遗传实验：果蝇唾液腺染色体的制片与观察
果蝇唾液腺染色体的制片与观察
果蝇唾液腺染⾊体的制⽚与观察果蝇唾液腺染⾊体的制⽚与观察121140083 朱琪璋⼀实验⽬的1观察果蝇的唾腺染⾊体，练习果蝇幼⾍唾腺分离技术及唾腺染⾊体的制⽚⽅法2观察了解果蝇唾液腺染⾊体的形态特征3了解果蝇唾腺染⾊体在遗传学研究中的意义⼆实验原理（预备知识）1果蝇唾液染⾊体的介绍果蝇、摇蚊幼⾍唾液腺细胞中的巨⼤染⾊体。
双翅⽬昆⾍的唾液腺细胞发育到⼀定阶段之后就不再进⾏有丝分裂，⽽永久停留在分裂间期。
但随着幼⾍的⽣长，唾液腺染⾊体仍不断地进⾏⾃我复制⽽且不分开，经过许多次的复制形成约 1 000—4 000拷贝的染⾊体丝，合起来直径达5µm，长度达400µm，⽐普通细胞中期染⾊体约⼤100～150倍，所以⼜称为多线染⾊体或巨⼤染⾊体。
唾液腺染⾊体的另⼀特点是体细胞中同源染⾊体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋⽩纤维丝唾液腺染⾊体是⼀类存在于双翅⽬昆⾍，如果结合在⼀起，紧密盘绕。
所以细胞中染⾊体只呈单倍数。
⿊腹果蝇的染⾊体数⽬2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染⾊体为中部着丝粒染⾊体，第Ⅳ染⾊体和第IX染⾊体为端着丝粒染⾊体。
唾液腺染⾊体形成时，染⾊体着丝粒和近着丝粒的异染⾊质区聚于⼀起形成⼀个染⾊中⼼，所以在光学显微镜下可见从染⾊中⼼处伸出6条配对的染⾊体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染⾊中⼼的很短的臂。
唾液腺染⾊体经染⾊后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹。
这些横纹的数⽬，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。
研究认为这些横纹与染⾊体的基因是有⼀定关系的。
通过⼀定的实验⽅法使果蝇唾液腺染⾊体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显⽰出来，是进⾏果蝇遗传学研究的很重要的⼀个环节．果蝇唾液腺染⾊体在不同种间的共同点是染⾊体的着丝点位于⼀个染⾊区域，但不同的种类往往其染⾊体臂数⽬不同．每条染⾊体臂上分布着染⾊深浅不同、粗细各异的磺纹，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数⽬⼜都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染⾊体近⼏⼗年来，已⼴泛⽤于种内系统发⽣和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染⾊体的不联会、形成泡、缢虞和间带区的伸缩性以及顶体的形态等多⽅⾯的差异，⽽特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产⽣了例位以及染⾊体的断裂、融合和重排)。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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一、试验目标
1.了解唾腺CS特点 2. 学习分离唾腺技术 3. 掌握唾腺CS制片方法
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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二、试验原理
• 永久间期CS • 复制而不分开 与观察
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果蝇唾腺染色体特点：
• 剥离唾腺置载片中央,加一滴HCl,解离23
• 吸去HCl,冲洗23次,吸干;加1d染液,染色5
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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4. 压片及观察
• 载片置平整处,加盖 片,轻敲;压片
• 低倍至高倍镜检
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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果蝇唾腺染色体的制片与观察
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果蝇唾腺染色体的制片与观察
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五、注意事项
1. 水不可太多,不然幼虫会漂浮而且活跃 2. 一定加生理盐水,不然唾腺易干 3. 将脂肪组织去除洁净 4. 吸水时勿将唾腺一起吸走 5. 染色时间不可过长,不然背景也着色 6. 压片时要揉,用力要均匀
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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六、作业
