis进行数据分析的基本操作
3
• 不过滤离子，所有的带电离子全都通过
B → 扫描（SCAN）
• 指在给定的质荷比范围内，依次采集每个质量数的信号
C → 选择离子监测（SIM）
• 只是采集指定的某个或某几个质荷比的离子信号

液相色谱基础

1）设定时间程序（切换检测波长等） 2）双波长检测 3）比例色谱，初步判断峰的纯度 4）停泵扫描，确定组分最大吸收波长
检测器
二极管阵列检测器（SPD－M10AVP）
二十一世纪标准紫外检测器
色谱定性依据：
保留时间常规紫外检测器
峰纯度
二极管阵列检测器
检测器
二极管阵列检测器的优点：
1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰
气泡气泡对测定的影响：
1）柱流量不准 2）检测器基线波动脱气注意点： 1）每天脱气(无在线脱气器时） 2）混合溶剂脱气时间不能过长
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输液泵
送液方式：恒流控制恒压控制
VP系列输液泵：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵 D泵：并联微体积往复式泵 T泵：串联式往复泵
岛津VP系列输液泵
反相液相色谱流动相极性大于固定相极性样品的保留顺序是非极性组分保留值大，极性组分先流出。正相液相色谱流动相极性小于固定相极性
溶剂前处理
过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。
溶剂前处理
脱气目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的
返回
目的
单元
流速范围特性和应用
分析
LC-10ADVP
0.001-9.999 超低脉动，适于半微量LC 和 LC-MS
LC-10ATVP 0.001-9.999 非凡的耐用性，适于常量分析
*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度
进样器
自动进样器手动进样器原理：（六通阀）注入方式： 1）全量注入 2）部分注入
返回
手动进样器的原理图

液相色谱基础理论.ppt

鬼峰－ Ghost Peak
并非由试样所产生的峰；亦称假峰
17
基础理论：术语介绍
基线－Baseline
在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线
基线飘移－ Baseline Drift
基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声；N － Baseline Noise
由各种因素所引起的基线波动
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基础理论：术语介绍
峰面积－ Peak Area
峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差；σ － Standard Error
0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
拖尾峰－ Tailing Peak
后沿较前沿平缓的不对称峰
前伸峰－ Leading Peak
前沿较后沿平缓的不对称峰
调整保留体积，V’R － Adjust retention volume
戴安中国HPLC用户培训 2011年
戴安中国有限公司
液相色谱基础知识部分
液相色谱简介液相色谱理论基础
2
高效液相色谱简介
3
色谱的发明人
俄国科学家：M. S. Tswett 正式命名“色谱”的文献
4
经典液相色谱
石油醚淋洗剂
叶绿素
碳酸钙颗粒
Review Stop
叶绿素中的有色物质
峰底－ Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线
峰高－ Peak Height
峰最大值到峰底的距离
峰宽－ Peak Width
在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半（高）峰宽－ Peak Width at Half Height

液相色谱流动相基础知识-扫盲篇

液相色谱流动相基础知识-扫盲篇一、液相色谱流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在SPME填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。

因此，k值是流动相组成的函数。

塔板数N一般与流动相的粘度成反比。

所以选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料会计考试有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相溶剂瓶，以提高灵敏度。

④粘度要低（应<2cp）。

高粘度溶剂溶剂瓶会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

二、液相色谱流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸会计考试的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。

分析弱酸经济师样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互网上培训作用，减轻或消除峰拖尾现象。

液相色谱基础知识

分辨率是色谱分离中主要考虑的因素
在开发色谱方法时，有很多因素是很重要
的。除分辨率之外，以下几个因素都要考
虑。
灵敏度
成本
载样量
容易使用
分析速度
色谱柱寿命
溶剂损耗
效率
Good Column
Inject
4.4% height
W1.44
Bad Column
提高柱效的方法
色谱柱本身
减小填料的颗粒度找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度降低溶剂的粘度增加柱长
其他影响柱效的因素
柱外效应
连接管路进样器、检测器
进样体积进样量
容量因子 k'
与峰高的关系
与R的关系
示差折光电导
响应
通用选择性
灵敏度毫克纳克
线性范围 104
106
流速敏感是
是
温度敏感是
是
梯度淋洗不可有限制
紫外荧光电化学
选择性选择性选择性
纳克 Picogram Picogram
105 10~103
106
否
否
是
否
否
是
可以可以脉冲的可以
色谱条件的优化
分离度
速度
容量
开发液相色谱方法
进样器
液相色谱的应用（一）
“分析型液相色谱” 定性及定量分析
灵敏度的要求样品的复杂性样品量的要求精度及准确度的要求容易使用
液相色谱的应用（二）
“制备型液相色谱” 分离及纯化
化合物的稳定性样品的复杂性制备量的要求纯度的要求，及纯度的鉴定方法的安全性
开发液相色谱方法
问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率?

