流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术是一种在液流中快速检测和分析细胞特性的技术，广泛应用于医学、生物技术、免疫学等领域。
然而，要确保实验结果的准确性和可靠性，必须实施严格的质量控制措施。
本文将探讨流式细胞术的质量控制。
1、样本制备的质量控制样本制备是流式细胞术的关键步骤之一，包括细胞样本的收集、处理和标记。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）样本的收集和保存：应尽可能缩短样本采集到分析的时间，避免细胞状态的改变。
对于血液样本，应使用肝素抗凝，避免细胞聚集。
（2）细胞的分离和洗涤：应根据实验需求，采用合适的分离方法（如密度梯度离心法、贴壁培养法等）对细胞进行分离。
在洗涤过程中，应使用无菌、无内毒素的缓冲液洗涤细胞，去除杂质和死细胞。
（3）抗体标记：选择高质量的抗体，并遵循制造商的建议进行标记。
应避免抗体非特异性结合，确保标记的特异性和敏感性。
2、仪器设备的质量控制流式细胞仪是流式细胞术的核心设备。
为确保实验结果的准确性，应对仪器进行定期校准和维护。
具体措施包括：（1）校准激光功率：定期使用标准样本对激光功率进行校准，确保光路准直，提高光散射数据的准确性。
（2）清洗流动室：定期清洗流动室，防止样品残留物堵塞喷嘴，影响流速稳定性。
（3）校准光电倍增管：使用标准样本校准光电倍增管，确保光电倍增管输出的线性范围。
3、数据分析的质量控制数据分析是流式细胞术的关键步骤之一，包括数据的获取、处理和解析。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）数据获取：设置合适的参数和门控，确保获取最佳的数据。
（2）数据预处理：去除噪声和无效数据，进行数据归一化处理，提高数据质量。
（3）数据分析：选择合适的数据分析方法（如聚类分析、主成分分析等），对数据进行深入挖掘。
同时，应使用多个对照样本，评估实验结果的可靠性和稳定性。
4、实验室环境的质量控制实验室环境对流式细胞术的结果也有重要影响。
为确保实验结果的准确性，应采取以下措施：（1）温度控制：保持实验室温度稳定，避免温度波动对细胞状态的影响。
流式细胞分选技术的质量控制
理论与方法252 2015年24期流式细胞分选技术的质量控制汪艳胡锐刘伟乔志仙李婷婷中国科学院水生生物研究所，湖北武汉 430072摘要：越来越多科研者利用流式分选技术进行分选染色体、纯化细胞株、单细胞克隆、分选干细胞等稀有细胞或细胞富集，将获取细胞主要用于细胞基因、蛋白、功能水平的研究，为了保证分选的细胞直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR 扩增或原位杂交等后续实验，我们有必要考虑分选细胞的生物学活性、回收率、纯度等相关分选指标。
实际上，流式细胞仪在分选细胞过程中，通常受到细胞本身状态、仪器性能、操作者等多种因素的干扰，无法获取流式细胞仪理想的分选参数值，即高速、高纯度、高活性、高得率，这些参数往往是相互制约，不能同时满足，需要考虑和平衡实验目的侧重选择。
我们将从流式分选术影响因素来阐述分选的质控。
关键词：流式细胞仪；细胞分选；质量控制中图分类号：TN24 文献标识码：A 文章编号：1671-5780(2015)24-0252-02流式细胞术（flow cytometer）利用流式细胞仪对快速流动的状态的单个细胞或生物颗粒进行多参数、高通量、高速分析和分选的一门技术[1]。
随着单克隆抗体和流式细胞仪研制整体水平的发展，分选型流式细胞仪的性能逐步完善，特别是分选功能智能化、高速化、高精度，流式细胞分选技术真正实现自动监控技术，复杂的分选技术简单化[2，3]。
因而，许多科研者利用流式分选技术进行深层次单细胞水平研究，如分选染色体、纯化细胞株、单细胞克隆、分选干细胞等稀有细胞或细胞富集等[4，5，6]。
实际上，流式细胞仪在分选细胞过程中，通常受到细胞本身状态、仪器性能、操作者等多种因素的干扰，无法获取流式细胞仪理想的分选参数值，即高速、高纯度、高活性、高得率，这些参数往往是相互制约，不能同时满足，需要考虑和平衡实验目的侧重选择。
我们将从流式分选术影响因素来阐述分选的质控。
1 样本质控流式细胞仪分析和分选样本必须制备成单细胞悬液，来源不同的样本如细胞、组织、外周血、骨髓等，必须经过一系列消化、离心、染色等步骤进行前处理，在一定程度上影响细胞的活性状态，其中染色过程对细胞活性有极大的损伤[7，8]。
流式细胞术质量控制
流式细胞术质量控制2010-01-08 14:04:03流式细胞术（flow cytometry,FCM）越来越广泛的应用在临床检验中。
由于临床检验本身的性质，它要求临床检验的管理者和操作人员必须把好常规操作已经结果分析的质量关。
同时还必须懂得如何判断分是在控还是失控。
作为临床检验工作，其工作的质量标准就是使检验的结果最佳地符合病人有无病变的实际情况。
在临床检验中分为分析前、分析中、分析后的质量控制。
分析前的质量控制主要内容是标本采集、保存和传送等；分析中的质量控制即实验操作过程的控制；分析后的质量控制主要是对数据结果的处理，对检验结果的可信度评价和及时将报告送给临床并听取反馈意见。
为此，从临床医师开出化验单，，直至拿到检验报告的整个过程都在质量控制的范畴之中，即所谓全程质量控制。
它包括质量保证、质量控制和质量评估。
质量保证，指围绕所有的步骤，监测和评估实验室规章制度与操作流程的效力。
主要利用质量控制和质量评估。
质量控制指建立一套完善的实验室监控方法，保证结果的可靠性，提高准确度、精密度、重复性和室间结果的可比性。
对于一个实验，应建立一套包括各种可变因素（仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等）的操作规程。
质量评估是由一个区域性的、国家的或国际性的机构，组织通过一系列的方法来比较实验室内或不同实验室之间的结果而建立的一套评价系统。
其主要目的是建立室间和仪器设备之间的可比性。
当一个标准品或参考标准存在时，质量评估通常被称为熟练度测试。
因此，严格的质量控制是先进的临床检验分析技术真正发挥作用的保证。
FCM作为一项先进的检测技术，对质量控制自然也不例外。
目前，FCM应用于临床检验的项目主要集中在几个方面：1，免疫表型分析，包括外周血淋巴细胞表型分析、白血病/淋巴瘤免疫分型、血小板膜糖蛋白分析、HLA-B27检测、阵发性血红蛋白尿（PNH）的检测等等。
2，细胞DNA、RNA检测及细胞周期分析，包括DNA倍体检测、细胞周期分析、网织红细胞检测、网织血小板检测等等。
白血病微小残留检测及其质量控制(流式细胞术)
2. 流式细胞术是直接进行定量，更为精确；而PCR是根据 产物的量进行推算。
3. 流式细胞术检测时可以区别活细胞和经化疗将要死亡的 细胞以及死亡细胞的碎片（而这些死亡的细胞以及细胞 碎片在PCR检测中都可能形成阳性信号）。
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Fluorescent Standard
Obtain Results
Troubleshoot Maintenance
Color Compensation
Generate Report
FAIL
Process/ Method Control
PASS
Test Reimbursement
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Elaine Coustan-Smith, etal. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2000, 96(8):2691-2696