1. 制效果很好唾腺CS暂时片1-2张 2. 真实绘制观察到唾腺CS绘图 3. 思索题P66 1-2
4.Puff结构：幼虫不一样发育期，浓缩染色质纤维会成群解 旋、松开，形成泡状涣散结构，使对应基因得以表示，这 种泡状结构称Puff结构，亦称染色体疏松。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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三、试验材料、器具、药品试剂
• 大果蝇(D. virilis)活体三龄幼虫 • 解剖镜,显微镜,培养箱;培养瓶,
1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um， 长约400um，相当于普通染色体100—150倍，因而又称为巨 大染色体。
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。
目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。
了解唾腺染色体的作用和意义。
１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。
因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。
1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。
Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。
２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。
２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。
（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。
幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。
拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。
去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
实验四 果蝇唾腺染色体的制备和观察
五、注意事项
1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织清除干净 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色 5. 压片时要逐渐加力，用力要均匀 6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色 液，再压片 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走
六、实验结果观察
动物遗传学实验
实验四
果蝇唾腺染色体的 制备和观察
一、实验目的
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染
色体的制片方法
2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学
特征
二、实验原理
果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其 中的染色体是巨大的唾液腺染色体 唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许 多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起 来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多 （约100～150倍），所以又称为多线染色体 唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许 多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等 提供了独特的研究材料
三、实验材料与器具
• • • • 三龄幼虫 0.9%生理盐水 胭脂红染色液 解剖镜 解剖针 吸水纸
四、实验步骤(1)
(1)剥离唾腺 在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、 肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温 处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。 每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。果蝇 的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体 后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫 头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。 唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织 （不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白 色脂肪剥离干净。
