高效液相色谱仪流动相配置操作规程
高效液相色谱仪流动相配置操作规程
高效液相色谱仪流动相配制标准操作规程1.目的
明确高效液相色谱法流动相配制过程,保证操作过程的规范性;
2.适用范围
适用于实验室高效液相色谱法流动相配制;
于清洁的带塞量筒中,加入适量纯水,振摇,待固体完全溶解后,再加纯水至规定刻度,盖上塞子,摇匀;
4.2.4若该流动相对PH值有特殊要求,根据流动相配制规定的体积比例,用酸或碱调节PH值,用PH计测定直至规定范围内;
4.3流动相抽滤
4.3.1含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分,抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥无水的;
4.3.2抽滤装置准备：将过滤器套在三角烧瓶上,用镊子夹取0.45μm的水系或有机滤膜一张,放在砂芯过滤器上注意：滤膜应将过滤面完全覆盖；再将量杯压在滤膜上,量杯边缘和过滤器的边缘对齐；用配套的夹子将过滤器和量杯接头边缘
4.6流动相配制工具清洁
4.6.1配制含水流动相用器具：先用自来水清洗一次,再用纯化水清洗3次,沥干后封口备用;
4.6.2配制不含水流动相用器具：用纯有机溶剂少量倒入已安装完毕的抽滤装置内,抽滤润洗一次,再将抽滤过的有机溶剂转入量筒内润洗量具,洗液倒入废液桶
后,待用;
4.7填写配制记录
流动相配制后,配制人员及时填写相应的配制记录;
4.8注意事项
4.8.1流动相所用溶剂应选用色谱纯、高纯水或双蒸水;。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪1流动相的配置及其注意事项
二 配置过程的注意事项 1 取瓶子的时候要记住要拿稳，由于瓶子很高，脚下要垫台 阶才能取瓶子。 2 瓶子取下后要立即用封口膜封口，防止有灰尘进入瓶中。
5 抽滤甲醇，水和冲洗液的顺序是超纯水，冲洗液和纯甲醇。因为超纯水过滤完后会有 残留，对冲洗液的影响不大，冲洗液需要用有机系滤膜，甲醇可以继续使用该滤膜。 6 抽滤完毕后用保鲜膜将各瓶封口，放到超声洗涤机里面超声30分钟，赶出液体内的 空气。
7 超声结束后，将各瓶放在高效液相色谱仪上面，记住要对号入座，甲醇瓶放在A处， 超纯水瓶放在B处，冲洗瓶放在C处，空瓶放在D处。吸液管也要仔细查看管线上的编号， 盖住各瓶，切记不要弄错。
2 打开通风橱电源，照明，抽风，由于有机相有毒，戴手套和口罩。手套不能有破洞， 有毒液体不要滴到身上。 3 取超纯水，使用纯水机制备，一定要用超纯水。制备方法参看纯水机操作手册。超纯 水要用专用的干净的玻璃容器盛装，玻璃容器不能用作其他用途。 4安装抽滤装置，抽滤有机液选择有机系滤膜，抽滤水选择水系滤膜。冲洗液也要用水 系滤膜. 滤膜要使用镊子夹取，不要用手。每次用一张即可。
??8将一切做完之后就要清洗过滤装置和使用的仪器流动相的配置和过滤装置记住不要用任何洗涤剂进行清洗只用超纯水进行淋洗冲洗还可以浸泡于装超纯水的烧杯中然后放在超声机中进行清洗
高效液相色谱仪流动相的配 置及其注意事项
以甲醇水流动相为例
一 流动相的配置过程
1 取下色谱瓶，由于没有封盖，需要用保鲜膜迅速封口，拿到通风橱。
Agilent1260高效液相色谱仪操作规程
Agilent1260高效液相色谱仪操作规程1开机前准备1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45Rm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B 中；对照品和样品溶液进样前要经0.45Rm滤膜过滤。
1.2若流动相中含有缓冲盐，则必须以每分钟2〜3滴的速度虹吸10% 的异丙醇水冲洗seal-wash,以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
2开机2.1打开电源，打开计算机，进入Windows系统，从上到下依次打开各模块电源。
2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。
2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。
2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min , A通道设到100%,单击“确定”。
2.6单击“泵”图标,出现参数设定菜单,单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge,直到管路内由溶剂瓶A到泵人口无气泡为止；切换B通道（B通道设到100%）继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
（查看柱前压力，若大于10Bar, 则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
