蝴蝶兰组织培养研究进展_综述_
蝴蝶兰的组织培养技术研究
泡 ４、５、６、７、８ｍｉｎ，在 处理 过程 中要不 断摇 晃 ，使 消毒液和外植体能充分 、均匀 的接触 ，然后用无 菌水 淋 洗 ４ ５次 ，用 无 菌手 术 刀将 花梗 切 成 １．５— ２ｃｍ的小段 ，接种在诱导分化培养基上 ，每瓶接 ｉ－２段 。 ２．２ 各种培 养基 的选择
利用这种组合 的方式 ，筛选出最佳诱 导 、分 化 和生 根培养 基 。 ２．３ 培 养条件
无 菌苗 光照 时 间为 １２ｈ／ｄ，光 照强 度 为 １６００～ ２０００１ｘ，温度 为 ２５～２８℃。 ２．４ 调查 统计
数 据 统计 方 法 ：每 处 理 调 查 ２Ｏ～５０个 ，无 菌 苗以 １个月为 １个生长周期 ，统计增殖数量 ，计 算继 代系数 ；接种 后 ７ｄ统计 生根数量 ，计算 生 根 率 。 ３ 结果 与分 析 ３．１ 不 同消毒 时 间对花梗 段 的影 响
蝴蝶兰花梗为外植体 ，以 ＭＳ附加琼脂 ６ｇ／Ｌ， 蔗 糖 含 量 为 ２０ｇ／Ｌ，水 解 酪蛋 白 ０．１ｇ／Ｌ，柠檬 酸 ０．０３ｇ／Ｌ，椰 汁 ０．１ｇ／Ｌ为培 养 基 ，添 加 不 同浓 度 组 合的外源激素 ，ｐＨ值 ５．８～６．０。 ２ 方 法 ２．１ 消毒时间的选择
取 温 室 栽 培 的带 有 花 箭 的 蝴 蝶 兰 植 株 的 整 枝 花 梗 ，在 放有 洗 衣粉 的水 中浸泡 清 洗 １０ｍｉｎ，用 自来水流水冲洗干净 ，放在烧杯 中待用 。在超净 工作 台上将烧杯 内的花梗用 ７５％乙醇消毒 ４０ｓ， 然后用无菌水 冲洗 ３—５遍 ，再用 ０．１％升汞分别浸
第 ２期
河北 林业科技
２０１３年 ４月
蝴蝶 兰的组 织培 养技术研 究
金 独 英
蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展
蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展刘亮,易自力3,蒋建雄,彭筱娜,黄丽芳 (湖南农业大学细胞工程实验室,湖南长沙410128)摘要 从蝴蝶兰(phalaenopsis)的组织培养及诱变育种两个方面进行了探讨。
就当前蝴蝶兰外植体的选择、培养基的选择、原球茎增殖、生根壮苗、炼苗移栽化学诱变几个方面作了详细的讨论。
关键词 蝴蝶兰;组织培养;诱变育种中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)27-08451-02R esearch P rogress in the Tissue Culture and Mutation B reeding of Phalaenopsis spp.LIU Liang et al (Cell Engineer Lab of Hunan Agriculture University,Changsha,Hunan410128)Abstract T he research progress in the tissue culture and mutation breeding of Phalaenopsis,including the effect of ex plants,m edium,multiplication of protocorm2like b ody,m eth od of rooting and seedling strengthening,transplantation and chem om orph osis and s o on,was discussed,in order to provide in for2 m ation for this field.K ey w ords Phalaenopsis spp.;T issue culture;Mutation breeding 蝴蝶兰(phalaenop sis)为兰科蝴蝶兰属兰花,原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚等地[1]。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。
试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。
MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。
2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L<sup>-1</sup>最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。
3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。
另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L<sup>-1</sup>能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。
J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .1<sup>0</sup>.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。
用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。
添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。
对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。
5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。
蝴蝶兰组织培养研究
蝴蝶兰组织培养研究本文以蝴蝶兰满天红品种为研究材料,以花梗和叶片为外植体,通过对消毒方法、培养基种类、激素浓度、褐化现象等的研究,建立了一套通过蝴蝶兰组织培养快速繁殖的有效途径。
主要结论如下：(1)蝴蝶兰花梗灭菌的最佳处理方法为用0.1%升汞消毒13分钟或15分钟,成功率达到85%以上；叶片最佳消毒处理的方法为：预处理后0.1%升汞灭菌13分钟,灭菌成功率达97.7%。
(2)采用正交试验设计,结果表明最适宜蝴蝶兰花梗诱导的培养基配方为MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA(3.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+PH(5.6)；叶片诱导的最佳组合为：MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA (5.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+pH(5.0)。
