氯霉素注射液PH值与含量分析方案
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氯霉素含量及ph值的测定
实验原理
测定溶液的pH值，通常用玻璃电极做指示电极，饱和甘汞电极做 参比电极（SCE），与待测溶液组成原电池，在一定的实验条件 下，原电池的电动势与溶液的电动势的pH之间的关系符合能斯特 方程式，即： E=K’+0.0592pH（t=25。C） 本实验采用比较法来测定氯霉素注射液的pH值。 紫外分光光度法测定氯霉素含量的原理是朗伯比尔定律，即： A=kcb 即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度呈线性关系。且同一物 质的吸收曲线相似，最大吸收波长相等，浓度越大，吸收强度越 大，不同物质吸收曲线不同，最大吸收波长不等。
0.025mol/l
混合磷酸盐 缓冲溶液和 清洗好的电 极。
配制标准缓冲溶液并 清洗安装电极
用蒸馏水清洗好 电极，并用洁净 仪器准备 的滤纸吸去附着 连接仪器，开启开关，检查电极的 在电极上的水。 玻璃球泡是否有裂痕，内参比电极 是否浸入内参比溶液内，仔细检查 参比溶液内是否有气泡。
供试品pH的测定
276
278
280
285 290
附图表如右侧
标准氯 霉素溶 液A 供试品A
数据记录与处理
数据处理
溶液 编号 吸光度A 1 2 0.02 浓度mg/ml 0.01 标准溶液 3 0.03 4 0.04 5 0.05 供试品 6 Cx
绘制出标准工作曲线，并校正工作 曲线，得到一个A-C的关系式，即可 求出供试品的浓度，并求出含量。
仪器分析课题研究
氯霉素注射液含量与pH值的测定 汪加红 张志雄 周强 张锦雯
L/O/G/O
背景知识
氯霉素是由委内瑞拉丝菌产生的抗生素。氯霉素注射 液是氯霉素的灭菌溶液，它的含量应为标示量的90%-110%。 也就是说它的浓度应为0.125g/ml，其PH大概应为5.0-7.5. 氯霉素注射液是无色或略带微黄色的澄明液体。
氯霉素注射液PH及含量的测定的实验方案
实验二
氯霉素含量的测定
• 实验目的 实验目的： 掌握紫外可见分光度法的定量方法 熟练使用紫外可见分光光度计 能对测试的数据进行处理
分光光度法测定的原理
• 分光光度法是以朗伯—比尔定律为依据。 当一束平行单色光垂直照射到某一固定浓 度的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液 的浓度及液层的厚度的乘积成正比即：
结果记录表
序号 1 2 3 平均值
氯霉素注 射液的 PH
实验注意事项
• 清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而 要用滤纸吸干。 • 电极插入溶液中，要小心轻摇烧杯 • 玻璃膜很薄，容易破裂，使用时要小心。
实验结果分析
• 查资料得氯霉素的PH值应该在5.0~7.5之间 可以与实验的结果进行比较，得出结论
A=Kcb
实验仪器及试剂
• 仪器： 722E型紫外可见分光光度计，1cm比色皿， 10ml吸量管，25ml容量瓶，100ml容量瓶 烧杯等 • 试剂： 试剂： 氯霉素注射液，标准氯霉素。
实验步骤
1、将分光光度计预热，用1cm吸收池，以蒸 、将分光光度计预热， 吸收池， 吸收池 馏水为参比，取氯霉素注射液在波长260～ 馏水为参比，取氯霉素注射液在波长 ～ 290nm间，每隔5nm测量一次，在峰值附 间 每隔 测量一次， 测量一次 近每隔2nm测量一次吸光度。以波长为横 测量一次吸光度。 近每隔 测量一次吸光度 坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线， 坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，确 定最大吸收波长 。
值测量： ③PH值测量： 值测量 将洗好的电极放在被测溶液中。轻轻摇匀， 将洗好的电极放在被测溶液中。轻轻摇匀， 待读数稳定后记录数据， 待读数稳定后记录数据，即为氯霉素注射 液的PH值 重复上述操作，平行测定3次 液的 值。重复上述操作，平行测定 次， 记录显示的PH值 取平均值。 记录显示的 值，取平均值。 测定完毕，关上电源开关，取下电极， ④测定完毕，关上电源开关，取下电极，用 蒸馏水洗净电极，将玻璃泡浸在饱和氯化 蒸馏水洗净电极， 钠溶液中，收好。 钠溶液中，收好。
氯霉素眼药水的高效液相色谱分析
靠性。
通过高效液相色谱分析，可 以建立氯霉素眼药水产品的 质量标准和控制方法，为产 品的注册和上市提供科学依 据和技术支持。
THANKS
感谢观看
氯霉素眼药水一般采用滴眼的方式给药，使用时需遵医嘱，避免长期使用或滥用 ，以免产生耐药性和副作用。
高效液相色谱分析简介
高效液相色谱分析是一种常用的分离和检测方法，具有分离效果好、灵敏度高、应用范围广等优点。 它通过高压泵将不同成分的混合物注入色谱柱，利用不同成分在固定相和流动相之间的分配系数差异 进行分离，再通过检测器进行检测和定量分析。
氯霉素眼药水的高效液相 色谱分析
• 引言 • 氯霉素眼药水的制备 • 高效液相色谱分析方法 • 氯霉素眼药水的HPLC图谱分析 • 结果与讨论 • 结论
01
引言
氯霉素眼药水简介
氯霉素眼、 角膜炎等。氯霉素具有抗菌谱广、作用强等特点，对于革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌都有较好的抑制作用。
