血红蛋白的提取和分离-PPT课件
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血红蛋白的提取和分离PPT课件
血红蛋白的提取和分泳法
1、蛋白质特性的差异
(1)分子的形状和大小；
(2)所带电荷的性质和多少；
(3)溶解度；
(4)吸附性质；
(5)对其他分子的亲和力。
2、分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大 小分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶：微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构 成，内含许多贯穿通道,如葡聚糖或琼脂糖。
③电泳常用方法 a.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子 在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大 小和形状的不同而不同，从而得以分离。 b.聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用：掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 迁移率完全取决于分子的大小。（原理：SDS使蛋白质发 生完全变性，解聚成单条肽链，并与其结合形成蛋白质— SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质原有的 电荷量。测定的结果只是单条肽链的分子量）
以哺乳动物红细胞为材料，血红蛋白质的提取和分 离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
（一)样品处理及粗分离 1、红细胞的洗涤 (1)目的:去除杂蛋白； (2)过程：
(3)实验注意事项：为防止血液凝固，加入抗凝血剂柠檬 酸钠。生理盐水洗涤防止红细胞吸水涨破。低速短时 离心。如果离心速度过高和时间过高会使白细胞和淋巴细 胞一同沉淀，达不到分离的效果。④洗涤次数过少，无法 去除血浆蛋白,分层不明显⑤上清无黄色，表明细胞已洗净。
3、缓冲溶液 ①概念：在一定范围内，能够抵制外界的酸、碱对PH的 影响，维持pH基本不变的溶液。 ②缓冲溶液的配制 1～2种缓冲剂 调节使用比例控制pH范围
二、血红蛋白的提取和分离 血红蛋白由四条肽链组成，包括两条α-肽链和两条
1、蛋白质特性的差异
(1)分子的形状和大小；
(2)所带电荷的性质和多少；
(3)溶解度；
(4)吸附性质；
(5)对其他分子的亲和力。
2、分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大 小分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶：微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构 成，内含许多贯穿通道,如葡聚糖或琼脂糖。
③电泳常用方法 a.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子 在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大 小和形状的不同而不同，从而得以分离。 b.聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用：掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 迁移率完全取决于分子的大小。（原理：SDS使蛋白质发 生完全变性，解聚成单条肽链，并与其结合形成蛋白质— SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质原有的 电荷量。测定的结果只是单条肽链的分子量）
以哺乳动物红细胞为材料，血红蛋白质的提取和分 离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
（一)样品处理及粗分离 1、红细胞的洗涤 (1)目的:去除杂蛋白； (2)过程：
(3)实验注意事项：为防止血液凝固，加入抗凝血剂柠檬 酸钠。生理盐水洗涤防止红细胞吸水涨破。低速短时 离心。如果离心速度过高和时间过高会使白细胞和淋巴细 胞一同沉淀，达不到分离的效果。④洗涤次数过少，无法 去除血浆蛋白,分层不明显⑤上清无黄色，表明细胞已洗净。
3、缓冲溶液 ①概念：在一定范围内，能够抵制外界的酸、碱对PH的 影响，维持pH基本不变的溶液。 ②缓冲溶液的配制 1～2种缓冲剂 调节使用比例控制pH范围
二、血红蛋白的提取和分离 血红蛋白由四条肽链组成，包括两条α-肽链和两条
5.3 血红蛋白的提取和分离 课件 (36张PPT)
科学家发现，猿猴细胞中的TRIM5α具有抗HIV-1的作用，它是 一种具有3个结构域的胞浆体蛋白质。此后，世界各地的很多科学 家开始研究TRIM5α蛋白的结构，但到目前为止研究有些进展。
研究TRIM5α蛋白的第一步是什么？ 分离和提纯TRIM5α蛋白。
如何分离和提纯蛋白质？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性 质和多少、溶解度、吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以 用来分离不同蛋白质。