(3)植物激素对蝴蝶兰类原球茎的实验研究表明,诱导蝴蝶兰原球茎的最佳激素组合为：6-BA(3.0mg·L-1)、NAA(0.5mg·L-1)和pH=5.4或6-BA(3.0mg·L-1)、 NAA(1.0mg·L-1)和pH=5.6.(4)植物激素组合对蝴蝶兰生根率的影响较小,差异性不显著(P>0.05)但不同激素组合对促进蝴蝶兰生根数及根长影响较大,更有利于生根,经方差分析,差异性均达到显著性水平(P<0.05)。
适宜蝴蝶兰根培养的培养基最佳配方为：1/2MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0-1.5 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7.5g·L-1,pH=5.4-5.6。
(5)本实验采用的蝴蝶兰满天红品种,发现在蝴蝶兰花梗芽诱导的较优基本培养基为：MS基本培养基,诱导率为77.8%,高于1/2MS基本培养基(77.3%)；叶片诱导的培养基为MS和1/2MS,考虑到苗的后续生长状况以及MS培养基的褐化现象较严重,而且1/2MS培养基更能节约成本,故选择1/2MS培养基为叶片萌发的培养基。
蝴蝶兰组织培养研究进展
蝴蝶兰组织培养研究进展摘要通过不同培养基、不同激素及添加物对蝴蝶兰各培养再生途径的影响进行了概述,为蝴蝶兰的组培技术研究提供参考。
关键词蝴蝶兰;组织培养;研究进展蝴蝶兰(Phalaenopsis)属热带或亚热带的兰科植物,深受人们的喜爱,研究和开发蝴蝶兰的组织培养具有重要的意义[1]。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效方式,目前主要有3条途径:一是利用蝴蝶兰杂交种子在无菌条件下诱导发芽,获得再生植株[2];二是从离体器官诱导产生原球茎(Protocorm like-body,以下简称PLB),通过原球茎的增殖、分化获得再生植株,即原球茎再生途径[3,4];三是通过离体器官诱导产生丛生芽,通过培养丛生芽获得再生植株,即器官再生途径[4-7]。
1无菌播种再生途径蝴蝶兰经人工授粉可获得种子,但种子个体极其微小,结构简单,没有胚乳,只有1层极薄的种皮,通常在自然状态下很难萌发,需经组织培养无菌播种才能获得植株。
在蝴蝶兰开花时选择优良植株进行自交或杂交授粉,生长4～6个月后尚未开裂的蒴果可用于试管无菌播种。
由于蒴果内种子数量达几千万之多,1个蒴果便可繁殖出成千上万的植株[8]。
通过无菌播种人工培养,能够在短期内获得大量幼小植株,是现阶段经济有效的快速繁殖方法,也是工厂化育苗的重要途径。
种子无菌播种10d后胚明显膨大,呈鹅黄色,陆续变成绿色,约1个月的时间形成原球茎)。
随后,原球体拉长,同时原球体上伴随着长出白色根毛状物,接着在顶端生长点处长出芽鞘,芽鞘不断长大,形成第1片鞘叶。
至2个月时,于第1片鞘叶对面长出第2片鞘叶,随着鞘叶的生长,2～3个月的时间在2片鞘叶之间长出真叶。
最后,转移到新的培养基上形成再生植株[8-10]。
魏翠华等[9]研究发现,添加香蕉汁对蝴蝶兰种子发芽、原球体形成以及叶片的生长具有促进作用,水解乳蛋白对种子萌发有抑制作用,比较光照和黑暗2种培养条件,种子萌发无明显差异。
章玉平等[10]研究表明,外源植物生长调节剂对种子萌发有抑制作用,天然物质如苹果汁、香蕉汁、胰蛋白胨和活性炭对种子萌发具有促进作用。
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰，兰科蝴蝶兰属植物，属热带、亚热带气生兰。
原产于菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚和我国台湾等地，其株型美观、花形奇特似蝶、枝叶繁茂，花朵硕大、花色鲜艳、花期持久，观赏价值极高，在热带兰中素有“兰花皇后”的美誉，有较高的观赏和经济价值，深受国内外花卉市场的欢迎。
但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖。
其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。
而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。
蝴蝶兰快速繁殖的途径主要是利用无菌播种和利用各种类型的外植体诱导类原球茎，进而诱导分生苗实现快繁，不用通过诱导愈伤组织而直接分化丛生芽。
蝴蝶兰组培快繁的影响因素1.无菌播种途径蝴蝶兰种子的胚发育不完全，不易发芽，用人工合成的培养基促使种子无菌萌发，可以得到较高发芽率。
种子培养过程中使用的培养基有KC、MS、花宝等，其中改良KC 培养基是蝴蝶兰种胚萌发的理想培养基。
对不同无菌播种方法包括撒播法、涂布法、稀释法进行了比较，结果表明稀释法较好，种子分布均匀，利用率高，明显减少转接次数，且原球茎发育健壮整齐【1】。
果龄采收期也影响着无菌播种效果。
也可采用无菌播种途径快繁蝴蝶兰，能够在短期内获得大量幼小植株，且技术简单、成本较低，是现阶段经济有效的快速繁殖方法，也是工厂化育苗的重要途径【2】。
但由于蝴蝶兰种子苗是一种杂交品系，因此后代变异率高，除了少数自花系列较稳定以外，难以形成品质均一的大规模栽培品种。
因此，在采用无菌播种进行蝴蝶兰种苗生产时，要对父母本进行严格的选择，以确保后代性状的尽可能一致。
2.类原球茎途径原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象，通过离体器官诱导原球茎快繁法获得试管苗基本一致，增殖系数较高，变异性较少，适合大规模繁殖，是兰花组培快繁的一个主要形式。
蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究进展
#" 原球茎增殖研究
原球茎繁殖 （ KLMNMOML? < )PQR SMTU ） 是兰花植物组 织培养的特有现象， 是其组培快繁的主要形式。通常 情况下从兰花成苗的叶片和根等成熟组织很难进行脱 分化形成原球茎， 而以兰花的茎尖分生组织为外植体 可以诱导原球茎。但因茎尖深埋于叶丛之中， 易被污 染， 成功率低， 而且会牺牲母株， 一般先取花梗侧芽， 经 常规消毒后接种于 /0 D 8 < => ( # 8?@ ; A 培养基上， 在较高温度 （ "7 # (’% ） 下待侧芽萌发成花梗苗， 再取 其组织诱导原球茎。这样既可以避免对母株造成损 失， 又可以免去消毒这一环节， 诱导分化的成功率高。 目前以蝴蝶兰的叶片、 根尖、 茎尖、 茎段等为外植体诱 导原球茎已获得成功， 但培养基及培养效果有差异。 # , !" 外植体的选择 #, !, !" 叶片诱导原球茎F " 早在 &V97 年日本的田中道
［ 9+ ］ 度 （ 大于 +8 7 /0 1 2） 会出现褐化死亡。袁全国等 在
, )’ 附加浓度为 - . * /0 1 2 时诱导的原球茎最多、 速 度最快， 而 &’’ 对叶片诱导原球茎无明显作用， 低浓度 3， 4 ,5 （ 6 78 * /0 1 2） 可促进愈伤组织形成、 但抑制原
［ 97］ 球茎分化。杨美纯等 研究认为 + , )’ 是决定叶片原
但因无菌播种方法为有性繁殖其获得的植株与母株基因型不同分离现象严重有可能出现大量劣质种苗而造成损失所以在选择母本进行杂交时应特别注意尽量了解亲本的遗传规律增加无菌播种后代性状的预见性减少市场风险
广东农业科学! *%%& 年第 , 期!
