志贺氏菌检测

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志贺氏菌检验方法

03
，如实验服、口罩、手套等。
样品处理注意事项
样品采集时应保证无菌操作，避免污染。
样品应尽快送至实验室进行检验，避免长时间存放导致细菌繁殖。
样品处理过程中应保持清洁卫生，避免交叉污染。
检验方法选择注意事项
1
根据样品类型和检验目的选择合适的检验方法。
2
对于不同种类的志贺氏菌，应选择具有针对性的检验方法。
断结果。
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
利用特异性引物扩增志贺氏菌基因片段，通过凝胶电泳检测扩增产物，判断是否存在志贺氏菌。
基因测序
对志贺氏菌基因进行测序分析，与其他已知基因序列进行比对，以确定志贺氏菌的种属和亚种。
生物传感器技术
利用生物传感器检测志贺氏菌的代谢产物或特异性抗原，通过信号转换器将生物信号转化为电信号，实现快速、灵敏的检测。
食品样品的处理
采集到的食品样品应尽快送往实验室进行检验，如果不能及时送检，应将样品低温保存，避免样品变质和污染。
04
志贺氏菌检验的注意事项
实验室安全注意事项
01
实验室应保持清洁卫生，定期进行消毒处理，确保无菌环境。
02
实验操作应在生物安全柜中进行，避免交叉污染和意外感染。
实验人员应接受专业培训，熟悉操作规程，佩戴个人防护装备
03
志贺氏菌检验的样品采集与处理粪便样品的采集与处理粪便样品的采集
采集粪便样品时，应确保采集到新鲜、未被污染的粪便，并尽量多采集一些，以增加检出率。
粪便样品的处理
采集到的粪便样品应尽快送往实验室进行检验，如果不能及时送检，应将样品低温保存，避免样品干燥和污染。
水样品的采集与处理

志贺氏菌检测

环境中志贺氏菌的消杀
通过检测环境中志贺氏菌的分布和数量，采取有效的消杀措施，降低疾病传播的风险。
05
志贺氏菌检测的挑战与展望
检测挑战
灵敏度与特异性
志贺氏菌检测需要高灵敏度和特异性，以避免假阳性或假阴性的结果，给临床诊断和治疗带来困扰。
快速检测
在感染早期快速准确地检测志贺氏菌对于及时治疗和防控疾病传播至关重要。
抵抗力较强
志贺氏菌对理化因素的抵抗力较强，在粪便、土壤、食品等外界环境中可存活数周至数月之久。
志贺氏菌的传播途径
粪口途径传播
志贺氏菌主要通过消化道传播，通过污染的食物、水或与感染者的接触而感染。
直接接触感染
志贺氏菌也可通过直接接触感染者的分泌物或接触被污染的物品而传播。
志贺氏菌的危害
优点
操作简便、快速。
缺点
可能出现假阳性或假阴性结果，特异性不如细菌培养法。
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增志贺氏菌的特异性基因片段，实现快速、灵敏的检测。
优点
灵敏度高、特异性强、检测速度快。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与样本中的目标基因进行杂交，实现高通量检测。
缺点
仪器设备和检测技术要求较高，成本也较高。
简便操作
检测方法应具有简便、易操作的特点，以便在基层医疗机构和现场环境中广泛应用。
技术展望
分子生物学技术
随着分子生物学技术的发展，利用基因芯片、高通量测序等技术有望提高志贺氏菌检测的灵敏度
和特异性。
免疫学方法
开发特异性强、灵敏度高的免疫学检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术等，将为志贺氏菌的快速检测提供有

志贺氏菌属实验活动风险评估报告

志贺氏菌属实验活动风险评估报告一、生物学特性（一）种类和细菌分型志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，志贺氏菌属（Shigella）是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌（Dysentcrybacillus）。