流式细胞术检测白血病MRD原理
利用抗原表达的差异，以直观的方式区分白血病 细胞和正常的骨髓细胞（正常生理状态下和骨髓重建期）
跨系表达的抗原 质的差异 时相混乱的抗原 与染色体异常相关的抗原 抗原表达量异常高 量的差异 抗原表达量异常低
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
差异
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制介绍:流式细胞术是一种广泛应用于生物学研究中的实验技术。
它利用机器读取细胞表面或细胞内的特定标记以获得细胞的详细信息。
在进行流式细胞术之前，需要进行一系列的质量控制步骤来确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术中的质量控制步骤。
⒈样本制备和处理⑴样本收集和保存●确保样本采集时的准确性和一致性，尽量避免引起细胞损伤或死亡的因素。
●根据所选择的荧光探针或抗体，选择合适的保存液保存样本，并按照推荐的存储温度和时间进行保存。
⑵细胞处理●避免细胞在处理过程中受到机械或酶的损伤。
选择适当的细胞处理方法（如胶凝、裂解或染色）。
⒉样本质量控制⑴细胞数目和浓度●使用细胞计数仪或显微镜对观察区域内的细胞进行计数，并计算细胞的浓度。
⑵细胞活性●使用细胞活性染料（如细胞渗透性染料）检测细胞的活性。
确保细胞在实验过程中保持完整和活跃。
⑶细胞纯度●利用细胞表面标记物或细胞核染色物进行细胞表型分析，以检测细胞样品中的污染物。
⑷细胞均一性●对样本进行混合和搅拌，确保细胞在整个样本中均匀分布。
⒊仪器校准和控制⑴流式细胞仪校准●使用流式细胞仪提供的校准粒子进行仪器校准，包括流速、散射光校准和荧光信号校准等。
⑵仪器控制●使用流式细胞仪的软件设置合适的参数，如触发门、荧光通道选择和数据采集速率。
⒋数据分析和解释⑴数据收集●使用流式细胞仪采集样本数据，并确保数据的完整性和正确性。
⑵数据分析●使用专业的数据分析软件对采集到的数据进行分析和解释。
⑶数据报告●根据实验需求和要求，使用适当的图形、表格和文本来呈现数据结果。
附件：⒈样本收集和保存记录表⒉样本质量控制记录表⒊仪器校准记录表法律名词及注释：⒈样本：指用于流式细胞术的生物样本，如细胞悬液或洗涤液。
⒉流式细胞仪：一种用于分析和计数细胞的仪器，透过仪器对细胞进行流式测量。
⒊标记物：用于识别和分析特定细胞类型或分子的抗体或染料。
⒋数据分析软件：用于处理流式细胞术数据并图形和数据表的计算机程序。
流式细胞术 标准微球
流式细胞术标准微球流式细胞术（流式细胞仪）是一种用于分析和计数细胞的高效技术，它可以帮助科研人员更好地理解细胞的特性和功能。
在流式细胞术中，标准微球是一个非常重要的组成部分，它可以用来进行质量控制、标定和校准流式细胞仪，保证实验结果的准确性和可靠性。
标准微球是一种直径均一的微小颗粒，通常由聚合物或玻璃材料制成。
它们具有精确的尺寸和荧光强度，可以用来模拟细胞在流式细胞仪中的信号。
通过将标准微球与待测样品一起送入流式细胞仪，我们可以根据标准微球的信号特性来校准和标定仪器，从而确保测量结果的准确性。
在流式细胞术中，标准微球通常用于以下几个方面：1. 质量控制，标准微球可以作为内部质量控制的参考物质，用来评估流式细胞仪的稳定性和准确性。
通过定期检测标准微球的信号强度和分布情况，我们可以及时发现仪器的偏差和故障，确保实验结果的可靠性。
2. 标定仪器，流式细胞仪需要经常进行标定，以确保测量结果的准确性和可比性。
标准微球的精确尺寸和荧光强度可以帮助我们确定仪器的灵敏度和线性范围，从而进行准确的标定。
3. 校准参数，流式细胞仪的参数设置对实验结果有着重要影响，而标准微球可以帮助我们确定荧光信号的阈值、补偿和比率，确保仪器参数的准确性和一致性。
在选择标准微球时，我们需要注意以下几点：1. 尺寸和荧光强度，标准微球的尺寸和荧光强度需要具有一定的范围，以适应不同类型的流式细胞仪和实验需求。
通常，我们可以根据实验的样品类型和检测参数来选择合适的标准微球。
2. 稳定性，标准微球的稳定性对于长期实验和质量控制非常重要。
我们需要选择具有良好稳定性和一致性的标准微球，以确保实验结果的可靠性。
3. 兼容性，在选择标准微球时，我们需要考虑其与实验样品和流式细胞仪的兼容性，以确保实验的顺利进行和结果的准确性。
总的来说，标准微球在流式细胞术中扮演着非常重要的角色，它们可以帮助我们进行质量控制、标定仪器和校准参数，保证实验结果的准确性和可靠性。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物学和医学研究中的细胞分析技术。
它通过利用光传感器和激光来检测细胞悬浮液中的细胞数量、大小、形态和表面标记物等信息，从而实现对细胞的分析和分类。
为了保障流式细胞术的准确性和可重复性，质量控制是非常重要的。
样本制备的质量控制在进行流式细胞术之前，样本制备是流式细胞术质量控制的第一步。
样本质量对于结果的准确性和可重复性至关重要。
以下是一些常见的样本制备质量控制步骤：细胞样品准备细胞浓度的准确计数：使用细胞计数仪准确计数细胞数目，以确保每个样本含有足够数量的细胞进行分析。
细胞的适当处理：根据不同实验要求，对细胞进行适当的处理，如洗涤、培养基的选择等，以确保细胞状态的一致性。
样品标记物的质量控制标记物的选择：根据实验需要，选择合适的标记物，并确保其特异性、亲和力和荧光强度等符合要求。
样品标记物的浓度和时间：对于标记物的浓度和反应时间进行优化，避免过高或过低的浓度导致信号失真或信号强度不足。
流式细胞仪的质量控制流式细胞仪作为流式细胞术的核心仪器，其性能的稳定和准确也是流式细胞术质量控制的关键。
以下是常见的流式细胞仪质量控制步骤：光谱校正与补偿荧光信号校正：使用校正颗粒进行荧光信号校正，校正光谱重叠和荧光强度的变化，以提高结果的准确性。
荧光信号补偿：通过对不同通道之间的荧光信号进行补偿，避免荧光信号之间的交叉干扰，确保结果的准确性。
流速标定流速标定：使用标定颗粒进行流速标定，保证流速的准确性，以便对细胞进行准确的定位和计数。
指标质量控制正质量控制：使用已知正样本进行实验，确保仪器的稳定性和结果的准确性。
负质量控制：使用未标记的负样本进行实验，排除背景信号和非特异性结合，保证结果的准确性。
识别和排除异物：通过故障检查和核查流式细胞术结果，识别和排除可能存在的污染源和异常情况。
数据分析的质量控制流式细胞术之后，对数据的准确分析和解读也是质量控制的重要环节。
流式细胞仪质量控制及常见问题处理-薛向军
移液 抗体 溶解/固定
II 仪器设置
IV 样品分析
分析窗口 补偿
门的纯度和回收率 准确性和精确度 可靠性核查
标本及标本处理的质控
•第一，标本的种类及外观 •第二，单细胞悬液的获取 •第三，抗凝剂的选择 •第四，样本的保存 •第五，去除红细胞的方法 •第六，细胞与抗体的比例 •第七，细胞活性的鉴定
数据的获取和分析
•第一，细胞获取数量
•第二，阈值的设立通道和大小 •第三，分析区域 •第三，其它有用的参数，如平均荧光强度，荧光强度中位 数，CV，细胞浓度等
可靠性的核实
T SUM: %CD3+4+ + %CD3+8+ = %CD3 ± 5% T 细胞的平行测定 2% LYMPHOSUM: CD3+ + CD19+ + NK = 100% ± 5% 荧光微球的流速（样本内质控）
在质控方面移液的影响经常被忽略
单平台绝对记数法要求精确和准确的测定 , 推荐使用反向加样
法, 要定期检查移液枪的精确度和准确性.