遗传学实验实验九果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
将涂片放入盛有胃酶的 容器中，用吸管或滴管 滴加适量的胃酶溶液， 使涂片完全浸没在溶液 中。在适宜的温度下处 理一定时间，使唾腺细 胞分离。
将经过胃酶处理的涂片 取出，用吸管或滴管滴 加适量的胰酶溶液，再 次放入适宜温度下处理 一定时间，使染色体逐 渐分离出来。
将涂片用清水冲洗干净 ，用吸水纸吸干水分， 然后进行染色。
通过观察果蝇唾腺染色体标本的次级 结构，可以发现染色体的精细结构， 如染色粒、染色带等特征，有助于研 究染色体的功能和基因定位。
染色体交叉互换
在某些情况下，果蝇唾腺染色体标本 中可能会出现染色体交叉互换的现象 ，这种现象可能与基因重组和遗传变 异有关。
05
实验结论
实验结果总结
成功制备了果蝇唾腺 染色体标本，观察到 了清晰的染色体结构。
掌握果蝇唾腺染色体的观察技术
学习并掌握显微镜观察技术，包括显 微镜的基本操作、调节焦距、观察视 野等。
学习并掌握染色体标本的制备和染色 技术，了解其原理和方法步骤。
分析果蝇唾腺染色体的特点
观察并记录果蝇唾腺染色体的形 态、大小、着丝粒位置等信息，
分析其特点。
比较不同种类的果蝇唾腺染色体 的差异，分析其与物种进化的关
3. 准备载玻片和盖玻片
将载玻片和盖玻片清洗干净，晾干备用。
安全须知
实验过程中应注意安全，避免直接接触染色液和化学试 剂，如需使用手套等防护措施。
唾腺染色体的制备
制备涂片
胃酶处理
胰酶处理
冲洗涂片
安全须知
用镊子小心地从果蝇头 部取下唾腺，将其放在 干净的载玻片上，用另 一片载玻片将其轻轻压 平，形成一层均匀的涂 片。
通过实验，深入了解 了果蝇唾腺染色体的 形态和结构特点。
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。
果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。
由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。
三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。
在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。
B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。
果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。
在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。
实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。
将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。
首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。
解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。
在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。
遗传实验3—果蝇唾液腺染色体制片与观察
压片
❖ 盖上盖玻片（避免气泡），保证盖玻片下充满染液。 ❖ 解剖针轻敲样本正上方使组织细胞分散。 ❖ 扶住盖玻片边缘，用拇指快速按压样本正上方并维持压
力3秒钟，使细胞膜破裂，细胞质流走，染色体散开。 ❖ 滤纸吸干多余染液
果蝇唾液腺染色体制片与观察
实验目的
❖ 掌握果蝇唾液腺染色体的制片技术 ❖ 观察唾腺染色体的形态特点
实验材料及流程
❖ 果蝇三龄幼虫 melanogaster 2n=8 virilis 2n=12
流程：剥离唾液腺-解离-染色-压片-镜检
解剖幼虫
❖ 工具：镊子、解剖针 ❖ 生理盐水(0.7% NaCl)中操作、保存。注意液体量的
控制
解剖幼虫-拉断
❖ 唾腺位置：头部两侧、位置在虫体的1/3-1/4 ❖ 两根解剖针的落点：近头端口器 1/3-1/2处 ❖ 口器处解剖针平稳前移，身体破裂，一部分器官随口器
牵拉而出，另一解剖针向前滚动挤出剩余器官。
解剖幼虫-找到唾液腺
❖ 4倍镜下寻找唾液腺（光圈10，淡黄色条状） ❖ 对比肉眼观察，锁定唾腺目标，透明条状，倒像 ❖ 体视镜下唾腺透明度很高不利于寻找
解剖幼虫-剥离唾液腺
❖ 体式镜下剥离唾液腺（肉眼辨认也可） ❖ 解剖针定期引流，维持湿环境
体视显微镜 *
❖ 双物镜 ❖ 立体视觉 ❖ 正像 ❖ 超长焦距 ❖ 放大倍数连续调节