志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（0）及表面抗原（K）组成。

0抗原是分类的依据，分为型特异性抗原和群特异性抗原2种。

根据抗原构造的不同，将本属细菌分为 4 个群、40余个血清型（包括亚型）。

1. A群又称痢疾志贺氏菌群，有10个血清型。

不分解甘露醇，无鸟氨酸脱竣酶，与其他各群细菌无血清学联系。

2.B群也称福氏菌群，己有13个血清型（包括亚型和变种）。

分解甘露醇，无鸟氨酸脱竣酶。

抗原结构较复杂，各型间有交叉凝集。

3.C群也称鲍氏菌群，有18个血清型。

分解甘露醇，无鸟氨酸脱竣醐。

各型内无交叉凝集。

4.D群也称宋内氏菌群，仅有一个血清型。

分解甘露醇，有鸟氨酸脱粉酶，迟缓发酵乳糖。

有I、∏相之分。

（二）来源痢疾是一种古老的疾病。

远在2600多年以前的《内经至真要大论》中说：“民病，泻泄赤白。

”秦汉（公元前2世纪）以后，记载渐多。

国外有关痢疾的记述始于古希腊希波克拉底时代（公元前5世纪）。

19世纪曾出现全世界痢疾的大流行。

1897年，日本人志贺洁首先发现痢疾是由痢疾杆菌引起，为纪念志贺氏的发现，把痢疾杆菌称为志贺氏菌痢坎杆菌。

（三）传染性志贺氏菌引起细菌性痢疾。

传染源是病人和带菌者。

非典型患者、慢性菌痢患者及无症状带菌者由于症状不典型而容易被误诊或漏诊，因此，在流行病学中具有重要蕙义（四）传播途径志贺氏菌主要通过粪一口途径直接传播，污染的食物或物体可间接传播，苍蝇可作为机械性传播媒介。

志贺氏菌病常为食物暴发型或经水传播。

和志贺氏菌病相关的食品包括色拉（土豆、金枪鱼、虾、通心粉、鸡），生的蔬菜，奶和乳制品，禽，水果，面包制品，汉堡包和有鳍鱼类。

志贺氏菌在拥挤和不卫生条件下能迅速传播，经常被发现于人员大量集中的地方，如餐厅、食堂。

志贺氏菌的检测报告

７５、％，村总发病５．％４２两２例，发病率为５７．％。
共发病３６户，占总户数的ｌ％，户发病ｌ的６５每例２５户，例的９户，和６例的各ｌ户；者中男２３例患性４例，性ｌ２女Ｏ例，男女之比为４２ｌ年龄最大、：；７６岁，最小３岁，平均３．；４２岁今春以来，与羊有明确接触史的３８人（３１，明确接触史的ｌ人７％）无４
［收稿日］０ — ２２；修定日期］０２１２期￣１１—４［０２０—０ — ２ｆ作者简介］崔东胜（９６，，１一）男主管压师，５从事卫生防疫工作。
检（）、氏菌感染及孕羊流产率较高。免疫布
志贺氏菌的检测报告
陈秀英（浙江省疾病预防控制中，浙江杭州３００）１０９
沁源县官滩乡的琵琶园、头两村２０崖０１年４
逐户调查．已发现的４对５例患者进行了个案调查，３对８例有可疑症状者进行血清学检验后确诊７例。故自４月１８日发生第一例后，８月至２５日琵琶园、崖头分别发病３ｏ例、２例，病率为２发
粪便随处可见。近年来两村的羊只均未进行过检
（），与已有布病疫情的平遥、县等邻县有免疫且沁混牧及羊只贸易。牧羊人员为羊接产时不采取任何防护措施．流产后的胎羔、盘，水等未进行过胎羊掩埋等处理。经畜牧部门调查，只的布病感染率羊为９２，％今年孕羊的流产率为８％左右。

志贺氏菌属诊断血清说明书

志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序1.目的制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测2.原理用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。

3.试剂及实验设备3.1志贺氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为22种的志贺氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。

