TR-021-50细菌内毒素检查原始记录
细菌内毒素无菌检验记录范本
【细菌内毒素】标准规定：
仪器型号：编号：
保温时间（~ ）保温温度：℃
反应结果
结论：符合规定（）不符合规定（）检验人/日期：
【无菌】标准规定：应符合规定
紫外消毒时间～
供试品用量：
将本品用0.9%氯化钠溶液溶解后，转移至500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，用薄膜过滤后检查。
淋洗液：名称pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液批号用量ml
需气、厌气菌检查
培养基：名称硫乙醇酸盐流体培养基批号用量ml
培养温度℃
真菌检查
培养基：名称改良马丁培养基批号用量ml
培养温度℃
阳性对照菌：大肠埃希菌[CMCC（B）44102] 编号
仪器型号编号
培养时间：～
观察结果
结论：符合规定（）不符合规定（）检验人/日期：
【微生物限度】供试液制备：
检查方法：
【霉菌和酵母菌】。
微生物检验原始记录
检样2
检样3
检样4
检样5
校核：检验：
注：1、培养箱温度36±1℃;培养时间18-24小时；2.证实试验培养箱温度36±1℃;
培养时间24-48小时.产气打+,不产气打-
2
3
4
5
测定步骤：
计算公式：
备注：
样品名称
检验项目
大肠菌群
检验依据
GB 4789.3
仪器设备名称及编号
天平，编号:烘箱，编号：高压灭菌锅，编号：培养箱，编号：
大肠菌群
执行
标准
标准要求fu/ g
样品编号
大肠菌群cfu/ g
结果
单项判定
10-1
10-2
证实
Q/YLM
0001S
n:5
c:2
m:10
M:102
微生物检验原始记录
检验编号：检验日期：年月日
样品名称
检验项目
菌落总数
检验依据
GB 4789.2
仪器设备名称及编号
天平，编号:烘箱，编号：高压灭菌锅，编号：培养箱，编号：
菌
落
总
数
样品编号
执行标准
标准要求cfu/ g
试验数据（CFU/ml,g）
结果（CFU/ml,g）
结论
空白
1
n:5
c:2
m:1000
M:10000
细菌内毒素检验记录
细菌内毒素检验记录检品名称批号批量检品规格检验依据检品来源检验日期完成日期试剂名称批号规格来源细菌内毒素工作品 EU细菌内毒素检查用水 ml鲎试剂EU/ml1、细菌内毒素工作标准品稀释：a、溶解：取 EU内毒素工作标准品，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底后启开备用，加细菌内毒素检查用水（BET水） ml复溶后置旋窝混匀器上混匀 min。
b、稀释：取上述细菌内毒素溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 ml BET水置旋窝混匀器上混匀 s，即得1EU/ml细菌内毒素溶液；取1EU/ml细菌内毒素溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 ml BET水置旋窝混匀器上混匀 s，即得ml（2λ内毒素阳性对照液）细菌内毒素溶液。
2、供试品溶液配制：取供试品溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 mlBET水置旋窝混匀器上混匀s，即得。
3、供试品阳性对照液配制：取供试品溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 mlBET水置旋窝混匀器上混匀s，取其溶液ml于2ml无内毒素空安瓿瓶中加入 ml 1EU/ml细菌内毒素溶液置旋窝混匀器上混匀 s，即得。
4、鲎试剂溶解：取 EU/ml鲎试剂，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底后启开加入BET水 ml，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。
保温仪器编号：保温温度：℃保温时间（～）反应结果：（细菌内毒素限值：应不得过3EU/ml）平行量编号鲎试剂+检查用水+检测液12阴性对照鲎试剂+检查用水+检查用水供试品鲎试剂+检查用水+供试品阳性对照鲎试剂+检查用水+λ阳性对照液供试品阳性对照鲎试剂+检查用水+λ供试品阳性液注：检验结果为阳性用“+”表示，阴性用“-”表示。
结果判定：符合规定口不符合规定口检验人：检验时间：。
细菌内毒素检查标准操作规程
细菌内毒素检查标准操作规程细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌毒素限值的确定。
（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。
其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C?L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
sop细菌内毒素检查操作规程
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6号、9号）、保鲜纸、试管（10×75 mm）、镊子（金属）、金属盒。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于2EU，不大于50EU。
