凝胶层析分离技术45页PPT
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实验一凝胶过滤层析分离蛋白质 ppt课件
吸水能力，每g干胶吸水量的10倍
数字愈小,交联度越大,被筛分物质的分子量也愈小
例：
Sephadex G-50：
对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 1500 – 30000
Sephadex G-200：
对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 5000 – 80000
B. 琼脂糖凝胶
( 商品名: Sepharose , Bio- gel – A ) 对实验条件要求高 ( 温度, pH )
实验一凝胶过滤层析分离蛋白质
一、 实验目的
1.掌握凝胶过滤层析法的基本原理； 2.掌握凝胶过滤层析法分离蛋白质的过程。
实验一凝胶过滤层析分离蛋白质
1. 常用生化实验技术
分光光度技术 电泳技术 离心技术 层析技术
实验一凝胶过滤层析分离蛋白质
是利用混合物中各组分的理化性质差异（吸附 力、溶解度、分子形状和大小、分子极性、分子亲 和力等）建立起来的技术。
注意：
防止床面干涸，可适当补充蒸馏水
实验一凝胶过滤层析分离蛋白质
① 加样前打开出口，使床面的蒸馏水流出，正好露 出床面时，立即关闭出口（将干未干）
② 用滴管将混合样品(0.6ml，即血红蛋白和溶菌酶 各0.3ml)缓缓沿柱内壁小心加于床表面
③ 打开出口，使样品进入床内，直到床面重新露出, 立即加入1~2倍于样品体积的蒸馏水
名称
操作形式
柱层析法
固定相装于层析柱内，使样品沿着一个方 向前移而达分离的层析法，包括一般柱层 析法、毛细管层析法和微粒填充柱层析法
平面层析法 层析过程在固定相构成的平面层内进行的 层析法，包括纸层析法、薄层层析法和薄 膜层析法
实验一凝胶过滤层析分离蛋白质
分离效率高 分析速度快 具有极高的灵敏度 应用范围广
凝胶层析法课件
聚苯乙烯和苯乙烯样品淋出曲线 的流速依赖性
1．流速为0.65ml/min； 2．流速为2.0ml/min溶剂为甲
苯
14
（三）流动分离理论
红细胞在毛血细管中流动时比血浆 流得快。
较大的分子较先通过或绕过这个填 料颗粒，使溶质能按其大小进行分 离。
15
第十五页，本课件共有133页
分离过程
三种不同分子量物质的 混合样品用某种规格的 凝胶柱进行分离。
32
第三十二页，本课件共有133页
国产Sephadex LH－20可用于分子筛层析、吸附层析 和分配层析。很适用于脂肪酸、甘油脂、类固醇、维生素、 激素类生化产品的分离。洗脱剂可用单一有机溶剂如甲醇、 氯仿等，也可用混合溶剂如氯仿与甲醇的混合液。
第三十三页，本课件共有133页
（二）葡聚糖凝胶离子交换剂
骨架结构上引入一些有机基团，如甲基、羟丙基，使 呈亲脂性，同时保留亲水性。
这种凝胶既亲脂又亲水，可在多种有机溶剂中膨胀。 这种凝胶在pH＞2的不含氧化剂的溶液中稳定。用低级醇 为溶剂时，对芳香族、杂环族化合物仍有吸附作用。但用 氯仿时则可去除对上述化合物的吸附作用，而对含羟基与 羧基的化合物却有吸附作用 。
样品加入，以水或其他 溶液进行洗脱，即得洗 脱曲线 。
16
第十六页，本课件共有133页
分离过程
最先流出物质A，A分子量最大，完全不能进入颗粒
内部，只能从颗粒间隙流过， “全排阻”。其 流经体积最小，等于外水体积V0。
最后流出物质C，它分子量最小，其分子可以自
由进出凝胶颗粒， “全渗入”。流经体积是外水
（一）平衡排除理论