精确
准确
精确和准确
“Ringing phone syndrome”
Site A
“Change of operator syndrome”
Site B
“Stepper pipette syndrome”
系统性能参数----荧光线性
将不同荧光强度的微球混合，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微 球说明书提供的各个峰的MEFL荧光分子数，以及分析得到的各个峰的平 均荧光强度，做的线性回归。
Log Amplifier Linearity Verification 3
流式细胞术 注意事项
流式细胞术注意事项流式细胞术是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的重要技术。
它可以用来分离和鉴定细胞群体，并分析其形态学、表型、生理学和功能特性。
然而，在进行流式细胞术时，需要注意以下几个方面。
首先，样本的准备至关重要。
样本的质量直接决定了流式细胞术结果的准确性和可靠性。
因此，在进行流式细胞术前，必须采取适当的方法收集和处理样本。
一般来说，样本应该保持单一细胞悬浮状态，以便通过流式细胞仪进行准确的细胞计数和鉴定。
同时，应该避免细胞团或聚集物的存在，以防止对细胞计数和鉴定造成影响。
其次，合适的抗体选择是十分重要的。
在进行流式细胞术时，抗体是用来鉴定不同细胞亚群和分析细胞表面标记物的重要工具。
因此，选择合适的抗体对于获取准确的结果是至关重要的。
在选择抗体时，应该考虑到其特异性、亲和力和背景噪音等因素。
此外，还要注意抗体的适宜浓度和孵育时间，以确保得到稳定的试验结果。
第三，流式细胞术过程中，仪器的性能和维护也是需要注意的。
流式细胞仪是流式细胞术的核心设备，其性能直接关系到结果的质量。
因此，在使用流式细胞仪前，需要进行适当的校准和质控操作。
例如，校正仪器的光源和光探测器，检查流速和压力，以及进行仪器的清洁和消毒等。
同时，还需要定期检查和更换仪器的关键零部件，以保证仪器的正常运行和准确度。
此外，流式细胞术的分析结果需要妥善解读。
流式细胞仪可以同时获得大量的数据，包括细胞数目、细胞表面标记物表达水平和细胞分布情况等。
因此，在分析结果时，需要借助适当的软件和统计方法进行数据处理和解读。
同时，应该对结果进行合理的验证和再现，以确保结果的可靠性和可重复性。
最后，安全操作也是进行流式细胞术时需要注意的事项之一。
流式细胞术涉及到使用一些潜在的有害物质和生物样本，如细胞染色剂、细胞培养液和细胞悬液等。
因此，在操作过程中，需要正确佩戴个人防护设备，如实验服、手套和面罩等。
同时，应该遵守实验室的安全操作规程，如避免直接接触有害物质、正确处理和处置废液和废弃物等。
流式细胞术实验技巧及数据分析
流式细胞术实验技巧及数据分析一、实验技巧1.细胞样本的准备在进行流式细胞术之前，首先需要准备好细胞样本。
对于悬浮细胞，可以通过离心分离获得单细胞悬浮液；对于贴壁细胞，需要利用胰酶等方法将细胞从培养皿上剥离。
样本的细胞浓度需要适当调整，以保证在实验过程中细胞数目在仪器检测范围内。
2.细胞标记与染色3.样本的处理与染色控制为了减少噪音和误差，需要进行相应的样本处理和染色控制。
常用的处理包括细胞固定、膜破裂和核酸溶解等。
另外，对照组的设置也非常重要，包括负对照、单标对照和血细胞淋巴细胞控制等，以校正仪器和标记的相关性。
4.流式细胞仪的设置与操作流式细胞仪是进行流式细胞术的关键仪器，需要正确设置和操作。
首先，要校准仪器的激发光源、滤光片和检测器等参数，以确保获得准确的荧光信号。
其次，要根据标记物的激发光和发射光波长选择合适的检测通道。
最后，通过检测标记物阳性细胞的信号强度和分布，调整仪器的敏感度和流速，以获得符合实验要求的数据。
二、数据分析1.数据获取与记录在流式细胞术实验结束后，需要用相应的软件（如FlowJo、CellQuest等）获取和记录仪器所产生的原始数据。
这些数据包括细胞整体的荧光信号和散点图等。
2.质量控制与后处理对于数据质量的控制，首先需要排除掉背景信号。
通过设置负对照，根据荧光信号的阈值来确定阳性细胞的比例。
另外，还需要剔除激活的、死亡的和颗粒干扰的细胞等。
3.数据可视化通过制作直方图、散点图和轮廓图等，可以直观地展示细胞的其中一种特定特征（如表达一些蛋白质、细胞周期等）在整个细胞群体中的分布情况。
从图形中可以得出相应的统计结果，并可以进一步比较不同样本之间的差异。
4.数据统计与分析对于一些研究问题，需要计算不同细胞亚群的百分比、中位数、平均值和标准差等。
此外，还可以利用双参数散点图，通过计算相关系数（如Pearson相关系数）来分析两个特征之间的相关性。
总结：流式细胞术作为一种快速、高通量和灵敏的细胞分析技术，对于研究细胞标记物的表达和功能等提供了有力的手段。
流式细胞仪原理及应用、CD4绝对计数的原理、方法和质量控制
• 功能特点
（1）多参数定量分析每一个细胞；
（2）细胞分选； 高纯度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群； 单细胞克隆等。
（3）高通量（分析分选）． 分析150，000个/ 秒 分选100，000个/秒
的功能。 CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞。
HIV通过多种直接和间接的病理机制导致CD4+T细胞数量的缺失，最 终引起感染者免疫功能缺陷。
HIV及其包膜蛋白的直接细胞致病作用 感染细胞-未感染细胞形成合胞体 程序性细胞死亡 自身免疫机制 特异性细胞毒T细胞对HIV感染细胞的破坏作用
CD4 T cells/ml
Infection
Seroconversion
1000
500 200
0 2-6 weeks
Flu-like Disease
HAART
Death
CD4 T cell depletion
mean of 10 years
Asymptomatic phase
Symptom-atic
CD4<200/ul和/或出现艾滋病指针性症状（如卡氏肺囊虫肺炎等）时，就可定义为 进入艾滋病期。如表中A3，B3，C1-3期。
判断HIV感染者发生临床合并症的可能性并进行预防
CD4计数（/ul）
任意值 <200 <100 <75 <50
主要机会性感染的预防
结核（皮试阳性） PCP
弓形体病（抗体阳性） MAC
CD4绝对计数的原理、方法和质量控制
张子宁 卫生部艾滋病免疫学重点实验室
HIV感染中CD4+、CD8+T细胞测定的临床意义
流式细胞仪检测技术与质量控制-文档资料
流式细胞仪检测技术与质量控制流式细胞仪检验技术（FCM），即流式细胞术，是以流式细胞仪作为检测手段，以免疫荧光技术作为主要标记方法的一门先进的分析技术。
该方法用免疫磁珠作为载体，在同一微孔内进行反应，利用流式细胞仪检测杂交信号和区分探针的种类。
