沉淀反应实验报告

实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应

一、实验目的

掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。

二、实验原理

蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨

基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物

质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另

外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的

稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生

了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。

三、实验仪器

1、吸管

2、滴管

3、试管

4、电炉

5、ph试纸

6、水浴锅

7、移液管

四、实验试剂

1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏

备用。

2、 0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。

3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体

积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。

4、尿素晶体

5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 44

6、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml

7、浓硝酸

8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.

9、冰醋酸

10、浓硫酸

11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。

12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。

13、95%乙醇。

14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml

15、氯化钠晶体

16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml

17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 18、1%醋酸溶液。

五、实验步骤

蛋白质的颜色反应

（一）米伦（millon’s）反应

1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热

观察颜色变化。

2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小

心加热，观察现象。

（二）双缩脲反应

1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加

10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% cuso4溶液，混匀，观察现象。

2、取蛋白液1ml，加10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% cuso4溶液，混匀，观察

现象。

（三）黄色反应

取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%naoh溶液1ml，观察颜色有什么变化。

（四）茚三酮反应

取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。

蛋白质的沉淀

（一）蛋白质的盐析作用

1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。

2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。

（二）有机溶剂沉淀蛋白质

试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。

（三）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质

1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。

2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。

（四）生物碱试剂沉淀蛋白质

取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。

六、实验结果

蛋白质的颜色反应

（一）米伦（millon’s）反应

1、苯酚实验：

溶液即出现玫瑰红色。

2、蛋白质实验：

出现白色的蛋白质沉淀，小心加热后凝固的蛋白质出现红色。

（二）双缩脲反应

1、有紫色出现。

2、溶液有蓝紫色出现

（三）黄色反应

先有黄色沉淀生成，加入10%naoh溶液1ml后颜色变为橘黄色。

（四）茚三酮反应

有蓝紫色出现。

蛋白质的沉淀

（一）蛋白质的盐析作用

1、有蛋白析出。

2、有蛋白质析出，加水后可复溶。

（六）有机溶剂沉淀蛋白质

取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象

（七）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质

取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。

（八）生物碱试剂沉淀蛋白质

取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，观察现象。

七、实验分析

蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨

基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。篇二：自由沉淀实验报告

六、实验数据记录与整理

1、实验数据记录

沉降柱直径水样来源柱高

静置沉淀时间/min

表面皿表面皿编号质量/g 表面皿

和悬浮物总质量/g

水样中悬浮物质量/g

水样体积/ml

悬浮物沉降柱浓度/工作水（g/ml）深/mm 颗粒沉沉淀效

速/率/％（mm/s）

残余颗

粒百分比/％

0 5 10 20 30 60 120 0 1 2 3 4 5 6

79.0438 80.7412 1.6974 81.7603 83.2075 1.4472 64.1890 65.4972 1.3082 66.1162

67.3286 1.2124 73.7895 74.9385 1.1490 83.4782 84.6290 1.1508 75.0332 76.1573 1.1241 31.0 30.0 30.0 30.0 30.0 31.0 31.0 0.0548 0.0482 0.0436 0.0404 0.0383 0.0371 0.0363 846.0 808.0 780.0 724.0 664.0 500.0 361.0 1.860 0.883 0.395 0.230 0.069 0.021 11.40 20.44 26.28 30.11 32.30 33.76 100 87.96 79.56 73.72 69.89 67.70 66.24 2、实验数据整理

（2）绘制沉淀曲线：e-t 、e-u 、ui~pi曲线如下： 2-1、绘制去除率与沉淀时间的曲

线如下：

图2.2：沉淀时间t与沉淀效率e的关系曲线

2-2、绘制去除率与沉淀速度的曲线如下：

图2.2：颗粒沉速u与沉淀效率e的关系曲线

2-3、绘制去除率与沉淀速度的曲线如下：

（1）选择t=60min 时刻：(大家注意哦！这部分手写的，不要直接打印！) 水样中悬浮

物质量=表面皿和悬浮物总质量-表面皿质量,如表格所示。原水悬浮物的浓度：c0?

水样中悬浮物质量1.6974

??0.0548g/ml 水样体积31.0

悬浮物的浓度：c5?

水样中悬浮物质量1.1508

??0.0371g/ml 水样体积31.0