由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如内环境中的缓冲液： H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。 ④本实验使用的是磷酸缓冲液(NaH2PO4 /Na2HPO4 ),目的是利用 缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能， 便于观察（红色）和科学研究（活性）。
例：相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为
2.顶塞制作：打孔→安装玻璃管；
3.底塞制作：打孔→挖凹穴→安装移 液管头部→覆盖尼龙网，再用100目 尼龙纱包好；
4.组装：将上述三者按相应位置组装 ，并在下端出口连接带开关的尼龙管 ，尼龙管放入收集器。
1.材料：
缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可 交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷酸缓冲液
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
由于琼脂糖本身不带电荷， 各种分子在电场中迁移速度 决定于所带电荷性质的差异 及分子的大小、形状的不同
在凝胶中加入SDS，使蛋白质解 聚成单链，与各种蛋白质形成 蛋白质－SDS复合物，使其迁移 速度完全取决于分子的大小
（二）方法及原理 3.凝胶色谱法和电泳法
凝胶色谱法
电泳法
（2）原理：
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；
研究TRIM5α蛋白的第一步是什么？ 分离和提纯TRIM5α蛋白。
如何分离和提纯蛋白质？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性 质和多少、溶解度、吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以 用来分离不同蛋白质。
由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如内环境中的缓冲液： H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。 ④本实验使用的是磷酸缓冲液(NaH2PO4 /Na2HPO4 ),目的是利用 缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能， 便于观察（红色）和科学研究（活性）。
例：相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为
2.顶塞制作：打孔→安装玻璃管；
3.底塞制作：打孔→挖凹穴→安装移 液管头部→覆盖尼龙网，再用100目 尼龙纱包好；
4.组装：将上述三者按相应位置组装 ，并在下端出口连接带开关的尼龙管 ，尼龙管放入收集器。
1.材料：
缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可 交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷酸缓冲液
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
由于琼脂糖本身不带电荷， 各种分子在电场中迁移速度 决定于所带电荷性质的差异 及分子的大小、形状的不同
在凝胶中加入SDS，使蛋白质解 聚成单链，与各种蛋白质形成 蛋白质－SDS复合物，使其迁移 速度完全取决于分子的大小
（二）方法及原理 3.凝胶色谱法和电泳法
凝胶色谱法
电泳法
（2）原理：
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；
《血红蛋白的提取和分离》课件
粗分离
通过离心或过滤去除细胞碎片 和杂蛋白。
鉴定
通过电泳、质谱等技术鉴定纯 度。
PART 04
血红蛋白的应用
血红蛋白在医学上的应用
诊断疾病
血红蛋白可用于检测和诊断各种贫血、血红蛋白病以及与血液相 关的疾病。
输血治疗
血红蛋白可用于制备红细胞输血制剂，为贫血患者提供治疗。
药物研发
血红蛋白作为药物载体，可用于药物的定向输送和释放。
感谢观看
KEEP VIEW
REPORTING
食品工业
血红蛋白可作为天然色素和营养强化剂，用于 食品加工和生产。
农业领域
血红蛋白可作为植物生长调节剂，促进植物生长和提高抗逆性。
PART 05
总结与展望
血红蛋白提取和分离的研究成果总结
血红蛋白提取和分离技术不断完善
随着科技的发展，血红蛋白的提取和分离技术不断得到优化，提高了分离效率和纯度。
血红蛋白结构与功能关系研究取得进展
血红蛋白在生物工程中的应用
生物传感器
血红蛋白可用于生物传感器制造，检测环境中的有害 物质。
生物燃料
血红蛋白可应用于生物燃料的合成，提高燃料的能量 转化效率。
生物制药
血红蛋白可用于药物的分离和纯化，提高药物的纯度 和产量。
血红蛋白在其他领域的应用
水体和土壤。
血红蛋白的提取
血红蛋白提取的方法和原理
血红蛋白提取的方法
硫酸铵分级沉淀法、离子交换法、层 析法等。
血红蛋白提取的原理
基于不同条件下蛋白质的溶解度不同 ，通过改变溶液的pH值、离子强度等 条件，将血红蛋白从其他蛋白质中分 离出来。
血红蛋白提取的实验材料和试剂
实验材料
血红蛋白的提取和分离人教精品PPT.