当溶质层流过一个填料颗料这段距离时，溶质 分子已多次进出于填料的孔，达到平衡。
《凝胶层析法》课件
改进方向
提高分离速度
通过改进凝胶介质或优化操作条件，提高凝 胶层析法的分离速度。
减少小分子物质的损失
研究新型的凝胶介质和操作条件，减少小分 子物质的损失。
增强对大分子的分离效果
开发新型凝胶介质，提高对大分子物质的分 辨率。
提高温度稳定性
通过改进凝胶介质或优化操作条件，提高凝 胶层析法对温度变化的稳定性。
装柱
将凝胶颗粒装入层析柱中，确 保填充均匀。
上样
将待分离样品加入层析柱的顶 部，确保样品与凝胶颗粒充分 接触。
检测
对洗脱液进行检测，观察分离 效果。
结果分析
对收集到的洗脱液进行定性和定量分 析，确定各组分的含量和纯度。
比较实验结果与预期结果，分析实验 误差和影响因素，总结实验结论。
03
CATALOGUE
告撰写非常重要。
采用适当的统计方法处理数据
对于实验数据，应采用适当的统计方法进行处理和分析， 以得出可靠的结论。
备份实验数据
为了防止数据丢失，应将实验数据备份并保存在安全的地 方。
04
CATALOGUE
凝胶层析法实验案例
实验一：分离蛋白质
总结词
通过凝胶层析法分离蛋白质，可以获得高纯度的蛋白质样品，为后续的生化分析提供高 质量的原料。
原理
基于分子大小和形状差异，利用凝胶孔径对不同大小分子进行选择性分离，大 分子不能进入凝胶孔洞，而小分子可以进入凝胶孔洞，从而实现大小分子的分 离。
发展历程
起源
现状
凝胶层析法起源于20世纪40年代，最 初用于蛋白质的分离。
目前，凝胶层析法已成为一种广泛应 用于分离纯化技术领域的进和分离技术 的提高，凝胶层析法逐渐应用于更多 领域，如生物技术、制药、环境科学 等。
凝胶过滤层析ppt课件
标准曲线
Ve
log M
凝胶过滤层析的特点
优点：
操作条件温和，样品回收率可接近100％，并且重复性高。
作为脱盐手段，与透析法相比速度快、精度高；与超滤法相比，蛋白 活性收率高；
分离机理简单，操作参数少，容易规模放大
缺点：
分辨率不高，对于分子量相差不多的物质难以达到很好的分离
料液处理量小，并且样品粘度不宜太高
内水体积(Vi)是指凝胶颗粒中孔穴的体积。 基质体积(Vg)是指凝胶颗粒实际骨架体积。 柱床体积(Vt)就是指凝胶柱所能容纳的总体积。 洗脱体积(Ve)是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积
凝胶层析柱各种体积示意图（阴影部分）
葡聚糖凝胶
➢ 葡聚糖凝胶（Sephadex）具有 良好的化学稳定性，是目前生 化产品制备中最常用的凝胶。
Sephadex G系列凝胶的分级范围 G10 <700 D G15 <1,500 G25 1,000 ~ 5,000 G-50 1,500~30,000 G-75 3,000~70,000 G100 4,000 ~150,000 G150 5,000 ~400,000 G200 5,000 ~800,000
这样，经过层析柱，混合物中的各物 质按其分子大小不同而被分离。
固定相（凝胶）
三维空间网状结构
分子筛效应： 按分子大小不同,在凝胶受到的阻滞
作用有差异,从而造成各组分在凝胶柱 中的迁移速度不同得到分离。
小分子
固 定 相
样品
流 动 相
大分子
小分子 被延滯
较快流出
基本概念
外水体积(Vo)是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒 间液体流动相的体积。
样品的浓度：样品浓度以不大于4 ％为宜，样品浓度过大往往导致粘 度增大。如果样品浑浊，应先过滤 或离心除去颗粒后上柱