）2.7将泵的流量设到0.5ml/min,若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%, B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min ，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
2.8单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。
2.9把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/ 水或10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳定后，打开检测器等，监视基线。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
高效液相操作规程
A-10 高效液相色谱仪操作规程1、准备：流动相：按方法要求配制流动相(水相、有机相、柱塞密封垫清洗液、洗针液)，经0.45 m 微孔滤膜过滤，并超声波脱气。
样品溶液：按方法要求配制样品溶液，并以过滤或高速离心方式除去溶液中的固体微粒。
2、开机及平衡系统：2.1 打开仪器电源，仪器自检；2.25分钟；2.31-2次；2.4打开真空脫气机，执行灌注：当溶剂的管路是空时候，或不小心走干溶剂的时候，执行2.5设定流动相条件平衡色谱柱；2.63、进样：3.1装载样品盘，准备进样；3.2打开计算机，运行Empower软件：编辑仪器方法和方法组，建立方法；进入平衡系统/监视基线界面，选择相应的仪器方法，点击进入进样参数编辑界面，输入样品名称、功能、方法组等存放数据文件的Project，运行Run Samples。
4、数据处理及打印：在Empower软件中运行Channels表中打开数据，建立处理方法；用建立好的处理方法处理数据；在Result表中选择要打印的结果，选择打印格式，打印数据。
5、关机：实验结束后，退出Run sample界面，退出Empower软件，关闭检测器电源；先用5：95乙腈清洗色谱柱约30min，然后用纯乙腈清洗色谱柱约60min。
清洗灌注柱塞密封1min。
清洗灌注针头2次。
冲洗进样器。
降低流速至0，待系统压力回零后，关闭2695电源。
关闭计算机及显示器电源。
6、仪器维护：正常使用时：流动相新鲜配置，使用缓冲盐溶液必须经0.45 m微孔滤膜过滤，置换流动相时要考虑前后两种流动相可以互溶，如：甲醇——水——缓冲盐——水——甲醇，不可直接甲醇/乙腈置换到缓冲盐。
长期不使用时：各管路充满甲醇或者乙腈，防止管路内和过滤头长菌。
每月开机一次至少半个小时，查看仪器自检及各种功能是否正常。
色谱柱使用后用说明书指定的流动相冲洗至少十倍柱体积，每半年至少冲洗一次。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程1．开关机顺序●开机顺序：打开LC各单元电源－控制器电源－电脑－LC-Solution工作站，开机后能听到“哔”声。
●关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭LC-Solution工作站－控制器－LC各单元电源2．流动相及样品的准备●流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。
流动相必须经0.45um 的微孔滤膜过滤后方能进入LC系统。
水和有机相所用的微孔滤膜不同，有机相（如甲醇）的过滤用F膜，水用水膜。
●样品溶液亦必须用0.45um 的微孔滤膜过滤后才能进样。
3．工作站的进入及系统的开启●双击桌面上的“labsolution”图标，选择“operation”项并单击，在弹出窗口后按OK进入工作站。
●首先打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转180度）。
然后按二泵面板上的“purge”键开始自动清洗A、B流路3分钟，然后在分析参数设置页中设置流速1ml/min，BCONC 0％，并设置合适的检测波长，柱温，停止时间。
在完成后点击“Download”将分析参数传输至主机。
●分析方法的保存：选择file－save method file as－取名保存文件●系统的启动：点击“instrument on/off”键开启系统（此时泵开始工作。
4．进样准备●观察基线及柱压，待基线平直（－5～80mv），压力稳定（0.5Mpa内）时方可进样。
5. 进样●点击助手栏中的“single start”键，弹出对话框，在对话框中输入“sample name”“method”“data file”等。
●填完后点击“start”，出现触发窗口，进样，仪器开始自动采样分析。
6. 数据文件的调用及查看●点击助手栏中的“Postrun analysis”键，打开数据处理窗口。
●打开文件搜索器，定位至数据文件所在文件夹，选择文件的类型，双击文件名即可打开数据文件（此时可以查看峰面积、保留时间等参数）。
高效液相色谱仪使用与操作规程
4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正
常。