蝴蝶兰组织培养技术研究进展
蝴蝶兰组织培养技术研究进展摘要：蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，本文综述了蝴蝶兰的原球茎诱导增殖培养，并对我国未来蝴蝶兰研究发展进行了展望。
关键词：蝴蝶兰;原球茎;组织培养蝴蝶兰是兰科蝶属植物，花形奇特，色彩艳丽，花期持久，一般2～3个月，最长可达半年，适于家庭摆设或作切花用于花篮、花束等。
但蝴蝶兰很难用传统的方式进行无性繁殖。
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢，故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。
原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象。
原球茎的发生途径可以由花梗节段、幼叶、根段、茎尖等部位直接产生，也可以通过诱导愈伤组织，再从愈伤组织诱导原球茎产生。
不同外植体原球茎的诱导，其特点及培养基的选择也不同。
本文就蝴蝶兰原球茎诱导增殖培养的研究现状进行综述。
1 外植体的选择外植体的来源是决定外植体能否培养成功的重要因素，不同品种、不同器官之间的分化程度和能力存在差别，因此，在进行组织培养时必须选择合适的外植体进行无菌操作才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。
常用于蝴蝶兰组织培养的外植体有茎尖、根、叶片和花梗芽。
1.1 茎尖茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体，较容易诱导培养，是成功率较高的部位。
利用蝴蝶兰的茎尖诱导出类原球茎，再由类原球茎分化成苗。
这种培养的突出问题在于蝴蝶兰为单茎性植株，剥取茎尖就损坏了母株本身，而蝴蝶兰茎极短，操作困难，易污染。
但茎尖培养的优点是比较容易获取类原球茎或愈伤组织，因为茎尖分生组织细胞的生理年龄小，易于脱分化和分化，同时，操作细致还能达到脱毒效果，获得无病毒苗。
1.2 根尖蝴蝶兰根为外植体诱导原球茎的诱导率相对较低。
以蝴蝶兰新发生的根尖段切成0.5～0.8 cm接种到培养基上，遮光处理4～5 d，14d后可形成愈伤组织。
将蝴蝶兰根平放在培养基上经过约50 d的培养后，根尖顶端可长出原球茎，其诱导率在75％左右，而根尖分生区以外的根段上却诱导不出原球茎。
蝴蝶兰组培快繁技术的研究进展
主要是利用各种类型的外植体诱导类原球茎，进而诱 导分生苗实现快繁，不用通过诱导愈伤组织而直接分
化丛生芽。近年来也有通过诱导愈伤组织途径进行蝴
蝶兰植株再生ＩＨ以及花葶培养、试管苗分株等方法进 行繁殖。本文概述了近年来蝴蝶兰的组织培养与快繁 技术的研究进展。包括外植体、基本培养基、激素及其 他添加物的选择．外植体褐变的防治措施以及生根壮 苗培养方法等，以期为蝴蝶兰的生产发展提供参考。
２外植体褐变的防治措施
蝴蝶兰外植体在组织培养过程中容易褐变死亡， 褐化问题是影响其成活率的关键因素。褐化是由于植 物组织中含有的ＰＰＯ作用于酚类物质形成醌而引起 的。培养基的ｐＨ值、矿质元素含量以及培养期间的光 照、温度等都能影响植物组织的ＰＰＯ活性，从而对植 物组织的褐变产生重要影响。印芳等［２３１研究了蝴蝶兰 外植体初代培养过程中不同浓度Ｆｅ、Ｋ、ｃａ、ｚｎ、ｃｕ等 矿质元素对其褐变的影响．结果表明，培养基中Ｆｅ、Ｃｕ 浓度越高．褐变情况越严重；培养基中Ｋ、Ｃａ、Ｚｎ浓度 越高．褐化越轻。赵伶俐等［２ａ－２０研究表明，对外植体进 行遮光处理町减缓植物组织中酚类物质的合成，从而 抑制褐变的发生，且不同光照强度对褐化的影响不同， 其中１ ０００ｌｘ和３ ０００ｌｘ光强培养可降低褐化率；培 养前的黑暗预处理能减轻外植体的褐化，其中以黑暗 预处理１０ ｄ的褐化程度最轻：此外．当培养基ｐＨ值为 ６．５或培养温度为２０℃时外植体的褐化率最低。 有关研究表明，活性炭对蝴蝶兰原球茎和幼苗的 生长均具有积极作用，在每升基本培养基中添加活性 炭１—２ ｇ．适时切除培养物的褐化部分并及时更换新 鲜培养基，能有效抑制外植体的褐变死亡嘞。
万方数据
蝶兰小苗的生根有明显抑制作用。低浓度的６一ＢＡ能 促进生根；ＮＡＡ对生根有促进作用；添加苹果汁、香蕉 汁、椰子汁和活性炭等也可明显促进壮苗的培养和生 根，提高移栽成活率。鲁雪华等”研究认为．ＧＡ，０．１
蝴蝶兰组培研究进展
蝴蝶兰组培研究进展张丹桂201310010125集贤创新实验131班蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)为兰科多年生附生草本，花形态优美似蝶，枝叶繁茂，花期持久，观赏价值极高，在热带素有“兰花皇后”的美誉。
蝴蝶兰是目前兰科植物中栽培最广泛的种类之一，同时也是室内绿化美化的新型观赏花卉，国内外市场对其需求量越来越大。
但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖；其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。
而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。
本文概述了近年来蝴蝶兰的组织培养与快繁技术的研究进展。
外植体繁殖途径糊蝶兰组培的过程一般分为外植体的诱导、继代增殖、壮苗、生根、健化移栽5个阶段。
目前，国内外蝴蝶兰组培研究主要集中在外植体的选择、基本培养基选择、植物激素种类和配比浓度、褐变防治措施等方面。
1.外植体选择及培养方法关于糊蝶兰组培外植体选择方面的报道较多，不同外植体各有优缺点。
常见的用作组培的外植体有种子（曾宋君,彭晓明,张京丽,等.蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖[J].武汉植物学研究,2000,18(4):344- 346. 章玉平,刘成运,胡鸿钧,等.蝴蝶兰无菌萌发技术的研究[J].武汉植物学研究,2004,22(1):82- 86.）、叶片（李成慧,蔡斌,单丽丽,等.应用正交设计法探讨蝴蝶兰叶片类原球茎的诱导[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版),2004,25(2):76- 78.）、花梗节间（鲁雪华,郭文杰,徐立晖,等.蝴蝶兰花梗节间段培养繁殖的初步研究[J].园艺学报,2002,29(5):491- 492. 刘福林,李淑萍.蝴蝶兰花梗的组织培养和植株再生[J].商丘师范学院学报,2001,17(6):98- 99.）、根尖（曾宋君,彭晓明,张京丽,等.蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖[J].武汉植物学研究,2000,18(4):344- 346.）、花梗腋芽（刘林,李淑兰.温度、节位和BA 对蝴蝶兰花茎腋芽生长的影响[J].北方园艺,2003(5):50- 51.）等。