本技术使用的免疫磁珠具有一定的特性，磁珠可利用颜色进行标识[1]。
当免疫磁珠上两种颜色混合的比例不同时，经流式细胞仪检测后即可区分定义为不同种类的免疫磁珠，目前两种颜色的组合在流式细胞仪上最多可区分成为100种不同的免疫磁珠。
1 材料与方法1.1 标本收集收集近3年本院治疗的30例患者，对30例患者行流式细胞仪检测，30例受检者中，男性患者16例，女性患者14例，最大年龄60岁，最小年龄17岁，患者平均年龄39岁。
2 检测方法2.1 采用特定的免疫磁珠作为载体，将已知序列特异性探针（SSO）固定在免疫磁珠上，每一种特异性探针固定在已知颜色比例的免疫磁珠上。
由于免疫磁珠上颜色比例的不同，在流式细胞仪红色激光束下可进行区分，根据事先设计的标记情况，通过流式细胞仪检测后可确认特定颜色比例免疫磁珠上携带的特异性探针的种类，从而达到将探针区分的目的。
2.2利用标记的特异性引物对目的DNA进行扩增，将PCR 扩增产物与免疫磁珠上的序列特异性探针（SSO）在同一孔内进行特异性杂交，再加入荧光显色剂，然后利用流式细胞仪绿色激光束检测杂交信号，红色激光束区分探针的种类，利用软件分析杂交结果得出样本HLA基因型别。
3 方法学评价该方法与PCR-SSO有相似的地方，但是技术上有重大的突破。
本方法灵敏度非常高，在96孔微板上可进行大规模的检测，实现了所有探针的杂交于液相条件下在同一个孔内进行，而且采用免疫磁珠作为载体，具有快速、简便、可靠的优点，平均每个孔在流式细胞仪上检测的时间不到30s。
目前已有商品化的试剂供应，同时该技术也广泛应用于其他方面（如传染病指标等）的检测和研究。
4 讨论流式细胞术常规测定由一系列繁琐的步骤组成，大体可分为样本采集和处理、免疫荧光染色、流式细胞仪检测、数据分析及结果报告解释，做好这些步骤中每一环节的工作可以确保室内质量控制（1Qc）和室间质量控制（EQA）顺利达标。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制1、引言1.1 背景1.2 目的1.3 范围2、流式细胞术概述2.1 原理2.2 流程2.2.1 样本准备2.2.2 样本标记2.2.3 流式细胞仪设置2.2.4 数据采集2.2.5 数据分析3、质量控制流程3.1 样本质量控制3.1.1 样本准备的要求3.1.2 样本处理的注意事项 3.2 仪器质量控制3.2.1 日常仪器维护3.2.2 校准珠的使用3.3 标记质量控制3.3.1 阴性对照样本的选取 3.3.2 正性对照样本的选取 3.3.3 标记反应的优化3.4 数据质量控制3.4.1 检查数据完整性3.4.2 数据质量评估3.4.3 数据异常处理4、质量控制指标4.1 样本接受率4.2 样本处理成功率4.3 仪器运行状况4.4 标记反应效果4.5 数据完整性4.6 数据准确性5、质量控制记录5.1 样本质量控制记录5.2 仪器质量控制记录5.3 标记质量控制记录5.4 数据质量控制记录6、附件附件1、样本准备要求清单附件2、仪器维护流程图附件3、标记质量控制对照表附件4、数据质量评估标准注释:法律名词及其注释1、流式细胞术：一种利用流式细胞仪对细胞进行分析和排序的技术。
2、质量控制：指采取一系列措施，确保流式细胞术过程中的样本、仪器、标记和数据的质量达到一定要求。
3、样本准备要求清单：包括对样本的收集、保存、处理等要求的清单。
4、仪器维护流程图：说明日常仪器维护的步骤和方法的流程图。
5、标记质量控制对照表：记录每次标记实验中所选用的阴性对照样本、正性对照样本和标记条件的表格。
6、数据质量评估标准：用于评估数据质量的标准，包括数据完整性、数据准确性等指标。
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温度、时间及抗凝剂对流式细胞术检测t淋巴细胞亚群的影响
㊃短篇论著㊃温度㊁时间及抗凝剂对流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的影响*任方刚1,张娜2,徐智芳1,张耀方1,张亚东3,覃艳红1,陈秀花1,王宏伟1ә(1.山西医科大学第二医院血液病分子诊疗山西省重点实验室,山西太原030001;2.山西医科大学第二医院检验科,山西太原030001;3.运城市第三医院检验科,山西运城044000)摘要:目的探讨流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的理想温度,时间及抗凝剂㊂方法随机采集健康志愿者全血6份,分别用不同的抗凝剂抗凝,4ħ及室温(18~25ħ)保存,在不同时间点(0.5h㊁2h㊁5h㊁24h㊁36 h㊁48h及72h)分别使用荧光抗体标记,后上机检测;对同一份标本平行标记后,平分放于4ħ及室温,在不同的时间节点(0.5h㊁1h㊁3h㊁5h㊁7h㊁24h)检测C D3+T淋巴细胞㊁C D3+C D4+辅助性T细胞㊁C D3+C D8+杀伤性T细胞的阳性率及荧光强度㊂结果1h内上机检测,枸橼酸钠㊁肝素㊁乙二胺四乙酸,三者抗凝剂,避光与否,孵育温度(室温&37ħ)等因素对检测结果均没有明显影响;与E D T A抗凝,室温避光标记,40m i n内上机检测结果比较,标本室温保存时,C D3+T淋巴细胞和C D3+C D4+辅助性T细胞在48h时检测结果出现变化,而C D3+C D8+杀伤性T细胞在72h时出现变化;标本存放与4ħ,C D3+T淋巴细胞和C D3+C D8+辅助性T 细胞在2h时检测结果出现变化,而C D3+C D4+杀伤性T细胞在5小时时检测结果出现变化㊂标记后,无论标本存于室温还是4ħ,C D3+T淋巴细胞和C D3+C D4+辅助性T细胞在24小时时结果出现变化,而C D3+ C D8+杀伤性T细胞在1小时时就发生了变化㊂结论1小时内上机检测,抗凝剂,避光与否,孵育温度对检测结果无明显影响;抗凝标本应在室温保存,48h内完成检测;标记后标本应在1h内上机检测㊂关键词:流式细胞术;T淋巴细胞亚群;温度;时间;抗凝剂流式细胞术是一种集免疫学技术,单克隆抗体技术和计算机技术等技术为一体的实验室技术,是目前主要的微小残留病变监测的手段[1-2]T细胞亚群检测则是最常规的检测项目之一,而对于流式细胞术的质量控制却比较困难,除基本的每日f l o w-c h e c k校验光路,一定时间内地质控全血检测评价机器状态,定期的人员培训外,标本的预处理在质控环节中具有举足轻重的作用[3],特别是随着第三方检验实验室的日益增多,标本预处理在质控中的影响比重更加明显,如标本运送与储藏㊁标本质量㊁机器偶发故障等,均有可能导致流式检测结果的偏差或错误,因此,探讨科学规范的抗凝剂,标本保存温度和标记时间等标本处理规范有现实意义㊂1资料与方法1.1一般资料抽取空腹12h健康志愿者(即肝功能㊁肾功能㊁血脂㊁血糖㊁尿酸正常,血㊁尿㊁粪便常规正常,乙肝表面抗原阴性及体格检查正常者)外周静脉血,分为三份,分别使用乙二胺四乙酸二钾(E