Ve
log M
凝胶过滤层析的特点
优点：
操作条件温和，样品回收率可接近100％，并且重复性高。
作为脱盐手段，与透析法相比速度快、精度高；与超滤法相比，蛋白 活性收率高；
分离机理简单，操作参数少，容易规模放大
缺点：
分辨率不高，对于分子量相差不多的物质难以达到很好的分离
料液处理量小，并且样品粘度不宜太高
内水体积(Vi)是指凝胶颗粒中孔穴的体积。 基质体积(Vg)是指凝胶颗粒实际骨架体积。 柱床体积(Vt)就是指凝胶柱所能容纳的总体积。 洗脱体积(Ve)是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积
凝胶层析柱各种体积示意图（阴影部分）
葡聚糖凝胶
➢ 葡聚糖凝胶（Sephadex）具有 良好的化学稳定性，是目前生 化产品制备中最常用的凝胶。
Sephadex G系列凝胶的分级范围 G10 <700 D G15 <1,500 G25 1,000 ~ 5,000 G-50 1,500~30,000 G-75 3,000~70,000 G100 4,000 ~150,000 G150 5,000 ~400,000 G200 5,000 ~800,000
这样，经过层析柱，混合物中的各物 质按其分子大小不同而被分离。
固定相（凝胶）
三维空间网状结构
分子筛效应： 按分子大小不同,在凝胶受到的阻滞
作用有差异,从而造成各组分在凝胶柱 中的迁移速度不同得到分离。
小分子
固 定 相
样品
流 动 相
大分子
小分子 被延滯
较快流出
基本概念
外水体积(Vo)是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒 间液体流动相的体积。
样品的浓度：样品浓度以不大于4 ％为宜，样品浓度过大往往导致粘 度增大。如果样品浑浊，应先过滤 或离心除去颗粒后上柱
《凝胶层析法》课件
凝胶层析法
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汇报人：PPT
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 凝 胶 层 析 法 的 分 离 过 程 05 凝 胶 层 析 法 的 操 作 技 巧 与
注意事项
07 凝 胶 层 析 法 的 优 缺 点 及 未 来 发展前景
在其他领域的应用
生物大分子分离纯化 蛋白质组学研究 蛋白质功能研究 蛋白质相互作用研究
Part Seven
凝胶层析法的优缺 点及未来发展前景
凝胶层析法的优缺点
优点：分离效果好、操作简便、设备简单、可重复性好
单击此处输入你的项正文，文字是您思想的提炼，请言简意赅 的缺 点阐：述分观离点时。间 较 长 、 分 离 效 果 受 多 种 因 素 影 响 、 对 样 品 要 求 较 高
凝胶层析柱的制备流程：选择合适 的凝胶、制备凝胶溶液、加入玻璃 珠、加入洗脱剂、密封层析柱
上样
样品准备：选择合 适的样品，进行预 处理
装柱：将凝胶颗粒 装入层析柱中，确 保均匀、平整
上样：将样品溶液 加入层析柱顶端的 凝胶层上
洗脱：用合适的洗 脱液对样品进行洗 脱，收集洗脱液
洗脱
洗脱液的选择：根据被分离组分的 性质选择合适的洗脱液
凝胶层析法具有分离效果好、操作 简便、分辨率高等优点
凝胶层析法的应用范围
蛋白质的分离纯化 酶的分离纯化 核酸的分离纯化 细胞器的分离纯化
Part Three
凝胶层析法的分离 过程
装柱
柱的类型：常用凝胶层析柱和玻璃层 析柱
装柱方法：湿法装柱和干法装柱
注意事项：避免气泡产生、保证均匀、 避免过度压紧或松散