回收率和线性范围
通过添加不同浓度的氯霉素标准品到 氯霉素眼药水中，可以测定方法的回 收率和线性范围，从而评估该方法在 实际应用中的适用性和可靠性。
与其他方法的比较
与微生物学方法的比较
将高效液相色谱法与微生物学方法进行比较，可以评估两种方法在测定氯霉素眼药水中的氯霉素含量时的准确性 和可靠性。
与其他色谱方法的比较
通过不断优化制备工艺，可以提高氯霉素眼药水的生产效率和产品质量， 降低生产成本，提升市场竞争力。
对质量控制的意义
高效液相色谱分析为氯霉素 眼药水提供了有效的质量控 制手段，可以确保产品的质
量和安全性。
分析结果可以用于监控生产 过程中的质量控制情况，及 时发现并解决潜在的质量问 题，保证产品的稳定性和可
通过高效液相色谱分析，可 以建立氯霉素眼药水产品的 质量标准和控制方法，为产 品的注册和上市提供科学依 据和技术支持。
THANKS
感谢观看
氯霉素眼药水一般采用滴眼的方式给药，使用时需遵医嘱，避免长期使用或滥用 ，以免产生耐药性和副作用。
高效液相色谱分析简介
高效液相色谱分析是一种常用的分离和检测方法，具有分离效果好、灵敏度高、应用范围广等优点。 它通过高压泵将不同成分的混合物注入色谱柱，利用不同成分在固定相和流动相之间的分配系数差异 进行分离，再通过检测器进行检测和定量分析。
氯霉素眼药水的高效液相 色谱分析
• 引言 • 氯霉素眼药水的制备 • 高效液相色谱分析方法 • 氯霉素眼药水的HPLC图谱分析 • 结果与讨论 • 结论
01
引言
氯霉素眼药水简介
氯霉素眼、 角膜炎等。氯霉素具有抗菌谱广、作用强等特点，对于革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌都有较好的抑制作用。
回收率和线性范围
通过添加不同浓度的氯霉素标准品到 氯霉素眼药水中，可以测定方法的回 收率和线性范围，从而评估该方法在 实际应用中的适用性和可靠性。
与其他方法的比较
与微生物学方法的比较
将高效液相色谱法与微生物学方法进行比较，可以评估两种方法在测定氯霉素眼药水中的氯霉素含量时的准确性 和可靠性。
与其他色谱方法的比较
通过不断优化制备工艺，可以提高氯霉素眼药水的生产效率和产品质量， 降低生产成本，提升市场竞争力。
对质量控制的意义
高效液相色谱分析为氯霉素 眼药水提供了有效的质量控 制手段，可以确保产品的质
量和安全性。
分析结果可以用于监控生产 过程中的质量控制情况，及 时发现并解决潜在的质量问 题，保证产品的稳定性和可
氯霉素注射液ph值与含量测定
背景知识
氯霉素是由委内瑞拉链丝菌产生 的抗生素。
氯霉素注射液为氯霉素的灭菌溶 液，含氯霉素(C11H12Cl2N2O5) 应为标示量的90%—110%,也就 是浓度为0.125g/ml.PH值为4.57.5。氯霉素注射液为无色或微带 黄绿色的液体。
药理作用
氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用， 包括氧格兰阴性菌及格兰阳性菌、厌氧菌、 立克次体属，螺旋体和衣原体属。
仪器：PHS—25型酸度计，塑料 洗瓶一只，蒸馏水，已知PH值的 标准缓冲溶液，PH试纸，电子天 平，722型紫外可见分光光度计， 1cm比色皿，10ml吸量管，25ml 容量瓶，100ml容量瓶。
试剂：氯霉素注射液，标准氯霉 素
实验步骤
PH值的测定： 1预热：开启酸度计电源，预热30分
钟，连接电极在读数开关放开的情况 下调零。
氯霉素注射液对下列细菌具杀伤作用：流感 杆菌，肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。
对以下细菌仅具抑菌作用：金黄色葡萄球菌、 化脓性链球菌、草绿色链球菌、B组溶血性 链球菌，大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，奇异变 形杆菌，伤寒沙门菌，副伤寒沙门菌，志贺 菌属，脆弱拟杆菌等厌氧菌。
实验目的
知道直接电位法测PH值的基本原 理。
phph值测定值测定11用蒸馏水淋洗电极并用滤纸吸用蒸馏水淋洗电极并用滤纸吸干再用待测的氯霉素注射液冲洗电干再用待测的氯霉素注射液冲洗电22将电极浸入氯霉素注射液中轻将电极浸入氯霉素注射液中轻轻摇匀待读数稳定后记录数据即轻摇匀待读数稳定后记录数据即为氯霉素注射液的为氯霉素注射液的phph值
氯霉素PH值及含量检测
2、快速测样，快速清洗！ 3、测样时电极不能碰到容器壁 。 4、可见-紫外分光光度法使用的吸
收池必须洁净，并注意配对使用。 量瓶、移液管均应校正、洗净后使 用。
氯霉素含量的测定
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定原理：〈1〉
〈2〉再用紫外分光光度法测其含 量
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素标准溶液的配制 •准确称取氯霉素标准品0.05g,用丙二 醇溶液40%溶解至100ml,配成浓度为 500微克/ml的标准储备液. •或找到已知氯霉素含量的氯霉素注射 液作为标准液
氯 霉 素 注 射 液 PH 值 的 测 定
pH值 应为5.0～7.5 （中国药典1985年版二部附录33页）
氯霉素注射液PH值测定方案
•用PH计测定PH值
