光学显微镜的操作及细菌、放线菌、蓝细菌个体形态的观察
水微生物学实验指导书
水微生物学实验指导书武汉科技大学城市建设学院给排水工程系2007.12目录页实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察活性污泥生物相的观察实验二培养基的制备及灭菌微生物的纯种分离及计数实验三微生物生理生化特性实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察一、实验目的1.了解普通光学显微镜的构造，学习显微镜的使用方法和保养方法。
2.观察蓝细菌、霉菌、酵母菌、放线菌的个体形态，学会生物图的绘制。
二. 实验内容1．显微镜的使用方法和保养方法2．微生物形态的观察三、实验仪器、设备及材料1.光学显微镜、载玻片、盖玻片等2.示范片：颤藻、曲霉、青霉、酵母菌、放线菌。
四、实验原理显微镜的结构和各部分的作用图1是微生物实验常用的双目电光源生物显微镜，其构造分机械和光学两部分：机械部分主要包括：1．镜筒镜筒是双筒，两筒间距离可调，长度一般是160mm。
它的上端装有接目镜，下端有回转板。
回转板上一般装有3个接物镜。
2．载物台载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。
两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。
有的载物台上装有自动推物器。
3．调节器镜臂旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降载物台，调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。
光学部分主要包括：1．接目镜一股使用的显微镜具有2—3种放大倍数的接目镜，其上常刻有“5×”、“10×”或“16×”等数字及符号。
意即使用时可放大5倍、10倍或16倍。
观察微生物时常用放大10倍或16倍的接目镜。
2．接物镜接物镜装在回转板上．可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40 (45)、100。
通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。
例如：用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400。
如果用放大100倍的接物镜则放大倍数为100×10＝1000。
实验一光学显微镜的操作及细菌、放线菌
实验一光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态的观察一、实验目的1．掌握普通光学显微镜的构造与功能，学习与掌握显微镜观察微生物的方法。
2．观察细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会绘制微生物的形态结构图。
二、显微镜的基本结构和功能普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500~2000倍。
(一)显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
实验图-1显微镜的结构1.机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件。
(1)镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
(2)镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜(装在转换器下)间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
(3)物镜转换器物镜转换器上可安装3~4个接物镜，一般是三个接物镜(低倍、高倍、油镜)。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
(4)载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
(5)推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面坐标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
实验 光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察
实验一光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察一、实验目的和要求1）了解显微镜的构造及成像原理。
2）掌握显微镜的使用方法和保养方法。
