MiRNA-125a-5p对大鼠脊髓损伤后血脊髓屏障及运动功能的影响
miRNA-136-5p对急性脊髓损伤模型大鼠炎症因子的作用
miRNA-136-5p对急性脊髓损伤模型大鼠炎症因子的作用邓贵营;曾高峰;岑忠喜;高云兵;曹百川;黄建华;宗少晖【摘要】背景:miRNA-136-5p对脊髓损伤后病理改变、炎症反应和再生修复产生重要的调节作用.目的:观察miR NA-136-5p对大鼠脊髓损伤后血清细胞炎性因子、脊髓组织NF-κB蛋白的影响, 探讨其作用分子机制.方法:SPF级雄性SD大鼠36只, 购买于广西医科大学动物实验中心.制备慢病毒载体系统转染脊髓损伤大鼠.改良Allen's法成功建立36只大鼠脊髓损伤模型, 对大鼠进行Basso Beattie Brenham (BBB) 评分, 随机分成正常对照组、模型组 (LV-ctrl+脊髓损伤组) 、过表达组 (脊髓损伤+LV-miRNA-136-5p) 、抑制组 (脊髓损伤+LV-sponge抑制组), 每组9只.手术前7 d及手术当天过表达组、抑制组在损伤区连续注射慢病毒悬液, 正常对照组、模型组注射等量生理盐水.各组在第1, 3, 7天分别处死3只大鼠, 取血、脊髓组织.ELISA测定大鼠血清白细胞介素1β, 白细胞介素6和干扰素α表达水平;Western Blot和双重免疫荧光检测NF-κB蛋白的表达.结果与结论:①术前BBB评分结果无显著差异 (P＞ 0.05);脊髓损伤模型组大鼠活动表现为俯卧位缓慢行走, 出现不同程度的尿潴留, 双后肢的运动、感觉功能完全丧失, 肌肉力量为0, 出现脊髓休克;②与正常对照组相比, 其他3组炎症因子水平均有升高 (P ＜0.05), 过表达组各种炎症因子水平升高更加明显;各组炎症因子水平分别按过表达组、模型组、抑制组顺序逐渐递减;③Western Blot、双重免疫荧光检测NF-κB蛋白表达水平, 模型组、过表达组、抑制组均高于正常对照组 (P ＜0.05), 其中过表达组表达水平最高;④结果提示, miRNA-136-5p对急性脊髓损伤大鼠炎症因子、NF-κB可产生影响.%BACKGROUND: miRNA-136-5 p plays a crucial regulatory role in pathological changes, inflammatory response and regeneration after spinal cord injury. OBJECTIVE: To investigate the effect of miRNA-136-5 p on theexpression of cytokines in serum and NF-κB protein in spinal cord in rats with spinal cord injury and to explore the molecular mechanism. METHODS: Thirty-six male Sprague-Dawley rats, of SPF grade were provided by Laboratory Animal Center of Guangxi Medical University. The lentiviral vector system was prepared and transfected into spinal cord injured rats. Thirty-six rat models of spinal cord injury were established by modified Allen's method. Basso Beattie Bresnahan scores were performed. Rats were randomly divided into normal control, modeling (LV-ctrl plus spinal cord injury), overexpression (spinal cord injury plus LV-miRNA-136-5 p), and inhibition (spinal cord injury plus LV-sponge) groups (n=9/group). Seven days before surgery and the day of surgery, the overexpression and inhibition groups were continuously injected with the lentivirus suspension into the injured area, and the normal control and modeling groups were injected with the same amount of normal saline. Three rats were sacrificed at 1, 3 and 7 days, and blood and spinal cord tissues were taken. The levels of interleukin-1β, interleukion-6 and interferon-α in rat serum were determined by ELISA. The expression of NF-κB protein was detected by western blot assay and double immunofluorescence. RESULTS AND CONCLUSION: (1) There was no significant difference in preoperative Basso Beattie Bresnahan scores (P＞ 0.05). In the modeling group, the rats showed prone walking, vary degrees of urinary retention, and spinal shock, with complete loss of function of both hind limbs and muscle strength of 0.(2) Compared with the normal control group, the levels of inflammatory factors in the other groups were increased significantly (P ＜ 0.05). Theexpression levels of inflammatory factors were highest in the overexpression group, followed by modeling group, and lowest in the inhibition group. (3) Results of western blot assay and double immunofluorescence showed that the expression level of NF-κB protein in the modeling, overexpression and inhibition groups was significantly higher than that in the normal control group (P ＜ 0.05), and the level was highest in the overexpression group. (4) In summary, miRNA-136-5 p can affect inflammatory factors and NF-κB in rats with acute spinal cord i njury.