•Ph计的原理：是将一支电极与被测物质活度有 关的电极（称指示电极）和另一支电位已知且保 持恒定的电极（称参比电极）插入待测溶液中组 成一个化学电池，在零电流的条件下，通过测量 电池电动势，进而根据能斯特求出待测液ph值。
氯霉素注射液PH值和含量检测
选用0.1mol/L的乙酸和乙酸钠
可由上式得出V乙酸钠：V乙酸=1.77827 从而可以得出PH为5.5的标准缓冲溶液
同理可得
PH为6.8和7.2的缓冲溶液
氯霉素注射液PH值和含量检测
PH计的校正 1. 预热：开电源，预热30分 钟，连接电极有读数开关 开放的情况下调0。 2. 定位：由产品说明书知注 射液的PH为5.0-7.5，将电 极浸入PH为6.8的缓冲溶 液中，轻轻摇匀，待读数 稳定后，调定位旋扭使其 读数为6.8，重复2~3次
O2 N
H2NHN
H NH2 OH H OH HIO4
O2 N O
O2 N
NO2
O2N
NO2 N N H
NO2
p-nitrophenyl-2aminopropan-1,3-diol
p-nitrobenzaldchyde
氯霉素注射液PH值与含量分析方案
注意事项
（1）仪器的输入端（即测量电极插口）必须保持清洁干燥，不用时应将短路 插上，以防灰尘及高湿侵入。在环境湿度较高的场所使用时，应将电极插头 用干净的纱布擦干。 （2）测量电极输入端短路插头，在仪器使用时应妥善保管，注意防潮防污染。 （3）测量时，电极的引入导线需保持静止，否则会引起测量不稳定。 （4） 关于复合电极： Ø 经长期的使用,如发现斜率略有减低,则可把电极球泡浸在4%HF(氢氟 酸)中3—5秒钟,用蒸馏水洗净后在氯化钾溶液中浸泡使之复新. Ø 电极在测量过程中反映迟钝及漂移不定的情况下应调换电极. Ø 被测溶液中如含有易污染敏感球泡或堵塞液接界的物质,使电极钝化和 梯度下降,或读数不准,应根据污染物质的性质,选用适当的溶液清洗,使之复新 (电极一年后应更新). （5）洗手池内的溶液不可装的过满以免溅出，腐蚀吸收架和仪器。装入水后， 池内不可有气泡。
仪器与试剂
仪器：PHS-2C型（或其他型号）酸度计及配套复合电极，塑料烧杯 50ml 3只 752型紫外光分光光度计（或其他型号）1cm比色皿 10ml的吸量管 25ml容量瓶 100ml容量瓶
试剂：pH标准缓冲溶液（pH=4.00，pH=6.86和pH=9.18），氯霉素 注射液，标准氯霉素
当pH玻璃－甘汞电极对分别插入pHS标准缓冲溶液和pHx未知溶液中，电动 势ES和Ex分别为 ES=K+0.059pHS(25℃)
Ex=K+0.059pHx(25℃)
两式相减，得（25℃）
2.紫外可见分光光度法测含量的原理
许多有机化合物在紫外区具有特征的吸收光谱，因此可用紫外分光光度法对有机物质 进行定性鉴定，结构分析及定量测定．紫外分光光度法定量测定的依据是比耳定律。 首先确定化合物的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。在选定的波长下，作出化合物 溶液的工作曲线，根据在相同条件下测得待测液的吸光度值来确定待测液中化合物的 含量。 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光 能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各 自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因 此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波 长处的吸光度的高低判别或 测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基 础。分光光度分析就是根据物质的吸 收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用 的有效手段。 紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定 浓度 的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比
氯霉素含量及ph值的测定
能够利用所学知识来设计并独立完成实验法案。
*
实验原理
测定溶液的pH值，通常用玻璃电极做指示电极，饱和甘汞电极做参比电极（SCE），与待测溶液组成原电池，在一定的实验条件下，原电池的电动势与溶液的电动势的pH之间的关系符合能斯特方程式，即： E=K’+0.0592pH（t=25。C） 本实验采用比较法来测定氯霉素注射液的pH值。 紫外分光光度法测定氯霉素含量的原理是朗伯比尔定律，即： A=kcb 即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度呈线性关系。且同一物质的吸收曲线相似，最大吸收波长相等，浓度越大，吸收强度越大，不同物质吸收曲线不
将上述配制好的不同浓度的标准氯霉素溶液，各吸取5ml,和供试液5ml,用紫外分光光度计于Xmax处测定吸光度并记录数据，绘制工作曲线。
数据记录与处理
附图表如右侧
用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在260-290nm间，每隔5nm测量一次吸光度，在峰值附近每隔2nm测量一次。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准吸收曲线，确定最大吸收波长为Xmax.