二、显微镜的构造（一）机械裝置部分：1）镜座：是显微镜的支架，由底座和镜臂组成。
2）载物台：又称镜台，用于安放载玻片，其上安有玻片夹和玻片移动器，调节移动器上的螺旋可使载玻片前后左右移动。
镜台中央有一孔，称通光孔，可使反光镜上的光反射到物镜中来。
3）镜筒：其上端连接目镜，下端连接转换器。
4）转换器：其上安装三个物镜，镜检时旋转转换器即可换物镜头。
注意转换物镜时。
必须用手按住园盘旋转，勿用手指直接推动物镜，以免使物镜与转换器之间的螺纹松脱而损坏显微镜。
5）调焦裝置：包括粗细调焦旋钮，是调节镜筒上下移动的裝置。
（二）光学系统部分：1）物镜：又称为镜头。
有三个物镜头，二个干燥系物镜，一个油系物镜。
物镜上标有主要参数，其含意是：例如：上排100/1.25是放大倍数为100，数值口径为1.25，下排160/0.17是指镜筒长为160毫米，盖玻片的厚度小于0.17毫米。
它是显微镜的最重要的部分。
普通显微镜接物镜的工作原理2）目镜：供眼睛观察物像用的，它将物镜放大的物像再放大，配有三个目镜，其上标有放大倍数。
显微镜的总放大倍数是目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积.3）聚光器：起聚集光线的作用，它可上下移动以调节最适光度。
其下方安装有可变光圈,用以调节光的强度。
4）反光镜：安装在镜座上。
它是一个有平凹两个面的双面镜。
其作用是采集外来光线，并且送入聚光器，一般采集自然光时用平面镜，采集人工光源时用凹面镜。
三、实验材料和器材双目显微镜、二甲苯、苯酚、擦镜纸、固定片等四、实验操作步骤（一）显微镜的使用方法：1.准备工作：取出显微镜时，应一手握镜臂,一手托镜座，轻拿轻放，切忌碰撞和猛震。
显微镜应放在离桌边60毫米左右的位置。
再将登子的高低调节好，不得将显微镜倾斜。
2.采光：将低倍镜与镜筒调节成一条直线，用双眼向下看，同时调节反光镜寻找光源。
实验一普通光学显微镜的使用及细菌三形观察
实验一普通光学显微镜的使用及细菌三形观察引言：显微镜是一种重要的生物学工具，能够放大物体，使我们能够观察到细小的结构。
其中，光学显微镜是最常见和广泛使用的显微镜之一、在本实验中，我们将学习使用普通光学显微镜，并观察细菌的三种形态。
材料和方法：1.准备细菌涂片。
准备一份细菌涂片，将其放在显微镜载片上。
2.放置载片。
将细菌涂片置于载片上，用显微镜夹子固定。
3.调整镜头。
在显微镜上选择合适的目镜和物镜，通常在使用40倍至100倍的物镜进行观察。
将镜头调整到最低位置，然后慢慢向上调整，直到能够看到细菌。
4.调整光源。
用光源照亮样品，然后通过调整光源的亮度和方向，使样品清晰可见。
5.调整焦距。
通过转动焦点调整器，使细菌变得清晰。
如果观察中出现模糊或扭曲的图像，重新调整焦距。
6.观察并拍照。
使用目镜和物镜逐步放大细菌，并观察它们的形态特征。
如果需要，可以使用相机拍摄细菌的图像以作进一步分析和记录。
结果：经过实验观察发现，细菌的形态分为以下三种：1.球形（球菌）：球形菌又称为球菌，其形状近似一个圆球。
球菌通常呈现出单个细胞独立生长的特点，例如葡萄球菌。
2.杆形（杆菌）：杆菌是一类细菌，其形状呈长棍状。
杆菌通常呈现出链状生长的特点，例如大肠杆菌。
3.螺旋形（螺旋菌）：螺旋菌的形状呈螺旋状。
螺旋菌有时会呈现出较长或较短的螺旋形态，例如鼠疫杆菌。
讨论：本实验使用普通光学显微镜观察了细菌的三种形态，即球形、杆形和螺旋形。
这些形态特征对于鉴定和分类细菌非常重要，因为形态可以反映细菌的生态和代谢特征。
球形细菌通常是在湿润的环境中生长并繁殖。
由于其小尺寸和圆滑的表面，球形细菌对于机体的作用较小，通常是人体正常菌群的一部分。
此外，一些病原细菌如葡萄球菌等也具有球形。
球形细菌在显微镜下通常呈圆形或椭圆形，并且可以在荧光显微镜下染色以增强可见性。
杆菌是一类常见的细菌，其形状与一根棍子类似。
杆菌通常生活在土壤、水体和生物体的表面。
显微镜的使用和微生物的形态观察
实验内容
1、显微镜的使用 2、微生物的形态观察
普通光学显微镜的结构
由一组光学放大系统、调 节系统及机械支持系统组成。
1、机械系统部件：镜座、 载物台、物镜转换器、镜 筒和调节器等。
2、光学放大系统部件：反 光镜、聚光器、物镜和目 镜等。
显微镜的使用
用显微镜观察肉眼看不到的微生 物，但大多数微生物用高倍镜也看 不清，需要用油镜（100×）观察。 用油镜观察时，镜头必须浸入香柏 油里 。
杆状细菌代表1-大肠杆菌
螺旋菌的典型代表-钩端螺旋体
细菌的特殊结构-鞭 毛
微生物第二大类-放线菌
❖ 放线菌菌丝
放线菌轮生菌丝
螺 旋菌丝
放线菌菌丝及孢子丝
微生物的第三大类：霉菌 霉菌菌丝的典型结构-1.无隔菌丝和
有隔菌丝
霉菌菌丝的典型结构-2。根霉的假根 及孢子囊孢子
霉菌菌丝的典型结构3.青霉的青霉穗
菌落形态
菌落是由某一微生物的单个细胞或 孢子在培养基表面繁殖后形成的肉眼 可见的集落。
菌落形态在一定程度上是个体细胞 形态结构在群体上的反映。