4.2.3细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.2.4鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。
4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
细菌内毒素检验操作程序
目的：规范细菌内毒素检验操作程序。
范围：适用于细菌内毒素检查操作。
责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。
内容1准备工作1.1实验设备及用具1。
1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml、5ml）、药匙、250℃烘烤1小时。
1。
1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。
1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管1.2内毒素标准品与实验试剂1。
2。
1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。
1.2.2细菌内毒素检查用水（内毒素含量＜0.015Eu/mL灭菌注射用水）.1.2.3细菌内毒素国家标准品和工作标准品。
1.2。
4 75%乙醇、铬酸洗液.1。
3实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌内毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250℃干热灭菌至少60分钟。
1。
4恒温水浴箱内水浴温度调节到37±1℃。
2鲎试剂灵敏度复核2.1根据鲎试剂灵敏度的标示值(如：λ=0。
25 EU/ml），细菌内毒素工作标准品加入1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟.2.2将工作标准品制备成2λ、λ、0。
5λ、0.25λ四个浓度(0.5 EU/ml、0。
25 EU/ml、例：工作标准品为160 EU/ml 时30秒。
2。
3取18支0。
25 EU/ml 鲎试剂，每支中加入0。
1mlBET 水，然后分别加入0。
1ml2。
2中制备好的4个浓度的标准液,按浓度从高到低依次加入，每个浓度加4支，；最后2支加入0。
1mlBET 水作阴性对照。
2。
4将上述试管用医用胶布封口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟.放入水浴前把水搅动几下，以使水温均匀。
再次检查温度是否在所要求的范围，注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。
2.5保温结束后将试管轻轻取出，缓缓转到180°，若关内形成凝胶，不变形、不从管壁滑落者为阳性;未形成凝胶或形成凝胶变形从壁滑落者为阴性。
细菌内毒素检查操作规程
细菌内毒素检查操作规程1.目的：建立一个测定细菌内毒素的检查方法。
2.范围：适用于需测定细菌内毒素的药品等。
3.责任：质检科检验员对实施本规程负责。
4.程序4.1原理4.1.1本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1.2细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
4.1.3细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
4.1.4细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.1.5细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
4.1.6凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml 的灭菌注射用水。
光度测定法的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml 。
4.1.7试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。
常用的方法是在250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
试验操作过程应防止微生物的污染。
4.2供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH值在6.0 ～8.0 的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节pH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