凝胶层析法的原理是利用凝胶的分子筛作用，将不同大小的分子分离 凝胶层析法中，不同大小的分子在凝胶孔径中的扩散速率不同，从而实 现分离 凝胶层析法中，分子大小与凝胶孔径果
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汇报人：PPT
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 凝 胶 层 析 法 的 分 离 过 程 05 凝 胶 层 析 法 的 操 作 技 巧 与
注意事项
07 凝 胶 层 析 法 的 优 缺 点 及 未 来 发展前景
在其他领域的应用
生物大分子分离纯化 蛋白质组学研究 蛋白质功能研究 蛋白质相互作用研究
Part Seven
凝胶层析法的优缺 点及未来发展前景
凝胶层析法的优缺点
优点：分离效果好、操作简便、设备简单、可重复性好
单击此处输入你的项正文，文字是您思想的提炼，请言简意赅 的缺 点阐：述分观离点时。间 较 长 、 分 离 效 果 受 多 种 因 素 影 响 、 对 样 品 要 求 较 高
凝胶层析柱的制备流程：选择合适 的凝胶、制备凝胶溶液、加入玻璃 珠、加入洗脱剂、密封层析柱
上样
样品准备：选择合 适的样品，进行预 处理
装柱：将凝胶颗粒 装入层析柱中，确 保均匀、平整
上样：将样品溶液 加入层析柱顶端的 凝胶层上
洗脱：用合适的洗 脱液对样品进行洗 脱，收集洗脱液
洗脱
洗脱液的选择：根据被分离组分的 性质选择合适的洗脱液
凝胶层析法具有分离效果好、操作 简便、分辨率高等优点
凝胶层析法的应用范围
蛋白质的分离纯化 酶的分离纯化 核酸的分离纯化 细胞器的分离纯化
Part Three
凝胶层析法的分离 过程
装柱
柱的类型：常用凝胶层析柱和玻璃层 析柱
装柱方法：湿法装柱和干法装柱
注意事项：避免气泡产生、保证均匀、 避免过度压紧或松散
凝胶层析法的原理是利用凝胶的分子筛作用，将不同大小的分子分离 凝胶层析法中，不同大小的分子在凝胶孔径中的扩散速率不同，从而实 现分离 凝胶层析法中，分子大小与凝胶孔径果
实验一凝胶过滤层析分离蛋白质PPT课件
7
（1）层析系统的基本组成
固定相 + 流动相
固体物质 / 固定于固体物质的成分
可以流动的物质： 如水和各种溶媒
8
待分离混合物（A、B）随流动相通过固定相
由于理化性质差异，与两相发生相互作用（吸附、 溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含 量对比）不同
与固定相相互作用力越弱的组分，随流动相移动时 受到的阻滞作用小，移动速度快
23
3. 凝胶装柱
①柱固定于架子上，垂直放置，关住出口 ②自顶部缓缓加入葡聚糖悬液，使G-50 开始下沉，
至1 ~2cm时，打开出口 ③凝胶逐层上升，至顶部 2-3cm时，关闭出口
24
注意点：
垂直放置 防止气泡产生 防止柱的分层
25
4. 平衡
放置一段时间，约40分钟（使凝胶更好的压实）
14
15
（2）凝胶的特点
属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条 件较温和，可在相当广的温度范围内进行，不需要
有机溶剂，对于高分胶
16
（3）凝胶的选择 多孔网孔结构
A. 葡聚糖凝胶 (商品名: Sephadex， Dextran) 型号: G-10 – G-200
CuSO4 碱性
肽键
紫 红色
29
四、实验结果
绘制洗脱结果示意图，并分析所得结果
五、讨论
下次实验：
《碱性磷酸酶的提取及其比活性的测定》 时间：4月18日上午9：00开始
30
2019/12/14
.