滤纸吸干液体-换液
❖ 一定注意保护样本，不要将其吸到滤纸上 ❖ 液体较多时滤纸离样本远一点，随着液体减少再逐渐靠
近样本解离-水洗-染色 Nhomakorabea镜检
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察一、实验目的1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法；2、观察果蝇的唾腺染色体。
二、实验原理1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。
唾腺染色体的显著特征是：（1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍；（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。
唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。
横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。
横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；（4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。
唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。
一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。
许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。
果蝇唾液腺：2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，构成一个永久间期系统。
唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。
由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。
果蝇唾液腺染色体制片与观察
三、实验材料
野生果蝇
四、实验步骤
1、剥离果蝇幼虫的唾液腺
取一洁净的载玻片，滴上1滴0.75%生理盐水。在瓶壁 上挑选肥大的充分发育的三龄幼虫放在的生理盐水中，唾 液腺位于幼虫食道的两侧，长度约占身体总长的1/3—— 1/4左右。
解剖时把载玻片放在解剖镜或放大镜下,一手用解剖针压住头部 (外型似一个黑色小点)，压住的地方越小越好，同时，用镊子夹住幼 虫身体1/2处， 轻轻地将幼虫的头部自身体拉开。唾液腺随同内脏一 起拉出。如果头部拉断,腺体没有拉出,可以用解剖针从镊子附近的腹 部缓缓地向头端挤压,也可压出唾液腺。然后在镜下细心分离，理出双 叉形半透明的囊状腺体即为唾液腺，在生理盐水中无论怎样触动它都 不会发生形状改变。
同源染色体的两条臂紧密结合，自由伸展。因 此唾液腺细胞染色体数看不出2n的染色体数， 只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。 与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾液 腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹，这 些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特 征和一些基因的位置。
由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重 复、倒位、易位等很容易在唾液腺染色体上识 别出来。
在显微镜下观察，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓 清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清细胞核是由染色体卷缩在 一起形成的。唾液腺拉出后，剔除腺体周围乳白色的脂肪组织和身体 的残留部分，只留唾液腺在载玻片上。
2、解离 用滤纸条吸净唾液腺周围的其它物质，然后将唾 液腺放入1N HCl，解离2—3分钟，以松软组织利于 细胞破裂，使染色体散开。 3、水洗 解离后的唾液腺用蒸馏水洗3—4次（或0.4%的 生理盐水），水洗时要注意不要把唾液腺弄丢，水洗 要彻底，目的是洗去盐酸，以免影响染色效果。另外 水洗过程也是细胞低渗过程，使唾液腺细胞膨胀。
果蝇唾腺染色体的标本制备和观察
果蝇唾腺染色体的标本制备和观察摘要多线染色体存在于某些生物特定生命周期的某些细胞中。
本实验观察的多线染色体是果蝇唾腺染色体，在其染色体标本中可以观察到果蝇唾腺染色体形态巨大，由5条长染色体和1条短小的染色体组成，他们聚集在染色中心，横纹条带深浅不一，疏密各异，遍布每条多线染色体臂，有些地方有还胀泡出现。
由于多线染色体因其形态巨大，横纹明显，它常被作为基因定位的良好材料，并且广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。
