菌种保藏大全
菌种保藏的方法
复苏方法：
从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即 放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直 到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。 开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的 培养基上进行培养。
菌 种 冻 存 管
四、菌种保藏的注意事项
菌种在保藏前所处的状态：孢子或芽孢 菌种保藏所用的基质：碳源 操作过程对细胞结构的损害
各大类 产孢子的微生物 细菌，酵母菌
约1～2年 约1～冻干燥保藏法
各大类
>5~15年
繁而高效
液氮保藏法
超低温（－196℃），有保 护剂
各大类
>15年
繁而高效
菌种保藏机构
Ex：
美国的标准菌种保藏所（ATCC） 美国农业部农业研究服务部（ARS） 英国国立标准菌种保藏所（NCTC） 我国：1 普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC） 2 农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 3 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 4 医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC） 5 抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 6 兽医微生物菌种保藏管理中心 （CVCC）
步骤
1安瓿管的处理
菌备用。
直径8-10mm，长度不小于100mm，洗净高压灭
2 保护剂
低分子和高分子化合物，如氨基酸、糖类、蛋白质等。 常用的是脱脂奶和血清。
3 菌悬液制备
最适培养条件、生长后期。产孢子的微生物须适 当延长培养时间以获得成熟的孢子。
4 冷冻干燥
5 安瓿管的保藏
4-5℃保藏
半固体穿刺保藏法
方法：适宜半固体→培养→4℃保藏 原理：缺氧、低温 适用：好气性细菌，酵母等 保藏期：6-12个月 步骤： 用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养 基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良 好后覆盖2-3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔 绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.
常用菌株保藏方法
常用菌株保藏方法
常用菌株保藏方法：
1.琼脂斜面低温保藏法：此法是实验室菌种最常用的保藏方法，操
作简便，使用方便，具体方法是，用无菌的接种环挑取菌种一环，划线于适宜的琼脂斜面上（细菌为营养琼脂斜面；真菌为改良马丁琼脂斜面），细菌置35℃培养18~24小时，真菌置25℃培养18~24小时，必要时可延长培养时间，待菌生长充分后，放置2~4℃保存。
霉菌和芽孢菌可保存2~4个月，细菌可保存1~2个月，铜绿假单胞菌不能放在2~4℃保存。
2.甘油冷冻管保存法：用无菌接种环接种菌种在琼脂斜面上，置适
宜的培养条件培养后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接种环与试管壁之间的摩擦使细菌充分扩散到已装有0.9%氯化钠溶液中，加入等体积的、浓度为20%的无菌甘油，轻轻振摇，分装于无菌小试管中，置-30℃条件下保存。
此法应注意菌悬液的浓度应高一些，而且不能含有培养基等营养物质，以防止长时间保存造成菌数下降；另外甘油的浓度不宜过高，否则影响细菌细胞渗透压，引起细菌死亡；厌氧菌、霉菌不宜用此法保存。
3.半固体高层穿刺培养：用无菌接种针挑取菌落，垂直刺入半固体
培养基中，在适宜条件下培养后，放置2~4℃保存。
也可在半固体表面加入液体石蜡，使液体石蜡高出菌种表面1cm再保存，可延长保存时间至一年，霉菌、芽孢杆菌可保存2年。
论述菌种的保藏方法
论述菌种的保藏方法菌种的保藏是指将某一种菌株保存在适宜的条件下，以确保其长期存活和保持其遗传特性的一种操作。
菌种的保藏对于科学研究和应用具有重要意义，因为菌株的失活或突变可能导致实验结果的不准确性或应用价值的丧失。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌株保存在低温条件下，以减缓菌株的代谢和生长速率，达到延长其存活时间的目的。
常见的冷冻保藏方法有两种：液氮冷冻和低温冷冻。
1. 液氮冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，迅速将冷冻管浸入液氮中进行冷冻保存。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
2. 低温冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，置于-80℃的低温冰箱中保存。
相比于液氮冷冻，低温冷冻的操作更加简便，且可以在普通实验室条件下进行。
二、干燥保藏法干燥保藏法是将菌株保存在无水条件下，通过降低菌株周围环境的水分含量，抑制菌株的代谢活动，并防止细胞内酶的活性。
常见的干燥保藏方法有两种：冷冻干燥和真空干燥。
1. 冷冻干燥：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的保护剂，然后在真空下进行冷冻干燥。
冷冻干燥的过程中，通过降低温度和压力，使水分直接从固态转变为气态，从而达到保护菌株的目的。
2. 真空干燥：将培养基中的菌株悬浮液均匀涂布在无菌的滤纸或硅胶膜上，然后将其置于真空干燥器中进行真空干燥。
真空干燥的过程中，通过降低压力，将水分从菌株周围环境中蒸发掉，使菌株处于无水状态。
三、液氮冷冻法液氮冷冻法是将菌株保存在液氮中的一种方法。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
该方法适用于多种菌株的保藏，包括细菌、真菌和酵母等。