4.3内毒素限值的确定4.3.1药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L = K/M式中：L——供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K ——人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg· h）表示，注射剂K＝5EU（/ kg·h），放射性药品注射剂K＝2.5EU/（kg·h），鞘内用注射剂K ＝0.2EU/ （kg·h）。
细菌内毒素检验SOP
干扰试验
表1凝胶法干扰实验溶液的制备
编号
配制内毒素的溶液浓度
稀释用液
当Ea在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5 Ea～2Ea（包括0.5 Ea和2Ea）时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。若供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对实验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺或环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
一般要求供试液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需要调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸，碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜缓冲液调节PH值。酸或碱溶液必须用细菌内毒素检查用水在已除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经验证不含内毒素和干扰因子。
检测
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检验
审核
日期
批准
日期
序号
作业内容及作业要项
参考图
检验方法：凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验：在本检查规定的条件下，使鲎试剂生产凝集内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
记录原始数据，填写检验报告。
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检查
细菌内毒素检查细菌内毒素检查1、实验原理2、实验试剂3、试验器具4、检查⽅法概述5、供试品溶液的制备6、内毒素限值的确定7、最⼤有效稀释倍数（MVD）的确定8、鲎试剂灵敏度复核9、⼲扰试验10、供试品的细菌内毒素检查1、实验原理：利⽤鲎试剂与微量内毒素产⽣凝聚反应的现象，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的⼀种⽅法。
细菌内毒素的量⽤内毒素单位（EU）表⽰。
2、实验试剂：①鲎试剂：从海洋⽆脊椎动物“鲎”的蓝⾊⾎液中提取的变形细胞溶解物，经低温冷冻⼲燥精制的⽣物制剂。
鲎试剂的⽣物活性以其能检出细菌内毒素的最低有效浓度表⽰，即鲎试剂的灵敏度，单位为EU/ml。
当使⽤新批号的鲎试剂或试验条件发⽣可能影响检验结果的改变时，应进⾏鲎试剂灵敏度复核试验。
②细菌内毒素国家标准品：系⾃⼤肠埃希菌提取精制得到的内毒素，⽤于标定细菌内毒素⼯作标准品和标定，仲裁鲎试剂灵敏度。
③细菌内毒素⼯作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，⽤于试验中鲎试剂灵敏度复核、⼲扰试验及各种阳性对照。
④细菌内毒素检查⽤⽔：指内毒素含量少于0.015EU/ml（⽤于凝胶法）或0.005 EU/ml （⽤于光度测定法），且对内毒素试验⽆⼲扰作⽤的灭菌注射⽤⽔。
3、实验器具：刻度吸管、凝聚管（10×75mm）、三⾓瓶、⼩试管（10×100mm）、试管架、洗⽿球、封⼝膜或⾦属试管帽、时钟、脱脂棉、吸⽔纸、剪⼑砂轮。
耐热器⽫常⽤⼲热灭菌法（250℃，30分钟以上）去除，塑料⽤具应选⽤⽆内毒素并且对试验⽆⼲扰的器械（⽬前多为⽆热源的⼀次性⽤品）。
4、检验⽅法概述①凝胶法：限量法、半限量法②光度测定法：浊度法（终点浊度法和动态浊度法）、显⾊基质法（终点浊度法和动态浊度法）凝胶法：最简单、经济、应⽤⼴泛、中国药典的“仲裁”⽅法，对⼲扰相对不敏感，较光度测定法不灵敏。
5、供试品溶液的制备某些供试品需进⾏复溶、稀释或在⽔性溶液中浸取制成供试品溶液。
细菌内毒素检查记录
备注
2.0λ
1.0λ
0.5λ
0.25λ
Nc
反应终点浓度X
重复管数
1
2
3
4
阳性用“+”表示，阴性（Nc）用“-”表示
公式：
λc=lg-1（∑x/4）
三：结论
本品按《中国药典（2005版）》检验，结果
复核员： 检验员 ：
编号:RSB80-01
鲎试剂购入、使用记录
购入日期
来 源
批 号
批数量
使用日期
使用人
使用数量
鲎试剂灵敏度复核检查记录
一、鲎试剂：
批号
标示灵敏度（Eu/ml）
λ= EU/ml
装量（ml/支）
0.1ml/支
检验日期
来源
报告日期
二、工作标准品：
细菌内毒素
标准品
细菌内毒素
检查用水
细菌内毒素标准品复溶的体积
为ml；
稀释方法：
批号
效价（Eu）
来源
三、反应结果（起止时间：至温度）
细菌内毒素
（Eu/ ml）