菌落形态特征
从菌落的大小、气味、颜色、表 面有无光泽，是否透明、干燥程度、 粘稠度、菌落隆起情况、边缘是否 整齐等角度描述四大类型菌群的菌 落形态特征
观察要求
霉菌菌丝的典型结构3.曲霉的足细胞
足细胞
分生孢子
霉菌菌丝的典型结构4. 毛霉的孢子
微生物的第四大类：酵母菌
假丝
❖ 酿酒 酵母
实验要求
❖ 每位同学必须观察的涂片为： 细菌三型涂片、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、
四联球菌、八叠球菌、金黄色球菌、放线菌、 酿酒酵母、青霉、曲霉、匍枝根霉
光学显微镜的使用及菌体观察
实验光学显微镜的使用及菌体观察一、实验原理1.普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
当前使用的显微镜都是由一套透镜组成的。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500-2000倍。
分辨率（可辨出两点间最小距离），公式如下：D = 0.5λ / n*sinα/2公式中：λ为所用光源波长；α为物镜镜口角；n为玻片与物镜间介质的折射率。
最短可见光450nm。
空气n=1.0；水n=1.33；香柏油n=1.52。
光学显微镜在最短波长450nm，用油镜其最大的分辨率为0.18μm。
肉眼正常德分辨率为0.25mm。
因此光学显微镜有效的最高总放大倍数能达到1000~1500倍。
根据上式，可通过：（1）减低波长；（2）增大折射率；（3）加大镜口角来提高分辨力。
紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。
数值孔径（numerical apeature简写为NA）是物镜的主要参数，是决定物镜性能的最重要指标。
数值孔径可用下式表示：NA= n* sinα/2镜口角α总是小于180°。
因为空气的折射率为1，所以干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.05~0.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则数值孔径最大可接近1.5。
虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率，但实际上从透镜的制造技术看，是不可能达到这一极限的。
通常在实用范围内，高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。
2. 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞常带负电荷，而碱性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
常用的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。
微生物实验实验一显微镜的使用及微生物形态观察
微生物实验
实验一 显微镜的使用及微生物形态观察 实验二 活性污泥生物相及藻类形态观察
实验三 微生物的染色
实验四 微生物细胞数的计数
实验五活性污泥不同微生物种群的分离培养 与鉴别
实验一 显微镜的使用及微生物形态观察
一. 目的 1. 了解普通光学显微镜的构造，学习显微 镜的使用方法和保养。（高、低倍镜的使用） 2. 观察蓝细菌、霉菌、酵母菌、放线菌的 个体形态，学会生物图的绘制。 二. 实验器材 1. 光学显微镜 2. 示范片：颤藻、曲霉、青霉、酵母菌、 放线菌。
4-5
实验五活性污泥不同微生物种群 的分离培养与鉴别 一. 目的
1．掌握配制培养基和制备无菌水的方法。
2. 学会玻璃器皿的干热灭菌和培养基高压蒸汽 灭菌技术。 3. 学习倒平板的方法和两种分离微生物的基本 操作技术。 4. 学习微生物纯种分离、培养及菌落的观察。
5-1
二. 实验器材
1.培养皿、试管、吸管、锥形瓶等。 2.牛皮纸等包扎材料。 3. 10% HCl、10% NaOH、精密pH试纸。 4. 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂。 5. 高压蒸汽灭菌锅等。 6. 活性污泥。 7．接种环、酒精灯、恒温箱(培养箱)等。 8．结晶紫染液。 9. 显微镜、载玻片
光学显微镜的操作及细菌、放线菌、蓝细菌个体形态的观察
《环境工程微生物学》实验报告实验名称：光学显微镜的操作及细菌的观察专业：环境科学班级：环科111学号：**********学生姓名：**指导教师：_____ ***__实验日期:_______ 2013.4.8__一、实验名称光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察。
二、实验目的1、了解普通光学显微镜的构造和原理，掌握显微镜的操作和保养方法。