3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。

4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。

4.2选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的疑似菌落。

4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。

如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。

4.4玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。

若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。

5.质量控制志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。

4789.5志贺菌检验

对可疑的食品，包括在使用前需用手处理的或轻微加热的产品，且其酸度范围由PH5.5至6.5 之间。一般来说，当食品中含有大量的大肠菌群，大肠杆菌与沙门氏菌时，同时即可疑含有志贺氏菌。
现行GB/T 4789.5-2003标准不足处
1. 采用的GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大肠菌
的生长速度大大超过志贺氏菌,所以检测效果较差
2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制 3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差异
修订原则
1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性
考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法
2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准，部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准
培养特性

志贺氏菌属于革兰氏阴性短杆菌；无芽孢、无荚膜、无鞭毛、不运动需氧或兼性厌氧，营养要求不高，能在普通培养基上生长能利用葡萄糖与其他碳水化合物，产酸不产气。除A群外，B 、 C 、 D群均能发酵甘露醇，除 D群外，A 、 C和D群均不发酵乳糖； D群具有鸟氨酸脱羧酶
菌体（0）抗原 1.型特异性抗原：化学组成为多糖，是光滑型菌株所含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常随之消失，根据所含的型抗原不同，可将志贺菌属分为A、B、C、D四个群及39个抗原型。 2.群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌体抗原的一种。特异性较低，主要存在于B群。根据所含的群抗原不同，可将一些菌型分为多种亚型。