液氮冷冻法的操作步骤如下：1. 将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，以增加菌株的抗冻性。
2. 将菌株悬浮液分装至冷冻管中，每支约0.5-1.0 mL，然后封闭冷冻管。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。
以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。
这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。
2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。
干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。
3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。
这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。
4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。
这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。
5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。
这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。
菌种的保藏方法
菌种的保藏方法菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
菌种保藏的目的是保存菌种的遗传信息、保持菌种的稳定性和纯度，为后续的研究提供保障。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
1. 冻干法冻干法是一种常用的菌种保藏方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻干管吸取菌液。
将冻干管放入液氮中，冷冻至-80℃，待冻干后，将管子密封，保存在-80℃的冰箱中。
冻干菌株可以保存多年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
2. 静态液氮法静态液氮法是一种高效、长期保存菌株的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入液氮中，冷冻至-196℃，保存在液氮罐中。
静态液氮保存的菌株可以保存数十年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
3. 冷藏法冷藏法是一种简单、易行的菌株保存方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将冻存管放入4℃的冰箱中保存。
冷藏法保存的菌株可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
4. 活体保存法活体保存法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
活体保存法可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
5. 长期培养法长期培养法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
每隔一段时间，将菌株转移到新的培养基上进行培养，以保持菌株的纯度和稳定性。
总之，菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
菌种保藏
菌种保藏几种常用的保藏方法：1、传代培养法保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置4C˚冰箱中存放，定期进行传代培养、再存放。
可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延长保存期。
2、载体法使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。
常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。
3、悬液法将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。
溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。
4、冷冻法使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。
包括低温法和液氮法。
此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。
注意控制降温速率及保护剂的使用。
5、真空干燥法这类方法包括冷冻真空干燥法和L－干燥法。
冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。
L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10－20C˚范围内进行真空干燥。
操作方法1、斜面保藏法将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置4C˚冰箱中包藏。
保藏时间依微生物的种类而定。
霉菌、放线菌及芽孢菌保存2－4个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。
此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。
2、液体石蜡保藏法将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。
将试管直立，置低温或室温下保存。
此法实用且效果较好。
霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1－2年，普通细菌也可保藏1年左右。
3、穿刺保藏法按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4℃冰箱存放。
4、砂土管保藏法（1）河砂处理取河砂若干加入盐酸10% ，加热煮沸30min除去有机机质。
倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸镏水冲洗，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。
（2）土壤处理取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
食用菌菌种保藏的6种方法
食用菌菌种保藏的6种方法
菌种保藏的目的是通过降低菌种的代谢活力，使其处于休眠状态，减缓衰亡速度，保持菌种原有优良性状，防止杂菌污染；当恢复生活条件时，菌种能在很短时间内恢复生机，迅速生长繁殖。
母种的保藏有如下方法：
1.斜面冰箱保藏法：把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。
高温菌在16摄氏度为宜。
有效期3—6个月。
2.石蜡油保藏法：斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1—1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。
保存期可1—2年。
3.孢子保藏法：用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子，可参考孢子分离法，然后把带孢子的纸条放入无菌试管内，置干燥器内2—3天吸干水分，再改用胶塞。
在冰箱或室温内可保存多年。
4.菌丝球保藏法：常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介，把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个，移入媒介内，用胶塞封口，冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。
5.液氮保藏法：常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂，注入斜面母种管，刮下菌丝体成悬浮液或孢子液，吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管，
熔封管口，置液氮冷冻器内，每分钟降摄氏1度，1小时内使其温度降至摄氏负35度，其后迅速降至气相摄氏负150度，液相摄氏负196度保存。
保存期可超过10年。
6.自然基质保藏法：此法多用于原种保藏。
在一些欠设备的地区，也可作母种保藏法。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
菌种保藏储存方法大全
菌种保藏储存方法大全菌种保藏储存方法大全食用菌由于营养价值高，生产成本低，经济效益高，近几年在农村兴起了生产热潮，但是，生产中食用菌菌丝繁殖快，容易老化。
本文根据实际情况介绍了7种简单易行的菌种贮藏方法供广大农户参考。
1.麦粒贮藏法取优质小麦淘洗后浸入20℃水中泡5小时，稍晾干后装管。
装入量以管长的l/4~1/3为宜。
将装有麦粒的试管灭菌后趁热摇散，冷却后接入菌丝体，在适温下培养至大多数麦粒上出现稀疏菌丝时，终止培养。
菌种可置于20℃以下干燥处保藏1～2年。
2.冰箱贮藏法将已经长好的试管菌种放于冰箱内储存，置于保鲜层保藏，能保证7个月菌种不退化。
3.生理盐水贮藏法将菌种接入马铃薯培养液中，每250ml三角瓶装60ml培养液，振动培养液或每天摇动5～10次，培养5～7天，然后将形成的菌丝球吸入装有5ml无菌生理盐水的试管中，每管约移入4～5个菌丝球，塞上棉塞，用蜡封好管口。
低温可保藏1年。
4.尿素暂存法在避光、干燥、通风良好的地方放置袋装尿素，将试管菌种主体埋在尿素颗粒中，试管口露在外面，可贮藏菌种活力30天之多。
此法在恒定低温环境下即可进行。
5.液体石蜡贮藏法选用化学液体石蜡，高压灭菌后放入40℃恒温箱中数小时或干燥器中数日，用无菌吸管或注射器吸取液体石蜡注入菌种试管。
注入量应高出斜面尖端1cm，管口塞上棉塞并用石蜡封好。
直立贮藏在清洁、干燥、凉爽的低温处，可以贮藏5年。
6.蒸馏水法 //农村致富经网 //适用于平菇、金针菇、香菇的菌种。
在自然温度下也可以贮藏其他菌种。
6.1贮藏平菇、金针菇菌种先将8成熟待贮藏试管菌种移入接种箱内后，用注射器从试管栓内注入蒸馏水，将培养基面全部淹没至管口2cm为止。
管口用矿蜡封闭，常温下置于阴凉处立放，可以贮藏1～1.5年。
6.2贮藏香菇、木耳菌种用15015mm的指型管将培养至7成熟的固体或半固体试管种在接种箱内无菌操作下，放人25200mm的大试管内，向大试管内注入蒸馏水至管口1cm处，封口用橡皮栓包好，并用矿蜡加固密封，置于阴凉处。
菌种保藏方法范文
菌种保藏方法范文菌种保藏是指将具有特定遗传性状的菌种保持在一定的条件下存活和保存，以便于后续的研究和利用。
菌种保藏的目的是保持菌种的稳定性、纯度和活力。
下面将对常见的菌种保藏方法进行详细介绍。
1.冷冻保藏法：冷冻保藏法是最常见和常用的菌种保存方法之一、该方法是将菌种在适宜的培养基上生长至适宜的阶段，然后通过添加甘油或其他保护剂来增加菌种的耐冻存活力，并放入低温环境下冷冻保存。
通常使用-20℃或更低的温度进行保存。
这种方法简单易行，成本较低，在短时间内能够保持菌株的复原性很好。
2.干燥保藏法：干燥保藏法又称为脱水保藏法，是将菌种长时间保存于干燥状态中。
先将菌种培养至适宜的生长阶段，然后用无菌方法将菌种制成干燥菌粉，放入干燥瓶中密封保存。
常见的干燥剂有二氧化硅凝胶、无水CaCl2等。
干燥保藏法保存的菌种潜伏期长，比较安全可靠，但复苏的条件较为苛刻。
3.液氮保藏法：液氮保藏法又称为低温保存方法，是将菌种保存在液态氮中。
通过将菌种培养至适宜生长阶段后，将其转接入试管中，用无菌方法加入等体积的冷冻保护剂（例如甘油），放入液氮中保存。
液氮的温度达到-196℃，在这种环境下菌种可以长时间保存，但需要特殊的设备和条件。