*
数据处理
绘制出标准工作曲线，并校正工作曲线，得到一个A-C的关系式，即可求出供试品的浓度，并求出含量。
*
Company LOGO
根据质量标准，供试品氯霉素注射液的pH值是否符合标准？
根据质量标准，供试品氯霉素注射液的含量是否符合标准？
含量检测
*
Thank You!
*
实验仪器与器材
复合电极
紫外分光光度计
Description of the contents
Description of the contents
*
比色皿，吸量管
容量瓶（25，100ml）
分析天平
*
实验原理
测定溶液的pH值，通常用玻璃电极做指示电极，饱和甘汞电极做参比电极（SCE），与待测溶液组成原电池，在一定的实验条件下，原电池的电动势与溶液的电动势的pH之间的关系符合能斯特方程式，即： E=K’+0.0592pH（t=25。C） 本实验采用比较法来测定氯霉素注射液的pH值。 紫外分光光度法测定氯霉素含量的原理是朗伯比尔定律，即： A=kcb 即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度呈线性关系。且同一物质的吸收曲线相似，最大吸收波长相等，浓度越大，吸收强度越大，不同物质吸收曲线不
将上述配制好的不同浓度的标准氯霉素溶液，各吸取5ml,和供试液5ml,用紫外分光光度计于Xmax处测定吸光度并记录数据，绘制工作曲线。
数据记录与处理
附图表如右侧
用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在260-290nm间，每隔5nm测量一次吸光度，在峰值附近每隔2nm测量一次。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准吸收曲线，确定最大吸收波长为Xmax.
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数据处理
绘制出标准工作曲线，并校正工作曲线，得到一个A-C的关系式，即可求出供试品的浓度，并求出含量。
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Company LOGO
根据质量标准，供试品氯霉素注射液的pH值是否符合标准？
根据质量标准，供试品氯霉素注射液的含量是否符合标准？
含量检测
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Thank You!
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实验仪器与器材
复合电极
紫外分光光度计
Description of the contents
Description of the contents
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比色皿，吸量管
容量瓶（25，100ml）
分析天平
复方氯霉素溶液中氯霉素及水杨酸含量的测定
， 取 １ ｌ 分 别 加 人 各 ｍ， １０ 容量瓶 中 ， 流 动 相 稀 释 至 刻 度 ， ｌ ｌ ０ｍｌ 加 取 ０ 进
ｍ， ｇ水杨酸标准 品２ ５０ ｇ分别置于 １０ ｌ ０ ．ｒ ， ａ ０ ｍ 容量瓶
中 ， 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 别 得 含 氯 霉 素 加 分
１ 仪器 与试 剂
１２３７，１０２ ，１０４ ，１７ ０ 。按 １ 结 果 １１４ １２０ １１ １３４ １１１６ Ｏ次
计算 ， 氯霉素 Ｒ Ｄ＝ ．％ ， Ｓ ０７ 水杨酸 Ｒ Ｄ＝ ．％。 Ｓ ０６
２ ５ 回收率 测定 ． 按 复 方 氯霉 素 溶 液 制剂 规 范 配
制 含标示 量 ８ ％ 、０ ％ 、２ ％各 １０ ｌ ０ １０ １０ ０ ｍ 。各取 ｌ ｌ ｍ，
２８ ｇｍ 范围内呈 良好 的线性关 系。 以标 准品溶 液 ０ ／／ ｌ ￣
复方 氯 霉 素溶 液 中氯霉 素 及 水杨 酸含 量 的测 定
杨建 忠 赵 国忠
中水杨酸浓度 Ｃ ｇｎ ） 水（ ／ｄ 与相对应 的峰面积 Ａ进 行
线性 回归 ， 得线 性 回归 方 程 ： ＝１８ Ｃｌ ． １×１ ×Ａ一 ７ ｃ ０
０７ ） ．％ ；水 杨 酸 ：１３８７ １２６ ，１１４２ １２６ ，１２３ ９ １４ ０ ，
复方氯霉素溶液是本院皮肤科常用制剂。该制 剂现有 的含量测定方法 流动相配制复杂， 试剂不易
购买 ， 在检 测 过 程 中拖 尾 现 象 严 重 。笔 者参 考 文 且
１２ ５ ８ １３ ７ ７ Ｒ Ｄ＝ ． ％ ） １２ ２ ，１０ ８ （ Ｓ ０ ７ 。置室 温 隔 日同法
氯 霉 素 、 杨 酸 的含 量 水 ％
ｍ， ｇ水杨酸标准 品２ ５０ ｇ分别置于 １０ ｌ ０ ．ｒ ， ａ ０ ｍ 容量瓶
中 ， 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 别 得 含 氯 霉 素 加 分