D T A-K2)㊁肝素和枸橼酸钠抗凝,其中男2例,女4例,年龄为24~28岁,中位年龄26岁㊂E D T A-K2抗凝静脉血均分两份,分别置于室温(18~26ħ)及4ħ保存,迅速进行预处理,平行标记标本后均分为处理3份,分别避光及不避光室温孵育和37ħ孵育,控制0.5h 内上机检测;3种不同抗凝标本进行平行避光标记处理,上机检测;分别对均分存放于室温(18~26ħ)及4ħ的E D T A-K2抗凝标本在2㊁5㊁24㊁36㊁48㊁72h等时间节点进行标记检测;E D T A-K2抗凝标本1h内标记处理完毕标本,均分为2份,分别至于室温(18~ 26ħ)及4ħ保存,在1㊁3㊁5㊁7㊁24h等时间节点进行上机检测,以上检测结果均与同一标本E D T A-K2抗凝,避光室温标记,0.5h上机检测标本的检测结果进行对比分析㊂1.2仪器试剂取12*75mm普通流式管,分别加入组合抗体C D45-F I T C/C D4-P E/C D8-E C D/C D3-P C5(B e c k m a n C o u l t e r美国,规格:50T,m o u s e I g G2b/I g G1/I g G1/I g G1)和C D45-F I T C/C D56-P E/ C D19-E C D/C D3-P C75(B e c k m a n C o u l t e r美国,规格: 50T,m o u s e I g G2b/I g G1/I g G1/I g G1),每种抗体各5μL,取抗凝全血各30μL分别加入各管,室温避光孵育15m i n,用o p t i l y s e C N O-w a s h l y s i n g s o l u t i o n (编号:A11895,B e c k m a n c o u l t e r美国)溶血试剂,裂解红细胞,10m i n后,用C y t o m i c s F C500流式细胞仪检测,使用C X P软件分析,S S C/C D45设门,获取10 000个淋巴细胞,分析淋巴细胞中各亚群的比例㊂1.3方法为保证实验结果的科学性,检测由同一名具有流式细胞仪操作培训资格认证的操作人员完㊃181㊃国际检验医学杂志2019年第40卷ZⅡ*基金项目:国家自然科学基金项目(81679126)㊂ә通信作者,E-m a i l:w a n g h w68@h o t m a i l.c o m㊂成,具体方法参照文献[3-4]㊂1.4统计学处理采用G r a p h p a d P r i s m5软件进行统计学分析㊂将3种抗凝剂㊁避光与否㊁不同储存条件下的标本及标记后标本的各个时间点的检测结果,分别同同一标本E D T A-K2抗凝,避光室温标记,0.5h 上机检测结果,若方差齐,进行配对t检验,否则进行非参数统计方法分析,P<0.05时认为有显著性差异㊂2结果2.1不同抗凝剂对分析结果的影响在1h内,对3种不同的抗凝剂抗凝的健康志愿者外周血标本,在平行实验条件下,对检测结果进行两两对比统计学分析,未发现明显差异(P>0.05)㊂2.2避光与否对分析结果的影响对同一份E D T A 抗凝全血标本置于两流式管,进行平行标记,一份避光孵育,一份不避光孵育,后于1h内上机检测,结果对比分析发现,无论是阳性细胞百分率还是平均荧光强度(M F I),两者之间均没有统计学差异(P>0.05)㊂2.3标本存放时间对检测结果的影响在不同的时间节点对标本进行检测发现,无论是室温还是4ħ保存标本,C D4和C D8分子的检测结果均在48h时出现显著性差异(室温:P=0.0085和P=0.0150,4ħ:P=0.0046和P=0.0174),而C D8分子则在2 h时就出现了显著性变化(室温:P=0.0109,4ħ: P=0.0013)㊂2.4标记后存放时间对检测结果的影响 E D T A抗凝标本,平行标记,避光孵育后,均分置于室温和4ħ,在不同的时间节点进行检测发现,在不同的存储条件下,C D4和C D3的检测结果,在24h内未出现显著性变化(P>0.05),而C D8的检测结果在1h时就出现了显著性变化(P<0.05)㊂3讨论流式细胞术以免疫学为基础,结合计算机㊁激光和光电转换等技术,用于对不同大小和荧光特征的细胞㊁细菌㊁囊泡等微粒进行快速定性及定量分析的一种技术,是临床诊断,预后评估的有用工具[1,5]㊂依据表面抗原的差异,可将T淋巴细胞分为细胞毒性C D8+T细胞㊁辅助性C D4+T细胞和调节/抑制性T细胞㊂作为T细胞表面受体的重要辅受体的C D4和C D8分子,能够特异性识别机体细胞的MH C,参与抗原递呈,与机体免疫防御功能密切相关[6-7],C D4+T细胞和C D8+T淋巴细胞的变化情况常被用来评价候选疫苗的免疫保护性以及监测疾病病情的发生㊁发展和转归[8-12],因此,国内使用流式细胞术对外周学淋巴细胞亚型进行分析,是临床最常见的项目之一㊂对于流式细胞术的质量控制的相关研究已有报道[4,13],然而国内关于标本的抗凝剂选择,标本的存储环境等报道较少㊂陈潇等建议各实验室应当以E D-T A-K2抗凝为宜,以18ħ的室温保存效果最好,3d 内检验结果与采集后1h内检验的结果差异无统计学意义[3-4]㊂本研究却发现,与0.5h内上机检测的E D-T A抗凝避光室温孵育的标本比较,3种临床常用的抗凝剂抗凝㊁避光与否㊁孵育温度等因素均对检测结果未发现明显影响,这可能和单克隆抗体及荧光偶联技术的不断优化和进步㊁复合型去红细胞试剂中所含细胞固定剂的使用有关㊂室温保存标本C D4+T和C D8+T细胞在48h时发生了显著性变化,而C D3+T细胞在72h时发生了变化,然而在4ħ保存标本时,C D8+T和C D3+T细胞在2h时发生了显著性变化,而C D4+T的检测结果在5h时也发生了变化,同时,我们还检测了C D4+T 的M F I,也得出了同样的结果,因此我们认为,标本应该储存于室温而不是4ħ,这与文献报道一致,而标本应于48h内检测完毕,而不是72h,这与文献报道不同[3]㊂机器的突发故障,人员的突发离岗等将会导致标记后的标本不能及时上机检测,因此标记后标本的储存条件及时效性,是实验室要关注的问题㊂本研究通过把E D T A抗凝标本,平行标记处理后,分别放于室温及4ħ,在不同的时间节点进行检测,结果与室温放置0.5h内上机检测结果进行对比,发现无论是室温与4ħ,C D4+T和C D3+T细胞的检测结果在24h 时发生了显著性变化,而C D8+T在1h时就发生了变化,未发现4ħ保存优于室温保存,这与文献不同[14]㊂标记标本能保持稳定,可能与溶血素中含有多聚甲醛(p a r a f o r m a l d e h y d e,P F A)成份的作用,这与文献报道一致[14-15],而C