液相色谱基础知识

梯度洗脱形式：梯度洗脱形式：
线性梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化和时间成线性比例指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈指数关系折线梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈跳跃关系
梯度洗脱形式的选择
液相色谱基础知识
梯度洗脱：梯度洗脱：
优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度，提高检测器的灵敏度
液相色谱基础知识
液相色谱基础知识
液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱：
适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用
气相色谱：气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法
适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、流动相只起运载样品分子的能力
注意事项：注意事项：
溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）
样品
1.
处
理
使用适宜的流动相溶解样品在溶剂选择的时候，应注意以下原则： -- 减少溶剂峰，尤其是不可使用组分峰靠近溶剂峰的流动相 -- 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在色谱柱中产生沉淀
溶剂等级
分析纯级(实线）和 HPLC 级溶剂（虚线）的吸光度比较
甲醇
乙睛
正己烷
General Maintenance and Troubleshooting
溶剂等级
缓冲液的使用
使用前必须过滤以免造成腐蚀、使用后一定要对柱子进行清洗，以免造成腐蚀、磨损及阻塞:首先用纯水冲洗首先用纯水冲洗30-60min（0.1-0.5ml/min），再用），再用阻塞首先用纯水冲洗（），甲醇冲洗30min(0.1-0.5ml/min) 甲醇冲洗易受到细菌和霉菌的影响

液相色谱基础知识(waters)

H 3 C H 3 C
C H 2
C H 2
C H 2 C H 2
H 2 C
H 2 C
H 2 C H 2 C
C H 2
C H 2
C H 2 C H 2
H 2 C
H 2 C
H 2 C H 2 C
C H 2 H 2 C
H 2 C C H 2 H 2 C C H 2 H 2 C C H 2
H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 3 C H 3 H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 2 C H 3 H H 3 C S C i H 3 C H 3 O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S i O O O S O iO H O S O iO
离子交换柱(钙基/Ca)
用于单糖、双糖及糖醇等低分子量的糖、及乙醇等的分析。主要用于药厂维生素C的原料分析(sorbitol/mannitol-山梨醇/甘露醇)，酒厂(葡萄酒、啤酒等)的糖及乙醇含量的分析。
柱温~90℃，要求有柱温箱。对流动相(水)的要求较高，要求用户另置超纯水系统。
T = 1.58 峰面积回收率
97.8 % 95.3 % 92.3 %
Waters 21,379
超越极限：全新Xterra色谱柱
集硅胶与聚合物基质填料的优点为一体,突破常规高效色谱柱的极限高效、高速分离
不仅能够使用极小粒径的填料以进行高分辨及快速分析，而且允许在高温下进行分离

液相色谱基础理论

检测器的清洁和维护
定期清洁和维护检测器，确保其正常运行和准确性。
仪器设备的日常检查和维护
定期对仪器设备进行检查和维护，确保其正常运行和使用效果。
04
液相色谱的应用
在化学分析中的应用
分离和纯化有机化合物
药物分析
液相色谱可用于分离和纯化有机化合物，如芳香烃、醇类、羧酸等。
液相色谱可用于药物分析，对药物进行定性和定量分析，确保药物的质量和安全性。
液相色谱的分类
按固定相的物理状态分类
液固色谱法（利用不溶于水的固体高分子涂层作固定相）和液液色谱法（利用互不相溶的两种液体作固定相）。
按分离机理分类
吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法和亲和色谱法等。
按色谱柱的形式分类
填充柱和毛细管柱。填充柱是将固定相填充在不锈钢或玻璃管内，而毛细管柱则是将固定相涂敷于多空细玻璃或石英纤维上，制成毛细管色谱柱。
液相色谱的背景是基于不同的物质在固定相和流动相之间的分配系数不同而实现分离的。通过选择合适的固定相和流动相，可以实现对不同物质的分离。
液相色谱的简介
01
液相色谱是一种基于流动相和固定相之间分配平衡的分离技术。其基本原理是利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现各组分的分离。
流动相和固定相
流动相
是携带样品通过色谱柱的液体，也称为淋洗液。流动相的选择对于液相色谱分离效果至关重要，需要根据不同的分离需求选择合适的流动相。
固定相
是色谱柱中的填料，是液相色谱分离的核心部分。不同物质在固定相和流动相之间的分配系数存在差异，从而实现分离。常用的固定相包括硅胶、氧化铝、活性炭、聚合物等。
液相色谱基础理论

液相色谱基础知识

紫外可见检测器
紫外可见检测器
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：Lambert-Beer定律，A＝KCL 优点：1）对温度和流速变化不敏感
2）可用于梯度分析缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
紫外可见检测器
光栅
l
样品池
Ein
Eout
光电管
D2 / W 灯
Ein
Ein
参比池
返回
流动相注意点
离子对试剂的使用具有缓冲盐流动相的使用分析结束及开
始流动相平衡加快平衡时间异丙醇的使用
LC检测器
紫外可见检测器（UV/VIS）二极管阵列检测器（PDA）示差检测器（RID）电导检测器（CDD）荧光检测器（RF）电化学检测器（L-ECD）质谱检测器（MS）蒸发光散射检测器（ELSD）
返回
流路中形成气泡引起的问题
改变保留时间和峰面积
流动相中形成气泡对液流的不良影响泵中形成气泡使液流波动
峰变形
柱中气泡形成和累积使流动相绕流
尖峰或锯齿状噪声
检测池中气泡形成和累积产生基线噪声
输液泵
输液泵类型：注射泵柱塞往复泵隔膜泵
输液泵控制方式：
恒流控制恒压控制
柱塞往复泵
马达和凸轮
液相色谱基础知识
一、色谱起源
石油醚
色素
碳酸钙颗粒
色谱
组分
HPLC的分离类型
正相色谱 (NP-HPLC) 反相色谱 (RP-HPLC) 反相离子对色谱 (RPIC) 离子交换色谱 (IEC) 空间排阻色谱 (SEC) 手性化合物分离模式(Chiral separation
mode)