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)015【总页数】6页(P2397-2402)【关键词】miRNA-136-5p;脊髓损伤;NF-κB;炎症因子【作者】邓贵营;曾高峰;岑忠喜;高云兵;曹百川;黄建华;宗少晖【作者单位】广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科, 广西壮族自治区南宁市530021;广西生物医药协同创新中心, 广西医科大学, 广西壮族自治区南宁市530021;广西医科大学公共卫生学院, 广西壮族自治区南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科, 广西壮族自治区南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科, 广西壮族自治区南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科, 广西壮族自治区南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科, 广西壮族自治区南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科, 广西壮族自治区南宁市 530021【正文语种】中文【中图分类】R446;R3180 引言 Introduction脊髓损伤引起原发性脊髓组织坏死、细胞溶解及继发性损害，对中枢神经系统造成严重影响，降低患者的生活质量。
外泌体miRNAs在脊髓损伤中的研究进展
·综述·外泌体miRNAs在脊髓损伤中的研究进展周孝敏1,2，鱼丽萍2作者单位1.陕西中医药大学第二临床医学院陕西咸阳7120002.咸阳市第一人民医院神经内科陕西咸阳712000收稿日期2022-11-26通讯作者鱼丽萍135****6941@ 摘要脊髓损伤（SCI）常会导致损伤节段以下严重的运动、感觉以及自主功能障碍，甚至导致死亡。
由于其病理机制复杂多样，目前尚无成功的临床治疗方法。
近年来，微小RNA（miRNAs）在SCI的治疗中受到越来越多的关注。
外泌体是转移核酸、蛋白质、脂质的细胞和组织之间通信的关键介质，同时miRNAs作为外泌体主要内容物参与SCI相关的多种病理生理过程。
大量研究表明外泌体miRNAs不但治疗SCI效果显著，而且可以作为早期诊断SCI的生物标志物。
关键词外泌体；微小RNA；脊髓损伤；综述中图分类号R741；R741.02；R744文献标识码A DOI10.16780/ki.sjssgncj.20210926本文引用格式：周孝敏,鱼丽萍.外泌体miRNAs在脊髓损伤中的研究进展[J].神经损伤与功能重建,2023, 18(8):480-483.Research Progress of Exosome miRNAs in Spinal Cord Injury ZHOU Xiaomin1,2,YU Liping2.1.The Second Clinical School of Medicine,Shaanxi University of Chinese Medicine,Shanxi Xianyang712000,China;2.Department of Neurology,Xianyang First People’s Hospital,Shanxi Xianyang712000,ChinaAbstract Spinal cord injury(SCI)often results in severe motor,sensory,and autonomic dysfunction below the injured level,and even death.Due to the complexity and diversity of its pathological mechanism,there are no successful clinical treatments.In recent years,microRNAs(miRNAs)have received more and more attention in the treatment of SCI.Exosomes are the key communication media between cells and tissues that transfer nucleic acids,proteins and lipids.miRNAs,as the main contents of exosomes,participate in various pathophysiological processes of SCI.A large number of studies have shown that exosomal miRNAs are not only effective in the treatment of SCI,but also could be used as biomarkers for the early diagnosis of SCI.Keywords exosome;microRNA;spinal cord injury;review脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是指由于各种因素导致的中枢神经系统创伤，可引起损伤平面以下运动、感觉和括约肌等功能障碍。
MicroRNA—125 的生理功能及其在疾病中的作用
MicroRNA—125 的生理功能及其在疾病中的作用MicroRNAs（miRNAs）是一类小的非编码RNA分子，其可以在转录后水平调节基因表达。
miR-125是在不同种属生物中高度保守的miRNA。
miR-125家族的成员已经被证实能够在多种不同类型的疾病中表达改变，并调控疾病的发生。
此外，miR-125在免疫宿主防御，尤其是在对细菌或病毒的感染中起到至关重要的作用。
本文着重总结了miR-125家族的生理功能以及其在肿瘤以及免疫系统疾病、造血系统恶性疾病、心血管疾病中的作用，也讨论了miRNA家族在未来作为生物标志物和治疗靶点的发展前景。
[Abstract] MicroRNAs （miRNAs）are emerging as small non-coding RNA molecules that regulate gene expression at a post-transcriptional level. miR-125 is a highly conserved miRNA throughout diverse species. Members of miR-125 family have been validated to be changed，exhibiting its different roles in many different types of diseases. Furthermore，miR-125 plays a crucial role in immunological host defense，especially in response to bacterial or viral infections. In this review，summarizes the pathophysiological functions of miR-125 family in various diseases，focusing on carcinoma and host immune responses，malignant diseases in hematopoietic system，cardiovascular diseases and so on，also discuss the potential of miRNA family as promising biomarkers and therapeutic targets for different diseases in future.[Key words] miR-125；Carcinoma；Autoimmune disease；Malignant diseases in hematopoietic system；Cardiovascular diseaseMicroRNAs（miRNAs）是一类18～25 nt长度的小分子非编码单链RNA，miRNAs通过不完全或完全结合到靶基因mRNA的3′非翻译区（3′UTR），从而降解靶基因mRNA或抑制其翻译，实现对靶基因表达水平的转录后调控，从而参与调控个体发育、细胞代谢、增殖、分化和凋亡等多种生物学过程[1-3]。