关键词多线染色体果蝇唾腺染色体横纹胀泡1.引言染色体由DNA和蛋白质构成，作为DNA的载体，有着不可或缺的的作用，因此是科学家广泛研究的材料。
然而染色体的研究通常面临两个困难：一是染色体很小；二是除极少数动植物，如玉米粗线期的染色体上具有染色粒这样的结构可以作为识别或定位的标志外，大多数生物的染色体都没有标志。
而多线染色体的染色体足够大，染色体上的识别标记足够多，这将对遗传学研究将提供不少的便利。
本次实验观察的多线染色体有如下特征：①果蝇唾腺染色体是一种缆状的巨大染色体。
由于果蝇幼虫的唾腺细胞发育至一定阶段就停止有丝分裂，终止在间期，但唾液腺细胞核的染色体仍不断地进行自我复制，但并未发生细胞核分裂，复制后的子染色体彼此不分开，形成了多线染色体，对于黑腹果蝇唾腺染色质的复制可达9次之多，单条染色体臂可达275μm，约为普通中期染色体的150倍。
②果蝇唾腺染色体由5条长染色体和1条短小的染色体组成，他们聚集在染色中心。
唾腺染色体由于体联会的原因只有二倍体的单元数，第Ⅰ染色体（X染色体）为端着丝粒，所以染色体的一端在染色中心上，另一端游离，第Ⅱ、Ⅲ染色体均为中着丝粒，它们从染色体中心呈V字形向外伸展，所以分别能看到2L(left arm)、2R( right arm) 、3L和3R4条长臂；点状的第Ⅳ染色体很短小，为端着丝粒。
因此，可以见到5条很长的和一条紧靠染色体中心的短小的染色体。
遗传实验02：果蝇唾腺染色体
七、绘图
绘制你所观察到的清晰的果 蝇唾腺染色体的图像。
八、实验ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ析与讨论
1、根据实验的观察可以确定果蝇的染色体 数目吗？ 2、制备果蝇唾腺染色体需注意哪几个关键 步骤？ 3、利用果蝇唾腺染色体可以进行哪些遗传 学研究？
九、参考文献
张贵友，普通遗传学实验指导， 北京：清华大学出版社，2003 卢龙斗、常重杰，遗传学实验技术， 合肥：中国科学技术大学出版社，1996 刘祖洞、江绍慧，遗传学实验， 北京：高等教育出版社，1987
在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观 察到，所以最容易识别的是5条（图三）。
雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里，因 为是异染色质，看起来染色可能淡?深些。有 经验的人可以发现雄果蝇的X染色体比雌果蝇X 染色体要细些，因为雄性只有一条X染色体。
3.唾腺染色体上的横纹宽窄、深浅是一定的， 但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不 连续的膨胀，这称为疏松区（puff），目前 人们认为这是这部分基因被激活的标志。
唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状 态－体联会； 各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠 拢形成染色中心(chromocenter)； 唾腺染色体经染色后，出现深浅不同、密疏 各别的横纹(band)，其数目和位置是恒定的， 代表着种的特征； 如果染色体有缺失、重复、倒位、易位等畸 变，很容易在唾腺染色体上识别出来，因此 唾腺染色体是研究染色体畸变的好材料。
三、实验材料
黑腹果蝇的三龄幼虫 为了得到更好的染色体标本，需要在20— 25℃和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行 动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫（化蛹 之前）做标本最佳。
三龄幼虫照片
四、实验仪器与试剂
１. 器具： 双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、 解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。 ２. 试剂： 改良苯酚品红溶液、生理盐水、1N 盐酸。
果蝇唾液腺染色体的制片与观察
果蝇唾液腺染色体的制片与观察一、实验目的学会果蝇幼虫的解剖技术学习唾腺染色体的染色制片方法观察唾腺染色体了解染色体横纹的特点二、实验原理黑腹果蝇幼虫期的唾腺细胞核非常大，唾腺染色体比其它细胞染色体大200多倍并且总是处于前期状态。
这是由于染色体复制而分不开，纵向并列形成像电缆那样的巨大染色体，这样的染色体称为多线染色体，染色体上的染色粒排列在成横带在染色体的部位是一定的。
从唾腺染色体的制片中可以看到五条长臂，好似从一共同的中心发射出来的，这个中心叫做染色中心。
它是由于所有染色体在刚一接近其纺锤丝附着点时，即被相互吸引及紧密结合而成，这五条臂分别称为X、2L、2R（第二染色体的左右臂），3L及3R（第三染色体的左右臂），还有一小段用4来表示（第四染色体），每一条臂都含有二条紧密聚合的同源染色体，一条是母本的，来自卵核，一条是父本的，来自精子。
在雄体的唾腺中，Y染色体大大的萎缩，X染色体则呈现不配对而成细长的一条。
因为，每一条臂都含有二条紧密聚合的同源染色体，所以，当它们有相同的构造时，没有办法从两条紧密配对的双股的染色体复合体来彼此区分它们。