编号:RSB78-01
细菌内毒素检查记录
一、供试品：
检品名称
批号
检验日期
报告日期
检验目的
细菌内毒素检查
供试品溶液的制备：
二、鲎试剂：
批号
标示灵敏度（Eu/ml）
λ= EU/ml
装量（ml/支）
0.1ml/支
复核结果
λc= Eu/ml
来源
三、标准品：
细菌内毒素
标准品
细菌内毒素
检查用水
细菌内毒素标准品复溶的体积
为ml；
稀释方法：
细菌内毒素检查原始记录
0.1
---
---
---
---
---
---
2λ阳性对照液（ml）
--
---
---
---
0.1
0.1
---
---
2λ供阳对照液（ml）
---
---
---
---
---
---
0.1
0.1
检测结果
检测时间
至
标准规定
60±2分钟
测定温度
℃
标准规定
37℃±1℃
备注
“＋”表示为呈阳性、“－”表示为呈阴性
4、判定标准：将管拿出缓缓倒转180°度察，若管内形成凝胶，且凝胶不变形，不从管壁滑脱者
为阳性（＋）未形成凝胶或形成凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性（一）。
5.结果判定：□符合规定□不符合规定
检验者：复核者：
日期：日期：
细菌内毒素检查原始记录
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样பைடு நூலகம்名称
批号
样品来源
规格
检验依据
《中国药典》2010年版二部附录XI E
内毒素限值
1.细菌内毒素工作标准品：批号单位Eu/支。
制造厂家：湛江博康海洋生物有限公司□、湛江安度斯生物有限公司□。
鲎试剂：批号规格ml/支灵敏度：Eu/ml。
制造厂家：湛江博康海洋生物有限公司□、湛江安度斯生物有限公司□。
2.配制过程：2.1细菌内毒素工作标准品稀释步骤：取标准品1支加检查用水ml溶解
2.2供试品溶液的制备:
2.3供试品阳性对照液的制备：
3.操作过程：
名称管号
供试品溶液管
阴性对照管
阳性对照管
供试品阳性对照管
细菌内毒素检查法标准操作规程
细菌内毒素检查法标准操作规程目的：建立细菌内毒素检查的基本操作，为细菌内毒素检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：本标准适用于细菌内毒素检查的操作。
4.职责：QC细菌内毒素检查人员对本标准的实施负责。
5.程序：5.1. 定义：5.1.1.细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
5.1.2.细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
5.1.3.细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。
细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。
5.1.4.细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
5.2. 实验设备：电热干燥箱（50~300±1）℃、电热恒温水温箱。
实验用具：注射器(精度0.02ml)、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、注射器盒、时钟。
试剂：鲎试剂（其标示值用λ表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。
5.3. 用具除热原：试验中所用的试管、注射器、针头、金属直镊等冲洗干净，置电热干燥箱中（注射器、针头、金属直镊等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中），经250℃加热30分钟，除去热原。
5.4. 检查法：5.4.1.打开洁净工作台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面，打开恒温水温箱的开关，使水温恒定在（37±1）℃。
5.4.2.用75%酒精棉球擦手消毒。
5.4.3.内毒素阳性对照溶液的制备：5.4.3.1. 取内毒素工作标准品1支，用75%酒精棉球消毒瓶颈，用砂轮割开瓶颈。
实验室调查-细菌内毒素检查测试
问题和回答部分
序号
实验室调查人员：同检验人员对以下问题进行回顾
Yes
No
N/A
1
样品标识和储存是否正确？
□
□
□
2
样品包装容器和盖子是否完好无损？
□
□
□
3
检测所用样品量是否正确？
□
□
□
4
样品稀释是否正确？
□
□
□
5
样品反应条件是否正确？
□
□
□
6
检测用到的移液器是否在校准效期内？
□
□
□
7
检测用到的鲎试剂灵敏度是否正确？
□
16
？检测用的试管是否经过除热原？
□
□
□
17
检测用到的移液管是否经过除热原？
□
□
□
18
实验过程中是否用到了其它试剂，是否在有效期内？
□
□
□
19
检测前是否对仪器进行正确的清洁？
□
□
□
20
仪器是否在校验周期内？
□
□
□
21
检测过程中，仪器的使用方法是否正确？
□
□
□
22
检验人员是否按现行文件进行过培训？
□
□
□
□
8
使用的鲎试剂是否在有效期内？
□
□
□
9
使用的内毒素工作标准品是否在效期内？
□
□
□
10
使用的内毒素检查用水是否在效期内？