2、观察、识别几种细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
3、学习用压滴法制作标本片。
三、反应原理1）显微镜的结构如下图：放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数四、实验仪器及其材料（1）显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡、二甲苯、（2）示范片：细菌三形、弧状、丝状、细菌鞭毛及细菌荚膜。
放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。
五、实验步骤1、显微镜的操作：1）安放：右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。
桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。
单筒的一般放在左侧，距离桌边3-4厘米处。
2）清洁：检查显微镜是否有毛病，是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。
透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。
3）对光：镜筒升至距载物台1-2厘米处，低倍镜对准通光孔。
调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。
若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮4）安装标本：将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。
用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。
5）调焦：调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面仔细观察，直到物镜贴近玻片标本，然后左眼自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调清晰。
6）观察：若使用单筒显微镜，两眼自然张开，左眼观察标本，右眼观察记录及绘图，同时左手调节焦距，使物象清晰并移动标本视野。
实验一普通光学显微镜的使用与细菌三形的观察
实验一普通光学显微镜的使用与细菌三形的观察摘要：本实验使用普通光学显微镜观察细菌的三种形态，包括球状细菌、杆状细菌和螺旋形细菌。
首先，通过镜片清洗和调焦操作，使显微镜准备就绪。
然后，通过移动物镜和镜身，找到适合观察的细菌样本。
最后，使用1000倍的放大倍数观察细菌样本，并记录下观察结果。
实验结果表明，普通光学显微镜可以有效地观察细菌的不同形态，并提供有关细菌结构的详细信息。
引言：显微镜是观察微小物体的重要工具之一、在生物学研究中，显微镜被广泛应用于观察细胞和微生物等微观结构。
本实验旨在使用普通光学显微镜观察细菌的三种形态，即球状细菌、杆状细菌和螺旋形细菌，并记录下观察结果。
方法和材料：本实验使用以下设备和试剂进行观察：1.普通光学显微镜：用于观察细菌样本。
2.清洗液：用于清洗显微镜镜片。
3.导轨：用于移动显微镜物镜和镜身。
实验步骤：1.清洗显微镜镜片：首先，取适量清洗液滴在镜片上，用棉纸轻轻擦拭，直到镜片干净为止。
2.调焦：将样本架置于显微镜平台上，调节光源的亮度，使用低倍物镜对准样本。
通过调节焦距，使样本清晰可见。
3.移动物镜和镜身：使用导轨移动物镜，找到适合观察的细菌样本。
然后，在适当位置上调整镜身，以便获得清晰的图像。
4.观察和记录：使用高倍放大倍数（1000倍）观察细菌样本。
注意细菌的形状、大小和结构，并记录下观察结果。
结果与讨论：本实验观察到了三种常见的细菌形态：球状细菌、杆状细菌和螺旋形细菌。
球状细菌：球状细菌是一种常见的细菌形态，其形状类似于小球。
观察时，可以看到多个球状细菌聚集在一起形成一个群体。
球状细菌的直径大约为1至2微米，通常由一个或多个细胞组成。
在高倍放大倍数下，可以通过显微镜清晰地观察到球状细菌的细胞壁和细胞质。
杆状细菌：杆状细菌是一种长形的细菌，其形状类似于棍子或柱子。
观察时，可以看到杆状细菌在显微镜视野中以不同的方向排列。
杆状细菌的长度通常为2至5微米，直径为0.5至1微米。
21 实验一 光学显微镜的操作及细菌放线菌蓝细菌个体形态的观察v3
1.1 微生物概述 3.3 低倍镜观察
– 把所要观察的玻片标本放在载物台上，用压片 夹压住，标本要正对通光孔的中心。 – 眼睛从侧边看着物镜头和标本之间，转动粗准 焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片 标本为止。 – 左眼看目镜内，同时反向缓缓转动粗准焦螺 旋，使镜筒上升，直到看到物象为止，再稍稍 转动细准焦螺旋，使看到的物象更加清晰。