31
适用：
杂质多、含量少的复杂样品分析，尤其适用于生 物样品的分离分析
13
3. 凝胶过滤层析法 （gel filtration chromatography） （1）原理：
（1）层析系统的基本组成
固定相 + 流动相
固体物质 / 固定于固体物质的成分
可以流动的物质： 如水和各种溶媒
8
待分离混合物（A、B）随流动相通过固定相
由于理化性质差异，与两相发生相互作用（吸附、 溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含 量对比）不同
与固定相相互作用力越弱的组分，随流动相移动时 受到的阻滞作用小，移动速度快
23
3. 凝胶装柱
①柱固定于架子上，垂直放置，关住出口 ②自顶部缓缓加入葡聚糖悬液，使G-50 开始下沉，
至1 ~2cm时，打开出口 ③凝胶逐层上升，至顶部 2-3cm时，关闭出口
24
注意点：
垂直放置 防止气泡产生 防止柱的分层
25
4. 平衡
放置一段时间，约40分钟（使凝胶更好的压实）
14
15
（2）凝胶的特点
属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条 件较温和，可在相当广的温度范围内进行，不需要
有机溶剂，对于高分胶
16
（3）凝胶的选择 多孔网孔结构
A. 葡聚糖凝胶 (商品名: Sephadex， Dextran) 型号: G-10 – G-200
CuSO4 碱性
肽键
紫 红色
29
四、实验结果
绘制洗脱结果示意图，并分析所得结果
五、讨论
下次实验：
《碱性磷酸酶的提取及其比活性的测定》 时间：4月18日上午9：00开始
30
2019/12/14
.
31
适用：
杂质多、含量少的复杂样品分析，尤其适用于生 物样品的分离分析
13
3. 凝胶过滤层析法 （gel filtration chromatography） （1）原理：
《凝胶层析技术》课件
样品上样
将过滤后的样品加入层析柱中，确保样品均匀分布在凝胶颗 粒表面。
洗脱与分离
01
02
03
洗脱液的选择
根据待分离组分的性质选 择合适的洗脱液，如缓冲 液、有机溶剂等。
洗脱速度的控制
根据分离效果和分离时间 的要求，调整洗脱液的流 速。
洗脱分馏
通过控制洗脱液的流速和 组分的吸附特性，使不同 组分依次从凝胶层析柱中 洗脱出来。
蛋白质分离
凝胶层析技术可用于分离和纯化 蛋白质，通过凝胶颗粒的孔径大 小和电荷性质，将不同大小的蛋
白质分子进行分离。
去除杂质
凝胶层析技术可以用于去除蛋白质 样品中的杂质，如盐、DNA、 RNA等，提高蛋白质的纯度。
蛋白质定量
凝胶层析技术还可以用于蛋白质的 定量分析，通过测量洗脱液中蛋白 质的浓度，计算蛋白质的含量。
高分辨率与高灵敏度
为了满足更精细的分离需求，凝胶层析技术将向 高分辨率和高灵敏度方向发展。这需要研发新型 凝胶介质和优化分离条件，以提高分离效果。
多功能化与集成化
随着应用领域的拓展，凝胶层析技术将向多功能 化和集成化方向发展。这包括与其他分离技术的 结合，以及在微流控芯片上的集成应用，以满足 复杂样品处理的需求。
自动化与智能化
随着机器人技术和人工智能的进步，凝胶层析技 术的自动化和智能化将成为未来的重要发展趋势 。这不仅可以提高分离效率，减少人为误差，还 能大幅减少人力成本。
高通量与快速分离
高通量和快速分离是凝胶层析技术的另一重要发 展趋势。通过改进凝胶介质和优化分离流程，可 以实现更高流速下的高效分离，缩短分离时间。
凝胶的清洗与再生
清洗
在每次使用后，用适量的 溶剂清洗凝胶层析柱，去 除残留的杂质和洗脱液。
将过滤后的样品加入层析柱中，确保样品均匀分布在凝胶颗 粒表面。
洗脱与分离
01
02
03
洗脱液的选择
根据待分离组分的性质选 择合适的洗脱液，如缓冲 液、有机溶剂等。
洗脱速度的控制
根据分离效果和分离时间 的要求，调整洗脱液的流 速。
洗脱分馏
通过控制洗脱液的流速和 组分的吸附特性，使不同 组分依次从凝胶层析柱中 洗脱出来。
蛋白质分离
凝胶层析技术可用于分离和纯化 蛋白质，通过凝胶颗粒的孔径大 小和电荷性质，将不同大小的蛋
白质分子进行分离。
去除杂质
凝胶层析技术可以用于去除蛋白质 样品中的杂质，如盐、DNA、 RNA等，提高蛋白质的纯度。
蛋白质定量
凝胶层析技术还可以用于蛋白质的 定量分析，通过测量洗脱液中蛋白 质的浓度，计算蛋白质的含量。
高分辨率与高灵敏度
为了满足更精细的分离需求，凝胶层析技术将向 高分辨率和高灵敏度方向发展。这需要研发新型 凝胶介质和优化分离条件，以提高分离效果。
多功能化与集成化