4.胶体保藏法：胶体保藏法是将菌种培养至适宜生长阶段，然后将其与无菌明胶混合均匀，制成菌胶球，通过培养基中的各种成分供应菌种的生长和维持菌株的复原性。
这种保藏方法具有较长的复苏潜伏期，并且易于携带和传递，是一种较为理想的保存方法。
5.冷冻干燥保藏法：冷冻干燥保藏法是将菌种通过冷冻干燥的方法进行保存。
首先将菌种培养至适宜生长阶段，然后用无菌方法将菌种在-40℃或更低温度下冷冻干燥，形成冷冻干燥粉末。
这种方法保存的菌种潜伏期长，但复苏条件较为苛刻。
除了以上的常见保存方法，还有一些新兴的菌种保藏方法，例如微柱保存法、冷冻解冻保存法等。
这些方法在不同的实验室和研究领域可能有着不同的适用性和优势。
综上所述，菌种保藏方法有多种多样，每一种方法都有其自身的特点和适用范围。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
实验室菌种的保藏方法
实验室菌种的保藏方法一、甘油悬液保藏法此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。
保藏温度若采用-20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用-70℃，保藏期可达10年。
将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使甘油的终浓度在10％～15％，再分装于小离心管中，置低温冰箱中保藏。
基因工程菌常采用本法保藏。
二、冷冻真空干燥保藏法冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
但该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
三、液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法。
它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法。
其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。
美国ATCC菌种保藏中心采用该法时，把菌悬液或带菌丝的琼脂块经控制致冷速度，以每分钟下降1℃/min的速度从0℃直降到-35℃，然后保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中。
14微生物菌种保藏
微生物的菌种保藏菌种保藏(culture preservation)▪是指保持微生物菌株的生活力和遗传性状的技术。
▪目的在于把从自然界分离到的野生型，或经人工选育得到的变异型纯种，使其存活、不污染、少变异，保持菌种原有的各种特征和生理活性。
▪基本原理是使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，使微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。
▪通常干燥、低温和隔绝空气是保证获得这种状态的主要措施。
1、传代培养保藏法▪对于经常使用中的菌种，实验室一般采用传代培养的方法进行保藏，包括斜面培养、穿刺培养等，培养后于4℃冰箱内保存。
▪这个方法主要是将菌种接种在适宜的固体斜面培养基或者穿刺培养基上，待菌充分生长后，石蜡膜封住硅胶塞或塑料盖，移至4℃的冰箱中保藏。
▪保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2-4个月，酵母菌两个月，细菌一般一个月。
然后移种一次。
2、冷冻保藏法▪这是目前实验室最常规使用的菌种保藏方法，主要原理是将菌种在合适的保护剂下，直接放入-80℃冰箱，进行长期保藏的方法。
适合各种微生物的菌种保藏，操作简便，保存期长，复活方便，一般菌种可以保藏10-15年左右。
▪主要操作方法是将待保藏菌种在液体或者固体培养基中培养好，转入含有20-30%甘油作为防冻保护剂的等渗液中。
3、载体保藏法▪载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
菌种保藏上交•每个组保藏自己分离得到的乳酸菌和其他菌种；•（用纸条写好标记，日期，姓名）乳酸菌rsp斜面1支，冻存管5支；放线菌M2斜面1支，冻存管5支；……实验报告要求1、你保藏的菌种有哪些，选用了什么保藏方法，原理是什么？2、讨论四大类微生物最合适的菌种保藏方法分别是什么？谢谢。
八种菌种保藏方法的优缺点
八种菌种保藏方法的优缺点
保藏菌种是微生物学研究中非常重要的一部分。
以下是八种常见的菌种保藏方法及其优缺点：
1. 冷冻保藏：
优点：简单易行，保藏时间长，适用于大多数微生物。
缺点：需要低温设备，可能会导致部分菌株失活。
2. 干燥保藏：
优点：操作简便，无需低温设备，适用于多种菌株。
缺点：某些菌株可能无法在干燥条件下存活。
3. 液氮冷冻保藏：
优点：温度极低，可长期保存。
缺点：设备昂贵，需要特殊处理。
4. 石蜡包埋：
优点：能够保存非常脆弱的菌株。
缺点：操作复杂，需要特殊设备。
5. 非常规保藏：
例如使用特殊培养基或添加保护剂等方法。
优点：针对特定菌株的保护效果更好。
缺点：需要特殊处理，不适用于所有菌株。
6. 液体保藏：
将菌株保存在培养基中。
优点：适用于快速生长的菌株，易于操作。
缺点：需要定期转移菌株以维持活性。
7. 冷冻干燥：
将菌株冷冻后进行干燥处理。
优点：保藏时间长，易于保存和转运。
缺点：某些菌株可能无法在冷冻干燥条件下存活。
8. 长期传代：
通过连续传代培养菌株。
优点：保持菌株活力，适用于快速生长的菌株。
缺点：需要定期进行传代，较为耗时。
这些方法各有优缺点，具体选择哪种方法取决于菌株的特性、实验条件和保存期望等因素。
微生物的纯培养 菌种保藏
• 干燥保藏法：沙土管保存和冷冻真空保藏 • 冷冻真空保藏：干燥、缺氧及低温，目前使用最普
遍、最重要的微生物保藏方法
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
主要措施 适宜菌种 保藏期 评价
冰箱保藏法（斜面）
低温
冰箱保藏法（半固体）
低温
通过宿主体内生长进行复壮 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处