3.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关
操作，其中正确的是（ ）
A．可采集猪血作为实验材料 ．用蒸馏水重复洗涤红细胞
AB
C．血红蛋白释放后应低速短时间离心
D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流
出液
谢谢观看！ 通常使用10％以下的稀酸操作，在于维持需要的pH值，否则会导致成分的破坏或水解。为发挥加酸的最好效能，较好地控制其用量，
⑴.概念：
带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 ⑵.电泳原理：
电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及 分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速 度，从而实现样品中各种分子的分离。
⑶.常见电泳类型：
①琼脂糖凝胶电泳
迁移率取决于它所带
净电荷的多少以及分
②聚丙稀酰胺凝胶电泳 子的大小、形状。
往往能将酸一次加于最初的少量浸出溶剂中。当酸化溶剂用完后，继续使用单纯的溶剂，完成浸的操作。例如，在最初部分溶剂中加 入教0学.1目％的枸：椽酸所制得的黄连流浸膏中，小檗碱含量、稳定性优于单用水浸提者。动物生化制剂浸提时，pH值的影响更为显著。 12、温禁度止：到非游泳区游泳，要在游泳馆、池或标有无危险标记的游泳区游泳。 （观2察）课碱本：上的图15-14，发现电路中的开关都接在了哪根线上？能解释一下原因吗？ 学客校户的 看安车全时工怎作么直应接对关系到办学质量，学校的信誉和学生的健康成长，也关系到家庭的幸福、社会的稳定。因此，我们必须增强广大 师1.3生.7的借安助全推意荐识渠，道强化学校安全教育力度，普及安全防范知识，加大学校安全管理措施，做到安全工作警钟长鸣，确保师生平安。 2不、要协乘助坐校超长载做的好船学只校；消不防要安在全船工上作嬉，戏对打校闹园；内不的要消冒防险安乘全船管。理工作负分管责任。 25． 号组位织是学车生的参侧加身大，型很集 多体销活售动人，员应认当为采车取的下侧列面安很全难措介施绍：，其实这个地方是很重要的，因为买车的客户最关心的还是安全，销售人员可 3以.禁跟止客在户计这算样机讲网：络大上家发看表，违一法般或的有车害是国有家三的个议柱论子。，我们称之为A柱B柱和C柱，很多汽车销售公司的员工不知道A柱、B柱和C柱应该 7介.配绍合什新么闻。出其版实、这公里安边、的工填商充行物政可管以理抗等击部冲门击依。法取缔学校周边兜售非法出版物的游商和无证照摊点，查处学校周边制售含有淫秽色 情认、同凶 对杀方暴的力观等点内容的出版物的单位和个人。
血红蛋白的提取与分离.38436.ppt
第十六页，共六十三页。
思考：在血红蛋白整个实验室中用(zhōngyòng)的缓冲液是 什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的 PH环境，保证血红蛋白的正常(zhèngcháng)结构和功能，便 于观察(红色)和科学研究(活性)
第十七页，共六十三页。
〔五〕电泳(diàn yǒnɡ)：
第十九页，共六十三页。
3、类型(lèixíng)
琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳
4、实例(shílì)
①应用 十二烷基磺酸钠〔SDS〕—聚丙稀酰胺凝胶电泳 测定蛋白质分子量
②聚丙稀酰胺凝胶 由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在引发
剂和催化剂的作用(zuòyòng)下聚合交联成三维网状结 构的凝胶
一、根底知识 (一〕蛋白质 1、含量
(hánliàng)
占细胞干重的50％以上(yǐshàng)，细胞中含量最多的有 机物
2、组成(zǔ 元素 chénɡ)
C、H、O、N 3、相对分子质量
高分子化合物
第二页，共六十三页。
4、根本组成(zǔ chénɡ)单位
氨基酸
5、氨基酸通式(tōngshì)
H
R C COOH
第二十四页，共六十三页。
讨论：如何(rúhé)测定蛋白质的分子量？
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(diàn yǒnɡ)测定蛋 白质的分子量时，可选用一组分子量的标准蛋白同 时进行电泳(diàn yǒnɡ)，根据分子量的标准蛋白的 电泳(diàn yǒnɡ)区带位置，用电泳(diàn yǒnɡ)迁移 率和分子量的对数作标准曲线，可以测定未知蛋白 质的分子量。市场上有高分子量、次高分子量及低 分子量的标准蛋白试剂出售.