１ 仪器 与试 剂
１２３７，１０２ ，１０４ ，１７ ０ 。按 １ 结 果 １１４ １２０ １１ １３４ １１１６ Ｏ次
计算 ， 氯霉素 Ｒ Ｄ＝ ．％ ， Ｓ ０７ 水杨酸 Ｒ Ｄ＝ ．％。 Ｓ ０６
２ ５ 回收率 测定 ． 按 复 方 氯霉 素 溶 液 制剂 规 范 配
制 含标示 量 ８ ％ 、０ ％ 、２ ％各 １０ ｌ ０ １０ １０ ０ ｍ 。各取 ｌ ｌ ｍ，
２８ ｇｍ 范围内呈 良好 的线性关 系。 以标 准品溶 液 ０ ／／ ｌ ￣
复方 氯 霉 素溶 液 中氯霉 素 及 水杨 酸含 量 的测 定
杨建 忠 赵 国忠
中水杨酸浓度 Ｃ ｇｎ ） 水（ ／ｄ 与相对应 的峰面积 Ａ进 行
线性 回归 ， 得线 性 回归 方 程 ： ＝１８ Ｃｌ ． １×１ ×Ａ一 ７ ｃ ０
０７ ） ．％ ；水 杨 酸 ：１３８７ １２６ ，１１４２ １２６ ，１２３ ９ １４ ０ ，
复方氯霉素溶液是本院皮肤科常用制剂。该制 剂现有 的含量测定方法 流动相配制复杂， 试剂不易
购买 ， 在检 测 过 程 中拖 尾 现 象 严 重 。笔 者参 考 文 且
１２ ５ ８ １３ ７ ７ Ｒ Ｄ＝ ． ％ ） １２ ２ ，１０ ８ （ Ｓ ０ ７ 。置室 温 隔 日同法
氯 霉 素 、 杨 酸 的含 量 水 ％
氯霉素的药物分析
• 有关物质
目前各国药典均采用HPLC法检测 精密称取本品适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素
加甲醇1ml）使溶解后，用流动相定量稀释制成每1ml 中含0.5mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另精密 称取氯霉素二醇对照品与对硝基苯甲醛对照品适量， 加甲醇适量（每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml）使溶 解，用流动相定量稀释制成每1ml中含氯霉素二醇物 5µg与对硝基苯甲醛3µg的混合溶液，作为杂质对照品 溶液。
摇匀，密封，作为系统适用性试验溶液；精密量 取对照品贮备液1ml置顶空瓶中，精密加供试品贮 备液2ml，摇匀，密封，作为对照品溶液，
• 照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P第二法）测定，以 6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相 近）为固定液的毛细管柱为色谱柱，起始温度为 40℃，维持10分钟，再以每分钟10 ℃的速率升至 200 ℃，维持4分钟；进样口温度为250 ℃；检测 器温度为300 ℃；顶空平衡温度为85 ℃，平衡时 间为45分钟。取系统适用性试验溶液顶空进样， 洗脱顺序依次为：乙醇、氯苯，各色谱峰之间的
4.紫外吸收 本类抗生素分子内具苯环含有共轭双键
系统，在紫外光区有吸收。在277nm波长处 有最大吸收。
5.氧化性 氯霉素含有对硝基苯基，其中硝基具
有氧化性，可以将其还原成胺基。
二 鉴别试验
1.色谱法
高效液相色谱法 ChP采用高效液相色谱法鉴别氯霉
素，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰 的保源自时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
THE END
分离度应符合要求，取对照品溶液顶空进样，计
算数次连续进样结果，相对标准偏差不得过 5.0%。取供试品溶液与对照溶液分别顶空进样， 记录色谱图，用标准加入法以峰面积计算，均应 符合规定。
氯霉素及分析方法
1 绪论1.1 引言随着社会经济的快速发展和人民生活水平的提高，动物源性食品在人们生活中所占比例越来越大，部分不法养殖户为追求经济效益最大化，不同程度的在饲料中添喂人用抗生素，使畜禽肉品中抗生素残留严重，成为的食品安全的重要问题之一。
各国政府严格限制食品中各种有害成分，特别是抗生素、农药残留等。
食品安全检测是保障食品安全的基础，是监督管理的重要手段。
为了有效地保障食品安全，就必须对食品安全中的各类样品进行准确地分析测定。
目前食品安全检验部门通常采用气相色谱、液相色谱等分析仪器。
然而使用这些仪器进行分析测定前，必须把样品制成溶液。
由于食品样品具有被测物浓度低、组分复杂、干扰物质多、易受环境影响而变化等特点，因此要获得数据准确、重现性好的分析结果，样品预处理是重要环节。
样品预处理已成为分析化学领域中一个重要的分支，传统的样品预处理方法有液-液萃取、索氏提取、层析、蒸馏、吸附、离心、过滤等几十种。
这些方法一般要使用大量的有机溶剂，而且处理时间长、操作步骤复杂，容易导致样品损失和玷污，产生较大误差。
因此，迫切需要探索高准确度、快速、简单、不使用或少使用有机溶剂的样品预处理方法，发展较快的有固相萃取、固相微萃取等。
固相萃取技术以其高效性、高选择性、高自动化程度以及低耗性等特点被广泛地应用在生物医学、食品分析、环境分析等领域[1]，其关键是优良的固相萃取材料的制备。