组织培养
2.2原球茎 原球茎(protoeorm)途径 原球茎 途径
• 关于兰花圆球茎繁殖方面的研究最早开始 于国外的20世纪 年代左右， 世纪60年代左右 于国外的 世纪 年代左右，而国内在此 方面的研究多数是建立在国外的研究结果 之上的，而且研究水平也相对落后。 之上的，而且研究水平也相对落后。最早 是王怀宇(1989)对蝴蝶兰杂交种黄花系和红 是王怀宇 对蝴蝶兰杂交种黄花系和红 花系试管苗的茎头、茎段、 花系试管苗的茎头、茎段、嫩叶片进行了 诱导圆球茎的研究， 诱导圆球茎的研究，所用的诱导培养基是 Ms+BA3.omg/L茎段的总诱导率为 茎段的总诱导率为8.8%， 茎段的总诱导率为 ， 叶片的总诱导率为6.3%。 叶片的总诱导率为 。
3 褐化问题
• 蝴蝶兰的诱导增殖及生根的整个组培阶段，均存 蝴蝶兰的诱导增殖及生根的整个组培阶段， 在着严重的褐化问题， 在着严重的褐化问题，近年来国内外关于褐化问 题的研究主要集中于褐变机理的研究以及抑制褐 化两方面。关于植物的褐变机理， 化两方面。关于植物的褐变机理，有报道称植物 体内引起褐变的酶主要是多酚氧化酶 体内引起褐变的酶主要是多酚氧化酶 (PPO)，而 ， 与其反应的底物是酚类化合物， 与其反应的底物是酚类化合物，并且在氧的作用 下而发生化学反应生成醌(曾镭 曾镭， 下而发生化学反应生成醌 曾镭，2007)。所以植 。 物培养中出现的棕褐色的物质其实就是醒类物质。 物培养中出现的棕褐色的物质其实就是醒类物质。 它们会逐渐扩散到培养基中， 它们会逐渐扩散到培养基中，对植物材料造成毒 影响植物体内其他酶的活性， 害，影响植物体内其他酶的活性，抑制试管苗的 生长及分化，严重时甚至导致材料死亡(吴淑平 吴淑平， 生长及分化，严重时甚至导致材料死亡 吴淑平， 2005)。 。
蝴蝶兰研究综述
兰 现 阶 段 研 究情 况进 行 了简 要 地 综 述 ， 并 对 后 续 的 研 究工 作 提 出相 关 建 议 。
关键词 ： 蝴蝶 兰 ； 栽培技 术 ； 组 织培 养 ； 遗 传 多样 性
的共 同特 性 ］ 。其 次 ， 蝴 蝶 兰 应 尽 量 选 择 在 温 室 中进 行
茎尖分化率达 ５ Ｏ ， 生根率高达 ９ ８ ， 移 栽 后 成 活 率 为
８ ９ ． ３ ， 说 明 用 此 方 法 进 行 蝴 蝶 兰 组 织 培 养 可 以获 得 较
高 的 成 活 率 。王 仁 睿 等 人 分 别 用 幼 嫩 花 梗 、 开 花 后 花 梗 和 茎 尖 做 为 外 植 体 进 行 蝴 蝶 兰 组 织 培 养 技 术 体 系 研
中图分类号 ： ￥ ６ ８ ２ ． ３ １ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ： ｌ ６ ７ ４ — ９ ９ ４ ４ （ ２ ０ １ ７ ） ｌ ｌ 一 ０ ０ ８ ０ — ０ ２
增湿 ， 浇 水 一 般 在 上 午 ９ ：０ ０后 或 下 午 １ ６ ：∞ 前
１ 引 言
蝴蝶兰 （ Ｐ ｈ ａ ｌ ａ ｅ ｎ ｏ ｐ ｓ ｉ ｓ ａ ｐ ｈ ｒ ｏ ｄ ｉ ｔ ｅ ） 为 兰 科 蝴 蝶 兰 属
赏 花 卉 和 园林 造 景 用 花 。 现 阶 段 ， 已 有 大 量 学 者 对 蝴 蝶 兰 进 行 了深 入 细 致 的 研 究 ， 笔者 主要 从栽 培技术 研究 、
３ 组 织 培 养 和 快速 繁 育 研 究
蝴蝶 兰在种 子 、 叶、 花梗 、 茎 间、 根 尖 等 外 植 体 的 组
蝴蝶兰组织培养技术研究
蝴蝶兰组织培养技术研究蝴蝶兰组织培养技术研究一、实验目的1.能够正确选取外植体，并最其进行前处理2.能够有效防止外植体褐变的发生。
3.能够正确进行继代培养与壮苗正根培养。
4.能够利用无菌播种方式进行种子繁殖。
5.培养团队精神、责任心和科学的思维能力。
二、实验原理随着植物组织培养技术在植物快繁上的应用，近年来，对蝴蝶兰组织培养研究较多的是用胚、幼叶、茎尖和根尖、花梗腋芽等多种器官为外植体进行组织培养研究，由于所选外植体材料各异，难度也有高低，虽然有些技术已经用于大规模工厂化生产，但仍面临一些困难，有待于进一步探索和完善。
根据目前蝴蝶兰的发展状况，本文将在以花梗侧芽、茎尖、叶片为外植体材料进行组织快繁技术上作深入的探讨和研究。
三、实验仪器及试剂花梗腋芽诱导培养基为1/ 2MS +BA2. 5 mg/L + NAA0. 2 mg/L 增殖培养基为1/ 2 MS + BA3. 5 mg/L + KT1.0 mg/L + NAA0.5 mg/L + 椰乳10 %。
生根培养基为1/ 2MS + BA1. 5 mg/L +NAA0.3 mg/L + 80 g/L 香蕉泥诱导培养基为1/3MS+NAA0.5~1.0毫克/升+6-BA3.0~5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖30克/升+琼脂6克/升，或KC+NAA1.0毫克/升+6-BA5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖20克/升+琼脂6克/升柠檬酸300毫克/升以上培养基p H 均为5.6四、实验步骤与方法（一）花梗腋芽和顶芽组织培养快速繁殖技术蝴蝶兰为总状花序，通常由花梗基部算起在第4或至第7节才会分化花朵。
除最基部一节外，剥开位于该节位以上各节的苞片都可看到腋芽，近顶端的节含有未完全分化的花原始体，花轴基部的芽往往为休眠芽，常具有苞片覆盖，连同花序的顶端，都是花梗腋芽组织培养的好材料。
1．花梗腋芽的培养途径对花梗腋芽有两条培养途径，一是切取带腋芽的花梗茎段培养；二是不带花梗组织剥取茎尖生长点培养。
蝴蝶兰组织培养与基因工程育种研究进展