《环境工程微生物学》
Environmental Microbiology （实验部分）
主讲人：程 翔 xcheng@ 北京林业大学
实验注意事项 • 实验须知
– 预习 – 讲解 – 操作与观察 – 实验报告
• 实验规则
– 遵守学生实验守则 – 实验室安全工作各项规定
BEIJING FORESTRY UNIVERSITY
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1.1 微生物概述 3.5 收镜
– 转动粗准焦螺旋，升高镜筒，取出玻片。 – 用擦镜纸揩净目镜和物镜，用清洁纱布揩净镜 体。 – 再转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜 筒下降，然后将显微镜平稳地放入镜箱内保 存。
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– 实验目的 – 实验内容与方法 – 结果与讨论 – 建议
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1.1 微生物概述 2 显微镜结构 显微镜的放大倍数：物镜放大倍数 ×目镜放大倍数 机械
装置
光学 装置
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1.1 微生物概述 3 操作方法
3.1 取镜和安放 3.2 对光 3.3 低倍镜观察 3.4 高倍镜观察 3.5 收镜
光学显微镜的使用和微生物形态观察
(1)光谱分析 法的发展状 况。
什么是仪器分析
分析化学是化学量测和表征的科学，仪器 分析是分析化学重要的组成部分。
化学量测— 获取指定体系中有关物质的质、量、
和结构等各种信息；
表征—是精确地描述其成分、含量、价态、状态、
结构和分布等特征。
光学分析法（optical analysis)：基于物质发射的电磁辐射
实训一 光学显微镜的使用和微生物形态观察
一、目的要求 1．学习普通光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 2．学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3．掌握微生物临时装片制作技术。
二、器材 1.菌种：啤酒酵母。 2.溶液或试剂：香柏油、二甲苯 3.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、酒精灯、载玻片、接种环等
2）高倍镜操作方法 将低倍镜观察到的目标移动至视野中央-->将低倍镜镜头转换成高倍 镜镜头-->用微调焦螺旋调至清晰。 注意：高倍镜观察时，光线需增强。
3）油镜的操作方法
将高倍镜观察到的目标移动至视野中央将高倍镜镜头挪开，于载 玻片上滴一滴石蜡油将油镜镜头移动至视野中央，让油镜镜头浸 入石蜡油（至油晕不再扩大为止）用微调焦螺旋调节至清晰
注意：油镜的操作需要较强的Байду номын сангаас线，故需将光线调至最强。 油镜用后处理： 第一遍：用擦镜纸拭去镜头上的镜油 第二遍：用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去头上残
留的油迹 第三遍：再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
（二）制作临时装片观察酵母菌
1.制作酵母菌临时装片 2.低倍镜观察 3.油镜观察
四、实验报告
绘制酵母菌图
五、思考题
1、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加 滴什么油？起什么作用？
实验一、普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察
实验一、普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察实验目的：
实验原理：
普通光学显微镜是一种透镜光学系统，通过对样本中的光线进行聚焦，放大细菌的图像。
显微镜的主要部分包括物镜、目镜、调焦机构、光源等。
细菌是一类微生物，形态多样，通常为单细胞生物，通过不同的染色方式和光学显微镜观察，可以看到不同形态的细菌。
实验器材：
普通光学显微镜、平片、细胞培养液、革兰染色试剂、蒸馏水、酒精、碘液、碱性蓝溶液
实验步骤：
1. 取一片平片，用无菌锉子在中心处轻轻划十字，用烧杯将片子消毒并放入培养液中。
2. 从细菌培养物中取出一小团菌落，在平片的交叉点处将其划成一个小圆圈，放入蒸馏水中。
3. 用无菌镊子夹取一滴细胞液，在平片的交叉点处加上一滴，然后在上方盖上一片盖片。
4. 将样品放入显微镜的标本台上，调整镜头至最佳位置，适当调整光源亮度和对比度等参数，观察细菌的形态特征。
5. 移动物镜或调整焦距，可以观察到更大或更小的细胞形态。
