1-1 生物化学实验技术

枪头（吸液嘴）的装配
正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微 用力左右微微转动即可使其紧密结合。
很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这是错误的做法，因 为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的 瞬时撞击力而变得松 散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。
移液的方法
吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下 2－3毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液 嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。
5、 根据需要依次设置离心所需要的温度、运行程 序（可不选择）、转速、离心时间（当触及某一 项的按键时，显示屏上相对应的值会闪烁，设完 一个参数可直接触及下一个按键，继续设定所需 数值），设置结束后按“start/stop”开始运行机 器。
6、 离心结束后，转子会逐渐地停下来，“open” 键指示灯亮起，按此键打开离心室，旋开转子盖， 取出样品。 7、 将离心管处理干净，倒置在小张滤纸上使其 干燥，以便下次使用。旋上转子盖，关上机盖。 若离心室内壁有冰霜待其化净干燥后，再旋上转 子盖，关上机盖。
意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。
常用洗涤剂： 1． 洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。 2． 强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。 3． 铬酸洗液------去除油污及有机物 4． 水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。
洗涤方法： 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱
判断洗净的标准：
洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后， 管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。
要求:每次实验完毕必须清洗干净试管,倒置干燥.
干燥方法
1、 晾干：仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。
2、 烘干：尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在 托盘上，放入烘箱烘干。普通仪器用80-100℃， 容量分析仪器用37-40℃。
7、 将选择旋钮由“T”调至“A”，此时读数应由 “100”至“0”，若不为“0”，可用“消光零”旋 钮调节。
8、 拉动拉杆，分别读取“A 标”和“A 样”。
9、 取出比色杯，弃去溶液，洗净晾干，备用。
思考题: 1.试管如何才能清洗干净? 2.如何正确使用移液管和移液枪? 3.分光光度计的原理是什么?如何正确使用?
3、 调节所需波长，灵敏度调至“1”，选择旋钮至 “T”。
4、 调“0”：打开暗箱盖，用调“0”旋钮调节。 5、 调“100%”：盖上暗箱盖，用调“100%”旋钮调
节，让光线通过“空白管”。
6、 重复调“0”和调“100%”数次。 * 注意：若调不到“0”和“100%”，可将灵敏度调 至“2”或更高，不得用力强行旋转旋钮，以免损 坏。
社 1994年 生物化学实验 陈钧辉等编 3版或4版 科学出版社
2003
3.常用玻璃仪器的洗涤及使用
玻璃仪器的洗涤, 移液管（pipette）,移液枪, 容量瓶（volumetric flask ）, 滴定管（burette）的使用, 过滤（filter） 匀浆器（homogenizer）等
玻璃仪器的洗涤及干燥
开始滴定时，液体滴出可快一些，但应成滴而 不成流。 溶液出现瞬间颜色变化，随着瓶子的摇动很快消失。
当接近终点时，颜色变化消失较慢，这时应逐滴滴入溶液， 摇匀后由溶液颜色变化再决定是否滴加溶 液。
最后控制液滴悬而不落，用锥形瓶内壁将溶液沾下(相当于半 滴)，用洗瓶冲洗锥形瓶内壁，摇匀，如颜色变化不再消 失，即为终点。
旋涡仪, 水浴箱, 天平(托盘天平,光电天平,电子天平), 离心机, 分光光度计(比色皿 )等.
天平的使用
天平的构造：托盘、横梁、游码、标尺、底 座。
使用:将游码放至零位，调节平衡螺母，使指 针指在标尺中央。
被测物放在左盘上，在右盘里加砝码，当增 减最小砝码也不能使天平平衡时，移动游 码使天平平衡，这时砝码的总质量加上游 码所示质量即为物体质量。
读数时，视线在弯月面下缘最低点处，且与液面成水平
过滤
一角：是指滤纸折叠时的角度要与漏斗的角度相一 致。
一搅：将混合物倒入水中以后，用玻璃棒搅拌加快 其溶解。
一静置：待可溶性物质完全溶解后，不要立即就进 行过滤，要静置片刻。使不溶性的颗粒先沉淀出， 可以减少不溶性物质将滤纸上的微小孔隙堵塞， 加快过滤的速率。
以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。 如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处
于松弛状态以保护弹簧。 移液器未装吸头时，切莫移液。 移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓
碱、有机物等）。 严禁使用移液器吹打混匀液体。
容量瓶
配制准确浓度.检查瓶塞是否严密;固体物质，先要在烧杯内 溶解，再转移到容量瓶中 .用毕后应立即用水冲洗干净
使用前： ① 观察吸管有无破损，污渍。 ②观察吸管的规格：所用吸管的 规格应等于或近似等于所要吸取 的溶液的体积。
③观察有无“吹”字：若有，说明 刻度到尖端，放液后需将尖端的 溶液吹出，否则不吹。
握法：用右手的拇指和中指拿住 管颈标线以上部位,拇指和中指 夹拄吸管，食指游离。下部的尖 嘴插入待移取的液体中.左手拿 洗耳球.