随着应用领域的拓展，凝胶层析技术将向多功能 化和集成化方向发展。这包括与其他分离技术的 结合，以及在微流控芯片上的集成应用，以满足 复杂样品处理的需求。
自动化与智能化
随着机器人技术和人工智能的进步，凝胶层析技 术的自动化和智能化将成为未来的重要发展趋势 。这不仅可以提高分离效率，减少人为误差，还 能大幅减少人力成本。
高通量与快速分离
高通量和快速分离是凝胶层析技术的另一重要发 展趋势。通过改进凝胶介质和优化分离流程，可 以实现更高流速下的高效分离，缩短分离时间。
凝胶的清洗与再生
清洗
在每次使用后，用适量的 溶剂清洗凝胶层析柱，去 除残留的杂质和洗脱液。
第五章-凝胶过滤层析PPT优秀课件
二、生物分子的相对分子质量、分子大小和形状
每一种特定的凝胶介质都有特定的分子量分级范围，分级范 围是凝胶介质的重要参数。 根据其分级范围，可以将溶质分子分为三类： 1.分子量大于分级范围上限的分子被称为全排阻分子，它们 完全被排阻在凝胶颗粒网孔外，从颗粒间隙中通过，所受阻 力最小，流程也最短，首先从层析柱中被洗脱下来；
凝胶过滤分离蛋白质 的过程
（1）蛋白质混合物上柱； （2）开始洗脱，小分子进入凝胶颗粒内，大分子被排阻在
颗粒外； （3）小分子被滞留而移动慢，大分子移动快，大小不同的
分子开始分开； （4）大小不同的分子完全分开； （5）大分子已被洗脱，而小分子仍在层析柱内。
6
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
3
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
一、凝胶过滤的概念
不同的溶质因不同程度进入介质而在液相中停留的时间不同, 凝胶的孔径和溶质分子大小的关系决定了层析时该溶质在层 析柱中的保留时间，不同的物质因保留时间不同而分离.
4
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
凝胶色谱分离原理
5
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
9
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
三、凝胶过滤的有关理论问题 ㈠ 凝胶介质的多孔结构和凝胶柱的体积参数 凝胶过滤介质是由多聚物交联形成的具有三维网状结构的
颗粒。 凝胶柱的体积参数包括： 总柱床体积（total volume, Vt），是凝胶经溶胀、装柱、
沉降，体积稳定后所占据层析柱内的总体积； 外水体积（outer volume, V0），是柱中凝胶颗粒间隙的液
7
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
2.分子量低于分级范围下限的分子被称为全渗透分子，它们 完全进入凝胶颗粒网孔内部，洗脱时所受阻力最大，流程也 最长，最后从层析柱中被洗脱； 3.分子量在分级范围内的分子被称为部分渗透分子，它们依 据分子大小不同程度的进入凝胶颗粒内部的，是该凝胶介质 的有效分离对象。 如果两种物质分子量均大于凝胶介质分级范围的上限，或者 均小于分级范围下限，它们就无法通过层析而分离。
每一种特定的凝胶介质都有特定的分子量分级范围，分级范 围是凝胶介质的重要参数。 根据其分级范围，可以将溶质分子分为三类： 1.分子量大于分级范围上限的分子被称为全排阻分子，它们 完全被排阻在凝胶颗粒网孔外，从颗粒间隙中通过，所受阻 力最小，流程也最短，首先从层析柱中被洗脱下来；
凝胶过滤分离蛋白质 的过程
（1）蛋白质混合物上柱； （2）开始洗脱，小分子进入凝胶颗粒内，大分子被排阻在
颗粒外； （3）小分子被滞留而移动慢，大分子移动快，大小不同的
分子开始分开； （4）大小不同的分子完全分开； （5）大分子已被洗脱，而小分子仍在层析柱内。
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第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
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第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
一、凝胶过滤的概念
不同的溶质因不同程度进入介质而在液相中停留的时间不同, 凝胶的孔径和溶质分子大小的关系决定了层析时该溶质在层 析柱中的保留时间，不同的物质因保留时间不同而分离.