但两条同源染色体之间有差别时，则很容易看出来。
例如，当一条染色体缺失一个片段时，它的同源染色体，在这一段不能配对，就会拱起来，形成了一弧状结构，此外重复、倒位、易位等染色体畸变也可以看到。
所以，果蝇唾腺染色体是研究染色体畸变的好材料，制备唾腺染色体标本，可以用果蝇3令幼虫，越肥越好，（温度在15℃左右，能使幼虫长得肥而大），果蝇的幼虫呈半透明状，有黑点的一端是头部，黑点是它的神经节，唾腺在神经节下面，呈两个半透明的棒状物，中间有一个细丝相连。
三、 实验材料及器材解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、醋酸洋红、85%的生理盐水、1NHCl 的盐酸，以及果蝇幼虫（3令的越肥越好的果蝇幼虫）。
四、 实验步骤1、从果蝇的培养瓶中的找出一只又大又肥的果蝇幼虫，用解剖针将其挑出放在载玻片上，滴两滴85%的生理盐水在果蝇的幼虫上。
果蝇唾液腺染色体装片 的制作与观察
果蝇唾液腺染色体的观察一．实验目的1.学会果蝇幼虫解剖技术，唾液腺分离的方法，学习唾腺染色体的制片步骤2.观察果蝇唾腺巨大染色体的结构，了解染色体横纹的特点3.了解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的意义二．实验原理本世纪初，D. Kastoffs用压片法首先在D. melanogaster 果蝇幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体——唾液腺染色体（salivary gland chromosome）。
事实上，双翅目昆虫（如摇蚊、果蝇等）的幼虫期都具有很大的唾腺细胞，其中的染色体就是巨大的唾液腺染色体。
这些巨大的唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。
双翅目昆虫的整个消化道细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂，而停止在分裂间期。
但随着幼虫整体器官以及这些细胞本身体积的增大，细胞核中的染色体，尤其是唾液腺染色体仍不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5m宽，400m长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体（polytene chromosome）和巨大染色体（giant chromosome）。
唾液腺染色体形成的最初，其同源染色体即处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝合在一起，紧密盘绕。
所以配对的染色体只呈现单倍数。
黑腹果蝇的染色体数为2n=2×4，其中第II、第III染色体为中部着丝粒染色体，第IV和第I（X染色体）染色体为端着丝粒染色体（图1）。
而唾液腺染色体形成时，染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区聚于一起表成一染色中心（chromocenter），所以在光学显微镜下可见从染色体中心处伸出6条配对的染色体臂，其5条为长臂，1条为紧靠染色中心的很短的臂（图2,图3）。
果蝇唾液腺染色体制片和观察
实验四果蝇唾液腺染色体制片和观察一、实验目的与要求1.实验目的：理解果蝇巨大染色体产生的原因和特点；掌握果蝇睡腺剥离技术以及果蝇唾腺染色体制片法；观察果蝇睡腺染色体。
2.实验要求：本实验为必做实验。
二、实验类型本实验为验证型实验。
三、实验原理及说明20世纪处，D Kostoff用压片法首先在黑腹果蝇幼虫唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体。
双翅目昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫的睡腺细胞很大，唾液腺染色体比普通染色体大得多，唾液腺染色体经过多次复制不分开，大约有1000-4000根染色线拷贝，称为巨大染色体；具有体联会的特点，即体细胞同源染色体呈配对状态，是前期中一种永久性配对形式，所能观察到的染色体只有半数（n）；多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各异的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。
如染色体缺失、重复、倒位、易位等，很容易在唾液腺染色体上识别出来，所以果蝇的唾液腺是研究遗传学和基因组学的好材料。
四、实验仪器五、实验内容和步骤1.实验准备：（1）用具：双筒解剖镜,显微镜,镊子,解剖针,载玻片,盖玻片，滤纸等.（2）药品：醋酸洋红,冰醋酸,盐溶液(0.7%的氯化钠),1NHCL,蒸馏水，45%醋酸，乳酸-醋酸溶液（乳酸-60%=1：1）醋酸，乳酸-醋酸-地衣红染色液。
乳酸-醋酸-地衣红染色液的配法：A液：饱和地衣红乳酸溶液（2g地衣红+100 ml乳酸，加热，谨防沸腾），充分溶解后过滤。
B液：饱和地衣红醋酸溶液（2g地衣红+100 ml冰醋酸，加热，谨防沸腾），充分溶解后过滤。
1份A液：1份B液+1份蒸馏水充分混合后在棕色瓶中保存备用。
2.实验步骤：（1）取载玻片于双筒镜下，其上滴一滴生理盐水，幼虫置于生理盐水内，两手各握一枚解剖针，以针揿住幼虫末端的1/3处。