取液： ①垂直入液 ②入液深度适中 ③洗耳球吸取 ④取液高度高于刻度2-3cm ⑤食指按紧吸管上端 ⑥刻度吸管提离液面 ⑦观察液内无气泡 ⑧滤纸擦净管壁。
放液至刻度：
①刻度ห้องสมุดไป่ตู้管垂直
②右眼与刻度线平行
③轻轻松开食指（转动刻 度吸管），使液面缓慢 降低，直至最低点与刻 度线相切。
放液至容器： ①刻度吸管垂直 ②容器倾斜45℃ ③使溶液自然流入容器，注意吹与不吹。 待溶液不再流出时，等15s后再取出移液管 一根吸管只吸取一种试剂，用后立即浸入水中。
先将剪碎的组织置于管中，再 套入研杆来回研磨，上下移 动，内壁之间间隙保持在十 分之几毫米距离。适用于量 少和动物脏器组织。
用匀浆缓冲器研磨动物组织之 前必须把组织剪成很小的小 块.
使用匀浆器的时候都要用匀浆 缓冲液.
缓冲液在磨样的时候只加一小 部分，其他的就是在磨完后 冲洗匀浆器的.
4.常用仪器的使用
表格规范
计算机画图
手工画图一定使用 坐标纸,铅笔,字迹工整.
考核与考试 实验素质（遵守实验室规则和道德行为）（10%） 实验预习情况（10%） 实验操作情况实验报告情况（80%） 实验成绩：为各项实验成绩总和的平均值。
主要参考资料 现代生物学基础实验指导 林宏辉等,四川大学出版
社,2003 生物化学实验原理和方法 李建武等编 北京大学出版
二低：指的是滤纸的边缘要稍低于漏斗的边缘； 在整个过滤过程中还要始终注意到滤液的液面
要低于滤纸的边缘。否则没有达到过滤的目的。
三接触： ①过滤时要使盛有待过滤液体的烧杯的烧杯嘴与倾
斜的玻璃棒相接触。
②是玻璃棒的下端要与滤纸为三层的那一边相接触。
③是漏斗的颈部要与接收滤液的接受器的内壁相接 触。
匀浆器
操作电子天平的主要步骤
(1)接通电源并预热使天平处于备用状态。 (2)打开天平开关(按操纵杆或开关键)，使天平处于
零位，否则按去皮键。 (3)放上器皿，读取数值并记录，用手按去皮键清零，
使天平重新显示为零。 (4)在器皿内加人样品至显示所需重量时为止，记录
读数. (5)将器皿连同样品一起拿出。 (6)按天平去皮键清零，以备再用。
离心机
操作方法 1、 接通电源，打开机器开关，等待机器自检完毕；
2、 按open键（机器电子锁开），打开机器盖； 3、 根据使用需要选择合适的转子，将转子轻轻地 套在旋转轴上，用六角螺丝刀旋转转子上的螺母， 将转子固定。
4、 根据转子选择适合的离心管，将样品装入一对离 心管后，在托盘天平上调节使它们质量相等，然 后对称的放入转子中，先将转子的盖子旋紧，然 后盖上机器盖。
用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。 吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松 开，以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成 漏气。
接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按 按钮至 第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。
移液器的正确放置
使用完毕，可将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。 当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，
移液枪的使用
量程的调节 在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，
则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可； 但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋
转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体 积，这样可以保证量取的最高精确度。
在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡 住内部机械装置而损坏了移液枪。
滴定管
碱式滴定管的使用方法是：
(1)试漏。给滴定管装满水后夹在滴 定管架上静置1－2分钟。若有漏水 应更换橡皮管或管内玻璃珠.
(2)滴定管内装入标准溶液后，要将 尖嘴内的气泡排出。方法是：把橡 皮管向上弯曲，出口上斜，挤捏玻 璃珠，使溶液从尖嘴快速喷出，气 泡即可随之排掉。
(3)进行滴定操作时，用左手的拇指 和食指捏住玻璃珠靠上部位，向手 心方向捏挤橡皮管，使其与玻璃珠 之间形成一条缝隙，溶液即可流出。
3、 有机溶剂干燥：体积小的容器急需干燥时，可 用此法。洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用 少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。
液体体积的度量仪器及使用方法
刻度吸管和微量移液器的使用及注意事项：
1． 作用：准确移取一定体积的溶液。 2． 规格（ml, μl）： 0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0ml; 0~1000μl。 3． 使用注意事项：
分光光度计 使用及注意事项
1、 接通电源，打开暗箱盖，预热20min。* 注意： 分光光度计在接通电源而不用时，必须打开暗箱盖， 以免光电管老化。
2、 将准备好的试剂倒入比色杯中，用吸水纸擦去比 色杯外侧水珠，并依次放入比色杯架中。* 注意： 手拿比色杯毛面，试剂倒入杯中满2/3 即可，不得 将比色杯放在仪器上。