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3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法
4、课题难点：①样品的预处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装 填。
一、凝胶色谱法（分配色谱法）
⑴.概念：
根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小， 利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分 离。
大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼 脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。
四、实验操作——血红蛋白的提取和分离
1.分离生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或
化学性质的生物大分子。
2.蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、
所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分 子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
⑵.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程
⑶.凝胶色谱法的原理—分子筛效应： 当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对
分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路 程较长，移动速度较慢；而相对分子量较大的蛋白 质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动， 路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋 白质分子因此得以分离。 ▲依据的特性是：蛋白质分子量的大小。
血液有哪些成分？
水分 血浆
固体物质
血 液
血细 胞
白细胞
血小板
红细胞 （最多）
思考
血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等
血红蛋白
两个α—肽链 两个β—肽链 四个亚铁红素基团
血红蛋白的特点：
血红蛋 白
两个α—肽链 两个β—肽链
四个亚铁红素基团
㈠.蛋白质提取和分离步骤
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
㈡.凝胶色谱法分离蛋白质操作步骤
3次洗涤后的 结果
②洗涤目的: 去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数 不可过少。
(2)血红蛋白的释放（使用蒸馏水和甲苯）
磁力搅拌器
搅拌器转子
搅拌器正在工作
(3)分离血红蛋白溶液：
甲苯层（无色透明）； 脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）； 血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）； 杂质沉淀层（暗红色）。 过滤：除去脂溶性物质沉淀层和杂质沉淀层。
A.改变蛋白质分A子通过凝胶时的路径
B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度
C.将酶或细胞固定在凝胶中
D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度
4.在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，其作用主要是
()
C A.使酶的活性最高
B.使蛋白质的活性最高
C.维持蛋白质所带的电荷 D.使蛋白质带上电荷
实践训练
1.在凝胶色谱法分离蛋白质中，所用凝胶的化学本质是( )
AC..糖蛋A类白化 质合物
B.脂质 D.核酸
2.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因
素是( )
A.蛋白质分子所带的电荷 B.蛋白质分子的形状
C.蛋白质分子的相对质量C D.缓冲溶液的pH
3.凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是( )
⑶.常见电泳类型： ①琼脂糖凝胶电泳
②聚丙稀酰胺凝胶电泳
迁移率取决于它所带净电 荷的多少以及分子的大小、
形状。
③SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳
电泳迁移率完全 取决于分子的大
小。
课外拓展： 用SDS测定蛋白质分子量的方法
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分 子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行 电泳，根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置， 用电泳迁移率和分子量的对数作标准曲线，可以测定 未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、次高分子 量及低分子量的标准蛋白试剂出售。
凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
二、缓冲溶液
1.概念:
在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或 强碱的影响使原来溶液pH值基本保持不变的混合 溶液。
2.缓冲溶液的组成举例：
H2CO3 —— NaHCO3、CH3COOH —— CH3COONa NaH2PO4 —— Na2HPO4、KH2PO4 —— K2HPO4
1.样品处理： 思考：人们用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞 提取血红蛋白的原因是什么？ 答：鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提 取，哺乳动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋 白含量丰富便于提取血红蛋白。
(1)红细胞的洗涤: ①洗涤操作：
柜式离心机
初次离心后的 结果
缓冲液（pH为7.0）充分洗涤平衡12小时。
注意：1.液面不要低于凝胶表最终生物大分子物
(4)透析(粗分离)：
①过程：取1ml的血红蛋白溶液装 入透析袋中，将透析袋放入盛有 300ml的物质的量浓度为20mmol/l 的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透 析12小时。 ②透析目的：除去样品中分子量 较小的杂质。
利用透析袋透析
透析过程动画演示
2.凝胶色谱操作:
⑴.凝胶色谱柱的制作：
注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面， 否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。
血红蛋白的提取和分离
学习目标
体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法， 并了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④它们在血红蛋 白的提取中分别起到什么作用。
2、主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②电泳法分离样品的 原理 ③缓冲溶液的组成和作用机理
⑵.凝胶色谱柱的装填
①凝胶的选择： ②凝胶的前处理： ③凝胶色谱柱的装填方法： 注意：1.凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 2.装 填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗 脱次序，降低分离效果。
④洗涤平衡：装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，
在50cm高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸
3.缓冲溶液的配制
三、电泳：
⑴.概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相 反的电极移动。
琼脂糖凝胶电泳示意图
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
⑵.电泳原理： 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及