西蒙氏柠檬酸盐实验
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。

志贺氏菌检测

志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。

培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。

二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。

挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。

一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。

下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。

先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。

如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。

福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。

假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。

四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。

志贺氏菌检测

志贺氏菌检测【1 】1 装备和材料除微生物实验室通例灭菌及造就装备外,其他装备和材料如下：1.1 恒温造就箱：36℃±1℃;1.2 冰箱：2℃～5℃;1.3 膜过滤体系;1.4 厌氧造就装配：℃±1℃;1.5 电子天平：感量0.1g;1.6 显微镜：10×～100×;1.7 均质器;1.8 振荡器;1.9 无菌吸管：1ml（具刻度）.10ml（具刻度）或微量移液器及吸头;1.10 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500ml;1.11 无菌造就皿：直径90mm;1.12 pH计或pH比色管或周详pH试纸;1.13 全主动微生物生化剖断体系.2 造就基和试剂3.1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录中1.3.2 麦康凯（MAC）琼脂：见附录中2.3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录中3.3.4三糖铁（TSI）琼脂：见附录中4.3.5养分琼脂斜面：见附录中5.3.6半固体琼脂：见附录中6.3.7葡萄糖铵造就基：见附录中7.3.8尿素琼脂：见附录中8.3.9β-半乳糖苷酶造就基：见附录中9.0氨基酸脱羧酶实验造就基：见附录中10.1糖发酵管：见附录中11.2西蒙氏柠檬酸盐造就基：见附录中12.3粘液酸盐造就基：见附录中13.4蛋白胨水.靛基质试剂：见附录中14.5志贺氏菌属诊断血清.6生化剖断试剂盒.4 操纵步调4.1 增菌以无菌操纵取检样25g（ml）,参加装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯,用扭转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质;或参加装有225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中,用拍击式均质器持续均质1min～2min,液体样品振荡混匀即可.于℃±１℃,厌氧造就16h～20h.4.2 分别取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色造就基平板上,于36℃±1℃造就20h～24h,不雅察各个平板上发展的菌落形态.宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌.若消失的菌落不典范或菌落较小不轻易不雅察,则持续造就至48h再进行不雅察.志贺氏菌在不合选择性琼脂平板上的菌落特点见表1.表1 志贺氏菌在不合选择性琼脂平板上的菌落特点4.3 初步生化实验4自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典范或可疑菌落,分别接种TSI.半固体和养分琼脂斜面各一管,置36℃±1℃造就20h～24h,分别不雅察成果.4凡是三糖铁琼脂中斜面产碱.底层产酸（发酵葡萄糖,不发酵乳糖,蔗糖）.不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）.不产硫化氢.半固体管中无动力的菌株,挑取其4中已造就的养分琼脂斜面上发展的菌苔,进行生化实验和血清学分型.4.4 生化实验及附加生化实验4生化实验用4中已造就的养分琼脂斜面上发展的菌苔,进行生化实验,即β-半乳糖苷酶.尿素.赖氨酸脱羧酶.鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分化实验.除宋内氏志贺氏菌.鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型,鲍氏志贺氏菌13型的β-半乳糖苷酶为阳性以外,其余生化实验志贺氏菌属的造就物均为阴性成果.别的因为福氏志贺氏菌6型的生化特点和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌类似,须要时还需加做靛基质.甘露醇.棉子糖.甘油实验,也可做革兰氏染色检讨和氧化酶实验,应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌.生化反响不相符的菌株,即使能与某种志贺氏菌分型血清产生凝聚,仍不得剖断为志贺氏菌属.志贺氏菌属生化特点见表2.