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、四 元泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待 泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、
主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定： 2 、流速设定： 3 、流动相规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积
的流动相。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如
超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操
作。
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声
二、样品
1、采用过滤或离心方法处理样品，
确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反
相柱，则极性比流动相大；若为
正相柱，则极性比流动相小）的 溶剂制备样品溶液，尽量用流动
相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使 用定量管定量时，进样体积应为 定量管的3～5倍；
第四步、注意事项
人的方法及实验结果；
3、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针
筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
4、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过 滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用 5%稀硝酸溶液浸泡后再洗
四、出现肩峰或分叉
1.样品体积过大
1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰 的15% 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
高效液相色谱仪操作规程-U3000(已打印)
戴安中国有限公司液相色谱操作规程-U3000一、操作前准备：1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机：2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表示Sever Monitor程序运行正常）可以点击Close来关闭界面。
2.5打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标（工作站主程序）打开HPLC软件系统主界面。
2.6 在左窗口中单击根目录，此时会在右边的窗口中出现一个“hplc.pan”文件，双击此文件打开HPLC控制面板程序。
2.7在控制面板“Pump”控制框中选中“connect”选框，Purge流路中气泡，设置总流速为适当的数值（建议要由0.2ml/min逐渐增加到适当的流速）后并按回车键（“Enter”）以示确定。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操纵步调及注意事项之樊仲川亿创作一、操纵步调：μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果欠好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（分歧规格的色谱柱其所允许的最大流速之和分歧）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面检查分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下检查样品的分析结果并编辑。
二、使用中罕见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操纵时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超出压力上限，致使泵停止工作。
高效液相色谱仪1流动相的配置及其注意事项
5 抽滤甲醇，水和冲洗液的顺序是超纯水，冲洗液和纯甲醇。因为超纯水过滤完后会有 残留，对冲洗液的影响不大，冲洗液需要用有机系滤膜，甲醇可以继续使用该滤膜。 6 抽滤完毕后用保鲜膜将各瓶封口，放到超声洗涤机里面超声30分钟，赶出液体内的 空气。
7 超声结束后，将各瓶放在高效液相色谱仪上面，记住要对号入座，甲醇瓶放在A处， 超纯水瓶放在B上的编号， 盖住各瓶，切记不要弄错。
8 将一切做完之后，就要清洗过滤装置和使用的仪器，流动相的配置和过滤装置记住不 要用任何洗涤剂进行清洗，只用超纯水进行淋洗，冲洗，还可以浸泡于装超纯水的烧 杯中然后放在超声机中进行清洗。 9 清洗干净后，水滴不能挂壁，放入烘箱中，温度控制在45度烘干。