miR-125a-5p抑制肝细胞癌的发生（启因生物客户文献系列）
miR-125a-5p抑制肝细胞癌的发⽣（启因⽣物客户⽂献系列）⽂章信息1.研究背景miR-125a-5p在肝细胞癌（HCC）和其他癌症中是⼀种肿瘤抑制因⼦，但在HCC肿瘤发⽣过程中其作⽤机理仍然未知。
2.⽅法2.1 来⾃HCC患者的8对肝癌组织和邻近正常组织使⽤miRNA芯⽚（Shanghai Wcgene Biotech, Shanghai, China）⽐较miRNA的表达情况2.2 细胞转染，对转染后的细胞进⾏qRT-PCR分析，CCK8和菌落形成试验，Western blot分析，以及免疫荧光分析。
2.3 利⽤数据库预测miR-125a-5p的靶基因2.4 建⽴⼩⿏肿瘤模型3.结果3.1 miR-125a-5p在HCC组织和细胞系中下调使⽤微阵列⽐较⼋对HCC组织和邻近正常组织中的miRNA表达。
结果表明，与邻近的正常组织相⽐，HCC组织中的miR-125a-5p表达降低。
此外，qRT-PCR表明miR-125a-5p在HCC细胞系（Bel-7404，SK-Hep1，Bel-7404和MHCC-97H）中的表达低于正常肝细胞系（L02）。
图1. （A）在⼋对匹配的HCC组织和相邻正常组织中差异表达的miRNA的热图。
（B）qRT-PCR表明，与邻近的正常组织相⽐，HCC组织中的miR-125a-5p表达下调。
（C）与Starbase中TCGA中相邻的正常组织相⽐，HCC肿瘤组织中的miR-125a-5p表达下调。
（D）qRT-PCR表明，miR-125a-5p在HCC细胞系（Bel-7404，SK-Hep1，Bel-7404和MHCC-97H）中的表达低于正常肝细胞系（L02）。
（E）Kaplan-Meier曲线表明，HCC患者的总体⽣存率与miR-125a-5p表达⽔平⽆关。
3.2 miR-125a-5p在体外抑制HCC细胞增殖并诱导其凋亡分别通过⽤miR-125a-5p模拟物和抑制剂转染，在Bel-7404和SK-Hep1细胞中过表达和敲低miR-125a-5p。
miR-125a-5P
Ｋｉ － ６ ７ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， ｃ ｅ ｌ ｌ ｍｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｗｅ ｌ ｌ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， ａ ｎ ｄ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｉ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｍｉ Ｒ・ － １ ２ ５ ａ ・ ・ ５ ｐ ｏ ｎ ｍｅ ｄ ｕ ｌ ｌ ｏ ｂ ｌ ａ ｓ ｔ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｖ ｉ ｖ ｏ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｍｉ ｎｏ ｒ ｂ ｅ ａ ｒ ｉ ｎ ｇ ｍｉ ｃ ｅ ｍｏ ｄ ｅ １ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｆ ｍｉ Ｒ－ １ ２ ５ ａ 一 ５ Ｐ ｉ ｎ ｍｅ ｄ ｕ ｌ ｌ ｏ ｂ ｌ ａ ｓ ｔ ｏ ｍａ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｓ ｗａ ｓ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ
・
９ ４・
临床儿科杂 志 第 ３ ３ 卷第 １ １ 期 ２ ０ １ ５ 年 １ １ 月 Ｊ Ｃ ｌ ｉ ｎ Ｐ ｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｒ Ｖ ｏ １ ． ３ ３ Ｎｏ ． １ １ Ｎ ｏ ｖ ． ２ ０ １ ５
ｄ ｏ ｉ ： １ ３ ９ ６ ９ ／ １ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ Ｏ Ｏ ０ — ３ ６ ０ ６ ． ２ ０ １ ５ ． １ １ ． ０ １ ４
miRNA在急性脊髓损伤病理生理调节机制中的作用研究进展
为 三类 ： பைடு நூலகம் １ ） 表达 上调 ； （ ２ ） 表 达下调 ； （ ３ ） 损 伤后 早期 （ ４ ｈ
能恢复 ， 并 且 在 中 枢 神经 系统 纤 维 化 中起 重 要 作 用 １ ８ １ 。 Ｓ ｕ ｎ ｇ
等［ ９ １ 发 现 Ｒｈ ｏ Ａ 在斑 马 鱼 Ｓ ＣＩ 后 出现 基 因 表 达 上 调 且 可 抑
制 损 伤 后运 动功 能 的恢 复 。 通 过下 调 Ｓ Ｃ Ｉ 后 ｍｉ Ｒ 一 １ ３ ３ ｂ的 表达可导致 Ｒ ｈ ｏ Ａ 基 因 表 达 水 平 较 对 照 组 明显 升 高 ， 从 而 抑制斑马鱼 Ｓ Ｃ Ｉ 后 轴 突再 生 ， 减缓 运 动 功 能 的 恢 复 。 相反 ，
１ ０ ２ ２
中国脊柱脊髓杂志 ２ ｏ １ ３年第 ２ ３卷第 １ １ 期 Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆＳ ｐ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ Ｓ ｐ ｉ ｎ ａ ｌ Ｃ ｏ ｒ ｄ ， ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ３ ， Ｎ ｏ ． １ １
Ｓ Ｃ Ｉ 后 尝 试 抑 制 对 损 伤 修 复 的 不 利 因 素 ．然 而 因 为 某 种 原
因这 种 尝 试失 败 了。 总之 ． Ｓ Ｃ Ｉ后 ｍｉ Ｒ一１ ３ ３ ｂ可 通 过 对
Ｒ ｈ ｏ Ａ蛋 白的 调 控影 响轴 突 再 生 从 而 在 损 伤 后 修 复 过 程 中 发 挥作 用 。
ｍＲ Ｎ Ａ的３ 非 翻 译 区 相应 碱 基 配 对 ，导 致 靶 ｍＲ Ｎ Ａ 的 降 解 或 者 抑 制 其 翻译 过 程 ，从 而 对 基 因 表 达 进 行 转 录 后 调
控。 近 年来 研 究 发 现 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ广 泛 参 与 炎 症 、 发育 、 凋亡 、 肿 瘤 等 多 种病 理 生 理 过 程 的 调 节 ＿ ３ １ １ ， 且有 相关 文献 报道 在 急 性 Ｓ Ｃ Ｉ 后可继发多种 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ 的表 达 失 调 ｌ 引 ，提 示 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ
miR-125a-5p在消化及呼吸系统肿瘤中表达水平及在肿瘤发生发展的作用
miR-125a-5p在消化及呼吸系统肿瘤中表达水平及在肿瘤发生发展的作用MicroRNA(miRNA)一种成熟的、小的、非编码的、单链、高度保守的内源性RNAs，通过与靶信使RNA(mRNA)3'端的非翻译区(3'UTR，untranslated regions)，近乎完全互补结合在转录后水平使其降解，或者与之不完全互补结合在翻译水平抑制蛋白合成，从而抑制靶蛋白编码基因的翻译及表达。
到目前为止，人们已经发现了几百种miRNA。
在人类的所有基因谱中，miRNA具有多种生物学功能，调控多种生物学过程，参与细胞的发育、代谢、分化、增殖、自噬和凋亡等。
越来越多的研究表明: miR-125家族在很多实体肿瘤中发挥抑癌基因功能，因靶基因的不同，miR-125a的表达水平不一致。
在不同肿瘤中表达程度亦不相同，提示miR-125a在不同肿瘤的发生发展过程中可能发挥不同的作用。
在多种实体肿瘤中检测到miR-125a的表达减少，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌以及胶质母细胞瘤。
miR-125a与肿瘤细胞的生长、分化及转移存在密切的关系，但在不同的癌组织中存在上调或下调不一致表达的现象。
目前，对于miR-125a研究多集中miR-125a-5p,为明确其在肿瘤发生发展中的作用，探寻肿瘤治疗的新靶点提供理论依据，寻求肿瘤诊断及预后判断新的生物标志物。
1. miR-125a-5p在胰腺癌中的表达水平及促进癌细胞恶性转化作用胰腺癌发病隐匿，早期诊断率低，大约95％的胰腺癌患者在明确诊断时己进入中晚期，是导致其高死亡率的主要原因。
因此急需寻找一种可以用于胰腺癌早期诊断的标志。
最新的研究结果显示，循环miRNAs尤其是外周血中的miRNAs稳定表达，其表达谱在疾病状态下出现异常改变，可能成为潜在的疾病检测评估指标及治疗靶点。
贾丛伟等人研究发现， 4个胰腺癌细胞系miR-125a-5p的表达均高于癌旁正常组织，下调miR-125a-5p的表达水平可抑制Pane-1、MIA PaCa-2两个细胞系的生长及增殖能力。
科技期刊出版中伦理问题的基本要求
主 管中华人民共和国国家卫生健康委员会主 办 中国康复医学会《中国组织工程研究》杂志社编 辑《中国组织工程研究》杂志编辑委员会地 址 沈阳浑南新区10002 邮政信箱邮 编110180电 话************************************在线投稿 网 址 1997年1月创刊 (总第964期) 第25卷 第35期 旬刊 2021年12月18日出版主 编 唐佩福执行副主编毕郑钢 姜保国 刘 璠马信龙 石炳毅 汤 欣吴新宝 张长青 张英泽赵德伟社 长 王莉莎出 版 《中国组织工程研究》杂志社广告代理 本刊广告部 印 刷辽宁泰阳广告彩色印刷有限公司国内发行中国邮政集团公司辽宁省报刊发行局邮发代号：8-584国外发行中国国际图书贸易集团有限公司发行代号： WK3862订 购 本刊发行部定 价 20.00元／册中国标准连续出版物号ISSN 2095-4344CN 21-1581/R坚持“创新，科学，严谨，规范”的刊社精神：坚持创办数字化、国际化、精品化受学科专家喜欢阅读的专业期刊。
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社长的话 From President科技期刊出版中伦理问题的基本要求2018年11月发生的“人类基因编辑婴儿”事件，引发了全社会范围对科学研究伦理问题的关注与担忧。
随着生物医学科学研究的快速发展和生物医学研究伦理审查工作的逐步深入，迫切需要加强科研伦理管理。
除了各大科研高校以及教学医院外，科技期刊出版过程也与科研伦理息息相关。
文章将从4个部分分别介绍科技期刊出版中的伦理问题。
1、科研伦理的法律法规现代生物医学技术的飞速发展为诊断治疗疾病、增进人类健康提供了新的手段，同时，因生物医学新技术临床研究风险和技术难度大，存在较多不可预料或不可控风险，当实施、管理不当时，便可能出现威胁公共安全、危害受试者健康权益的情况。
microRNA在脊柱脊髓损伤中作用的研究现状与进展
microRNA在脊柱脊髓损伤中作用的研究现状与进展李贺祥;丛岩;王佳瑶;邱涛【摘要】脊髓损伤(SCI)是当今全球性的医学难题之一,致残率及病死率极高,当前临床治疗手段有限且疗效欠佳.SCI后复杂的病理生理过程使得神经功能障碍进一步加重,脊髓再生和功能恢复困难.近年来的研究发现,基因表达的改变在SCI中起到了重要作用,microRNA (miRNA)是一类在转录后水平负性调控基因表达的非编码单链RNA小分子,是基因表达调控的重要机制之一,在细胞分化、生长、增殖和神经活动等多种神经生物学过程及病理过程中起重要作用.在SCI后miRNA主要通过调节中性粒细胞和炎性反应通路在炎性应答中起到了重要作用;在细胞凋亡过程中,因miRNA表达的改变可能同时刺激和抑制凋亡而显得其功能复杂;miRNA也可作用于星形胶质细胞调节胶质瘢痕的进程,在促使神经元存活、轴突生长和促进SCI 部位再生进程中发挥重要作用.总之,对神经系统疾病中miRNA作用机制的研究不仅为基因治疗SCI的研究提供了一种新的思路,miRNA本身也可能成为临床治疗SCI的潜在靶点.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2019(048)003【总页数】4页(P479-482)【关键词】微RNAs;脊髓损伤;脊柱损伤;基因表达;新靶点【作者】李贺祥;丛岩;王佳瑶;邱涛【作者单位】贵州医科大学临床医学院,贵阳550004;贵州医科大学临床医学院,贵阳550004;贵州医科大学临床医学院,贵阳550004;贵州医科大学临床医学院,贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R651.2作为中枢神经系统中较为严重的创伤之一，脊髓损伤(SCI)是脊柱骨折的严重并发症[1]。
其早期主要有因损伤组织缺血、水肿、氧自由基形成及炎性反应等多种因素联合作用引起的暂时性或永久性的病理生理改变，最终可导致肢体运动和感觉能力丧失[2]，目前尚无令人满意的疗法[3]。
最近有研究表明，SCI的继发性损伤和损伤后神经再生过程受到microRNA(miRNA)的显著调控,对与SCI相关的miRNA的研究可以提高对疾病进程的认识，从而为临床医生提供治疗SCI及预测临床预后的机会[4]。
MicroRNA在神经系统不同部位特异分布及其在神经损伤再生中的变化和作用
MicroRNA在神经系统不同部位特异分布及其在神经损伤再生中的变化和作用左乔1许家军2，△（第二军医大学1附属长海临床医学院；2人体解剖学教研室，上海200433）摘要MicroRNA是一类内源性的非编码RNA，在mRNA转录后水平调节靶基因的表达。
近年来国内外研究表明，生理条件下microRNA在神经系统存在特异性表达并发挥重要作用。
而在神经系统损伤后，多种microRNA的分布和表达发生改变，从而对神经再生过程产生影响。
microRNA的这一作用对临床诊断和治疗神经系统损伤意义重大。