表2 志贺氏菌属四个群的生化特点4附加生化实验因为某些不生动的大肠埃希氏菌（）.A-D（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特点与志贺氏菌类似,并能与某种志贺氏菌分型血清产生凝聚;是以前面生化实验相符志贺氏菌属生化特点的造就物还需另加葡萄糖胺.西蒙氏柠檬酸盐.粘液酸盐实验(36℃造就24h～48h).志贺氏菌属和不生动大肠埃希氏菌.A-D菌的生化特点差别见表3.表3 志贺氏菌属和不生动大肠埃希氏菌.A-D 菌的生化特点差别4如选择生化剖断试剂盒或全主动微生物生化剖断体系,可依据4的初步断定成果,用4中已造就的养分琼脂斜面上发展的菌苔,应用生化剖断试剂盒或全主动微生物生化剖断体系进行剖断.4.5 血清学剖断4抗原的预备志贺氏菌属没有动力,所以没有鞭毛抗原.志贺氏菌属重要有菌体（O）抗原.菌体O抗原又可分为型和群的特异性抗原.一般采取1.2%～1.5%琼脂造就物作为玻片凝聚实验用的抗原.注1：一些志贺氏菌假如因为K抗原的消失而不消失凝聚反响时,可挑取菌苔于1ml心理盐水做成浓菌液,100℃煮沸15min～60min去除K抗原后再检讨.注2：D群志贺氏菌既可能是滑腻型菌株也可能是光滑型菌株,与其他志贺氏菌群抗原不消失交叉反响.与肠杆菌科不合,宋内氏志贺氏菌光滑型菌株不一定会自凝.宋内氏志贺氏菌没有K抗原.4凝聚反响在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域,挑取一环待测菌,各放1/2环于玻片上的每一区域上部,在个中一个区域下部加1滴抗血清,在另一区域下部参加1滴心理盐水,作为对比.再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液.将玻片竖直动摇混杂1min,并对着黑色布景进行不雅察,假如抗血清中消失凝聚成块的颗粒,并且心理盐水中没有产生自凝现象,那么凝聚反响为阳性.假如心理盐水中消失凝聚,视作为自凝.这时,应挑取统一造就基上的其他菌落持续进行实验.假如待测菌的生化特点相符志贺氏菌属生化特点,而其血清学实验为阴性的话,则按4注1进行实验.附录造就基和试剂1 志贺氏菌增菌汤-新生霉素（Shigella broth）1.1 志贺氏菌增菌肉汤成分蒸馏水1000mlp±1.制法将以上成分混杂加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,分装恰当的容器,121℃灭菌15min,掏出后冷却至50℃～55℃μg/ml）,分装225ml备用.注：如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存一个月.1.2 新生霉素溶液1.成分蒸馏水1000ml制法μm过滤膜除菌,如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存一个月.1.3 临用时每225ml志贺氏菌增菌肉汤（1.1）参加5ml新生霉素溶液（1.2）,混匀.2 麦康凯（MAC）琼脂2.1 成分3号胆盐蒸馏水1000mlp±2.2 制法将以上成分混杂加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,分装,121℃高压灭菌15min.冷却至45℃～50℃,倾泻平板.注：如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存二周.3 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂3.1 成分L-赖氨酸蒸馏水1000ml±3.2 制法除酚红和琼脂外,将其他成分参加400ml蒸馏水中,煮沸消融,校订pH.另将琼脂参加600ml蒸馏水中,煮沸消融.将上述两溶液混杂平均后,再参加指导剂,待冷至50℃～55℃倾泻平皿.注：本造就基不须要高压灭菌,在制备进程中不宜过火加热,防止下降其选择性,贮于室温暗处.本造就基宜于当天制备,第二天应用.应用前必须去除平板概况上的水珠,在37℃～55℃温度下,琼脂面向下.平板盖亦向下烘干.别的如设置装备摆设好的造就基不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存二周.4 三塘铁（TSI）琼脂4.1 成分硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)·6H2蒸馏水1000ml±4.2 制法除酚红和琼脂外,将其他成分加于400ml蒸馏水中,搅拌平均,静置约10min,加热使完整熔解,冷却至25℃阁下校订pH至±.另将琼脂加于600ml蒸馏水中,静置约10min,加热使完整熔解.将两溶液混杂平均,参加5%酚红水溶液5ml,混匀,分装小号试管,每管约3ml.于121℃灭菌15min,制成高层斜面.冷却后呈桔红色.如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存一个月.5 养分琼脂斜面5.1 成分蛋白胨10.0g牛肉膏氯化钠琼脂15.0g蒸馏水1000mlpH 7.0±5.2 制法将除琼脂以外的各成分消融于蒸馏水内,参加15%氢氧化钠溶液约2ml,冷却至25℃阁下校订pH至±.参加琼脂,加热煮沸,使琼脂熔解.分装小号试管,每管约3ml.于121℃灭菌15min,制成斜面.注：如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存二周.6 半固体琼脂6.1 成分～蒸馏水100ml±6.2 制法按以上成分派好,加热消融,校订pH,分装小试管,121℃灭菌15min,竖立凝固备用.7 葡萄糖胺造就基7.1 成分硫酸镁（MgSO4·蒸馏水1000ml±7.2 制法先将盐类和糖消融于水内,校订pH,再参加琼脂加热消融,然后参加指导剂.混杂平均后分装试管,121℃高压灭菌15min.