固定幼虫，将另一针揿住幼虫头部，用力向拉，把头部自身体拉开，腺体即随之而出。
腺体们于食道两侧，中间夹有神经球。
南京大学实验报告-果蝇唾液腺染色体的制片与观察实验报告
果蝇唾液腺染色体的制片与观察一、实验目的1、练习果蝇唾液腺的分离方法2、掌握唾液腺染色体的制片技术3、观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征二、实验原理1、双翅目昆虫（果蝇）幼虫期的唾液腺细胞很大，其中的染色体称唾液腺染色体，相当于一般普通染色体的100－150倍，又称巨大染色体。
2、在幼虫发育过程中，唾液腺染色体仍进行复制，但细胞只生长不分裂，从而产生多线染色体。
多线染色体经染色后，出现深浅不一、宽窄不同的横纹，这些横纹的数目和位置是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。
如果染色体缺失、重复、倒位、易位等结构变异时，很容易在唾腺染色体上识别出来。
3、多线染色体的特征：a 巨大；b体细胞配对，所以染色体只有半数（n=4）；c 各染色体的异染色质多份额着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；d 横纹有深浅、疏密的不同，各自相应排列，这意味着基因的排列。
三、实验材料和用品实验材料：黑腹果蝇的三龄幼虫实验用品：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸。
生理盐水、1％醋酸洋红。
四、实验步骤1、载玻片置于显微镜下，上面滴加一滴生理盐水，放上果蝇幼虫（有一钝尾和带黑色口器的尖头，可根据其在盐水中爬行方向确定头部），两手各拿一枚解剖针，左手解剖针按住幼虫的后端1/3, 右手解剖针按住头部(尽量靠近口器)用力后拉，把头部从身体拉出，唾液腺随之而出。
（一对双叉形透明的囊状腺体）。
2、除去幼虫其他组织部分，把唾液腺周围脂肪组织（不透明）剥离干净，然后将多余生理盐水吸走，滴一滴醋酸洋红在载玻片上。
3、染色10 分钟，盖上盖玻片，用滤纸轻压一下吸去多余的染色液，然后平放在桌子上，用大拇指适当均匀用力压住，并横向揉几次（勿使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉！）。
4、显微镜观察，先在低倍镜下观察，找到分散好的染色体图像，再高倍镜观察。
用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。
果蝇唾腺染色体的标本制备和观察
果蝇唾腺染色体的标本制备和观察果蝇(Drosophila melanogaster)是生物学研究中常见的模式生物之一，其唾腺染色体是生物学中经常使用的标本之一。
本文将介绍如何制备果蝇唾腺染色体标本，并展示如何观察这些标本。
制备标本材料制备果蝇唾腺染色体标本需要的材料如下：•果蝇成虫•酒精•醋酸•乙醇•0.5% 的乙酸-洋红溶液•1% 的氧化铬酸钾溶液•100% 的甘油•盖片•显微镜步骤1.将成虫放入酒精中，浸泡5分钟至失去活性。
2.用镊子将成虫头部部分取下，然后将其剪开，将唾液腺取出。
3.将唾液腺置于醋酸中浸泡2分钟，然后转移到乙醇中浸泡2分钟，最后放入1%的氧化铬酸钾溶液中浸泡1-2分钟。
4.从氧化铬酸钾溶液中将唾液腺转移到100%的甘油中浸泡1-2分钟，以使其变色，然后将其取出，并放入盖片上。
5.加入0.5%的乙酸-洋红溶液，然后用另一个盖片覆盖，压扁唾液腺。
6.将盖片放入显微镜，用40倍或100倍放大倍数观察。
观察标本染色体结构果蝇唾腺染色体呈现为极细线状，可根据其结构分为两类：•染色体较长的一端为钩状，称为钩端。
•另一端较短，称为非钩端。
染色体数量成虫染色体数目为8条，如下：•一对#1染色体•一对#2染色体•一对#3染色体•两对#4染色体染色体组成果蝇唾腺染色体由DNA和蛋白质组成，其中蛋白质主要为组蛋白和非组蛋白。
通过以上步骤，我们可以轻松制备果蝇唾腺染色体标本，并通过显微镜观察其结构和数量。
这对于生物学研究和遗传学研究具有重要意义。
果蝇唾液腺染色体制片和观察
实验报告课程名称遗传学实验实验名称果蝇唾液腺染色体制片和观察一、实验原理果蝇唾腺染色体是永久间期染色体，只发生DNA复制，不发生有丝分裂。
在幼虫唾腺细胞内，每条染色体进行了10次左右的复制，形成了约210=1024条染色体拷贝，再结合同源染色体的配对，共用约2048条同源染色体拷贝进行体细胞联会，形成比正常有丝分裂中期的染色体大200倍的、巨大的多线染色体。
这些染色体的着丝点聚集在一起，形成染色中心，同源染色体的两臂向外伸展。
经过染色，唾腺染色体的显示出独具本染色体特色的带和间带模式。
这个模式是恒定的，可用用于基因的定位，如果发生染色体的结构变异，则可以通过模式的改变而发现出来。
不同的染色体，其端部不同，可以用于鉴别染色体。
在观察唾腺染色体时，会发现膨胀泡结构，这是强烈的基因转录迹象。
二、实验结果图一：果蝇幼虫解剖针分离后效果图图二：剥离的腺体一共分离了3条果蝇幼虫才分离出较清晰的唾液腺体，在分离出带腺管的2侧腺体时，上面还有其他东西，因为想剥离的干净一点，所以没急着拍照，结果分离到一半时，一条腺体丢失，所以照片仅显示剥离中期时剩的一条腺体。