二 配置过程的注意事项 1 取瓶子的时候要记住要拿稳，由于瓶子很高，脚下要垫台 阶才能取瓶子。 2 瓶子取下后要立即用封口膜封口，防止有灰尘进入瓶中。
3 甲醇有毒，要做好防护措施，戴手套和口罩，打开通风橱。 4 安装抽滤装置的时候要防止抽滤装置摔破。滤膜要放在正 中间，
5 抽滤顺序不能弄混，超纯水，冲洗液，甲醇。甲醇要保证 是色谱级纯甲醇，如果不能保证，就不能用。
6 超声洗涤时要确保瓶子不会倒下来，不要让溶液污染。
7 清洗过滤装置的时候不能用洗涤剂，因为洗涤剂中含有离 子和有机物，不能完全清洗干净，也不能用刷子和自来水， 因为会有颗粒物。 8 清洗后烘干时不能将温度设置过高，防止玻璃仪器高温变 形。 9 色谱瓶放在仪器上面的时候一定要记住对号放置，对号放 入吸液管，不能弄错。
高效液相色谱仪流动相的配 置及其注意事项
以甲醇水流动相为例
一 流动相的配置过程
1 取下色谱瓶，由于没有封盖，需要用保鲜膜迅速封口，拿到通风橱。
高效液相的标准操作规程(SOP)
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。
实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
流动相瓶子要保持清洁。
1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。
压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。
解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。
b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。
如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。
1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。
高效液相色谱法操作规程与注意事项
⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所⽤的仪器为⾼效液相⾊谱仪，由泵系统，进样系统，⾊谱柱，检测器和⾊谱数据处理系统组成。
1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过⾼压⼒管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱⼦中。
现⾏的泵系统有⼀元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的⽐例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。
1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过⼿动进样器或定量环，或⾃动进样器转移到流动相中。
⾃动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有⼀个可以刺⼊的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到⼀个定量环中然后输送到⾊谱系统中。
1.1.3.⾊谱柱：最常⽤的⾊谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相⾊谱系统使⽤⾮极性填充剂，以⼗⼋烷基硅烷键合硅胶最为常⽤，⾟基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使⽤。
正相⾊谱系统使⽤极性填充剂，常⽤的填充剂有硅胶等。
离⼦交换⾊谱系统使⽤离⼦交换填充剂量；分⼦排阻⾊谱系统凝胶或系统⾼分⼦多孔微球等；对映异构体的分离通常使⽤⼿性柱。
除另有规定外，柱温为室温。
1.1.4.检测器：常⽤的检测器包括紫外分光检测器，⽰差折光检测器，⼆极管阵列检测器。
固定波长检测器在单⼀波长下运⾏，典型的波长是254nm，通过低压⼒的汞灯发射。
可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或⾼压⼒氙灯，通过单⾊器或⼲涉过滤器产⽣⼀定波长的单⾊光。
1.2.系统适⽤性试验1.2.1.为了确定最终运⾏系统的有效性，应当进⾏系统适⽤性试验。
整个系统可以⽤以下指标来评价：信噪⽐、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因⼦，其指标及计算⽅法应在相关分析⽅法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下⽅法进⾏计算：信噪⽐：⽤于评价⾊谱系统检测微量物质的能⼒，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最⼤值与最⼩值的差，该段基线需取≥5倍半峰⾼宽的距离，如果有可能，⽬标峰两侧取相等的距离（如图1）。