制成斜面备用.8 尿素琼脂8.1 成分蛋白胨1.0g氯化钠蒸馏水1000mlpH 7.2将上述成分参加蒸馏水中,煮沸消融,调节pH,分装小试管,121℃高压灭菌15min.8.2 制法除酚红和尿素外的其他成分加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,参加酚红指导剂,混匀,于121℃灭菌15min.冷至约55℃,参加用μm过滤膜除菌后的20%尿素水溶液100ml,混匀,以无菌操纵分装灭菌试管,每管约3m l～4ml,制成斜面后放冰箱备用.8.3 实验办法挑取琼脂造就物接种,在36℃±1℃造就24h,不雅察成果.尿素酶阳性者因为产碱而使造就基变成红色.9 β-半乳糖苷酶造就基9.1 液体法（ONPG法）成分邻硝基苯β±±9.1.2制法将ONPG溶于缓冲液内,参加蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管内,每管l,用橡皮塞塞紧.9.1.3实验办法自琼脂斜面挑取造就物一满环接种,于36℃±1℃造就1h～3h和24h不雅察成果.如β-D-半乳糖苷酶产生,则于1h～3h变黄色,如无此酶则24h不变色.9.2 平板法（X-Gal法）成分5-溴-4-氯-3-吲哚-β蒸馏水1000ml±制法将各成分加热煮沸于1L水中,冷却至25℃阁下校订pH,115℃高压灭菌10min.倾泻平板避光冷藏备用.实验办法挑取琼脂斜面造就物接种于平板,划线和点种均可,于36℃±1℃造就18h～24h不雅察成果.假如β-D-半乳糖苷酶产生,则平板上造就物色彩变蓝色,如无此酶则造就物为无色或不透明色,造就48h～72h后有部分转为淡粉红色.10 氨基酸脱羧酶实验造就基10.1 成分蛋白胨5.0g1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液L型或DL型赖氨酸和鸟氨酸/100ml或/100ml蒸馏水1000ml±10.2 制法除氨基酸以外的成分加热消融后,分装每瓶100ml,分别参加赖氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%参加,DL-氨基酸按1%参加,再校订pH至±.对比造就基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管ml,上面滴加一层白腊油,115℃高压灭菌10min.10.3 实验办法从琼脂斜面上挑取造就物接种,于36℃±1℃造就18h～24h,不雅察成果.氨基酸脱羧酶阳性者因为产碱,造就基应呈紫色.阴性者无碱性产品,但因葡萄糖产酸而使造就基变成黄色.阴性对比管应为黄色,空白对比管为紫色.11 糖发酵管11.1 成分磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2蒸馏水1000ml±11.2 制法11葡萄糖发酵管按上述成分派好后,按％参加葡萄糖,25℃阁下校订pH,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min.11其他各类糖发酵管可按上述成分派好后,分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min.另将各类糖类分别配好10％溶液,同时高压灭菌.将5ml糖溶液参加于100ml造就基内,以无菌操纵分装小试管.注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采取过滤法除菌.11.3 实验办法从琼脂斜面上挑取小量造就物接种,于36℃±1℃造就,一般2d～3d.迟缓反响需不雅察14d～30d.12 西蒙氏柠檬酸盐造就基12.1 成分氯化钠g硫酸镁（MgSO4·7H2O）g磷酸二氢铵g磷酸氢二钾g柠檬酸钠g琼脂20g0.2%溴麝喷鼻草酚蓝溶液ml蒸馏水1000ml±12.2 制法先将盐类消融于水内,调至pH,参加琼脂,加热熔解.然后参加指导剂,混杂平均后分装试管,121℃灭菌15 min.制成斜面备用.12.3 实验办法挑取少量琼脂造就物接种,于36℃±1℃造就4d,天天不雅察成果.阳性者斜面上有菌落发展,造就基从绿色转为蓝色.13 粘液酸盐造就基13.1 测试肉汤成分酪蛋白胨g溴麝喷鼻草酚蓝溶液g蒸馏水1000ml粘液酸g±制法慢慢参加5N氢氧化钠以消融粘液酸,混匀.其余成分加热消融,参加上述粘液酸,冷却至25℃阁下校订pH至,分装试管,每管约5ml,于121℃高压灭菌10min. 13.2 质控肉汤成分酪蛋白胨g溴麝喷鼻草酚蓝溶液g蒸馏水1000ml±制法所有成分加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,分装试管,每管约5ml,于121℃高压灭菌10min.13.3 实验办法将待测新颖造就物接种测试肉汤和质控肉汤,于36℃±1℃造就48h不雅察成果,肉汤色彩蓝色不变则为阴性成果,黄色或稻草黄色为阳性成果.14 蛋白胨水.靛基质试剂成分蛋白胨(或胰蛋白胨) g氯化钠g蒸馏水1000mL14.2 制法按上述成分派制,分装小试管,121℃高压灭菌15 min.注：此试剂在2℃～8℃前提下可储存一个月.14.3 靛基质试剂柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛消融于75ml戊醇中.然后迟缓参加浓盐酸25ml.欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛消融于95ml95%乙醇内.然后迟缓参加浓盐酸20ml.14.4 实验办法挑取少量造就物接种,在36℃±1℃造就1d～2d,须要时可造就4d～5d.参加柯凡克试剂约l,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或参加欧－波试剂约ml,沿管壁流下,笼罩于造就液概况,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注：蛋白胨中应含有丰硕的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种剖断后方可应用,此试剂在2℃～8℃前提下可储存一个月.。