分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移 速度，从而实现样品中各种分子的分离。
4、课题难点：①样品的预处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装 填。
一、凝胶色谱法（分配色谱法）
⑴.概念：
根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小， 利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分 离。
大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼 脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。
四、实验操作——血红蛋白的提取和分离
1.分离生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或
化学性质的生物大分子。
2.蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、
所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分 子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
⑵.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程
⑶.凝胶色谱法的原理—分子筛效应： 当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对
分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路 程较长，移动速度较慢；而相对分子量较大的蛋白 质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动， 路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋 白质分子因此得以分离。 ▲依据的特性是：蛋白质分子量的大小。
血液有哪些成分？
水分 血浆
固体物质
血 液
血细 胞
白细胞
血小板
红细胞 （最多）
思考
血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等
血红蛋白
两个α—肽链 两个β—肽链 四个亚铁红素基团
血红蛋白的特点：
血红蛋 白
两个α—肽链 两个β—肽链
四个亚铁红素基团
㈠.蛋白质提取和分离步骤
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
㈡.凝胶色谱法分离蛋白质操作步骤
3次洗涤后的 结果
②洗涤目的: 去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数 不可过少。
(2)血红蛋白的释放（使用蒸馏水和甲苯）
磁力搅拌器
搅拌器转子
搅拌器正在工作
(3)分离血红蛋白溶液：
甲苯层（无色透明）； 脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）； 血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）； 杂质沉淀层（暗红色）。 过滤：除去脂溶性物质沉淀层和杂质沉淀层。
A.改变蛋白质分A子通过凝胶时的路径
B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度
C.将酶或细胞固定在凝胶中
D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度
4.在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，其作用主要是
()
C A.使酶的活性最高
B.使蛋白质的活性最高
C.维持蛋白质所带的电荷 D.使蛋白质带上电荷
实践训练
1.在凝胶色谱法分离蛋白质中，所用凝胶的化学本质是( )
AC..糖蛋A类白化 质合物
B.脂质 D.核酸
2.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因
素是( )
A.蛋白质分子所带的电荷 B.蛋白质分子的形状
C.蛋白质分子的相对质量C D.缓冲溶液的pH
3.凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是( )
⑶.常见电泳类型： ①琼脂糖凝胶电泳
②聚丙稀酰胺凝胶电泳
迁移率取决于它所带净电 荷的多少以及分子的大小、
形状。
③SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳
电泳迁移率完全 取决于分子的大
小。
课外拓展： 用SDS测定蛋白质分子量的方法
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分 子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行 电泳，根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置， 用电泳迁移率和分子量的对数作标准曲线，可以测定 未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、次高分子 量及低分子量的标准蛋白试剂出售。
凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
二、缓冲溶液
1.概念:
在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或 强碱的影响使原来溶液pH值基本保持不变的混合 溶液。
2.缓冲溶液的组成举例：
H2CO3 —— NaHCO3、CH3COOH —— CH3COONa NaH2PO4 —— Na2HPO4、KH2PO4 —— K2HPO4
1.样品处理： 思考：人们用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞 提取血红蛋白的原因是什么？ 答：鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提 取，哺乳动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋 白含量丰富便于提取血红蛋白。
(1)红细胞的洗涤: ①洗涤操作：
柜式离心机
初次离心后的 结果
缓冲液（pH为7.0）充分洗涤平衡12小时。
注意：1.液面不要低于凝胶表最终生物大分子物
(4)透析(粗分离)：
①过程：取1ml的血红蛋白溶液装 入透析袋中，将透析袋放入盛有 300ml的物质的量浓度为20mmol/l 的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透 析12小时。 ②透析目的：除去样品中分子量 较小的杂质。
利用透析袋透析
透析过程动画演示
2.凝胶色谱操作:
⑴.凝胶色谱柱的制作：
注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面， 否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。
血红蛋白的提取和分离
学习目标
体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法， 并了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④它们在血红蛋 白的提取中分别起到什么作用。
2、主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②电泳法分离样品的 原理 ③缓冲溶液的组成和作用机理
⑵.凝胶色谱柱的装填
①凝胶的选择： ②凝胶的前处理： ③凝胶色谱柱的装填方法： 注意：1.凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 2.装 填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗 脱次序，降低分离效果。
④洗涤平衡：装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，
在50cm高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸
3.缓冲溶液的配制
三、电泳：
⑴.概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相 反的电极移动。
琼脂糖凝胶电泳示意图
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
⑵.电泳原理： 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及
分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移 速度，从而实现样品中各种分子的分离。