D8+T细胞的检测值在标记后很快就发生了变化,其机制还需要进一步探讨㊂本研究所用单克隆抗体均为荧光素-抗体直接藕联模式,而对于非荧光素直接偶联的单克隆抗体或复合抗体处理等标本,其结论如何,需要进一步研究㊂总之,对于使用流式细胞术检测外周血T细胞亚群,在0.5h内上机检测,3种常用抗凝剂抗凝㊁避光与否㊁孵育温度(室温&37ħ)㊁均对检测结果无明显影响,标本应储存于室温,并于48h内处理,标记后标本应储存于4ħ,C D4+T和C D3+T细胞的检测在24h时完成,C D8+T细胞检测在1h内完成㊂4结论利用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群时,在1小时内上机检测,结果不受抗凝剂,避光与否,孵育温度等因素等影响;抗凝标本应在室温保存,48h内完成检测;标记后标本应在1h内上机检测,本研究结论仅局限于外周血T淋巴细胞亚群的检测,和相关文献有㊃281㊃国际检验医学杂志2019年第40卷ZⅡ相同也有差异的地方,也提示各实验室应建立自己实验室的流式细胞术S O P ,以保证流式细胞术结果的客观准确㊂参考文献[1]K e r s t G ,K r e y e n b e r g H ,R o t h C ,e t a l .C o n c u r r e n t d e t e c -t i o n o f m i n i m a l r e s i d u a l d i s e a s e (M R D )i n c h i l d h o o d a -c u t e l y m p h o b l a s t i c l e u k a e m i a b y f l o w c y t o m e t r y a n d r e s l -t i m e P C R [J ].B r J H a e m a t o l ,2005,128(6):774-782.[2]赵书涛,武晓东,王策,等.流式细胞仪的原理㊁应用及最新进展[J ].现代生物医学进展,2011,11(22):4378-4381.[3]陈潇,吴丽娟.抗凝剂㊁标本保存温度和保存时间对流式T 淋巴细胞亚群检测的影响[J ].国际检验医学杂志,2012,33(2):146-150.[4]吴丽娟,许东升.流式细胞术表型分析的质量控制[J ].中华检验医学杂志,2011,34(5):389-394.[5]B r e n k e r K ,O s t h o f K ,Y a n g J,e t a l .L E D t h e r m o f l o w -c o m b i n i n g o p t o g e n e t i c s w i t h f l o w c y t o m e t r y [J ].J V i s E x p,2016(118):e 54707.[6]L i X L ,T e n g M K ,R e i n h e r z E L ,e t a l .S t r i c t m a jo r h i s t o -c o m p a t i b i l i t y c o m p l e x m o l e c u l e c l a s s -s p e c i f i c b i n d i n g b yc o -r e c e p t o r s e n f o r c e s MH C -r e s t r i c t ed αβT C R r e c o g n i t i o n d u r i n g T l i n e a ge s u b s e t c o mm i t m e n t [J ].F r o n t I mm u n o l ,2013,34(4):383.[7]R o c h a -P e r u g i n i V ,S án c h e z -M a d r i d F ,M a r t ín e z D e l H o yo G.F u n c t i o n a n d d y n a m i c s o f t e t r a s p a n i n s d u r i n g a n t i ge n r e c o g n i t i o n a n d i mm u n o l o g i c a l s y n a ps e f o r m a t i o n [J ].F r o n t I mm u n o l ,2016,38(6):653.[8]W u D ,W e i S ,L i u B ,e t a l .E f f e c t o f i mm u n e s u p pr e s s i o n o n m e t a s t a s i s i n a p a t i e n t w i t h h e pa t o c e l l u l a r c a r c i n o m a m e t a s t a s i z e d t o t h e c o l o n a n d s t o m a c h :A c a s e r e po r t [J ].E x p Th e r M e d ,2016,5(11):1741-1747.[9]F a j a r d o E ,M e t c a l f C ,M b o f a n a E ,e t a l .O p po r t u n i t i e s t o i m p r o v e s t o r a g e a n d t r a n s p o r t a t i o n o f b l o o d s p e c i m e n s f o r C D 4t e s t i n g i n a r u r a l d i s t r i c t i n Z i m b a b w e u s i n g BD v a c u t a i n e r C D 4s t a b i l i z a t i o n t u b e s :a s t a b i l i t y a n d d i a g-n o s t i c a c c u r a c y s t u d y [J ].B M C I n f e c t D i s ,2014,14(5):553.[10]P l a t t e e l A C ,M a r i t d e G r o o t A ,K e l l e r C ,e t a l .S t r a t e gi e s t o e n h a n c e i mm u n o g e n i c i t y of c D N A v a c c i n e e n c o d e d a n -t ig e n s b y m o d u l a t i o n o f a n t i g e n p r o c e s s i n g [J ].V a c c i n e ,2016,34(42):5132-5140.