6. 取另一张平片，准备革兰染色试剂，将样本放入试剂中，反复洗涤，用显微镜观察识别细菌的形态，进行分类。
实验结果：
观察到细菌呈长梭形，直杆形，圆球形、螺旋形等形态，且在革兰染色后，长梭形的细菌为革兰阳性菌，圆球形的细菌为革兰阴性菌。
结论：
通过使用普通光学显微镜，成功观察了细菌的形态特征。
并通过革兰染色试剂进行分类，为后续的生物学研究提供了基础。
微生物实验
实验一光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察一、实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。
(2)观察细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
二、显微镜的结构、光学原理及其操作方法(一)显微镜的结构和光学原理显微镜是观察微观世界的重要工具。
随着现代科学技术的发展，显微镜的种类越来越多，用途也越来越广泛。
微生物学实验中最常用的是普通光学显微镜，其结构分为机械装置和光学系统两部分。
显微镜的结构如图－1所示。
A B图－1 显微镜的结构1．机械装置(1)镜筒：镜简上端装目镜，下端接转换器。
镜筒分单筒和双筒两种。
单筒有直立式(长度为160mm)和后倾斜式(倾斜45°)。
双筒全是倾斜式的，其中一个筒有屈光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。
两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用!(2)转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。
不向规格的物镜分别安装在各孔上。
(3)载物台：载物台为方形(多数)和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片．载物台上还有移动器(其上有刻度标尺)，可纵向和横向移动。
移动器的作用是夹住和移动标本用。
(4)镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。
镜臂有固定式和活动式(可改变倾斜度)两种。
(5)镜座：镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。
(6)调节器：调节器包括大、小螺旋调节器(调焦距)各一个。
可调节物镜和所需观察的物体之间的距离。
调节器有装在镜臂上方或下方的两种。
装在镜臂上方的是通过升降镜臂来调焦距，装在镜镜下方的是通过升降载物台来调焦距，新式显微镜多半装在镜臂的下方。
2．光学系统及其光学原理(1)目镜：一般的光学显微镜均备有2～3个(对)不同规格的目镜，例如，5倍(5×)、10倍(10×)和15倍(15×)，高级显微镜除了上述3种外，还有20倍(20×) 。
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。
实验二普通显微镜的使用及细菌形态观察
显微镜旳放大倍数和辨别率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2.显微镜旳辨别率 是表达显微镜辨析物体（两 端）两点之间距离旳能力，可用公式表达为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜辨别出物体两点间旳最短距离。 ：可见光旳波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质旳折射率。 ：镜口角（即入射角）。
保光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最终
用油镜。当目视接目镜时，尤其在使用油镜时， 切不可使用粗调整器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察旳习 惯，以免眼睛疲劳，而且能够在左眼观察时，右 眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座， 不可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存储在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌 而腐蚀镜片。
有时按上述操作还找不到目旳物，则可能因为油镜头下降 还没有到位，或因油镜上升太快，以至眼睛捕获不到一闪而 过旳物像。遇此情况，应重新操作。另外应尤其注意不要因 在下降镜头时用力过猛，或聚焦时误将粗调整器向反方向转 动而损坏镜头及载玻片。
3、显微镜用毕后旳处理