理，以杀死生命力较差的已衰退个体）
THANKS
创造良好的培养条件 利 用 不 同 类 型 的 细 胞 进 行 接 种 传 代 ： 对 丝 状 微
生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种。
采用有效的菌种保藏方法
菌种的复壮措施
纯种分离
菌落纯的分离方法（平板表面涂布法，平板划线分 离法，琼脂培养基浇注法）
细胞纯的分离方法（分离小室进行单细胞分离，显 微操纵器进行单细胞分离，菌丝尖端切割法进行单细胞 分离）
在，使原有的优良性状发生负变，即菌种的衰退。
• 复壮：狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况
下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群 体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状 的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就 有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作， 以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变 （正变）不断地从生产中选种。
石蜡油封藏法*
低温、缺氧
沙土保藏法
干燥、无营养
各大类 细菌、酵母菌
各大类** 产孢子微生物
冷冻干燥法
干燥、无氧、低 温、有保护剂
各大类
3~6月 6~12月 1~2年 1~10年
5~15年 以上
菌种保藏+菌种储藏管理监督制度
菌种保藏（culture preservation）首先挑选典型优良纯种，其次创造一个有利于休眠的环境条件，还要考虑方法的通用性与简便性。
1、低温保藏：冰箱、超低温。
2、干燥保藏：土壤、细砂、硅胶等。
3、隔绝空气保藏：石蜡油封。
4、冻干保藏：综合低温、干燥、真空。
5、活体保藏：病原微生物、病毒。
实验室常用方法：1、斜面冰箱保藏法：斜面保藏是一种短期、过渡的保藏方法，用新鲜斜面接种后，置最适条件下培养到菌体或孢子生长丰满后，放在4℃冰箱保存。
一般保存期为三个月到六个月菌丝速冻法：对于不产孢子或芽孢的微生物，一般不能用沙土管保藏。
为了方便可以采用甘油菌丝速冻法。
由于该法的保藏温度为-20℃，为了避免微生物受损伤致死，需要甘油作为保护剂。
甘油的最终浓度为25%。
2 、沙土管保藏法：适合于产孢子或芽孢的微生物。
将斜面孢子制成孢子悬浮液接入沙土管中或将斜面孢子刮下直接与沙土混合，置干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱内保存。
一般保存期为1 年左右。
3、石蜡油封存法：向培养成熟的菌种斜面上，倒入一层灭过菌的石蜡油，用量要高出斜面一厘米，然后保存在冰箱中。
此法可适用于不能利用石蜡油作碳源的细菌、霉菌、酵母等微生物的保存。
保存期约一年左右。
4、真空冷冻干燥保藏法：目前常用的较理想的一种方法。
在真空中使水分升华。
微生物的生长和代谢都暂时停止，不易发生变异。
菌种保存时间一般５年左右。
需要一定的设备。
保护剂一般采用脱脂牛奶或血清等。
保护剂的作用可能是在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分(细胞膜)的构型，防止细胞膜因为冻结而破坏。
保护剂还可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。
5、液氮超低温保藏法：适用范围最广的微生物保藏法。
尤其是一些不产孢子的菌丝体，用其它保藏方法不理想，可用液氮保藏法，其保存期最长。
原理：用液氮能长期保存菌种。
这是因为液氮的温度可达-196℃，远远低于其新陈代谢作用停止的温度(－130℃)，所以此时菌种的代谢活动已停止，化学作用亦随之消失。
常用菌种保藏方法
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
素而设计的。
一、保藏方法大致可分为以下几种：1、传代培养保藏法2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5、冷冻保藏法6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
二、器材:细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
三、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。
菌种保藏方法
菌种保藏⽅法菌种保存⽅法a.常⽤有以下⽅法：1 半固体保存法：将菌落穿刺接种在半固体中，4度存放，⼀般可以管3－6⽉2 低温冻存法：接种菌落的⾁汤加20％灭菌⽢油，置－20或－70度，可存放⼀年以上。
3 真空冻⼲法：试最理想的保存⽅法，但需要特殊仪器b.基因⼯程菌：1：30%的灭菌⽢油与培养好的菌悬液按照1：1的⽐例混合，分装到1.5ML的离⼼管中，每关1ML，存于--20度，但仅保存半年就不太好了，最好保存到——70度的低温冰箱中。
也可⽤10%的灭菌⽢油从斜⾯上洗下保存。
2：菌悬液中加⽢露醇和⼈⾎⽩蛋⽩c.⽬前菌种的保存⽅法主要有以下⼏种:1.传代培养保存法:⼀般来说,这是最基本的保存法,⽤斜⾯,穿刺或其他⽅法培养的传代菌种,⼀般要保存在5度,但因类⽽异,如霍乱,淋球,脑膜炎,厌氧菌,钩体等要保存于37度为宜.2.液体⽯蜡覆盖保存法:这是传代培养的变相⽅法,可以适当地延长保存时间,主要适⽤于霉菌,酵母菌,放线菌,需氧性细菌等的保存.3.载体保存法1)⼟壤保存法:主要⽤于形成孢⼦回孢囊的微⽣物的保存,特别适⽤于真菌和放线菌不改变性状的长期保存.(2)砂⼟保存法:常⽤于梭状芽孢杆菌和⼀部分霉菌的保存,可保存数年.(3)硅胶保存法:本法对保存链孢霉菌较有效,对酵母菌的保存也较有效(4)磁珠保存法:⽤本法保存根瘤菌在室温下⾄少可保存2年半(5)滤纸保存法:适⽤于对⼲燥抵抗⼒较强的微⽣物,如油芽孢细菌和葡萄球菌.另外噬菌体,放线菌和丝状菌也可⽤本法.4.悬液保存法1)蒸溜⽔保存法:霉菌,酵母菌和放线菌的⼤部分,使其悬浮于蒸馏⽔中,可在室温下保存数年,青枯病假单孢杆菌也可⽤本法.