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第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
凝胶色谱分离原理
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第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
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第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
三、凝胶过滤的有关理论问题 ㈠ 凝胶介质的多孔结构和凝胶柱的体积参数 凝胶过滤介质是由多聚物交联形成的具有三维网状结构的
颗粒。 凝胶柱的体积参数包括： 总柱床体积（total volume, Vt），是凝胶经溶胀、装柱、
沉降，体积稳定后所占据层析柱内的总体积； 外水体积（outer volume, V0），是柱中凝胶颗粒间隙的液
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第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
2.分子量低于分级范围下限的分子被称为全渗透分子，它们 完全进入凝胶颗粒网孔内部，洗脱时所受阻力最大，流程也 最长，最后从层析柱中被洗脱； 3.分子量在分级范围内的分子被称为部分渗透分子，它们依 据分子大小不同程度的进入凝胶颗粒内部的，是该凝胶介质 的有效分离对象。 如果两种物质分子量均大于凝胶介质分级范围的上限，或者 均小于分级范围下限，它们就无法通过层析而分离。
凝胶层析(生化实验)PPT课件
Proteins that are applied will migrate until the pH = pI, then they will cease to migrate
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Electrophoresis
Electrophoresis is an analytic method to analyze the purity of proteins. It is can also be used to estimate molecular weight of proteins.
生物大分子的分离生物大分子的分离凝胶层析分离蛋白质凝胶层析分离蛋白质生物化学实验生物化学实验上海交通大学生命科学技术学院上海交通大学生命科学技术学院实验目的实验目的了解凝胶柱层析的原理及应用掌握凝胶柱层析的基本操作技术进一步了解和掌握其他层析技术purificationmultistepprocedure
上海交通大学生命科学技术学院
生物化学实验
生物大分子的分离 —— 凝胶层析分离蛋白质
实验目的
1. 了解生物大分子分离、纯化的方法 2. 了解凝胶柱层析的原理及应用，掌握凝
胶柱层析的基本操作技术 3. 进一步了解和掌握其他层析技术
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Purification is a multi-step procedure.
1. Dialysis and ultrafiltration 2. Gel electrophoresis 3. Gel filtration chromatography 4. Ultracentrifugation
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Electrophoresis
Electrophoresis is an analytic method to analyze the purity of proteins. It is can also be used to estimate molecular weight of proteins.
生物大分子的分离生物大分子的分离凝胶层析分离蛋白质凝胶层析分离蛋白质生物化学实验生物化学实验上海交通大学生命科学技术学院上海交通大学生命科学技术学院实验目的实验目的了解凝胶柱层析的原理及应用掌握凝胶柱层析的基本操作技术进一步了解和掌握其他层析技术purificationmultistepprocedure
上海交通大学生命科学技术学院
生物化学实验
生物大分子的分离 —— 凝胶层析分离蛋白质
实验目的
1. 了解生物大分子分离、纯化的方法 2. 了解凝胶柱层析的原理及应用，掌握凝
胶柱层析的基本操作技术 3. 进一步了解和掌握其他层析技术
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Purification is a multi-step procedure.
1. Dialysis and ultrafiltration 2. Gel electrophoresis 3. Gel filtration chromatography 4. Ultracentrifugation
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66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生