志贺氏菌检验

志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。

志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。

食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。

志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。

一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。

二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。

这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。

但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。

第二，SPA协同凝集法。

这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。

三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。

志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。

以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。

志贺氏菌检测标准

志贺氏菌检测标准志贺氏菌是一类常见的细菌，它造成了许多消化系统疾病。

为了确保消费者的安全，食品厂商和相关组织都需要进行志贺氏菌的检测。

本文将详细介绍有关志贺氏菌检测的标准，以确保消费者的健康和安全。

第一步骤：选择适当的样本检测开始前，需要选择适当的样本。

这可以是从环境，食品或水源中收集得到的，以确定是否存在志贺氏菌。

通常，人们从肉类，奶类以及其他易受污染的食品等选择样本进行检测。

选择适当的样本对于获得准确的结果非常重要。

第二步骤：采集样本在进行检测前，样本需要采集。

采集需采取规范化程序，以确保采集的样品实际上代表了被检测对象的状况。

采集过程需要避免污染样品，否则可能影响检测结果。

第三步骤：样本处理样品处理是保证测试数据准确性的关键，它可以消除干扰物质和旁边生物。

对于厨房和医疗设施，在处理志贺氏菌样品时应该采取严格的操作。

操作过程应精确规范，以保证样品不与其他样品的任何形式发生交叉污染。

第四步骤：实验室测试在实验室中进行测试是一种保证分析的准确性的方式。

志贺氏菌检测一般使用PCR或者培养方法进行。

不同的实验室可能采用不同的实验操作方法，因此测试数据包括实验的操作条件和环境条件等因素可能会有所不同。

第五步骤：分析测试结果在分析测试结果时，需要考虑到数据的相对稳定性和准确性问题。

分析的结果应包括相关的质量控制数据，以便能够确定测试是否正确进行。

正确的数据分析必须满足比如重复性，标准色谱的基本要求，因此必须引入知识和技术。

总之，通过以上五个步骤，我们可以实现对志贺氏菌的高效检测，并确保消费者的食品安全。

当然，我们在使用志贺氏菌检测标准时，需要时刻关注其技术竞争力和检测过程的规范化，这将为消费者提供一个安全的健康环境，成为维护人民健康的重要保障。

志贺氏菌检测新国标要求厌氧条件增菌的解决方案.

志贺氏菌新国标要求厌氧条件增菌的解决方案最新发布的志贺氏菌国标GB_4789.5-2012(食品安全国家标准_食品微生物学检验_志贺氏菌检验方法即将于2012年7月17日实施,新国标中关于增菌部分有重大改变,要求在厌氧条件下增菌过夜,由于增菌通常在500mL三角瓶或均质袋中进行,这就对所有检测志贺氏菌的政府检测机构和企业提出更高的硬件要求。

由于志贺氏菌是兼性厌氧菌,此次国标变更增菌方法为厌氧条件下增菌,目的是想在增菌时抑制部分好氧菌的生长,提高志贺氏菌的检出率,提出灵敏度。

很多微生物工作者在讨论用什么方法来实现厌氧增菌,由于增菌时可采用三角瓶、试剂瓶或均质袋,放在何种容器中进行增菌,要根据样品容量、增置设备的承受能力等各种因素进行综合考虑。

现本人给广大有检测志贺氏菌需求的客户推荐几种解决方案:1 大培养空间的方案—各种大型厌氧工作站,如英国DWS公司的A35新型厌氧工作站(带触摸屏:适合每日检测量大于50个样品/以上的检测机构和企业。

可以方便转入三角瓶(瓶子高度要求小于185mm和均质袋,内部培养空间至少可以放置60个500mL三角瓶,提供精确的温度、湿度和气体控制,触摸屏控制系统。

2中等培养空间的方案—各种紧凑型厌氧培养箱,如DG250厌氧工作站:适合每日检测量20-30个左右的检测机构和企业。

提供精确的温度、湿度和气体控制。

3最小培养空间的方案—各类厌氧罐系统,如Jar Gassing system(厌氧罐气体控制系统:适合每日检测量小于10个的检测机构。

样品放入厌氧罐中(可选放一个瓶子或4个瓶子的厌氧罐,通过抽真空和充混合气体,将内部的氧气降至1%左右,然后通过混合气体中的氢气,在钯催化条件下将微量的氧气反应生成水,达到厌氧条件。