(2)糖液保存法:过去⽤于保存酵母菌,但现在已不常⽤.(3)其他悬液保存法:如乳链球菌可⽤PBS保存,放线菌可⽤0.125%稀琼脂液保存.5.寄主保存法:⼀些微⽣物如⼀部分病毒,⽴克次⽒体,螺旋体.原⾍和少量丝状菌⽬前只能使活着的动物,昆⾍,植物体和寄⽣微⽣物等感染并传代,否则不能保存.6.冷冻保存法1)低温冰箱保存法:多说微⽣物在-20度保存效果良好,(2)⼲冰保存法:-70度保存,(3)液氮保存法:保存温度克达到-196度,本法可说是使⽤范围最⼴的微⽣物保存法.7.冷冻⼲燥保存法:使微⽣物在冷冻状态下,在减压下利⽤升华现象除去⽔份,使细胞的⽣理活动事实上停⽌,从⽽长期维持⽣活状态,本法适⽤于⼤多数细菌和放线菌,另外病毒,噬菌体,⽴克次⽒体,霉菌和酵母菌再多数情况下⽤本法保存.8.冷冻⼲燥以外的⼲燥保存法1)常压⼲燥保存法,(2)菌⽚封袋⼲燥保存法,(3)Stamp⼲燥保存法,(4)Sordelli⼲燥保存法,(5):L-⼲燥保存法(真空⼲燥保存法)d.我们实验室保存菌种的⽅法是:1 将菌落穿刺接种在半固体中，如加有琼脂的⾁汤培养基，4度存放，保存时间较短⼀般3－4⽉2 接种菌落的⾁汤0.9ml加100％灭菌⽢油0.1ml，置－20度冰箱中可以保存⼀年左右,－70度冰箱或液氮中可放置N年，细胞的保存我们放了近⼗年，仍然复苏的很好3 基因⼯程菌的保存：1：为防⽌基因⼯程菌质粒丢失或不稳定，保存菌种加⼊⽢油的量应该不⼤于10%，⼀般0.9ml的菌液加0.1ml80％⾼压灭菌⽢油－70度冰箱保存e.菌种的保藏:菌种是⼀个国家所拥有的重要⽣物资源，菌种保藏（preservation）是⼀项重要的微⽣物学基础⼯作。
菌种保藏大全
菌种保藏一、菌种的含义:菌种:菌种是指食用菌、工业菌、农用菌菌丝及其生长基质组成的繁殖材料。
分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级,也可以理解为保存着的、具有活性的菌株。
微生物工业对菌种的要求1.原料廉价,生长迅速、目标产物高。
2.易于控制培养条件,酶活性高,发酵周期较短。
3.抗杂菌和噬菌体的能力强。
4.菌种遗传性能稳定,不易变化和退化,不产生任何有害的生物活性物质和毒素,保证安全生产。
5.对放大设备的适应强。
二、菌种保藏的重要意义:菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料,特别是利用微生物进行有关生产,如抗生素、氨基酸、酿造等工业,都离不开菌种。
所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。
其任务首先是使菌种不死亡,同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来,而不致向坏的方面转化。
菌种是一种极其重要和珍贵的生物资源,1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。
菌种保藏的原理与方法微生物菌种保藏的概念:收集实验室和生产用微生物(菌种、菌株、病毒毒株等,也包括动、植物的细胞株和微生物质粒),运用适当方法和措施使其长期存活并保持原种的生物学性状稳定不变,使之不死、不衰、不乱,以达到便于研究、交换和使用等目的的措施。
微生物个体微小、代谢活跃、生长繁殖快,很容易发生变异,或被其他微生物污染,甚至死亡。
因此根据实际情况选择合适的保藏方法十分重要。
一、菌种保藏的原理:菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性,人工创条件使其生长代谢处于最低或几乎停止的状态,以减少其变异和保持生物性状。
保藏时,一般利用菌种的休眠体(孢子、芽孢等),创造最有利于休眠状态的环境条件,如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等,以降低菌种的代谢活动,减少菌种变异,使菌种处于“休眠”状态,抑制其繁殖能力,达到长期保存的目的。
一个好的菌种保藏方法,应能保持原菌种的优良特性和较高的存活率,同时也应考虑到方法本身的经济、简便。
实验室菌种保藏的方法
实验室菌种保藏的方法菌种是主要的生物资源，也是食用菌生产首要的生产资料。
一个优良的菌种被选育出来以后，必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变，才不至于降低生产性能，能长期在生产中使用。
因此，菌种保藏在食用菌生产上具有重要的意义。
各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。
一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。
下面介绍几种常用的菌种保藏方法：1斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4。
C左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。
此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。
放线菌、霉菌和有芽匏的细菌一般可保存6个月左右，无芽抱的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。
如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4。
C冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。
这一改进可使菌种的保藏期延长。
此法由于采用低温保藏，大大减缓了微生物的代谢繁殖速度，降低突变频率；同时也减少了培养基的水分蒸发，使其不至于干裂。
该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。
其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。
2石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端IC明使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4。