蝴蝶兰组织培养与基因工程育种研究进展王云惠1,2,陈雄庭13 (1.中国热带农业科学研究院生物技术研究所,海南海口571102;2.海南职业技术学院,海南海口570216)摘要 综述了利用种子、花梗芽作为外植体通过愈伤组织、体细胞胚、P LB、原生质体途径再生植株技术以及基因枪和农杆菌介导的遗传转化体系建立的研究成果。
关键词 蝴蝶兰;组织培养;基因工程育种中图分类号 S682.31 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)16-04827-04R esearch A chievem ents of Tissue Culture and G ene E ngineering B reeding in Phalaenopsis spp.W ANG Yun2hui et al (Institute of T ropical Biological Sciences,Chinese Academ y of T ropical Agricultural Sciences,H aik ou,H ainan571102) Abstract T his paper reviews achievem ents of plant regeneration from flower stalk buds and seed of Phalaenopsis through callus,s om atic embry ogenesis, protocorm2like b odies(P LB),protoplasts and genetic trans form ation by particle b ombardm ent and Agrobacterium2m ediated were establishm ent.K ey w ords Phalaenopsis spp.;T issue culture;G ene engineering breeding 蝴蝶兰(Phalaenop sis)又称蝶兰,为兰科蝴蝶兰属花卉,其花形酷似蝴蝶,花色丰富艳丽,花期持久,在国内外花卉市场深受欢迎,被誉为“兰花皇后”,是兰科植物中栽培最广泛、最普及的种类之一,具有较高的观赏价值和经济价值。
蝴蝶兰组织培养技术研究进展以及应用分析
蝴蝶兰组织培养技术研究进展以及应用分析关键词：蝴蝶兰；组织培养；研究进展；应用摘要：蝴蝶兰作为美丽的花卉植物，极具市场价值及广阔的应用前景。
从外植体的选择、常见的三种培养方式（原球茎的诱导和增殖、丛生芽的诱导、无菌播种）等方面概述了蝴蝶兰组织培养技术的研究进展。
并对我国蝴蝶兰的研究与开发前景进行展望。
蝴蝶兰是兰科蝴蝶兰属植物，因花型奇特、色彩艳丽、花期长久而享有“洋兰皇后”的美誉。
蝴蝶兰原产于缅甸、菲律宾、台湾、马来西亚、印度尼西亚等热带亚洲地区，具有极高的观赏和经济价值，是国际上最具商业价值的四大观赏热带兰之一。
蝴蝶兰属单茎性附生兰，再生能力强，很难进行分株繁殖，且种子无胚乳，自然条件下难以萌发，增殖系数低，难以满足日益增长的市场需求。
应用植物组织培养技术进行蝴蝶兰快速增殖可以缩短繁育周期，获得大量成株，并可保持优良性状，维护种质资源，是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径。
1949年Rotor利用无菌技术成功在试管中培养出蝴蝶兰的花梗苗，此后，国内外学者纷纷对蝴蝶兰的组织培养技术进行了研究。
1974年，Intuwong等利用蝴蝶兰茎间诱导产生了原球茎状体，再由原球茎分化得到完整的蝴蝶兰植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础[1]。
原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官，在兰科植物中多以之中器官发育、增殖和分化。
目前，蝴蝶兰的组织培养方式只要有3种：1、利用离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎增殖，得到大量蝴蝶兰幼苗；2、利用各种外植体直接诱导出丛生芽3、利用种子无菌播种得到实生苗[2]。
蝴蝶兰组织培养的程序一般为：选取外植体（叶片、根尖、茎尖、花梗等）—诱导形成原球茎（PLB）—原球茎大量增殖—分化出小植株—生根壮苗培养—温室移栽[3]。
笔者对蝴蝶兰组织培养的研究进展进行阐述。
1从离体器官诱导产生原球茎进行繁殖1.1原球茎的诱导（1）外植体的选择常见外植体外植体优缺点叶片对母株伤害小，不受季节所限。
成熟叶片对诱导反应弱，多选用试管苗生长旺盛的肥厚幼叶基部，切取0.5-1.0cm叶片作为外植体，平放于培养基上诱导最佳。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究蝴蝶兰的组织培养研究【摘要】自古以来，人们都有发现美、欣赏美的艺术追求。
花卉等具有“美”的特质的植物理所当然的成为了养殖、欣赏的对象。
在几十年以前，我国人民尚徘徊在生存的边缘，无暇追求美丽事物，随着我国社会经济的发展，人们生活水平的也逐渐提升，人们越来越重视生活中的美。
花卉作为人们欣赏美的载体，不论是各类庆典、宴会，还是环境绿化建设等都是不可或缺的。
蝴蝶兰的花形奇特，类似蝴蝶，色彩艳丽鲜明，花期持久，是最适合作为观赏植物的花种之一。
【关键词】蝴蝶兰组织培养培育材料培育方法激素配方蝴蝶兰具有极高的观赏价值和经济价值，是当今国际上商业价值最大的热带兰花之一。
但因为蝴蝶兰属于单茎性气生兰，其再生能力不强，因此要进行分株繁殖显得异常困难。
蝴蝶兰的种子十分细小，在一般的自然条件下很难发芽，这也导致其增殖系数极低。
虽然其有较高的观赏价值，但是因为不易养殖，所以在市场上的蝴蝶兰显得极为珍贵。
为了提高蝴蝶兰的繁殖力，相关的专家人员利用组织培养法进行蝴蝶兰的快速繁殖，并取得了成功。
蝴蝶兰的组织培养程序为：选取外植体――诱导形成不定芽――增殖不定芽――分化小植株――生根壮苗培养――温室移栽。
这整个程序都是根据蝴蝶兰的生长习性而设计的，对蝴蝶兰的培育有着显著效果，解决了以前在蝴蝶兰工厂化快速繁殖中遇到的技术问题，增加了蝴蝶兰的成活率。
本文就蝴蝶兰的组培方案进行了分析，首先阐述了蝴蝶兰组织培育中必须要准备的材料，然后阐述了蝴蝶兰组织培育的方法。
期望通过本文的分析，能够让读者对蝴蝶兰的组培方案有更加深刻的认识。
1 蝴蝶兰组织培育中必须要准备的材料在蝴蝶兰组织培育中可以作为外植体的有蝴蝶兰的嫩茎、花梗、叶片、茎段、茎尖等。