关键词microRNA；基因表达；神经系统；神经损伤；神经再生中图分类号R651Specific Expression of MicroRNA in Different Tissues of Nervous System and Expression Changes in Nerve Regeneration ZUO Qiao1，XU Jia-Jun2（Second Military Medical University1Company One，the Graduates Management Brigade；2Department of Human Anatomy，Shanghai200433，China）Abstract MicroRNA is a class of endogenous non-coding RNA，which regulates the expression of target genes at the post-transcriptional level．In recent years，researches have shown that microRNA expresses specifically and plays an important role in the nervous system under physiological condition．Further-more，the distribution and expression level of microRNA were changed after the injury of nervous system，which presents important effect on nerve regeneration．This effect of microRNA is significant to the clini-cal diagnosis and treatment on the injury of nervous system．Key words microRNA；gene expression；nervous system；nerve injury；nerve regenerationMicroRNA（miRNA）是生物体内一类较短（约22个核苷酸）的非编码单链小分子RNA，进化上高度保守，存在于动物、植物、病毒等多种生物中，并广泛参与生物体生长、发育、凋亡等生理或病理过程。
miR-125a-5p在视神经炎患者PBMC中的表达及其生物信息学分析
miR-125a-5p 在视神经炎患者PBMC 中的表达及其生物信息学分析*战家霖，梁巧雯，黄艳玲，杜毅，何剑峰△（广西医科大学第一附属医院眼科，南宁530021）摘要目的：探讨miR-125a-5p 、miR-145-3p 和miR-145-5p 在视神经炎（ON ）患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平，并采用生物信息学方法分析差异表达的microRNA 在ON 发病过程中的分子调控网络。
方法：收集ON 患者5例（ON 组）及同期体检健康者5例（对照组），应用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR ）法检测PBMC 中miR-125a-5p 、miR-145-3p 和miR-145-5p 的表达水平。
应用miRNAbase 数据库分析miR-125a-5p 在不同物种间的保守性。
应用TargetScan 数据库、Pic-Tar 数据库、miRanda 数据库及miRDB 数据库预测hsa-miR-125a-5p 交集靶基因；应用DA VID 数据库对hsa-miR-125a-5p 靶基因进行GO 功能富集分析；应用KOBAS 数据库对hsa-miR-125a-5p 靶基因进行KEGG 信号通路富集分析；应用STRING 数据库对hsa-miR-125a-5p 靶基因进行蛋白－蛋白互作（PPI ）网络分析。
结果：ON 组PBMC 中miR-125a-5p 表达水平（1.086×10-3±0.692×10-3）显著低于对照组（4.468×10-3±2.322×10-3）（P ＜0.05），两组miR-145-3p 和miR-145-5p 表达比较，均未见明显差异（P ＞0.05）；miR-125a-5p 成熟序列在不同物种间具有高度保守性；hsa-miR-125a-5p 潜在交集靶基因有78个；GO 富集结果显示，hsa-miR-125a-5p 靶基因功能主要富集于nucleus 、nucleoplasm 、membrane 等14个生物学过程；KEGG 通路结果显示，hsa-miR-125a-5p 靶基因主要富集于MicroRNAs in cancer 、PI3K-Akt signaling pathway 等17条信号通路；PPI 网络结果显示，hsa-miR-125a-5p 靶基因主要作用于DICER1等72种蛋白。
miRNA-125a靶向调控Bcl-2对癫痫大鼠神经元凋亡的影响
第38卷第1期2021年2月4研究报告％实验动物科学LABORATORY ANIMAL SCIENCEVol.38 No.1February 2021miRNA-125a靶向调控价/-2对癫痫大鼠神经元凋亡的影响裴静陈明高华白杨王萍(新疆医科大学第五附属医院神经内科，乌鲁木齐830000)摘要：目的探讨miRNA-125a耙向调控B W-2对癫痫大鼠神经元凋亡的影响。
方法选择清洁级S D雄性大鼠 32只随机分为正常对照组（A组）、癫痫组（B组）、miRNA-l25a antagomir contro丨组（C组）和miRNA-125a antagomir 组（D组）t<lRT-PCR检测各组大鼠脑组织miRNA-125a表达水平；H E检测各组大鼠脑海马组织CA-1区病理形态 学改变；TUNF丄法检测脑海马CA-1区神经元细胞凋亡数；Western blot和qI{T-PC R法检测各组大鼠脑组织中BW-2 的表达水平；荧光素酶活性检测miRNA-125a与Sc/-2的靶向关系t结果与A组相比，B组和C组大鼠脑组织 raiRNA-125a表达升高，差异具有统计学意义（P<0.05) ;A组海马细胞排列整齐，细胞形态结构及层次清晰完整，核仁明显，间质无水肿；B组可见坏死灶，细胞排列紊乱，细胞核固缩，核仁消失，细胞间隙增宽出现水肿；TUNEL结果 显示，B组、C组和D组脑海马神经元凋亡细胞数明显高于A组，而大鼠脑组织Bc/-2mRNA及蛋白表达降低。
D组 miRNA-125a表达与C组相比降低而6c/-2表达增加（P<0.05)，且D组大鼠脑组织水肿现象明显减轻，海马细胞排 列紊乱现象有所改善。
荧光素酶报告基因实验结果显示，miRNA-125a和fic/-2能够靶向结合（结论癫痫模型大 鼠脑组织miRNA-125a可通过调控fiC/-2表达，进一步导致脑海马神经元损伤及大量神经元细胞凋亡；抑制miRNA-125a的表达水平可改善癫痫大鼠神经元损伤。
211108257_ｍｉＲ-１２５ｂ-５ｐ对创伤性脑损伤诱发大鼠认知功能障碍的干预作用及其机制
ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ对创伤性脑损伤诱发大鼠认知功能障碍的干预作用及其机制王 勇１△，赵 伟１，姜正林２，陈振华１，张 欢１（１．南通大学第二附属医院神经外科，２．南通大学特种医学研究院，江苏南通２２６００１）【摘要】 目的：研究ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ对创伤性脑损伤（ＴＢＩ）引起的大鼠认知功能障碍的影响及其分子机制。
方法：将大鼠随机分为Ｃｏｎｔｒｏｌ组、ＴＢＩ组（模型组）、ＮＣａｇｏｍｉｒ组（假阴性组）、ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐａｇｏｍｉｒ组（高表达组），每组５只。
假阴性组和高表达组分别脑室注射ＮＣａｇｏｍｉｒ和ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐａｇｏｍｉｒ，除Ｃｏｎｔｒｏｌ组外各组均用改良Ｆｅｅｎｅｙ法建立脑损伤模型。
通过行为学实验对大鼠的运动协调、学习记忆、神经损伤程度等进行评估。
通过ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔ ｅｒｎｂｌｏｔ对各组大鼠海马组织中ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ、炎性因子，以及神经相关因子的表达水平进行检测。
