蒸发光检测器校准方法作业指导书分析

编号：JL13-理化-作业-121

蒸发光检测器校准方法

作业指导书

编写：年月日

审核：年月日

批准：年月日

理化实验室

蒸发光检测器校准方法作业指导书

1 使用范围

本规范主要适用于新制造、使用中或修理后的蒸发光检测器的校准。

2 引用文献

《液相色谱仪ELSD 蒸发光散射检测器简介与校准方法研究》广东省计量院JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》

蒸发光检测器使用说明书

3 术语和计量单位

蒸发光散射检测器是上世纪90年代开始应用的一种新型通用性的HPLC质量检测器：其主要特点在对于没有紫外吸收的化合物，比如皂甙、内酯、糖类等化合物，在ELSD上会有响应,而且稳定性好,灵敏度高,可进行梯度洗脱分析。在我国中药、食品等检测领域有着广乏的应用。

4 概述

通常，蒸发光检测器的结构是由雾化器蒸发、漂移管和光散射池三部分组成。其工作原理如图所示，雾化器与分析柱出口直接相连，柱洗脱液进入雾化器针管在针的末端，脱洗液和充入的气体（通常为氮气）混合形成均匀的微小液滴，可通过调节气体和流动相的流速来调节雾化器产生的液滴的大小。漂移管的作用在于使气溶胶中的易挥发组分挥发，流动相中的不挥发成分经过漂移管进入光散射池。在光散射池中，光源照射雾状颗粒产生散射光，经光电倍增管收集，根据散射光强正比于溶质粒子数目和粒子大小，样品组分含量得到检测。本校准方法主要依据《液相色谱仪ELSD 蒸发光散射检测器简介与校准方法研究》和JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》，对蒸发光检测器的校准进行了规范。

5 计量性能要求

5.1外观

5.1.1 蒸发光检测器应有下列标志：仪器名称、型号、制造日期和仪器编号、制造厂名、国产离心机还应有制造计量器具许可证标志及编号。

5.1.2 仪器外观不应有影响仪器正常工作的机械损伤。

5.1.3 仪器的各紧固件和电缆接插件均应紧固，插接良好；各运动件运行平稳自

如；各功能键应完好，工作正常。

5.1.4 仪器的指示刻度和数字清晰，数字显示完整；

5.2 仪器技术性能

5.2.1 输液系统：输液管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无泄漏。

5.2.2流量设定值误差S S和流量稳定性误差S R应符合表1 的要求

5.2.3 梯度误差GC：不超过±3 %。

5.2.4柱温箱温度设定值误差ΔT C：不超过±2℃。

5.2.5温度稳定性T C：不超过1℃。

5.2.6 噪声：优于1mv；漂移：应优于0.5%/30min。

5.2.7 检出限：(100ng-100pg) 范围内（葡萄糖）

5.2.8 定性重复性：优于1%；定量重复性：优于3%。

表1 流量设定误差S S和流量稳定性误差S R的要求

6 计量器具控制

6.1校准的环境条件

6.1.1环境温度：（15～35）℃

6.1.2相对湿度：≤80％，或按仪器说明书规定。

6.1.3电源：电压AC（220±10）V，频率（50±1）Hz。

6.1.4仪器周围应无强烈振动、无强烈交流电干扰，无强气流及酸、碱等腐蚀性气体。

6.1.5仪器及电源应有良好接地。

6.2所需标准器及标准物质

6.2.1 色谱检定测量仪

6.2.2葡萄糖标准物质

6.2.3 秒表

6.3 校准条件

采用C 18柱，流动相为90%的水和10%的甲醇，采用等度洗脱方式，雾化载气为高纯氮气等。

7 校准项目和校准方法

7.1输液系统的检校

7.1.1泵耐压的检校

将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为 1mL/min ，按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min ，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min 无泄漏。

7.1.2泵流量设定值误差S S 、流量稳定性误差S R 的检校

参照下表的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集下表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按下式计算S S 和S R 。

100%/F F -F S S S M S ⨯=）（

100%F /F -F S M min max R ⨯=）（

式中：F M --t /W -W F t 12M ⋅=

ρ）（，流量实测值，mL/min ； W 2--容量瓶+流动相的质量，g ；

W 1--容量瓶的质量，g ；

ρt --试验温度下流动相的密度，g/cm 3；

t--收集流动相的时间，min ； M F --同一组测量的算术平均值，mL/min ；

F S --流量设定值，mL/min ；

F max --同一组测量中流量最大值，mL/min ；

F min --同一组测量中流量最小值，mL.min 。

7.2梯度误差的检校

由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A 溶剂为纯水，B 溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B 经由5个阶梯从0变到100%，如图1所示。将输液泵和

检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A 溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出A 、B 溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。从B 溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读数），按下式计算梯度误差G ci ，取G ci 最大者作为仪器梯度误差。

100%L )/L -L (m m i ⨯=ci G

式中：G ci --第i 段梯度误差 ( % ) ；

i L --第i 段输出信号值（或记录仪读数）平均值；

m L --各段输出信号（或记录仪读数）平均值的平均值。

图1 剃度误差检校示意图

梯度误差G C ：不超过±3 % 。

7.3 柱箱温度设定值误差ΔT S 和控温稳定性T C 的检校

将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃（也可根据用户使用温度设定）进行检校。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min 记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔT S ，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性T C 。

7.4基线噪声和基线漂移的检校

仪器开机后，在室温下设定泵的流速为1%，按仪器规定的要求调节好载气（氮气）流速和漂移管温度，设定合适增益等，待仪器稳定后，采用不进样方式运行30min ，测量仪器的噪声和漂移。

7.5 检出限

配制25ug/L 的葡萄糖水溶液，每次进样量20μL ，测量3次取平均值；检出限的公式可依据 JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》中规定的最小检测浓度