必须要确保所取外植体的原蝴蝶兰没有虫害、没有病害，生长状态要极好。
本文所选蝴蝶兰是白瓣红唇蝴蝶兰。
若取花梗作为材料，则要剪去上端无须的花梗，剪成长度为五至十厘米的小段。
若取叶片为材料，则要先取花梗进行诱导，当获得蝴蝶兰无菌苗后，待其成长为2叶苗时，再取其叶片或是茎尖作为培育材料。
试析蝴蝶兰组织培养研究
试析蝴蝶兰组织培养研究摘要：通过采用组织培养的快速繁殖方式对蝴蝶兰进行繁殖培育，并且对蝴蝶兰的快速培育繁殖技术的研究进行了分析和研究，明确了蝴蝶兰组织培养的优势以及其相应的影响因素，同时阐述了蝴蝶兰组织培养技术以及其影响因素，为减少蝴蝶兰组织培育当中的问题提供了可供参考的经验，同时也为蝴蝶兰的广泛种植以及生产奠定了良好的基础。
关键字：蝴蝶兰；组织培养；研究引言：蝴蝶兰，属于兰科蝴蝶兰属植物，属于热带以及亚热带气生兰。
蝴蝶兰的原本产地在菲律宾、马拉西亚以及印度尼西亚等地，植株美观，形状似碟，枝叶繁茂且花色鲜艳持久，具有极高的观赏价值以及经济价值，然而由于蝴蝶兰属于单茎性气生兰，植株较少发育为侧枝，蝴蝶兰的种子也由于并不包含胚乳或者其他类型的组织，由此蝴蝶兰在自然条件下萌发率十分低，常规的无性繁殖方式根本无法采用。
而组织培养方式进行的种苗繁殖是当前蝴蝶兰大规模生产以及种植的唯一的途径。
蝴蝶兰主要是通过无菌播种以及使用其他类型的外植体诱导类原球茎进行快速繁殖。
一、蝴蝶兰组织培养快速繁殖及其影响因素1、丛生芽诱导繁殖当前，蝴蝶兰组织培养的快速繁殖有原球茎以及丛生芽繁殖途径。
相对而言，原球茎的繁殖途径是研究相对较多的一种类型，而丛生芽快速繁殖途径则在很大程度上是一种芽生芽的繁殖途径。
其培植的技术含量相对较低且容易操作，并不对母株造成影响和伤害，同时能在一定程度上保证其遗传的稳定性。
同时也能在一定程度上避免植株的大量变异。
并且丛生芽诱导的繁殖途径所需要的时间较短，诱导的成功率也相对较高。
2、诱导以及其繁殖的影响因素根据相应的研究以及实验表明，6-BA对蝴蝶兰丛生芽诱导产生了重要的影响。
浓度一定的6-BA能在一定程度上破坏腋芽的休眠，随着6-BA浓度的持续提高，丛生芽的增长率也随之提高。
6-BA浓度的提高能有效提高丛生芽的增长率，然而浓度过高的6-BA也将对丛生芽的生长以及发育产生影响，导致其芽的长势变弱，同时也将导致蝴蝶兰的褐化率明显增加。
蝴蝶兰组织培养研究进展_综述_郑玉忠
2006,35(1):71-74.Subtropical Plant Science蝴蝶兰组织培养研究进展(综述)郑玉忠，张振霞，陈泽华(韩山师范学院生物系, 广东潮州 521041)摘要：本文从蝴蝶兰外植体的选择、不同基本培养基、激素及添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治以及生根壮苗方法等，概述蝴蝶兰组培快繁方面的研究进展，为其组培技术研究提供参考。
关键词：蝴蝶兰；组织培养；原球茎中图分类号：Q943.1；S682.31 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2006)01-0071-04Progress in Tissue Culture of Phalaenopsis spp.ZHENG Yu-zhong, ZHANG Zhen-xia, CHEN Ze-hua（Department of Biology, Hanshan Teachers College, Chaozhou 521041, Guangdong China）Abstract: The research progress of tissue culture of Phalaenopsis, including the effects of explants sources, culture mediums, hormones and nutrition compositions on multiplication and differentiation of protocorm-like body, the inhibition on browning of explants and methods of rooting and seedling strengthening before transplanting, are reviewed. Some reference materials are also provided for further study in tissue culture of phalaenopsis.Key words:Phalaenopsis spp.; tissue culture; protocorm-like body蝴蝶兰（Phalaenopsis spp.）属热带或亚热带的兰科植物，其花形奇特，姿态优雅，色彩鲜艳，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高，深受人们的喜爱，国内外市场的需求量越来越大。
蝴蝶兰的组织培养综述
蝴蝶兰的组织培养综述摘要：对于兰科植物选取蝴蝶兰作为代表进行组织培养，包括外植体的选择，灭菌方法，培养基的成分配制，培养条件及缓苗移植方案等。
利用组培技术培育培养名贵品种的兰科植物—蝴蝶兰的无病毒植株。
关键词：组织培养蝴蝶兰无病毒植株蝴蝶兰属是著名的切花种类，全属50多种，蝴蝶兰是单茎性附生兰，茎短，叶大，花茎一至数枚，拱形，花大，因花形似蝶得名。
其花姿优美，颜色华丽，为热带兰中的珍品，有“兰中皇后”之美誉。
蝴蝶兰是植物界被子植物门单子叶植物纲天门冬目兰科蝴蝶兰属的植物。
主要分布在菲律宾，马来半岛和我国台湾。
喜欢高气温、高湿度、通风透气的环境；不耐涝，耐半阴环境，忌烈日直射，忌积水，畏寒冷，生长适温为22~28℃，越冬温度不低于15℃越冬温度不低于15度。
兰花在我国素有“花中君子”之称，具有极高的观赏价值。
随着经济的发展，人民对兰花的购买力增加，兰花迅速成为一项产业，并迅速向工业化生产发展，尤其是蝴蝶兰。
过去传统的分枝繁殖远远不能满足于市场的需求。
为了适应蝴蝶兰事业的发展，可以进行兰花的植物组织培养来满足人们的需求。
一.培养部位：大多数植物根、茎、叶和花器等各个部位都能培养成功。
而兰科植物可以培养的部位主要是顶芽和侧芽，一部分种类可以采用隐芽等休眠芽，个别可从叶片培养得植株，各属适宜培养的部位也有区别。