□
□
□
11
取样检测间隔是否正确？
□
□
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12
细菌内毒素检测方法介绍
样品内毒素检查
1、供试品最大有效稀释倍数的计算： C·L
MVD＝ λ
λ ：测试用鲎试剂灵敏度标示值(EU/ml)。 L：供试品细菌内毒素限值。 C：供试品浓度或供试品复溶后所得样品浓度。
当L单位为EU/ml（溶液）时，C的单位为1ml/ml；
当L单位为EU/mg或者EU/u时（抗生素原料），C的 单位为mg/ml或者u/ml。
实验材料及用具
1、仪器 2、器具
名称 天平 电热干燥箱 恒温水浴箱 水银或酒精温度计 漩涡混合器 计时器
器具分类
要求 感量0.1mg以下
～300℃ 37±1 ℃ ～100 ℃±1 ℃
/ 60min±1min
器具名称
反应试管
玻璃试管（外径10×75mm）、试管架、 小三角瓶或磨口瓶
移液器具 刻度吸管及洗耳球或移液器及无热原吸头
内毒素限值L：参考兽药典“每1000庆大霉素单位含 内毒素的量应小于0.5EU”，即 L＝0.5EU/1000U=0.0005EU/U
鲎试剂标示灵敏度λ：0.125EU/U
供试品最大稀释倍数
C·L 4000U/ml×0.0005EU/U
MVD＝
＝
＝160（倍）
λ
0.125EU/U
供试品溶液制备：
供试品 0.4ml 4000U/ml 1.0ml 1000U/ml 2.0ml 500U/ml 2.0ml 250U/ml
的内毒素标准溶液各 0.1ml,每一浓度做 4 个平行管，另 2 支加入 BET 水作为阴性对照。 应
反应条件：37±1℃保温 60±2min。
平 行 各标准液浓度（EU/ml）反应结果 阴性 反应终点浓度 C X
细菌内毒素定量测定原始记录
上海市药品检验所
细菌内毒素定量测定原始记录
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温度(℃)：相对湿度(%)：样品编号样品名称
批号规格
生产国及
厂家名称
检验依据
检验方法□动态浊度法□动态显色基质法□终点显色基质法□其他
仪器型号仪器编号
天平型号仪器编号
鲎试剂
生产单位：
批号：规格：ml/支
细菌内毒素标准品□国家标准品□工作标准品
来源：□中国药品生物制品检定所
□其他：
批号：标定效价：EU/支
细菌内毒素检查用水生产单位：批号：
内毒素标准曲线范围：λ1= EU/ml λn= EU/ml
细菌内毒素
标准品溶液
配制
样品溶液
配制
根据内毒素标准曲线浓度，λm= EU/ml, 配制如下：
含标准内毒
素的样品溶
液配制
实验结果回归方程：相关系数（γ）阴性对照λ1
标准规定
结论□ (均)符合规定□ (均)不符合规定
检验者：校对者：审核者：
日期：日期：日期：。
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检测试剂：透析专用内毒素检测鲎试剂盒使用说明书快速凝胶法(0.25EU/ml)
试剂盒组成：
名称
规格/数量
用途
1
PPC
1支
供试品阳性对照管（PPC）
2
SPL
1支
供试品管（SPL）
3
采样瓶
10ml×1支
透析液采集
4
除热原滴管
3支
移取样本及内毒素溶液
5
使用说明书
7、当供试品阳性管（PPC）为阳性（+）时实验有效。若供试品管(SPL)为阴性，判供试品内毒素含量小于1EU/mL，若供试品管(SPL)为阳性，判供试品内毒素含量大于或等于1EU/mL。当供试品阳性管（PPC）为阴性时实验无效，可能由于供试品对本实验有抑制或实验过程操作不当，应重复实验：
PPC
SPL
细菌内毒素检查原始记录TR-021-5/0
第页,共页
样品类别/名称：
样品编号：
报告编号：
收样日期：年月日
检测日期：年月日
样品状态：□固体□液体□固液体混合物
包装：□定型包装□散装□包装破损□其它：
检测项目：□内毒素
检测方法依据：□GB15982-2012；中国药典2010版附录XII_E_细菌内毒素检查法
结果
+
+
检测透析液样本细菌内毒素大于或等于0.25EU/mL。
+
―
检测透析液样本细菌内毒素小于0.25EU/mL。
―
+
实验无效，应重复实验。
―
―
实验无效，应重复实验。
37℃分钟
结果观察
PPC
SPL
结果判断
结果报告
该样品经内毒素检查：□检出内毒素≥0.25EU/mL□未检出内毒素＜0.25EU/mL
□试验无效□试验有效检毕日期：
5、把供试品管（SPL）和供试品阳性管 (PPC) 放入37℃±1℃的恒温器上温育质检报告上说明的时
间（分钟），温育期间避免振动。
6、温育结束后，将供试品管(SPL)和供试品阳性管（PPC）从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°。若试管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
1份
操作说明
6
质检报告
1份
说明灵敏度及反应时间
批号：有效期：批准文号：
操作步骤：
1、接取大约2ml透析液样本加入采样瓶中，用于以下实验。
2、用配套的滴管移取0.5ml透析液样本于SPL管中，轻轻振摇，注意不要引起气泡。
3、用滴管移取0.25mlSPL溶液，用于步骤4.
4、把步骤3所取的0.25mlSPL溶液移于PPC管中，轻轻振摇，注意不要引起气泡。