因此制备选择性高的固相萃取材料已为研究的热点。
1.2 氯霉素样品预处理及检测方法1.2.1 氯霉素类抗生素来源及危害我国是一个养殖大国，近年来养殖业飞速发展。
由于集约化的高密度养殖、珍贵品种引进、使用催生长激素、环境污染等因素导致了养殖环境的恶化和畜禽疾病增加，又由于畜禽疾病防治体系的不健全和欠缺用药指导和规范管理，在养殖业中滥用抗生素现象严重。
比如不遵守休药期、超剂量使用、超范围使用违反国家法规规定等等，从而造成动物源食品中的抗生素的残留。
这部分残留抗生素就转移到了人们体内，这会使人产生对抗生素的抗性，从而影响以后用药的效果。
氯霉素的药物分析
4.紫外吸收 本类抗生素分子内具苯环含有共轭双键 系统，在紫外光区有吸收。在277nm波长处 有最大吸收。 5.氧化性 氯霉素含有对硝基苯基，其中硝基具 有氧化性，可以将其还原成胺基。
二 鉴别试验
1.色谱法
ChP采用高效液相色谱法鉴别氯霉 素，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰 的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
• 照含量测定项下的色谱条件，取杂质对照 品溶液10µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏 度，使氯霉素二醇物峰的峰高约为满量程 的25%；精密量取供试品溶液与杂质对照品 溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色 谱图，按外标法以峰面积计算，含氯霉素 二醇物不得过1.0%，含对硝基苯甲醛不得 过0.5%。
● 本品分子中的硝基经锌粉还原成羟胺衍生物，在乙酸钠存在下
与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与高铁离子生成 紫红色的络合物。
例：ChP(2010) 取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化钙溶液 3ml与锌粉50mg置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰
●
取氯霉素1ml，加氢氧化钠的乙醇溶液2ml， 再加硝酸2ml，加硝酸银3滴，生成白色沉 淀，沉淀加氨试液溶解，再加硝酸银5滴， 沉淀复生（氯离子的鉴别）。
四 含量测定
氯霉素的含量测定主要 用的是HPLC，除此之外还可 以用UV、TLC、LC/MS等方法
高效液相色谱
• 色谱条件 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（磷酸 二氢钾6.8g 0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀 释，加三乙胺5ml，磷酸调节pH值至2.5） 检测波长：277nm 对照品：氯霉素
• 照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P第二法）测定，以 6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相近） 为固定液的毛细管柱为色谱柱，起始温度为40℃， 维持10分钟，再以每分钟10 ℃的速率升至200 ℃， 维持4分钟；进样口温度为250 ℃；检测器温度为 300 ℃；顶空平衡温度为85 ℃，平衡时间为45分 钟。取系统适用性试验溶液顶空进样，洗脱顺序 依次为：乙醇、氯苯，各色谱峰之间的分离度应 符合要求，取对照品溶液顶空进样，计算数次连 续进样结果，相对标准偏差不得过5.0%。取供试 品溶液与对照溶液分别顶空进样，记录色谱图， 用标准加入法以峰面积计算，均应符合规定。
氯霉素制剂标准中含量测定应采用微生物检定法
氯霉素制剂标准中含量测定应采用微生物检定法《中国药典》2005年版已将氯霉素及制剂标准中的含量测定项由原来的紫外分光光度法改为HPLC法，但还是缺乏对氯霉素与合霉素（氯霉素的D-苏型消旋体，其抗菌作用仅及氯霉素的一半）有效鉴别。
建议增加抗生素微生物检定法，控制氯霉素制剂的含量和临床有效性。
杜绝以合霉素冒充氯霉素。
标签：氯霉素制剂；微生物检定法《中国药典》2005年版已将氯霉素及制剂标准中的含量测定项由原来的紫外分光光度法改为HPLC法，该方法与原来的UV法相比，具有能有效控制杂质及有关物质的作用，同时HPLC法比紫外分光光度法更具有专属性，可以直接区分氯霉素、琥珀氯霉素和无味氯霉素，在有效控制氯霉素产品质量方面，向前迈进了一步。
但该方法还不能区分氯霉素与合霉素。
由于氯霉素的化学结构分子中C-1和C-2是两个手性中心，因而它的光学异构体共有4种。
这4种异构体为两对对映异构体，其中一对的构型为D-苏型（或称1R，2R型）和L-苏型（或称1S，2S型）；另一对为D-赤型（或称1R，2S型）和L-赤型（或称1S，2R型）。