最后使用生物信息学结合ＲＴ ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ的下游靶基因进行预测和验证。
结果：与对照组相比，模型组和假阴性组大鼠ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ的表达水平显著下调、ｍＮＳＳ评分显著升高、运动协调能力及学习记忆能力显著下降、白介素（ＩＬ １β、ＩＬ ６）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ α）表达水平显著升高、ＢＤＮＦ和ＮＧＦ的表达水平显著下降、ＧＦＡＰ的表达水平显著升高（Ｐ＜０．０１）；与模型组和假阴性组相比，高表达组大鼠的ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ的表达水平显著升高、ｍＮＳＳ评分显著降低、运动协调能力及学习记忆能力明显增高、ＩＬ １β、ＩＬ ６及ＴＮＦ α表达水平显著下降、ＢＤＮＦ及ＮＧＦ的表达水平升高、ＧＦＡＰ的表达水平显著下降（Ｐ＜０．０１）。
生信分析显示，ＭＭＰ １５为ｍｉＲ １２５ｂ ５ｐ的下游靶标基因，与对照组相比，模型组和假阴性组ＭＭＰ １５表达显著升高（Ｐ＜０．０１）；与模型组和假阴性组相比，高表达组ＭＭＰ １５的表达显著降低（Ｐ＜０．０１）。
miR-125a-5P在髓母细胞瘤中的异常表达及其抑癌作用
miR-125a-5P在髓母细胞瘤中的异常表达及其抑癌作用楚冬梅;刘晓智;严艳萍;高心静;刘翠苹;李艳霞;姜忠敏;姚玲【摘要】目的探讨miR-125a-5P在髓母细胞瘤中的表达特点并分析其抑癌作用.方法采用逆转录PCR方法检测58份髓母细胞瘤组织及2个髓母细胞瘤株D341细胞和Daoy细胞中miR-125a-5p表达水平;瞬时转染D341细胞miR-125a-5P 寡核苷酸,免疫荧光方法检测Ki-67核增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移力,克隆形成实验检测瘤细胞致瘤潜能;荷瘤鼠模型检测miR-125a-5p转染对体内瘤细胞的抑制效果.结果 miR-125a-5P在儿童髓母细胞瘤组织中的相对表达量明显高于正常儿童脑组织,差异有统计学意义(t=17.55,P＜0.01);miR-125a-5P在神经干细胞、髓母细胞瘤株D341细胞、Daoy细胞、神经胶质细胞和神经元细胞的相对表达量差异有统计学意义(F=9.44,P=0.002);miR-125a-5P的表达量在神经胶质细胞和神经元细胞中较高,分别高于神经干细胞、髓母细胞瘤株D341细胞和Daoy细胞中的相对表达量,差异有统计学意义(P均＜0.05).与对照组和无义组比较,miR-125a-5p组瘤细胞增殖速度减慢,瘤细胞迁移力降低,肿瘤克隆能力减弱,荷瘤鼠肿瘤体积小,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-125a-5P在髓母细胞瘤中表达降低或缺失,可能是潜在的抑癌基因之一.【期刊名称】《临床儿科杂志》【年(卷),期】2015(033)011【总页数】5页(P974-978)【关键词】髓母细胞瘤;增殖;转移;微小RNA【作者】楚冬梅;刘晓智;严艳萍;高心静;刘翠苹;李艳霞;姜忠敏;姚玲【作者单位】天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450;天津市第五中心医院天津300450【正文语种】中文髓母细胞瘤是10岁以下儿童最常见的原发性恶性颅内肿瘤，具有极高的致死率和致残率［1］。
在脊髓损伤中发挥潜在作用的一些重要蛋白质与miR-21a-5p有关？
在脊髓损伤中发挥潜在作用的一些重要蛋白质与miR-21a-5p有关？脊髓损伤的病理生理机制可涉及各种信号通路的中枢神经系统损伤，目前尚不明确。
课题组以往研究发现，microRNA21a-5p（miR-21a-5p）基因敲除可改善脊髓损伤模型小鼠脊髓损伤后运动功能的恢复，但具体分子机制尚不清楚。
中国山东大学附属医院Almaghalsa-Ziad Mohammed等在其一项最新研究中，采用重物打击法建立脊髓损伤小鼠模型，利用蛋白质组学方法来观察miR-21a-5p基因敲除的脊髓损伤模型小鼠脊髓组织中的不同蛋白质的表达，并设未经基因敲除的脊髓损伤模型小鼠为阴性对照组对比发现：(1)在miR-21a-5p基因敲除后，与NC组相比，基因敲除组在炎症调节，细胞氧化应激保护，细胞氧化还原稳态和细胞维持中发挥重要作用的多数蛋白质表达均上调；(2)KEGG途径分析发现，两组中均发现了KEGG相关的富集途径，如氧化磷酸化途径，其与帕金森病，亨廷顿病，阿尔茨海默病和心肌收缩相关；(3)实验还发现miR-21a-5p可能是肌萎缩侧索硬化途径中的潜在生物标志物，因为miR-21a-5p在该途径中表达下调；(4)上述数据说明，实验成功检测出了在脊髓损伤中发挥潜在作用的一些重要蛋白质，研究这些蛋白质及其在脊髓损伤恢复中的相互关系，将为未来脊髓损伤生物标志物的研究提供参考依据。
文章研究成果发表在《中国神经再生研究（英文版）》杂志2020年6月第6期。
文章摘要：课题组以往研究发现，microRNA21a-5p（miR-21a-5p）基因敲除可改善脊髓损伤模型小鼠脊髓损伤后运动功能的恢复，但具体分子机制尚不清楚。
为此，实验采用重物打击法建立脊髓损伤小鼠模型，利用蛋白质组学方法来观察miR-21a-5p基因敲除的脊髓损伤模型小鼠脊髓组织中不同蛋白质的表达，并设未经基因敲除的脊髓损伤模型小鼠为阴性对照组。
对比发现：(1)在miR-21a-5p基因敲除后，与NC组相比，基因敲除组小鼠在炎症调节，细胞氧化应激保护，细胞氧化还原稳态和细胞维持中发挥重要作用的多数蛋白质表达均上调；(2)KEGG途径分析发现，两组小鼠均发现了KEGG 相关的富集途径，如氧化磷酸化途径，其与帕金森病，亨廷顿病，阿尔茨海默病和心肌收缩相关；(3)实验还发现miR-21a-5p可能是肌萎缩侧索硬化途径中的潜在生物标志物，因为miR-21a-5p在该途径中表达下调；(4)上述数据说明，实验成功检测出了在脊髓损伤中发挥潜在作用的一些重要蛋白质，研究这些蛋白质及其在脊髓损伤恢复中的相互关系，将为未来脊髓损伤生物标志物的研究提供参考依据。
血清外泌体miR-125a-5p和miR-99b-5p在心力衰竭诊断中的价值
血清外泌体miR-125a-5p和miR-99b-5p在心力衰竭诊断中的价值杨丽;戴婷婷;刘丹;李鹏飞【期刊名称】《全科医学临床与教育》【年(卷),期】2024(22)5【摘要】目的采用微阵列和荧光定量PCR(qRT-PCR)技术评估在心力衰竭中具有诊断效能的miRNA。
方法用微阵列探索心力衰竭患者血清中的miRNA表达谱,并用qRT-PCR方法检测候选miRNA的表达水平。
然后,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析候选miRNA的诊断价值。
结果与健康对照者相比,miR-125a-5p和miR-99b-5p在心力衰竭患者的血清外泌体中明显下调,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.73和0.72。
此外,miR-125a-5p和miR-99b-5p的联合检测比单个miRNA具有更高的诊断价值,其AUC达到0.80。
结论miR-125a-5p和miR-99b-5p的表达水平在心力衰竭患者的血清外泌体中显著下调,可作为心力衰竭诊断的新型循环生物标志物。
miR-125a-5p和miR-99b-5p联合后的诊断效能高于其单独使用。