此方案只提供抽真空和充气系统及厌氧罐,客户需要将厌氧罐放入其它培养箱中培养。

志贺氏菌检测流程

志贺氏菌属检验的标准操作程序【目的】指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【标本的采集】由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。

【检验程序】采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。

【操作步骤】1. 分离培养采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。

36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1℃培养18-24小时。

2. 生化学试验凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。

其结果全部阴性者，作血清学试验。

3. 血清学试验挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏多价血清多价血清血清 2型血清 1型血清∣ + ∣ +∣ +∣ +∣—∣↓↓↓↓∣福氏菌宋内氏菌志贺氏2型志贺氏1型↓ 1-6型某型+鲍氏 7-11型某组+：组内分型血清———→鲍氏某型血清： 12-15型全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验16-18型福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。

福氏菌抗原成分如下。

沙门氏菌和志贺氏菌的检测

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➢ 斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑色 ➢ 斜面红色、底层黄色，无黑色 ➢ 斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色
除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌等也可出现上述反应。 • 吲哚试验：阴性
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志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生 H2S 。沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生H2S ，多数产气。下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？
• 方法将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需作出努力个复管，分别加入等量的伤寒沙门菌O、H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的H抗原进行试管内凝集，凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集将价。
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1）正常凝集价正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含有一定水平的凝集抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异
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抗原构造
• 菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与
特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。现已知有50多种，多数沙门菌含有两种以上的O抗原，有的O抗原是一种菌独有的，有的是几种菌共有的，凡含有共同特异性抗原成分的血清型归为一个群，可
将沙门菌化分为42群，按A-Z排列，Z以后的顺序以 O51-O67表示。引起人类沙门菌病的95%以上都在A-
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M抗原：粘液抗原，在菌型鉴定上无特殊意义。
5抗原：
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4.抵抗力
• 不强，加热60℃1h，或 65℃15~20min即被杀死。在水中能存活2~3周，在粪便中可存活1~2月。对胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用于制备沙门菌的选择培养基。

从业人员健康体检沙门氏菌志贺氏菌检测操作程序讨论稿

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。

二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。

三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2 生物安全实验室的生物安全柜中进行。

四、试剂及仪器设备4.1试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管4.2仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法5.1标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。

肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。

5.2粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。

5.3肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3 周。

以目测能见到粪便为准。

插入Cary-Blair运送培养基。

5.4标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h;如不能立即送检, 应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。

六、检验程序七、操作步骤7.1分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG （或SF增菌液或沙门志贺培养液）。

7.2用 1 个无菌拭子取少量标本（不要使拭子粘得太多，尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在XLD平板的第一区，接着把拭子放入SBG增菌液。

志贺氏菌的检测方法国际标准

志贺氏菌的检测方法国际标准
目前，国际上常用的志贺氏菌检测方法有以下几种：
1. PCR法：利用聚合酶链反应（PCR）技术对志贺氏菌进行检测。

该方法具有快速、准确、灵敏度高等优点。

2. ELISA法：利用酶联免疫吸附法（ELISA）对志贺氏菌进行检测。

该方法简便、快速、灵敏度高，但需要更多的实验室设备和技术。

3. 细胞培养法：将患者体液中的志贺氏菌细胞培养在适宜的培
养基上，观察细胞形态和生长状态来判断志贺氏菌是否存在。

该方法
可确诊志贺菌感染，但需要长时间的培养时间和更多的实验室设备和
技术。

4. 免疫荧光法：利用抗志贺氏菌抗体与志贺氏菌的特异抗原反
应发出荧光信号，通过显微镜观察来检测志贺氏菌的存在。

该方法准确、灵敏度高，但仍需要更多的设备和技术。