（1）上升镜筒，取下载玻片。 （2） 用擦镜纸拭去镜头上旳镜油，然后用擦镜 纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留旳油迹，最终再 用洁净旳擦镜纸擦去残留旳二甲苯。
在聚光器旳数值孔径拟定后，若需要变 化光照强度，可经过升降聚光器或变化光 源旳亮度来实现，原则上不应再经过光圈 旳调整。当然，有关虹彩光圈、聚光器高 度和照明光源强度旳使用原则也不是固定 不变旳，只要能取得良好旳观察效果，有 时也可根据不同旳详细情况灵活利用，不 一定拘泥不变。
2、显微观察
在目镜保持不变旳情况下，使用不同放大 倍数旳物镜所能到达旳辨别率及放大率都是 不同旳。一般情况下，尤其是初学者，进行 显微观察时应遵从由低倍镜到高倍镜再到油 镜旳观察程序，因为低倍数物镜视野相对大， 易发觉目旳及拟定检验旳位置。
实验四微生物的染色
2）高压蒸汽灭菌：微生物试验所需仪器培养基，皆可 用高压灭菌锅灭菌
2）灭菌操作过程
A 先加水，放物品，盖锅盖，对称的拧紧螺栓，防 漏气。
B 加热，并开排气阀，冒热气3~5min后关。到所需 压力 计时，达灭菌时间后停止加热
❖ 取水样 • 自来水样的采集 • 河湖、井水、海水水样的采集 • 水样的处置
❖ 初步发酵实验
❖复发酵实验
❖准备工作
• 滤膜灭菌 • 滤膜过滤器安装
❖ 过滤水样
❖ 观察结果
• 挑取符合大肠菌群菌落特征的菌落进行革兰氏染色，镜检。 • 将镜检验员革兰氏服性、无芽孢杆菌的菌落再接种一支乳 糖 蛋白胨发酵管，经370c培养24h，产酸又产气者即为大肠菌群阳性 • 计算
试管，中指于其间，斜面向上，管口齐平。
D接种环灭菌
E 将棉花拔出，试管口微绕火焰。用接种环迅速移菌种于另一试 管底部，再接种环上有底部向上画曲线。接种环灭菌。
2）液体接种 由斜面基接种到液体培养基。用接种环将菌种全 送入液体培养基，塞棉花，转动使其混匀。
3）液体培养基中的菌种被接入液体培养基
用无菌移液自菌种管吸取菌液接种到另一液体培养基中赛好 棉塞即可
（2）平板划线分离法
a制作: 将熔化冰冷至50oC的营养琼脂培养基 10~15ml
导入无菌培养皿，凝固成平板
b划线：以无菌操作，接种环挑污泥于在平板上划线，盖盖， 倒置于30oC恒温箱培养48h后观察结果
•2其他接种方法的操作
1）斜面接种技术
A 贴标签
B
点燃酒精灯
C将
一支斜面菌种和一支待接种的斜面培养基放左手，拇指压住两
光学显微镜的使用及原核生物的个体形态观察
微生物学实验中最常用的是普通光学显微镜无论是观察微生物的个体形态还是测量微生物细胞的大小都必须借助于显微镜
实验一
光学显微镜的使用及原核生物 的个体形态观察
一、实验目的
1.了解普通光学显微镜的构造和原理，准 确掌握使用显微镜的方法； 2.观察和识别几种原核微生物的个体形 态。
二、概述
显微镜（图YS-100）是观察 微观世界的重要工具。随着现代科 学技术的发展，显微镜的种类越来 越多，用途也越来越广泛。微生物 学实验中最常用的是普通光学显微 镜，无论是观察微生物的个体形态 还是测量微生物细胞的大小，都必 须借助于显微镜。学会显微镜的操 作是本实验的主要内容，也是微生 物学实验必须掌握的基本技能之 一。由于绝大多数微生物的大小均 在肉眼观察的极限（0.25mm）以 下，所以显微镜成了必不可少的研 究工具。
四、实验材料、器皿
1.标本片：细菌三型、丝状细菌、四联球 菌、八叠球菌、放线菌、颤蓝细菌、念珠 蓝细菌等。 2.器皿、试剂：显微镜、香柏油、二甲苯、 镜头纸等。
ห้องสมุดไป่ตู้ 细菌三型
丝状细菌
颤蓝细菌
念珠蓝细菌
微囊蓝细菌
放线菌
五、注意事项
1.调节显微镜的焦距从低倍到高倍，用油镜 时，直接从低倍到油镜。 2.注意倍数的变化，随时调节亮度、放大倍 数指示圈等。 3.仔细、认真地保养显微镜。
A：屈光度调节器B：（物 镜）转换器C：放大倍数指示圈 D：载物台E：载物台、调焦 手轮F：内置灯
三、主要内容
1.显微镜的使用和保养（见教材显微镜的“原理及 操作方法） 2.形态观察 原核生物都属于微生物。根据外表特征，可将 其粗分为6种类型，包括细菌、放线菌、蓝细菌 (旧名蓝藻或蓝绿藻)、支原体、衣原体和立克 次氏体等。本实验以前三类为主，观察、识别 不同类型的个体形态，并绘出个体形态图。
光学显微镜的使用及菌体观察
实验光学显微镜的使用及菌体观察一、实验原理1.普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
当前使用的显微镜都是由一套透镜组成的。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500-2000倍。
分辨率（可辨出两点间最小距离），公式如下：D = 0.5λ / n*sinα/2公式中：λ为所用光源波长；α为物镜镜口角；n为玻片与物镜间介质的折射率。
最短可见光450nm。
空气n=1.0；水n=1.33；香柏油n=1.52。
光学显微镜在最短波长450nm，用油镜其最大的分辨率为0.18μm。
肉眼正常德分辨率为0.25mm。