[11]I m S J ,H a s h i m o t o M ,G e r n e r M Y ,e t a l .D e f i n i n g CD 8+T c e l l s t h a t p r o v i d e t h e p r o l i f e r a t i v e b u r s t a f t e r P D -1t h e r a p y[J ].N a t u r e ,2016,537(7620):417-421.[12]Y e k C ,G i a n e l l a S ,P l a n a M ,e t a l .S t a n d a r d v a c c i n e s i n -c r e a s e H I V -1t r a n s c r i p t i o n d u r i n g a n t i r e t r o v i r a l t h e r a p y[J ].A I D S ,2016,30(15):2289-2298.[13]宋建新,朱红艳,蒋雅先,甸自金.骨髓标本放置时间对流式细胞术白血病免疫分型检测结果的影响[J ].国际检验医学杂志,2012,32(3):391-392.[14]J a l l a S ,S a z a w a l S ,D e b S ,e t a l .E n u m e r a t i o n o f l y m ph o -c y t e s u b s e t s u s i n g f l o w c y t o m e t r y :E f f e c t o f s t o r a ge b e -f o r e a n d a f t e r s t a i n i ng i n a d e v e l o p i n g c o u n t r y s e t t i n g [J ].I n d i a n J C l i n B i o ch e m ,2004,19(1):95-99.[15]郭海婷,胡超,,严普,等.多聚甲醛处理的昆明小鼠T 细胞及其亚群存放不同时间分析[J ].细胞与分子免疫学杂志,2017,33(4):460-464.㊃短篇论著㊃肿瘤恶液质患者血清P T H r P ㊁C R P ㊁A l b ㊁H b㊁C a 的表达水平及临床价值探讨*刘 洋,刘慧莹,李袁飞ә(山西医科大学第一医院肿瘤科,太原030000) 摘 要:目的 探讨血清甲状旁腺激素相关蛋白(P T H r P )㊁C 反应蛋白(C R P )㊁血红蛋白(H b )㊁白蛋白(A l b )㊁钙(C a)在癌症患者中的水平变化及临床意义,为肿瘤恶液质的临床诊疗提供一定的参考依据㊂方法 将入选的癌症患者根据国际恶液质诊断标准分组,分为A 组(恶液质组)和B 组(非恶液质组),设定健康对照者为C 组,采用酶联免疫法(E L I S A 法)检测癌症患者及健康对照者血清P T H r P ㊁C R P 的浓度水平,采用标准方法测定血清H b ㊁A l b ㊁C a 水平,收集并随访患者体重变化,进行差异及相关性分析㊂结果 A 组㊁B 组和C 组血清P T H r P ㊁C R P ㊁H b ㊁A l b ㊁C a 的浓度水平各组间比较差异具有统计学意义(P <0.05);癌症患者血清P T H r P 与C R P ㊁C a 之间存在明显的正相关(r =0.822,P <0.01;r =0.756,P <0.01),P T H r P 与H b ㊁A L b 之间存在明显的负相关(r =-0.800,P <0.01;r =-0.842,P <0.01),尤其体现在恶液质组中;不同肿瘤类型患者血清P T H r P 水平差异无统计学意义(P >0.05),体重丢失百分比(W L %)差异有统计学意义(P <0.01);不同癌症分期患者血清P T H r P 水平差异有统计学意义(P <0.05),W L %差异无统计学意义(P >0.05);多重线性回归㊃381㊃国际检验医学杂志2019年第40卷Z Ⅱ*基金项目:山西省卫生厅科研课题计划项目(201301062)㊂ә通信作者,E -m a i l :740897607@q q.c o m ㊂。
BD CANTO
３分析后 的质量控制
实验 数据获 取后 的精准 分析 是流 式细胞 术 的重 要技 术 过程 。由于流 式细胞术 具有 很强的经验性 ，因此进 行流式的 结果分析时 ，要根据 实验的具体 情况 ，充分 了解 各种 荧光抗 体在不同细胞表达 的强度和临床意义 ，能对各种 荧光抗 体的 表达作出合理的解释，同时，还要考虑实验过程 中的各种影 响因素。对于 目标细胞群较 少的细 胞，也可 以通过先分选再 鉴定 。因此需要流式细胞仪 的操作者统筹兼顾 ，心 中有数 。 ３ ． １结果审核 流 式 细 胞 术 的 实 验 结 果 需 对 照 临 床 资 料 以 及 其 他 的 检 查结果综合分析，对 结果有 疑义 时应 重新检测 。对 于恶 性血 液病 、细胞采集物等细胞数量较高 的标本应做倍数稀释后检 测 ，从而 为临床提 供准确可靠的实验结果 。 ３ ． ２实验结果复查 Ｂ Ｄ Ｃ Ａ Ｎ Ｔ Ｏ流式细胞仪诸 多优 点，但不 能完全 替代 显微镜 下的形态 学的检查 。在 临床 工作 中，应将流式细胞 术、细胞 形态 学、分子生物 学等 多种检查 手段 和临床结合起来，才能 为临床 诊断提供可靠的实验依据 。 ３ ． ３ 关机 清理 样本检测 完毕 ，按要求执行关机程序 ，并对管道进 行 自 动冲 洗防止细胞团块沉积。 总之 ，使用流式细胞仪 的各个环节都影响着质量控制与 检验 结果，实验 室工作 人员应精 于学 习，长于技术 ，耐心细 致地做好 工作 ，以保证检验结果的准确性 参考文献 ［ １ ］ 刘淑梅 ，张信 东． 浅谈流 式细胞术在 临床检验 中的应用． 实用医技杂志，２ ０ ０ ２ ，９（ ５ ）： ３ ４ ８ ． ［ ２ ］ 韩旭东 ，张皓楠 ，孟燕妮，刘彦强． 流 式细胞仪 工作原理 及在 中医药研 究 中的应用 ［ Ｊ ］ ． 实验室科学 ，２ ０ １ ０（ ０ ３ ）． ［ ３ ］ 唐 国华 ， 贺修胜． 流式细胞仪检测细胞 Ｄ Ｎ Ａ含 量技术 的标 化与控制． 中国医师杂志 ，２ ０ ０ ４年增刊：２ ７ ８ — ２ ８ ０ ． ［ ４ ］ 胡凡 ，王玲． 大 型流 式细胞仪 质量控制 方法的探讨，南京 医科大学学报 （ 自然科学版 ），２ ０ ０ ５ ，２ ５（ ３ ）：２ １ 卜２ １ ３ ．
流式细胞术标准操作规程,1200字
流式细胞术标准操作规程流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞学研究技术，广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、免疫学研究等领域。