1.新芽的茎尖茎尖是细胞分裂最旺盛的部分，也是培养成功率最高的部位，但需要较高的分离技术。
2.休眠芽在顶芽失去发芽力时它能发芽。
其芽裸露，故分离技术简单。
但易污染，所以要注意灭菌。
3.茎的隐芽茎的隐芽是较难分离的芽，其成活率与休眠芽差不多。
4.花梗当兰花开花约一个月后，剪取其花梗顶端及若干个花梗腋芽，切成2～3cm长的切段，每段带一腋芽，基部向下插于培养基中。
二.外植体的选择：蝴蝶兰的茎尖、茎段、叶片、花梗侧芽、花梗节间、根尖等部位都已有培养成功的报道，方法各异，难度各有高低。
蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异，其中花梗侧芽的成活率最高，达75%；其次为花梗，成活率为 62.5%；叶片和根尖最差，分别为12.5%和7.5%。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2006,35(1):71-74.Subtropical Plant Science蝴蝶兰组织培养研究进展(综述)郑玉忠，张振霞，陈泽华(韩山师范学院生物系, 广东潮州 521041)摘要：本文从蝴蝶兰外植体的选择、不同基本培养基、激素及添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治以及生根壮苗方法等，概述蝴蝶兰组培快繁方面的研究进展，为其组培技术研究提供参考。
关键词：蝴蝶兰；组织培养；原球茎中图分类号：Q943.1；S682.31 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2006)01-0071-04Progress in Tissue Culture of Phalaenopsis spp.ZHENG Yu-zhong, ZHANG Zhen-xia, CHEN Ze-hua（Department of Biology, Hanshan Teachers College, Chaozhou 521041, Guangdong China）Abstract: The research progress of tissue culture of Phalaenopsis, including the effects of explants sources, culture mediums, hormones and nutrition compositions on multiplication and differentiation of protocorm-like body, the inhibition on browning of explants and methods of rooting and seedling strengthening before transplanting, are reviewed. Some reference materials are also provided for further study in tissue culture of phalaenopsis.Key words:Phalaenopsis spp.; tissue culture; protocorm-like body蝴蝶兰（Phalaenopsis spp.）属热带或亚热带的兰科植物，其花形奇特，姿态优雅，色彩鲜艳，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高，深受人们的喜爱，国内外市场的需求量越来越大。
蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。
因此，研究和开发蝴蝶兰具有重要的意义。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，主要通过两条途径：一是利用种子无菌发芽，二是从离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎的增殖培养，得到大量幼苗[1]。
早在1949年，Potor[2]利用无菌培养技术成功地促使蝴蝶兰花梗上的休眠芽发育成完整植株，该方法经过其他研究人员改进后，曾一度成为蝴蝶兰的主要无性繁殖方式。
1974年，Intuwong等[3]利用蝴蝶兰茎尖诱导产生了原球茎状体，再由原球茎分化成植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础。
原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官，在兰科植物中多以这种器官发育、增殖和分化。
蝴蝶兰的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。
根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，国内外研究人员对蝴蝶兰组织培养进行了广泛的研究，并取得了一定的成效。
本文就近年来蝴蝶兰组培快繁技术的研究现状进行综述，包括外植体的选择，不同基本培养基、激素、添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治，以及生根壮苗的方法等。
同时展望未来的发展趋势，为该研究领域今后的发展提供有益的信息。
1 外植体的选择诱导蝴蝶兰原球茎采用的外植体主要有根段[4]、花梗苗根尖[5]、花梗腋芽[6]、茎尖[7]、叶片[8-10]、胚收稿日期：2005-08-03基金项目：韩山师范学院青年基金项目（QN200503）资助作者简介：郑玉忠(1977-), 男, 广东潮阳人, 硕士, 从事植物生物技术研究。
注：张振霞为通讯作者。
第35卷 ﹒72﹒[11]、花葶节间[12]、花梗节或花梗节间切段[13]、种子[14-16]等。
顾伟民等[17]研究结果表明，蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异，其中花梗侧芽的成活率最高，达75%，其次为花梗，成活率为62.5%，叶片和根尖最差，分别为12.5%和7.5%。
针对不同外植体，取材方法也不同，通常取花梗节之间1～2cm长的幼嫩部分，切取长2～3mm的切段作为外植体[13]。