因此光学显微镜有效的最高总放大倍数能达到1000~1500倍。
根据上式，可通过：（1）减低波长；（2）增大折射率；（3）加大镜口角来提高分辨力。
紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。
数值孔径（numerical apeature简写为NA）是物镜的主要参数，是决定物镜性能的最重要指标。
数值孔径可用下式表示：NA= n* sinα/2镜口角α总是小于180°。
因为空气的折射率为1，所以干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.05~0.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则数值孔径最大可接近1.5。
虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率，但实际上从透镜的制造技术看，是不可能达到这一极限的。
通常在实用范围内，高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。
2. 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞常带负电荷，而碱性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
常用的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。
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《环境工程微生物学》
实验报告
实验名称：光学显微镜的操作及细菌的观察专业：环境科学
班级：环科111
学号：**********
学生姓名：**
指导教师：_____ ***__
实验日期:_______ 2013.4.8__
一、实验名称
光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察。
二、实验目的
1、了解普通光学显微镜的构造和原理，掌握显微镜的操作和保养方法。
2、观察、识别几种细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
3、学习用压滴法制作标本片。
三、反应原理
1）显微镜的结构如下图：
放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数
四、实验仪器及其材料
（1）显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡、二甲苯、
（2）示范片：细菌三形、弧状、丝状、细菌鞭毛及细菌荚膜。
放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。
五、实验步骤
1、显微镜的操作：
1）安放：右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。
桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。
单筒的一般放在左侧，距离桌边3-4厘米处。
2）清洁：检查显微镜是否有毛病，是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。
透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。
3）对光：镜筒升至距载物台1-2厘米处，低倍镜对准通光孔。
调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。
若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮
4）安装标本：将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。
用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。
5）调焦：调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面
仔细观察，直到物镜贴近玻片标本，然后左眼自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调清晰。
6）观察：若使用单筒显微镜，两眼自然张开，左眼观察标本，右眼观察记录及绘图，同时左手调节焦距，使物象清晰并移动标本视野。
右手记录、绘图。
镜检时应将标本按一定方向移动视野，直至整个标本观察完毕，以便不漏检，不重复。
2、观察霉菌、放线菌、酵母菌和蓝细菌个体形态
六、实验结果及其分析讨论
从准备的载玻片中看到了这些细菌：
霉菌
周鞭毛细菌荚膜
其他细菌。