C冰箱内保藏。
使用的液体石蜡要求优质无毒，化学纯规格，其灭菌条件是：150~170。
C烘箱内灭菌Ih;或121。
C高压蒸汽灭菌60~80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分。
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菌种保藏一、菌种的含义：菌种：菌种是指食用菌、工业菌、农用菌菌丝及其生长基质组成的繁殖材料。
分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级，也可以理解为保存着的、具有活性的菌株。
微生物工业对菌种的要求1.原料廉价，生长迅速、目标产物高。
2.易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期较短。
3.抗杂菌和噬菌体的能力强。
4.菌种遗传性能稳定，不易变化和退化，不产生任何有害的生物活性物质和毒素，保证安全生产。
5.对放大设备的适应强。
二、菌种保藏的重要意义：菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，都离不开菌种。
所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。
其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来，而不致向坏的方面转化。
菌种是一种极其重要和珍贵的生物资源，1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。
菌种保藏的原理与方法微生物菌种保藏的概念：收集实验室和生产用微生物（菌种、菌株、病毒毒株等，也包括动、植物的细胞株和微生物质粒），运用适当方法和措施使其长期存活并保持原种的生物学性状稳定不变，使之不死、不衰、不乱，以达到便于研究、交换和使用等目的的措施。
微生物个体微小、代谢活跃、生长繁殖快，很容易发生变异，或被其他微生物污染，甚至死亡。
因此根据实际情况选择合适的保藏方法十分重要。
一、菌种保藏的原理：菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性，人工创条件使其生长代谢处于最低或几乎停止的状态，以减少其变异和保持生物性状。
保藏时，一般利用菌种的休眠体（孢子、芽孢等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，以降低菌种的代谢活动，减少菌种变异，使菌种处于“休眠”状态，抑制其繁殖能力，达到长期保存的目的。
一个好的菌种保藏方法，应能保持原菌种的优良特性和较高的存活率，同时也应考虑到方法本身的经济、简便。
国内外主要菌种保藏机构介绍国外（1）ATCC 美国标准菌种收藏所，美国，马里兰州，罗克维尔市.（2）CSH 冷泉港研究室，美国.（3）IFO 日本大阪发酵研究所，日本大阪.（4）NRRL 美国北部地区研究实验会（5）CBS 荷兰霉菌中心保藏所（6）ＮCTC 英国国家典型菌种保藏所现有菌种保藏的大体方法有1.传代培养法2.悬液法3.载体法4.真空干燥法5.冷冻法菌种保藏的注意事项（1）菌种保藏所处的状态大部分以均保藏其休眠体，保藏前选择合适的培养时间。
培养时间过长，生产性能会下降，反之保存时容易死亡。
一般以稍低于生长最适温度培养至孢子成熟保藏的菌种进行保藏，效果较好。
（2）保藏所用的基质一般使其营养成份贫乏较好，降低其代谢活动。
冷冻时应加入保护剂。
（3）操作过程尽量减少对细胞结构的损害，如选择合适的冻结速度，加入保护剂等。
细胞结构的损伤不仅使菌种保藏的死亡率增加，而且容易导致菌种变异，造成菌种性能衰退。
二、实验室和生产实践中常用的菌种保藏技术方法：1. 斜面低温保藏法（冰箱保藏法）2．矿物油中浸没保藏法3．穿刺法4. 滤纸法5. 固体曲保藏法6．砂土管保藏法7. 普通冷冻保藏8．超低温冷冻保藏法9. 冷冻干燥法10. 液氮冷冻保藏法11. 寄主保藏保藏方法通常基于温度、水分、通气、营养成分和渗透压等方面考虑1.斜面低温保藏（冰箱保藏法）原理是利用低温（4℃）降低菌种的新陈代谢，使菌种的特性在短时期内保持不变。
方法是：将菌种转接在适宜的固体培养基斜面上，待其充分生长好后，用封口膜或油纸将棉塞部分包扎好，置于4℃冰箱中保存。
斜面法保藏菌种的时间依微生物的种类不同而异。
霉菌、放线菌以及形成芽孢的细菌保存3~5个月移种一次，普通细菌最好每月移种一次，假单胞菌则两周传代一次，酵母菌间隔2个月。
注意事项1.保存期间要注意冰箱的温度，不可波动太大，不能在0℃以下保存，否则培养基会结冰脱水，造成菌种性能衰退或死亡。
2.此方法是一种短期、过渡的保藏方法此方法，一般不适宜作工业生产菌种的长期保藏，一般保存时间为3~6个月。
优缺点优点:最为简单和经济，操作简单、使用方便、不需要特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异、与污染杂菌等。
可用于实验室中若干菌种的保藏。
缺点:保藏时间短、需定期传代，且易被污染，菌种的主要特性容易改变。
易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变2. 矿物油中浸没保藏（石蜡油封藏法）1.先将液体石蜡分装于试管或三角瓶中，塞上棉塞并用牛皮纸包扎，121℃灭菌30min，然后放在40温箱中使水汽蒸发后备用。
2.将需要保藏的菌种在最适易的斜面培养基中培养，直到菌体健壮或孢子成熟。
3.用无菌吸管取适量的无菌液体石蜡，加在已长好的菌苔的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。
4.将试管直立，置于低温或室温下保存（有的微生物在室温下比在冰箱中保存的时间要长）。
此法实用效果较好。
产孢子的霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏2年以上，有些酵母菌可保藏1~2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保存3个月之久。
注意事项1.以液体石蜡作为保藏方法时，应对需保藏的菌株预先作试验。