图三：唾腺染色体（借用）图四：唾腺染色体——图片放大（借用）带与间带、染色中心、膨胀泡、3R端部（僧帽）特点如上图标示。
三、总结反思从挑取果蝇幼虫，到幼虫的头身分离和剥离腺体，再到染色，这些操作的较为顺畅，并没有出现大的失误。
虽然刚开始分离的两条幼虫因为手法生疏，并没有分离出完整的腺体，但是第三次尝试时就分离出带腺管的2侧腺体，剥离后还剩一条较为完整的腺体。
染色时操作也较为小心，并未让腺体随水流被滤纸吸走。
就剥离腺体这个操作而言，我觉得这是一个需要耐心、眼力和方向感的事情，可以在剥离的时候将载玻片放在显微镜下，同时2根解剖针也进入显微镜的视野内的两侧，用解剖针判断该划掉哪个方向的一部分，一点点去掉不要的东西，最后就可以留下需要的腺体了。
但是操作一定要细心，腺体特别小，划的时候如果一不小心粘到解剖针上也弄不下来，那条腺体也就没用了。
遗传学实验_果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察摘要有关果蝇唾腺染色体，即巨大染色体标本的制备与观察的实验，操作过程及注意事项。
1.引言1881年，意大利的细胞学家巴尔比尼（Balbiani）在双翅目昆虫摇蚊幼虫的唾腺细胞间期核中发现了一种巨大的染色体，由于存在于唾腺细胞中，所以又称为唾腺染色体。
1933年，美国学者贝恩特（Painter）等又在果蝇和其它双翅目昆虫的幼虫唾腺细胞间期核中发现了巨大染色体。
这种染色体宽约5μm，长400μm，是一般中期染色体的100-150倍，因而又称为巨大染色体。
此后在昆虫的多种组织如肠、气管、脂肪体细胞和马尔皮基氏管上皮细胞内以及在其他动植物的一些高度特化细胞如某些原生动物及附子属（Aconitum）植物的反足细胞里也发现了这种巨大染色体。
果蝇幼虫的唾腺细胞发育到一定阶段后，停止在间期，但紧密配对的同源染色体（实为伸展的染色质丝），仍能不断复制，复制后的子染色体彼此不分开，复制可达9次之多，因此一对染色体最终可产生 2*29=1024条染色质丝，它们集结在一起形成了一条多线染色体。
2.实验材料2.1实验材料果蝇三龄幼虫、解剖针、解剖镜、显微镜、载玻片、盖玻片、改良苯酚品红染液、生理盐水、盐酸。
2.2实验方法2.2.1材料的获取及处理三龄幼虫的饲养：在15℃培养的果蝇三龄幼虫，培养时间较长，获取较多的三龄幼虫需要20d，但虫体大，爬行慢，唾腺细胞发育非常良好，贴在瓶壁的幼虫几乎全是后三龄幼虫，解剖比较容易，剔除腺体上的脂肪又快又易，压制出来的片子干净整洁，染色体上的带纹清晰可见。
此外，这种温度保湿抗污染性强，果蝇代谢慢，可较长时间供给学生实验幼体，所以，对供给学生实验材料来讲，此温度为最适温度。
【1】剥取唾液腺：(1)挑取三龄幼虫。
用解剖针从培养瓶中挑取行动迟缓、爬上管壁但未蛹化的肥大幼虫，体长约5mm。
个体肥大的幼虫是制作唾腺染色体的基础。
(2)区分幼虫的头部。
虫体尖细的一端为头部，有呈黑色的口器。
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流程：剥离唾液腺-解离-染色-压片-镜检
1 剥离唾液腺
❖ 唾腺位置：头部两侧、位置在虫体的1/3-1/4 ❖生理盐水：0.7% NaCl *
2 解离 *
❖ 目的：破坏胞间质及组织结构，使细胞容易散开 ❖方法：1M HCl 室温 处理3-5min
多线染色体的生理意义 *
❖ 分泌腺体需要在一定空间范围内具备高效分泌的 能力——细胞体积大、蛋白合成能力强。
❖ 多线染色体能够增加细胞核体积，进而增加细胞 体系。
❖ 多线染色体每一个基因具有数千拷贝，为细胞提 供更高的基因表达水平，提高蛋白合成能力。
多线染色体的形态特点 *
❖1 拟联会（体细胞联会）：同源染色体的同源臂 紧密结合，在DNA复制过程中新产生的染色质纤 丝互相缠绕，在光学显微镜石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异 染料
❖ 步骤： 1 滴加1-2滴染色液 2 染色8min
4 压片
❖ 单侧慢放盖玻片（领取） ❖ 用解剖针轻敲样本上方使其组织细胞分散 ❖ 用拇指按压载玻片使细胞膜破裂，细胞质流走，
染色体臂散开
5 镜检
JLU
果蝇唾液腺染色体的制片与观察
多线染色体（polytene chromosome）*
❖ 1881年首次发现
❖ 在双翅目昆虫的分泌组织细胞内存在一种光学显 微镜下可见的巨大染色体。称为多线染色体，是 细胞内持续进行的DNA的复制造成的。这种细胞 不分裂而DNA持续复制的现象被称为核内有丝分 裂（endomitosis）。多线染色体的每一条染色单 体都拥有数千个拷贝。
多线染色体的带型（banding pattern）*
❖ 深色带：螺旋程度高、难接近、非活化 ❖ 浅色带：螺旋程度低、易接近、活化 ❖ 胀泡（puff）：基因活跃转录区域
❖ 带型：种属特异性（缺失、重复、倒位、易位）
实验目的
❖ 掌握果蝇唾液腺染色体的制片技术 ❖ 了解唾腺染色体的形态特点。
实验材料及流程 *
❖2 染色中心：所有染色体的着丝粒及附近的异染 色质区域都集中在一起，染色后形成一个深色的 染色中心。
3 多线染色体形态：以染色中心为中心，向四周伸 出数条拟联会染色体臂。
果蝇唾液腺染色体形态 *
❖黑腹果蝇 2n=8
❖5长臂 1短臂
果蝇唾液腺染色体形态 *
❖virilis果蝇 2n=12
❖5长臂 1短臂