为了确保流式细胞术的准确性和可靠性，需要遵循一系列的标准操作规程。
1. 实验前准备- 确保流式细胞仪、计算机和相关设备正常工作，包括保证激光器、光学系统等的正常运行。
- 确保光谱校准及标定的准确性，包括日常监测仪器的性能、定期校准补偿参数等。
- 准备所需试剂和标记抗体，确保其质量良好并符合实验要求。
2. 样本处理- 根据实验目的选择合适的细胞来源和取样方式，并保持细胞的完整性及活性。
- 根据细胞类型和实验需要选择适当的预处理方法，如细胞固定、细胞膜穿透等。
- 对于固定样本，要避免过度固定和过度穿透，以免影响细胞染色和光学性能。
3. 样品标记- 预先优化标记抗体的浓度和反应时间，确保准确的抗原检测和最大的靶向效率。
- 避免标记抗体和细胞表面抗原的非特异性结合，应加入相应的负对照组和等位控制。
- 合理选择荧光染料和标记方法，避免光谱重叠和串扰，以确保标记物的准确检测。
4. 流式细胞仪调试及仪器设置- 根据样本类型和实验需求，选择适当的仪器设置，包括选择合适的激光器、滤光片和检测参数等。
- 对于多色染色，进行补偿设置以消除光谱重叠和仪器漂移带来的影响。
- 定期校准和检验仪器的参数，确保仪器性能和数据稳定性。
5. 流式细胞术操作- 严格控制实验要求的温度、湿度和光照等环境条件，避免对细胞和染料的影响。
- 合理设置流速和事件采集数目，以确保准确且充分的样本分析。
- 避免空管事件和双重事件的发生，及时清理堵塞和冲洗流式细胞仪采集管路。
- 对于稀有事件和低频事件，需要增加采集数目和合理的补偿设置，以提高检测敏感性。
- 及时保存数据和相应的控制实验数据，以备后续数据分析和结果验证。
6. 数据分析和结果解释- 使用专业的流式细胞术分析软件进行数据处理和结果分析。
- 对于多色染色，应进行合理的补偿和背景校正，确保数据的准确性和可靠性。
流失细胞术鉴定白血病的主要流程
流失细胞术鉴定白血病的主要流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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外周血通常通过静脉穿刺采集，骨髓样本则通过骨髓穿刺或活检获取。
6流式细胞术的质量控制和影响因素
DNA倍体的标准是根据正常二倍体细胞 DNA含量的分布范围而确定的，对于二 倍体的标准的选择，应遵照如下原则：
◆采用同个体同源正常组织。
◆同种固定方法。
◆相同的样品处理方法。
◆同样的染色方法 , 同步染色。 ◆同样的仪器检测条件。
⒈ 温度对荧光染色强度的影响：
在一般情况下，环境温度的升高对荧 光染色有明显的影响。温度升高可造成溶 液粘滞性增加，溶剂和荧光染料分子的动 力增大，这就使荧光分子和其他分子之间 的相互碰撞几率增加，使荧光猝灭的可能 性增加。因此，影响了荧光分子发光量子 产额
温度升高时，荧光减弱，荧光减弱的
百分比称温度系数。就一般荧光物质而言， 温度系数大约为1%，如果温度在20℃时， 一般荧光染料即出现温度猝灭效应，随温 度的升高，荧光猝灭作用越强，以致造成 完全猝灭，温度在20℃以下，荧光分子发 光量子产额的变化不明显，基本上保持恒 量。因此在荧光测定时要保持染色后的样 品在适当低温环境下运行，尽可能减少样 品的照射时间，有条件时应使样品观察室 做到恒温装置，会得到更好的荧光定量结 果
例如细胞DNA的分析，使用醇类固 定剂较好而不选择醛类固定剂，醛类固 定剂明显影响细胞DNA荧光发射强度。 实验证明，醛类固定剂对插入性荧光染 料与核酸的结合有很强的干扰作用，其 荧光强度仅相当于新鲜组织荧光强度的 50-70%左右。
如果作流式免疫研究工作，采用新
鲜组织是最好的选择。在不能及时检测 又没有低温保存条件时，要根据所测物 质在细胞内还是在细胞膜表面，在膜表 面的抗原物质，以醛类固定剂为宜，尽 管醛类固定剂产生的非特异性荧光较强， 但不宜采用醇类固定剂，因醇类固定剂 可使细胞表面的糖蛋白、脂蛋白脱落丢 失，失去标记的位点。
石蜡包埋组织标本的材料选择，应经 病理医师仔细检查，选取无自溶，坏死 的组织对肿瘤组织标本，选取含肿瘤组 织细胞丰富的区域，且经病理形态或细 胞学核实病理诊断
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流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制
一、引言
流式细胞术是一种重要的细胞分析技术，可以用于细胞计数、细胞表型分析和细胞排序等。
在进行流式细胞术之前，进行质量控制是非常重要的，以确保实验的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术的质量控制方法。
二、仪器校准
⒈流式细胞仪校准
●清洁流式细胞仪的样品室，并检查激光器和光路系统是否正常工作。
●使用粒子标准物质检查细胞仪的散射、荧光和时间参数的准确性。
●清洗和校准流式细胞仪的液体系统，确保流速和样本量的准确控制。
⒉样品准备
●均匀悬浮细胞样本，避免细胞团聚和沉积。
可通过离心和重新悬浮样本来实现。
●使用质量可靠的细胞染色方法，确保染色的准确性和一致性。
●调整样本的浓度，以避免过度聚焦和细胞过于稀疏而损失信号。
三、质量控制指标
⒈样本纯度的质量控制
●使用合适的负对照和正对照来评估染色的纯度。
例如，使用
未染色细胞作为负对照，使用已知阳性标记的细胞作为正对照。
●定期检查染色结果的一致性，确保负对照细胞没有阳性标记，正对照细胞有预期的阳性标记。
⒉流式细胞仪性能的质量控制
●定期检查流式细胞仪的性能参数，包括散射灵敏度、荧光检
测灵敏度和时间分辨率。
●使用校准颗粒检验流速的准确性和一致性。
●根据实验需要，使用合适的质检颗粒进行分辨率和强度的调整。
四、数据分析和结果解释
⒈数据质量控制
●检查数据文件的完整性，确保数据文件包含所有需要的参数和样本。
●清除实验过程中的噪声信号和非特异性染色的细胞。
●根据预设的阈值和门控策略进行数据清洗和筛选。
⒉数据解释和结果报告
●根据实验的目的和结果，选择合适的数据可视化方法，如频率直方图、散点图或密度图等。
●在报告中注明样本总数、阳性细胞比例、细胞亚群的比例等相关指标。
●提供结果的解释和分析，例如细胞表型的变化趋势、不同实验组间的比较等。
五、附件
附件1、样本染色方案
附件2、流式细胞仪校准记录表
附件3、数据分析结果表格
六、法律名词及注释
⒈ IRB：Institutional Review Board，即伦理审查委员会，负责审查人体试验和研究项目的合法性和伦理性问题。
⒉ HIPAA：Health Insurance Portability and Accountability Act，即健康保险流通责任法，为保护个人健康信息的隐私而制定的法律。