【总页数】6页(P392-395)【作者】杨丽;戴婷婷;刘丹;李鹏飞【作者单位】宁波市镇海中医医院重症医学科;宁波市镇海中医医院呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.血浆外泌体miR-125a-5p对宫颈癌的诊断价值2.基于GEO数据库鉴定血清外泌体miR-372在食管癌中的诊断价值3.血清外泌体中lncRNA SOX21-AS1的表达在宫颈癌诊断中的临床价值4.温阳贴贴敷涌泉穴对慢性心力衰竭病人血清UCP2、外泌体及外泌体内miR-320水平的影响5.血清外泌体miRNA-21、miRNA-214联合检测在骨质疏松症诊断中的价值因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
护理干预对大鼠脊髓损伤后运动功能修复的影响
护理干预对大鼠脊髓损伤后运动功能修复的影响宋碧英;李巍【期刊名称】《局解手术学杂志》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】Objective To explore the effect of nursing intervention on degree of motor function recovery after spinal cord injury in rats. Methods 60 rats were randomly divided into three groups with 20 rats in each group. Group A was the control group,group B was the rou-tine nursing group,and group C was the nursing intervention group which was given nursing intervention such as muscle pressure,joint passive movement,and skin care. The ethology was evaluated by BBB score and inclined-plane score at different time points after spinal cord injury. Myoelectricity and wet weight of gastrocnemius muscle were observed at different time points after spinal cord injury through multi-channel physiological signal acquisition system and electronic weighing scales. Results BBB score and inclined-plane score were basically the same. Compared with group B,hind limb function of group C was significantly improved,but it was obviously lower than the control group. Amplitude of gastrocnemius myoelectrical fibrillation in group C was higher than that in group B and gastrocnemius muscle wet weight decrease in group C was lower than that in group B. Conclusion Nursing intervention can delay the speed of gastrocnemius muscle atrophy,improve motor function,and promote the recovery ofpartial function after the spinal cord injury in rats.%目的：探索护理干预对脊髓损伤大鼠运动功能恢复程度的影响。
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MiRNA-125a-5p对大鼠脊髓损伤后血脊髓屏障及运动功能的影响Dai Guoyu;Liu Jisong;Li Jian;Liu Wenrui;Li Gang;Bi Yunlong;Cao Yang【摘要】目的:通过干预大鼠脊髓中miRNA-125a-5p的表达量,探讨miRNA-125a-5p在脊髓损伤(SCI)后对血脊髓屏障(BSCB)的作用及对大鼠运动功能的影响.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组)、miRNA空载组(NC组)和miRNA-125a-5p agomir鞘内注射组(miRNA组).RT-PCR检测miRNA-125a-5p在各种大鼠脊髓中的表达,免疫印迹和免疫荧光实验检测脊髓微血管内皮细胞间紧密连接蛋白(ZO-1)表达,尼氏染色观察脊髓前角运动神经元的数量以及通过BBB评分评价大鼠运动功能恢复.结果:MiRNA组的miRNA-125a-5p 的相对表达量明显高于SCI组,且ZO-1的mRNA的相对表达量和相对蛋白质表达量较SCI组和显著增加.MiRNA组的脊髓前角运动神经元相对数量明显多于SCI 组.MiRNA组大鼠脊髓损伤后1d、3d、7d、14d、21d和28 d运动功能恢复明显优于SCI组.结论:MiRNA-125a-5p可以有效保护脊髓损伤大鼠的血脊髓屏障功能并促进运动功能恢复.【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2019(042)003【总页数】6页(P225-230)【关键词】脊髓损伤;血脊髓屏障;miRNA-125a-5p;紧密连接蛋白ZO-1【作者】Dai Guoyu;Liu Jisong;Li Jian;Liu Wenrui;Li Gang;Bi Yunlong;Cao Yang【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）主要包括原发性损伤和继发性损伤，原发性损伤主要是指脊髓受到直接的外力作用而造成的脊髓机械性损伤并伴有直接的肢体感觉异常和运动障碍[1]。
继发性损伤主要是指在脊髓损伤后损伤部位向头尾纵轴方向蔓延并继发性出血水肿以及炎症浸润等不良反应所造成的损伤[2-3]。
在继发性损伤中血脊髓屏障（blood spinal cord barrier，BSCB）内皮细胞功能的减弱直接导致了脊髓血管通透性增加造成脊髓微环境的改变；有害物质大量沉积再次加重脊髓的损伤；这些情况对脊髓损伤的预后产生了极其不良的影响[4]。
因此在治疗原发性脊髓损伤的同时，有针对性的维持BSCB的功能可能是治疗脊髓损伤的切入点[4-5]。
但目前能够改变BSCB作用的有效方法很少。
MicroRNA-125a-5p （miRNA-125a-5p）是miRNA-125家族中的一员，它是1种大小约22个碱基组成的单链小分子内源性具有调控功能的非编码RNA[6]。
目前研究表明miRNA-125a-5p在脊髓损伤后72 h明显下调，此时也是脊髓损伤后BSCB开放的高峰期，因此推测miRNA-125a-5p可能与BSCB的作用有关[7-8]。
本研究是在大鼠鞘内注射miRNA-125a-5p的模拟物（miRNA-125a-5p agomir）增加脊髓的miRNA-125a-5p的含量后检测紧密连接蛋白（tight junction protein，ZO-1）的表达、前角神经元数量和对大鼠进行BBB评分，观察和评价miRNA-125a-5p在大鼠脊髓损伤中的作用，为脊髓损伤的研究提供新的方向。