简述下高效液相色谱仪的操作全流程
高效液相色谱仪的操作全流程一、实验准备阶段1. 配置流动相：高效液相色谱仪的操作首先需要配置好所需的流动相。
流动相是液相色谱中推动样品组分在色谱柱上移动并分离的溶剂或溶剂混合物。
配置流动相时，应注意所使用的溶剂不能对实验或设备造成影响或损害，如堵塞或腐蚀。
同时，流动相必须经过滤和脱气处理，以避免气泡对实验结果的影响。
在更换流动相时，还需要保证两种溶剂的互溶性，如不互溶，则需要使用一种中间溶剂进行过渡。
2. 冲洗和平衡色谱柱及仪器：在配置好流动相后，需要对仪器及色谱柱进行冲洗和平衡。
这是为了确保仪器压力正常，基线稳定，以及色谱柱的填料处于最佳状态。
冲洗和平衡的过程中，应使用与实验流动相相同的溶剂，并设定适当的流速和压力。
3. 样品处理：在进样前，样品需要经过必要的净化处理。
这包括通过0.45um以下的微孔滤膜过滤，确保样品是澄清溶液。
过滤后的样品应装入合适的液相色谱样品瓶中待用。
二、样品运行阶段1. 设置方法参数：根据实验需要，在仪器的控制软件中设置或调用相应的参数。
这些参数包括流速、流动相组成、进样量、柱温、检测波长等。
这些参数的设定将直接影响色谱分离的效果和实验结果的准确性。
2. 编辑进样序列表：根据样品信息，编辑进样序列表。
进样序列表应包含每个样品的名称、进样量、进样次数等信息。
编辑完成后，保存并运行序列方法以分析样品并得到数据。
三、数据分析阶段色谱得到的原始数据为色谱图，色谱图上的每个峰代表一个组分。
需要对色谱峰进行积分处理，获得峰面积。
峰面积的大小与组分的浓度成正比，因此可以用来定量计算组分的浓度。
根据实验需要，可以使用不同的方法进行定量计算，如外标法、内标法、面积百分比法等。
此外，仪器还可以得到光谱或质谱信息，通过这些信息可以获得定性信息，如组分的结构、分子式等。
四、实验结束阶段1. 冲洗色谱柱：在实验结束后，应使用高有机相/水相冲洗柱子以清除残留的样品和杂质。
冲洗时，应注意纯相的比例不要超过95%，以避免对色谱柱造成损害。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程(岛津LC-10AT型HPLC)1.仪器组成及开机1.1仪器组成: 岛津LC-10AT泵(两台)CTO-10AS柱温箱RID-10A检测器(SPD-10A检测器)电脑一台(装有威玛龙色谱工作站)1.2 开机:插入电源,依次打开泵、柱温箱、检测器、电脑（并进入色谱工作站）。
2. LC-10AT泵参数设定2.1 开始运行前务必确保储液瓶中装有流动相，并且吸滤器已经放入储液瓶中。
排液管的另一端已经放入废液瓶中。
2.2待仪器自检完毕后, 将排液阀逆时针旋转1800,若显示屏左下角显示的压力值不在-0.3-0.3Mpa范围内,使用ZERO ADJ功能对压力传感器进行调零(反复按func 键,直至显示屏上有ZERO ADJ字样出现,按Enter键,然后再按CE键返回初始屏幕)。
2.3然后按purge ,进行吸入过滤器至泵的冲洗操作,也可用注射器在排液阀的管道处抽吸清洗。
冲洗完成后关闭排液阀。
(注意:如果排液阀旋转大于1800,空气将进入排液管,最终导致空气进入流动相。
)2.4 按一次func键后,设定所需流速(例如:设定1ml/min,按1键,然后按Enter键确定)。
逐次按func跳到相应Pmax,Pmin项下，输入最高和最低保护压力后，按Enter键确定，再按CE键恢复初始状态。
2.5 如果要使用两台泵,则按conc键进入设定状态，输入B泵（从动泵）的百分率，然后按Enter 确定，再按CE键返回初始界面。
2.6 按pump 启动泵,对色谱柱进行平衡,待压力显示稳定,可开始测试操作。
3. CTO-10AS柱温箱参数设定3.1 在初始屏幕下,按func 键进入操作温度设定状态,以数字键输入设定温度,然后按enter 确定。
3.2 再按一次func键设定上限温度,按enter 确定,按CE返回初始屏幕即可。
3.3 按oven 键启动加温程序,仪器会自动控温于所设温度。
4. RID-10A检测器参数设定按shift + R flow键,让流动相依次流过流通池、参比池，待参比池内液体置换完毕，再按一次shift + R flow键让流动相只通过流通池，直至基线跑平。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
一、所需流动相经过滤、脱气处理后待用。
安装好色谱柱。
二、检查供电电源是否稳定，各部件连接是否牢固。
三、开启仪器检测器和泵电源，待检测器电源指示灯由黄灯变成绿灯后，开启
仪器工作站，即双击桌面上图标LCwin1.0。
四、点击工作站中控制采集，点击开启，待仪器自检通过后，进入仪器控制采
集界面。
五、依次用甲醇、甲醇：水=2：8、流动相进行冲洗色谱系统，每次更换更换溶
液时，均需拧开放空阀，选择菜单泵下的快速冲洗模式，选定合适的时间进行冲洗，赶走泵内气泡。
确定泵内无气泡后，停止冲洗模式，关闭放空阀。
六、更换换上流动相后，按样品分析条件设置选择合适的流速、波长。
待色谱
设备达到平衡状态（柱压稳定，工作站基线稳定，一般需30-40min）后，即可进样分析。