如利用2～3cm长的根尖段，将其切成0.5～0.8cm，接种2周后根端切口处开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织[4]；采用无菌种子苗茎尖作为外植体时，培养30d后基部出现愈伤组织，出愈率达85%以上[16]；而利用正在培养的花梗苗生长旺盛的根尖进行培养，20d左右外植体膨大且表面颜色明显加深[5]；陈之材等则用花梗腋芽为起始材料诱导花葶，由花葶节间切片可以高频率诱导分化不定芽[12]。
2 基本培养基的选择蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等，但对最适培养基的选择却不同，主要在于蝴蝶兰品种差异及外植体来源不同所致。
周俊辉等[18]以红花品种为试材，研究比较了MS、1/2MS和改良KC三种基本培养基，发现改良KC的效果最好，1/2MS次之，MS最差；张秀清等[9]、马子骏等[19]的研究结果也显示出蝴蝶兰的原球茎增殖培养以较低的无机盐浓度为好。
王静等[20]以红花系085#和白花系0217#的杂交品种作试验材料，研究了大量元素对蝴蝶兰原球茎增殖与分化的影响，研究结果表明了大量元素对原球茎增殖有很大影响，1/2MS对原球茎增殖最有利。
姚丽娟等[10]在MS、1/2MS、KC和VW的试验结果也表明，1/2MS对蝴蝶兰原球茎增殖效果最好。
鲁雪华等[13]在花梗节间切段诱导原球茎的实验过程中对培养基进行筛选，也发现1/2MS或改良MS较MS效果好，减少MS中大量元素和部分微量元素及有机成分，适当增加少量的叶酸和生物素有利于原球茎的增殖生长。
陈勇等[1]认为，1/2 MS培养基对原球茎的增殖和分化效果均好于MS培养基，MS培养基中较高浓度的无机盐不利于原球茎的增殖和分化。
杨美纯等[14]则认为，MS培养基最适合蝴蝶兰种子的萌发。
另外，也有报道B5培养基更有利于蝴蝶兰根段原球茎的诱导和增殖[4]。
3 植物生长调节剂对蝴蝶兰原球茎增殖与分化的影响目前，蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为6-BA，较高浓度（1～8mg/L）的6-BA能促进蝴蝶兰原球茎增殖，较低浓度（0.1～0.5mg/L）的6-BA则能促进原球茎分化[21]。
也有研究认为，低浓度6-BA 更有利于原球茎的增殖，而高浓度（6mg/L）的6-BA刺激多酚氧化酶作用，使原球茎容易产生褐化[18]。
姚丽娟等[10]研究发现，附加6-BA后，原球茎增殖量明显高于附加Ad或KT的，增殖效果为6-BA＞KT＞Ad＞KT + Ad；当6-BA使用浓度在1.0～3.0mg/L时，增殖情况无明显差异；同时还发现NAA对原球茎增殖分化影响不明显。
周俊辉等[18]则认为，低浓度的NAA对原球茎增殖和出苗均有促进作用，高浓度的则不利。
王静等[20]研究结果也表明，适宜浓度的6-BA配合较低浓度的NAA，更有利于原球茎的增殖，2.0mg/L 6-BA 和0.3mg/L NAA配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的最佳组合。
叶晓青等[22]也发现，在添加BA和NAA的培养基中，原球茎的增殖系数比单独添加BA或NAA的高；单独使用2.0mg/L NAA的处理组，其繁殖系数也较高。
而陈勇等[1]认为，高浓度的NAA对蝴蝶兰原球茎增殖有一定的抑制作用，NAA浓度从1mg/L增加到3mg/L，增殖率相应从98.3%下降到38.3%；其实验结果同时还表明，单独添加3mg/L 6-BA，原球茎的增殖率与平均每块增殖数要高于其它各激素浓度的配比，且原球茎增殖迅速。
彭立新等[8]在蝴蝶兰组培快繁研究中，采用3.0mg/L 6-BA + 0.2mg/L NAA配方，能够有效的诱导原球茎，同时还发现提高激素配比（5.0mg/L 6-BA + 0.2mg/LNAA + 活性碳1.0g/L），则有利于原球茎的增殖，提高增殖系数，且不用转接就可直接生根成苗，避免转接过程带来的污染损失，简化了培养过程，因而是一种值得推广的方法。
此外，在培养基中加入1.0mg/L GA3对原球茎分化成芽有一定的抑制效果，为获得大量原球茎而避免分化成芽，适当添加GA3是有一定作用的[20]。
第1期郑玉忠,等：蝴蝶兰组织培养研究进展(综述) ﹒73﹒4 培养基添加物对蝴蝶兰原球茎增殖和分化的影响一些氨基酸类添加物，也可以作为培养基中的有机氮源，例如甘氨酸能促进离体根的生长，丝氨酸和谷氨酰胺有利于花药、胚状体或不定芽的分化。
水解酪蛋白和水解乳蛋白对胚状体或不定芽或多胚的分化有良好的促进作用。
而在培养基中加入一些天然有机物，如椰乳、香蕉泥、番茄汁等，也能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，如加入100～200mg/L香蕉泥，具有较大的pH缓冲作用，对幼苗发育有促进作用。
在不同添加物对蝴蝶兰原球茎增殖和分化影响的研究中发现，水解酪蛋白对蝴蝶兰原球茎增殖有明显促进作用，而水解酪蛋白和香蕉匀浆相结合却对原球茎增殖有抑制作用，有机添加物之间的相互作用或有机添加物与培养基之间的相互作用可能对原球茎增殖有影响[20]。
许多研究也表明，添加适量的香蕉泥、椰乳或含胶质的果菜汁等均对原球茎增殖有明显促进效果[15,17]。
培养基中添加活性炭，低浓度（0.5～1.0g/L）时对原球茎增殖影响不明显，高浓度（2.0～3.0g/L）时对原球茎增殖有促进作用，但原球茎有黄化现象[18]。
蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂，对原球茎的增殖生长影响较大。
有试验表明，2%的蔗糖浓度有利于原球茎生长，2%～3%蔗糖促进芽的形成，5%的蔗糖有利于根的分化和生长[23]。
陈勇等[1]也认为蔗糖浓度对原球茎分化有明显的影响，当分化培养基含1%或2%蔗糖时原球茎100%分化，尤其蔗糖为2%时，分化速度最快；蔗糖含量为3%～5%时，抑制原球茎的分化和生长，分化质量和分化速度都显著下降。
5 原球茎继代中褐化的防治蝴蝶兰和其它兰科植物一样，原球茎状体在继代培养过程中易褐变死亡，不易增殖。
在培养基中添加1～2g/L活性炭，适时切除培养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基，能有效抑制外植体褐变死亡；培养基中加入10%椰子水，也能促进原球茎的生长，减少原球茎增殖过程中的褐变[24]。