因为某些菌株在液体石蜡下生长还十分明显，有些菌株如某些假丝酵母还会同化液体石蜡，也有的对液体石蜡保藏敏感。
所有这些菌株都不能用液体石蜡保藏。
为了预防不测，一般保藏株2～3年也应做一次存活试验。
2.从液体石蜡下面取培养物移种后接种环在火焰上灼烧时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意，尤其是保藏致病菌更需小心。
优缺点：优点：制作简单，不需特殊装备，且不需经常移种。
缺点：保存时必须直立放置，所占位置较大；同时也不便携带。
3. 穿刺法该方法比较简便，是短期保藏菌种的一种有效方法。
1.接种培养（培养试管选用带螺旋帽的短试管或离心管）。
2.将培养好的穿刺管盖紧，外面用封口膜封严，置于于4℃存放。
3.取用时将接种环（环的直径尽量小些）伸入菌种生长处挑取少许细胞，接入适当培养基中。
将穿刺管封严后可保存以后再用。
4.滤纸法1、滤纸的制备将滤纸剪成0.5cm×1.2cm的小纸条装入0.6cm×8cm的安瓿管中，每管装入1~2片，用棉花塞上后经121℃灭菌30min。
2、保护剂的制备配制20％脱脂奶，装在三角瓶或试管中112℃灭菌25min。
待冷却后随机取出几份分别置28℃、37℃培养过夜，然后各取0.2mL涂布在肉汤平板上或斜面上进行无菌检查，确认无菌后方可使用，其余的保护剂置4℃存放待用。
3、菌种培养将需保藏的菌种在适宜的斜面培养基上培养，直到其生长丰满。
4、菌悬液的制备取无菌脱脂奶2~3mL加入待保存的菌种斜面试管内，用接种环轻轻地将菌苔刮下，经振荡器震荡均匀，即为菌悬液。
5、分装样品：用无菌滴管或吸管吸取菌悬液滴在安瓿瓶中的滤纸上，每片滤纸滴0.5mL，塞上棉花。
6、干燥：将安瓿管中放入五氧化二磷或无水氯化钙作吸水剂的干燥瓶中，用真空泵抽其至干。
7、熔封与保存：用火焰将安瓿管封口，置于4℃或室温存放。
8、需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17年之久。
此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
5. 固体曲保藏法这是根据我国传统制曲原理加以改进的一种方法，适用于产孢子的真菌。
该法采用麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为产孢子培养基，使菌种产生大量的休眠体（孢子）后加以保存。
该法的要点是控制适当的水分。
6.砂土管保藏法本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得以栖息。
适用于产孢子的放线菌、霉菌以及产芽孢的细菌。
砂土是砂和土的混合物，砂和土的比例一般为3：2或1：1。
（1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。
倒去酸水，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸馏水冲洗。
烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。
（2）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。
（3）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10mm×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌(通常采用间歇灭菌2~3次），烘干。
（4）抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
（5）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，加入2~3mL无菌水，用接种环轻轻地将菌苔洗下，制成孢子悬液。
（6）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。
（7）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分。
每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。
若经检查没有问题，用火焰熔封管口（也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口），放冰箱（4℃）或室内干燥处保存。
每半年检查一次活力和杂菌情况。
（8）需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。
此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，但对于营养细胞效果不佳。
7.普通冷冻保藏由于该法的保藏温度为－20℃，为了避免微生物受损伤致死，需要甘油作为保护剂。
甘油的最终浓度为25%。
具体操作如下：①配制浓度为50％的甘油溶液，121℃灭菌后备用；②制备菌悬液，一般菌悬液的浓度为108～1010个／mL；③将菌悬液和甘油溶液以等体积混合均匀后，置－20℃保藏。
或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同上置于冰箱中保存。
普通冷冻保藏可以维持若干微生物的活力1~2年。
应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再用来保藏。
保藏过程中应注意控制保藏温度，培养瓶或试管应严格密封。
这一方法虽简便易行，但不适宜多数微生物的长期保藏。
8. 超低温冷冻保藏要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在-60～-80℃以下进行保藏。
在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是：1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜；4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保藏。