未经拆分的苏型消旋体即为合霉素（Syntomycin），抗菌活性为氯霉素的一半，副作用大，对造血系统有抑制，严重时会导致再生障碍性贫血，甚至导致死亡。
2005版药典收载的氯霉素为D-苏型，其他三种立体异构体均无疗效，且毒性大。
1982年合霉素就已被卫生部淘汰。
2005年版的中国药典收载的氯霉素，其原料标准方法，很严密，可以有效控制氯霉素的质量，但制剂（片剂）的检验方法就存在缺陷。
1 片剂检验方法的缺陷其[鉴别](1) 取本品1 片，除去包衣后，研细，加乙醇10 ml，振摇，使氯霉素溶解，滤过，滤液蒸干，加稀乙醇1 ml 溶解后，加1%氯化钙溶液3 ml 与锌粉50 mg，置水浴上加热10 min，倾取上清液，加苯甲酰氯约0.1 ml，立即强力振摇1 min，加三氯化铁试液0.5 ml 与氯仿2 ml，振摇，水层显紫红色。
温度对氯霉素注射液含量测定影响探讨
温度对氯霉素注射液含量测定影响探讨张力增;江旺明;陈琪【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2001(13)2【摘要】@@卫生部药品标准收载的氯霉素注射液的含量测定方法为中国药典规定的微生物检定法,检定菌为藤黄八叠球菌[CMCC(B)28001],在pH值6.0的磷酸盐缓冲液和pH值6.5～6.6的Ⅱ号培养基中进行含量测定,培养皿规定在35～37℃中培养,按上述条件进行检定,边界容易模糊不清,有时还会产生双圈现象,给测量带来困难,影响检验结果的准确性,而且多次检验结果表明,在现有的检验条件下检验的平均可信限率经常容易超过5%,对在临界值旁的检品难以作出判定.我们通过对多批样品进行多次试验,试验的结果表明,氯霉素注射液的微生物检定法采用培养温度为39℃,在其他检定条件不变的情况下,检定指标包括抑菌圈的直径,高低剂量抑菌圈边缘清晰度以及可信限率均可达到要求,并且优于现行标准检验下的检定指标,调整温度后测定的含量测定结果与未调整时的含量结果比较,两者之间的误差均在允许范围内.【总页数】1页(P20)【作者】张力增;江旺明;陈琪【作者单位】龙岩市药品检验所,;龙岩市药品检验所,;龙岩市药品检验所,【正文语种】中文【中图分类】R944.1+1;R927.2【相关文献】1.稻谷储存水分和温度对真菌生长和稻谷主要品质的影响探讨 [J], 苏升畅2.试验条件对纺织品甲醛含量测定的影响探讨 [J], 潘勇华;卢鸯;姚伟民;黄一彤;戴寅3.稻谷储存水分和温度对真菌生长和稻谷主要品质的影响探讨 [J], 苏升畅;4.干燥温度对中药丸剂溶散时限的影响探讨 [J], 张伟5.环境温度对风压传感器精确度的影响探讨 [J], 文昌山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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适应症状
1．伤寒和其他沙门菌属感染：为敏感菌株所致伤寒、副伤寒的选用 药物，由沙门菌属感染的胃肠炎一般不宜应用本品，如病情严重，有 合并败血症可能时仍可选用。
2．耐氨苄西林的B型流感嗜血杆菌脑膜炎或对青霉素过敏患者的肺炎 链球菌、脑膜炎奈瑟菌脑膜炎、敏感的革兰阴性杆菌脑膜炎，本品可 作为选用药物之一。 脑脓肿
试剂：pH标准缓冲溶液（pH=4.00，pH=6.86和pH=9.18），氯霉素 注射液，标准氯霉素
实验步骤
1、PHS-2C型酸度计的组装 1）开机准备 将电源线插入电源插座。按下电源开关，电源接通后，
将仪器预热20~30 min。 2）仪器组装 PHS-2C型酸度计由机体、电极夹、输入端短路插头、
用法用量
稀释后静脉滴注。 成人一日2～3g，分2次给予； 小儿按体重一日25～50mg/kg，分3～4次给予； 新生儿一日不超过25mg/kg，分4次给予。
孕妇及哺乳期妇女用药
由于氯霉素可透过胎盘屏障，对早产儿和足月产新生儿均可能引起毒性反应，发生 “灰婴综合征”，因此在妊娠期，尤其是妊娠末期或分娩期不宜应用本品。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定 浓度 的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比
仪器与试剂
仪器：PHS-2C型（或其他型号）酸度计及配套复合电极，塑料烧杯 50ml 3只 752型紫外光分光光度计（或其他型号）1cm比色皿 10ml的吸量管 25ml容量瓶 100ml容量瓶
氯霉素注射液PH值与含量分析方案
组员：王正 汤友祥 朱勇 郑晓峰 徐娇艳
指导老师：陈芬
项目背景
氯霉素 化学名称：D-苏式-(-)-N-[a-(羟基甲 基)-b-羟基-对硝基苯乙基]-2，2-二氯乙酰胺。
分子式： C11H12Cl2N2O5药。有广谱抑菌
氯霉素注射液对下列细菌具杀菌作用： 流感杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。 对以下细菌仅具抑菌作用： 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、草绿色链球菌、B组溶血性链球菌、大肠
杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、志贺 菌属、脆弱拟杆菌等厌氧菌。 下列细菌通常对氯霉素耐药：铜绿假单胞菌、不动杆菌属、肠杆菌属、粘 质沙雷菌、吲哚阳性变形杆菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌和肠球菌属。 氯霉素注射液属抑菌剂。氯霉素为脂溶性，通过弥散进入细菌细胞内，并 可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚基上，使肽链增长受阻（可能由于抑制 了转肽酶的作用），因此抑制肽链的形成，从而阻止蛋白质的合成。氯霉 素注射液为无色或微带黄色的澄明液体
老年患者用药
老年患者组织器官大多退化，功能减退，自身免疫功能亦降低，氯霉素可致 严重不良反应，故老年患者应慎用。
实验目的
1.应用直接电位法测氯霉素注射液PH值 2.应用紫外可见分光光度法测氯霉素注射液
的含量
实验原理
1.pH值的直接电位法测定原理
以pH玻璃电极作指示电极，甘汞电极作参比电极，插入溶液中即组成测定pH 值的原电池。在一定条件下，电池电动势E是试液中pH值的线性函数。测量 E时，若参比电极（甘汞电极）为正极，则
作用。用于伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、 流感杆菌、布氏杆菌、脑膜炎球菌、链球菌、 肺炎球菌等感染，对多种厌氧菌感染有效，亦 可用于立克次体感染。有引起粒细胞缺乏症及 再生障碍性贫血的可能，有时可引起精神症状， 长期应用可引起二重感染，新生儿、早产儿用 量过大可发生灰色综合症。
药理作用
氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用，包括需氧革兰阴性菌及革兰阳 性菌、厌氧菌、立克次体属、螺旋体和衣原体属。
E=K+0.059pH(25℃)
当pH玻璃－甘汞电极对分别插入pHS标准缓冲溶液和pHx未知溶液中，电动 势ES和Ex分别为
ES=K+0.059pHS(25℃)
Ex=K+0.059pHx(25℃)
两式相减，得（25℃）
2.紫外可见分光光度法测含量的原理
许多有机化合物在紫外区具有特征的吸收光谱，因此可用紫外分光光度法对有机物质 进行定性鉴定，结构分析及定量测定．紫外分光光度法定量测定的依据是比耳定律。 首先确定化合物的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。在选定的波长下，作出化合物 溶液的工作曲线，根据在相同条件下测得待测液的吸光度值来确定待测液中化合物的 含量。
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光 能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各 自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因 此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波 长处的吸光度的高低判别或 测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基 础。分光光度分析就是根据物质的吸 收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用 的有效手段。
3．脑脓肿，尤其耳源性，常为需氧菌和厌氧菌混合感染。 4．严重厌氧菌感染，如脆弱拟杆菌所致感染，尤其适用于病变累及
中枢神经系统者，可与氨基糖苷类抗生素联合应用治疗腹腔感染和盆 腔感染，以控制同时存在的需氧和厌氧菌感染。 5．无其他低毒性抗菌药可替代时治疗敏感细菌所致的各种严重感染， 如由流感嗜血杆菌、沙门菌属及其他革兰阴性杆菌所致败血症及肺部 感染等，常与氨基糖苷类联合。 6．立克次体感染，可用于Q热、落矶山斑点热、地方性斑疹伤寒等 的治疗。
复合电极、电极杆、电源线、保险丝0.1A（F5×20，一般已装入机 体）七个部分组成。组装时，首先把电极杆插入仪器右侧电极杆孔内 旋紧，然后把塑料电极夹二孔对准装在电极杆上，拔去电极保护套， 把电极固定在电极夹上，然后旋去输入端短路插头，旋上电极插头。 短路插在不用时应妥善保管好，仪器使用完毕再旋上。电极下端的玻 璃球泡较薄，当心碰坏。
氯霉素注射液自乳汁分泌，有引致哺乳婴儿发生不良反应的可能，包括严重的骨髓 抑制反应，因此本品不宜用于哺乳期妇女，必须应用时应暂停哺乳。
儿童用药
新生儿由于肝脏酶系统未发育成熟，肾脏排泄功能又差，药物自肾排泄较成人 缓慢，故氯霉素应用于新生儿易导致血药浓度过高而发生毒性反应（灰婴综合 征），故新生儿不宜应用本品，有指征必须应用本品时，如有条件应在监测血 药浓度条件下使用。