七、分析完毕后，流动相中存在缓冲盐等溶剂，需先用甲醇：水=2:8，进行冲洗
至少30min，再用甲醇冲洗，待柱压降至正常值（依色谱柱而定，即柱压稳定后），停泵。
柱压降为零后关闭检测器和泵的电源。
八、样品分析应做好原始纪录，内容包括分析样品名称、送样时间、分析时间、
样品编号、检测数据、报告结果、报告时间、送样单位、分析员以便统计和查阅。
九、仪器如出现故障，应及时报告专业维修单位或专职维修人员，未经专业维
修培训或未取得维修资格证书的不能进行维修工作。
十、仪器室内严禁吸烟或进行任何无关明火操作。
仪器室内应配备二氧化碳灭
火器，分析人员应能正确操作使用。
依利特高效液相色谱仪操作规程
依利特高效液相色谱仪：
1.将准备好的流动相置于流动相管。
2.打开总电源，开启紫外-可见检测器开关、开启两个高压恒流泵开
关、开启电脑并打开液相色谱检测软件。
3.顺时针拧开高压恒流泵的放空阀，按下“冲洗键”，并用小烧杯
接住放空管流出的液体，洗涤30~60秒后，按下“运行/停止键”，逆时针拧紧高压恒流泵的放空阀。
4.单击液相色谱检测软件的系统配置，然后验证系统配置。
5.验证成功后，单击仪器控制，设定系统检测条件以及流动相流动
条件，开始作基线，基线稳定后，停止基线检测。
6.启动数据采集，插入微量进样器后将进样旋钮顺时针旋转至底进
样，然后将进样旋钮逆时针旋转至底开始检测。
7.等待检测过程完毕后重复5、6过程继续进样检测。
8.全部检测完毕后，单击仪器控制-检测器，将氘灯关掉，然后用“甲
醇”冲洗色谱柱至基线平直（一般运行30分钟）。
9.用纯净水（或乙醇、甲醇）清洗进样插孔、针头。
10.关掉紫外-可见检测器开关、两个高压恒流泵开关、关掉电脑，然
后关掉总电源。
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高效液相色谱仪流动相配制标准操作规程1.目的
明确高效液相色谱法流动相配制过程，保证操作过程的规范性。
2.适用范围
适用于实验室高效液相色谱法流动相配制。
3.职责
实验室分析人员负责按本规程进行操作。
4. 内容
4.1流动相批号的编写原则：流动相批号按配制日期编制，如批号20150609，代表2015年06月09日配制。
4.2流动相配制
4.2.1含水流动相和不含水流动相的配制所用量筒应区分开，配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒必须是干燥状态，不得有水。
4.2.2根据样品分析方法所规定的流动相体积比例配制，在清洁的带塞量筒中分别倒入相应的溶剂，若该流动相需加入适量的酸或碱，则戴上一次性手套，用专用注射器吸取规定体积的酸或碱，加入量筒，盖上塞子摇匀，振动过程应主要排气。
4.2.3含盐的缓冲液类流动相的配制应根据规定比例配制，分别秤取规定重量的盐于清洁的带塞量筒中，加入适量纯水，振摇，待固体完全溶解后，再加纯水至规定刻度，盖上塞子，摇匀。
4.2.4若该流动相对PH值有特殊要求，根据流动相配制规定的体积比例，用酸或碱调节PH值，用PH计测定直至规定范围内。
4.3流动相抽滤
4.3.1含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分，抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥无水的。
4.3.2抽滤装置准备：将过滤器套在三角烧瓶上，用镊子夹取0.45μm的水系或有机滤膜一张，放在砂芯过滤器上（注意：滤膜应将过滤面完全覆盖）；再将量杯压在滤膜上，量杯边缘和过滤器的边缘对齐；用配套的夹子将过滤器和量杯接头边缘固定（注意夹子位置应避开抽滤嘴）；将抽滤软管套在抽滤嘴上。
4.3.3抽滤：将少量配置好的流动相倒入量杯内，观察是否有漏液现象，若出现漏液须重新固定过滤器和量杯。
如未漏液则继续倒入流动相（注意不要超过量杯最大刻度线），开启真空泵抽滤。
抽滤结束先拔掉与抽滤嘴连接的真空软管，再关闭真空泵。
4.3.4脱气：将抽滤好的流动相转入流动相试剂瓶内（少量润洗一次倒入废液桶内再盛装），盖上瓶盖（瓶盖不得拧紧），常温下超声波超声15至20分钟。
4.4流动相储存及标识
流动相全部转入专用试剂瓶内后拧紧瓶盖，及时填写《流动相标签》贴于试剂瓶身中间位置，备用。
4.5流动相有限期如下：
4.6流动相配制工具清洁
4.6.1配制含水流动相用器具：先用自来水清洗一次，再用纯化水清洗3次，沥干后封口备用。
4.6.2配制不含水流动相用器具：用纯有机溶剂少量倒入已安装完毕的抽滤装置内，抽滤润洗一次，再将抽滤过的有机溶剂转入量筒内润洗量具，洗液倒入废液桶后，待用。
4.7填写配制记录
流动相配制后，配制人员及时填写相应的配制记录。
4.8注意事项
4.8.1流动相所用溶剂应选用色谱纯、高纯水或双蒸水。
4.8.2过滤流动相时应注意区分水系膜和有机滤膜使用范围，防止误用。
4.8.3配制不含水流动相的抽滤器具及存储容器应清洁干燥，不得残留水份。
4.8.4流动相严禁超过储存期限使用，经验证储存期限超过有效期流动相比例未发生变化的，须重新抽滤流动相并进行超声脱气处理后使用。
4.8.5不含有机溶剂的水系流动相每次使用前应进行刷洗，自来水冲洗干净后用纯化水润洗3次以上。