1 材料和方法1.1 实验动物及分组48只150～180g SPF级SD大鼠由锦州医科大学实验动物中心提供。
大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤组（SCI组）、miRNA空载组（NC组）和miRNA-125a-5p agomir鞘内注射组（miRNA组），每组12只。
采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，注射剂量为3 μl/g，其中Sham组为只去除第11胸椎（T11）节段椎板暴露第10胸椎（T10）节段脊髓且不对脊髓进行打击的空白对照组；SCI组为去除椎板暴露T10节段脊髓后用自制的Allen打击器进行脊髓打击的单纯脊髓损伤的对照组；NC组为在脊髓打击前3 d每隔24 h注射1OD无功能miRNA空载基因的鞘内注射的阴性对照组，miRNA组为脊髓打击前3 d每隔24 h注射1OD的miRNA-125a-5p agomir的miRNA-125a-5p高表达组。
其中miRNA空载组是含miRNA成熟体的双链无功能基因序列并不表达基因功能，miRNA-125a-5p agomir是根据miRNA-125a-5p成熟体设计并针对提高体内稳定性而进行化学修饰合成的双链miRNA模拟物，agomir是在miRNA反义链上进行化学修饰，3'端胆固醇修饰，5'端2个硫代修饰，3'端4个硫代修饰的1种新型的miRNA模拟物。
miRNA-125a-5p agomir由江苏吉玛生物公司提供。
注射部位为大鼠第3腰椎与第4腰椎椎骨间隙。
打击方式均对暴露节段中心进行垂直打击，打击重量为20 g、打击高度为2 cm，打击后大鼠双侧后肢和尾部均有强直而后瘫痪，造模时对不标准的模型给予剔除并及时添加。
待各组实验动物苏醒后安放回鼠笼，正常水食精心饲养72 h，其中每组各随机抽取3只饲养至28 d并按时间点记录大鼠运动功能的变化情况。
1.2 RT-PCR检测1.2.1 miRNA-125a-5p 造模后72 h取各组损伤点前后1 cm的新鲜脊髓液氮研磨，TRIzol法分别提取总RNA后分别进行miRNA和mRNA的检测，miRNA逆转录成cDNA，体系为20 μl。
以cDNA为模板，再以miRNA-125a-5p和U6的引物进行扩增，体系为50 μl。
扩增后取产物20 μl行RNA凝胶电泳并观察凝胶成像结果。
所用引物序列如表1。
表1 引物序列Tab1 Sequences of the primersGene Primer sequenceMiRNA-125a-5p Forward：5'-CACAGTTCCCTGAGACCCT-3'Reverse：5'-TATGGTTGTTCTGCTCACTGTCTC-3'U6 Forward：5'-CGCTTCGGCAGCACATATAC-3'Reverse：5'-TTCACGAATTTGCGTGTCATC-3' 1.2.2 ZO-1 mRNA mRNA的逆转录以随机引物为模板逆转录合成cDNA，体系为20 μl，以此cDNA产物为模板以ZO-1和β-actin的引物扩增，体系为50 μl。
取产物20 μl进行RNA凝胶电泳并成像观察结果。
所用引物序列如表2。
表2 引物序列Tab2 Sequences of the primersGene Primer sequence ZO-1 Forward：5'-ATCCCACAAGGAGCCATTCC-3'Reverse：5'-GTCACAGTGTGGCCAAGCGTA-3'β-actin Forward：5'-CTCTGTGTGGATTGGTGGCT-3'Reverse：5'-AGCTCAGTAACAGTCCGCCT-3' 所有引物均由北京鼎国昌盛公司提供，TRIzol、miRNA和mRNA的逆转录和扩增试剂盒购于TaKaRa公司。
1.3 免疫印迹法检测ZO-1蛋白的表达72 h取损伤点脊髓在RIPA裂解液中匀浆、提取总蛋白，定量后制备样品。
样品采用6%SDS-PAGE电泳，时长90 min，0.45 μm孔径的PVDF膜湿转150 min 继而用1%胎牛血清白蛋白封闭2 h，1∶250的ZO-1一抗和1∶1 000的β-actin一抗4℃孵育过夜。
次日TBST洗5 min×3次，二抗室温孵育2 h，化学发光法显色。
1.4 免疫荧光组织化学法检测ZO-1蛋白的表达72 h后取各组大鼠3只麻醉，左心室插管灌注预冷的0.9%生理盐水待流出液清澈后4%多聚甲醛灌流直至大鼠颈部强直四肢尾部僵硬。
取材浸泡于4%多聚甲醛中48 h后于30%蔗糖溶液中待组织悬浮。
擦干组织OTC包埋后速冻，徕卡冰冻切片厚度为6 μm。
取切片恢复至室温，10%山羊血清封闭2 h，1∶50的ZO-1 一抗4℃孵育过夜。
滴加1∶50的FITC标记的二抗，室温避光孵育2 h。
DAPI染色1 min并用50%甘油封片。
荧光显微镜下观察荧光强度和血管形态。
1.5 尼氏染色取冷冻切片室温干燥1 h后浸染于60℃焦油紫染液1 h。
取出切片蒸馏水洗涤3 min×2次后擦去多余染液，浸入分化液分化，分化时间根据染色程度进行调整，通常情况下不超过3 min。
分化后依次乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片，光学显微镜镜下观察。
1.6 BBB评分取各组大鼠3只标记后混合单盲法观察分别在1、3、7、14、28 d 5个时间点观察其爬行并记录各组大鼠髋、膝、踝关节活动度每项计2分；记录大鼠步态的协调能力计5分；躯体的负重能力计5分以及后肢小关节精细运动能力计5分。
根据BBB评分核定后肢各功能情况总分为21分，计算各组大鼠BBB分数进行统计分析。
在观察前需排空大鼠膀胱，观察地点应选取宽敞无障碍且清洁的空地。
1.7 统计学处理采用SPSS16.0软件分析处理，所有数据均采用±s表示，利用Image J软件求出各组灰度值，PS6.0统计荧光强度，并用GraphPad软件做出相应统计图并计算P 值。
两组之间采用t检验。
2 结果2.1 miRNA-125a-5p的相对表达水平脊髓损伤后的SCI组中miRNA-125a-5p的相对表达量明显低于Sham组。
SCI 组和NC组miRNA-125a-5p的相对含量差异没有统计学意义（P＞0.05）。
脊髓鞘内注射miRNA-125a-5p agomir后，脊髓损伤部位的miRNA-125a-5p相对含量为1.37±0.04，是SCI组（0.55±0.06）的2.4倍，差异具有统计学意义（P ＜0.05，图1）。
2.2 ZO-1 mRNA的相对表达水平损伤后ZO-1 mRNA的相对表达量明显下调；SCI组和NC组的ZO-1 mRNA的相对表达量差异没有统计学意义。
MiRNA组中ZO-1的mRNA相对表达量为0.90±0.10，是SCI组（0.55±0.06）的1.6倍，且二者之间的差异具有统计学意义（P＜0.05，图2）。
图1 大鼠脊髓miRNA-125a-5p相对表达量的RT-PCR分析Fig1 RT-PCR analysis of the relative expression of miRNA-123a-5p in the spinal cord of each group of rats*P＜0.05 vs SCI group2.3 ZO-1的蛋白表达水平图2 大鼠脊髓紧密连接蛋白ZO-1相对表达量的RT-PCR分析Fig2 RT-PCR analysis of the relative expression of tight junction ZO-1 gene in the spinal cord of each group of rats*P＜0.05 vs SCI group免疫印迹法结果显示ZO-1的相对表达量同ZO-1 mRNA的相对表达量趋势相同，Sham组ZO-1的相对表达量为1.46±0.25。