石蜡切片法
石蜡切片的主要步骤
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
实验六 石蜡切片法1
四、实验结果
包埋后的石蜡快应为均匀的半透明状，蜡块中没有 气泡。
包埋材料摆放的位置是否符合要求？
修块效果：每个蜡边与材料平行，蜡边的上下左右摇 平行。
切片效果：得到厚薄均匀的蜡带，蜡带无破损。 展片效果：展片后蜡带或蜡片平整，无气泡、粘附牢 固，蜡带略呈透明状，后续制片不易脱落。
五、作业
实验完毕，每人交包埋块一个，在纸盒上写
上材料名称及自己的姓名和日期；
实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻
片上写上材料名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
苦味酸液（波茵氏液）
甲液： 1％铬酸 10％醋酸 乙液： 甲醛 苦味酸饱和水溶液 50ml 20ml 25ml 75ml
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
实验六 石蜡切片法
—— 包埋、切片和贴片
石蜡切片法
石蜡切片法是显微制片技术中最常用的一种方法，除了
藻类、菌类、木材和骨骼外一般的材料均可以使用，既 可制成较薄的切片，使材料各部分都清晰可见，同时也
可制成连续切片，观察材料的动态发生及层次，所以，
它在显微制片技术中占有非常重要的地位，必须掌握， 同时也是进行透射电镜观察超薄切片的基础。
实验七 石蜡切片法2
番红-固绿染色中：番红可将木质化细胞壁红色，角质化细胞壁 粉红色，栓化细胞壁黄褐色，染色体、核仁、中心体染红色； 固绿将纤维素细胞壁染成绿色，细胞质染成淡绿色。
五、作业
实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻 片上写上材料名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
实验八 石蜡切片法
—— 染色、封藏
实验原理
切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每 一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石 蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色 的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同 的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置， 然后使带水的载片经历脱水→透明等步骤最后用树胶封 片。
明
100%AL 5min
95%AL 5min
复 水
80%AL 5min
70%AL 5min
50%AL 5min
蒸馏水 5min 染 色 苏木精染色液 20min
100%AL 5min
95%AL 5min
脱
水
80%AL 5min
70%AL 过一下
1%伊红水溶液 3min
对 染
蒸馏水漂洗 5min，换几次
氨水中“蓝 3-4s 化” 水洗 5min，换几次
染色时注意的几个问题
应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法 ； 材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必
须相同 ； 作二重染色时，应先染碱性染 料，后染酸性染料； 染色宁可深一点，不要浅一点 ； 作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净； 制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
怎样制作石蜡切片
怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。
以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。
-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。
确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。
-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。
-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。
2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。
-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。
-等待石蜡冷却和凝固。
你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。
3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。
-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。
你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。
4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。
-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。
5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。
-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。
6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。
- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。
-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。
制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。
在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。
石蜡切片法
取材 固定 浸洗（冲洗） 脱水 透明 浸蜡（透蜡） 包埋
八、 切片 九、 展片和贴片（裱片） 十、 烤片 十一、 染色 十二、 封固（封片） 十三、 贴标签
一、取材
1、用锐利刀、剪剪切组织块，不可来回切割和 用力挤、压，以免损伤组织。 2、组织块大小一般为5×5×2mm。 3、切好的组织块经生理盐水清洗后可用牙签
十、 烤片 1、展片时是利用水使切片展平，但载玻片 与蜡片之间尚留有部分水分，烤干便是将水分 通过温箱加热后除去，使组织在脱蜡后依然能 够粘贴在载玻片上。若水分未烤干，则脱蜡时 组织会脱落。 2、烤干时的温度<60℃，一般以50℃较为 适当；也可置37℃温箱内烤干（约12~24hr，烤 干后蜡片在玻片上呈透明状）。烤干的时间， 以底烤去水分为原则。
四、切片发生严重皱纹： （1）蜡太软、室温过高→用冰块冰一下再切； （2）切片刀不锋利→磨刀； （3）刀的切削角过小→切刀片仅能在蜡块切削面上浮切 →改变切削角 五、蜡片裂纹： （1）切片刀口缺口刀纹； （2）刀刃不干净→干布擦； （3）蜡块中具有坚硬杂质或尘埃：石蜡过滤及修块时用
刀削去各个方面的表面蜡（纸屑）。
十三、 贴标签 切片封后，在切片的右侧贴上标签， 平放于无灰尘或放在左右的温箱中烤几天 ，待树胶干固后便可使用。 如制成的切片上，树胶过多而溢出盖 片，则可候其完全干固后，用刀片轻轻刮 去，再用纸蘸二甲苯少许将胶擦净。
七、包埋 1、目的：使组织与石蜡在硬度上适配， 以利于切片。 2、硬蜡包埋温度65℃。 3、包埋操作要快，材料吸、夹入石蜡后 轻吹使蜡表面凝结成薄膜状，即可将 其没入水中使快速、均匀、完全凝固
八、切片 1、单面刀片修整蜡块，长：宽约3：2，长边与 刀刃平行。 2、木块上先熔上一点蜡，再用烫蜡铲将蜡块牢固 地粘在木块上；之后沿蜡块四周用烧热的解剖 针烫几下，使蜡块粘牢。 3、安装，刀口与蜡块的角度<100。 4、切片：5~8m；左手用毛笔托住蜡带， 右手不断摇动切片机，获连续切片。 5、切片前，将蜡块置冰箱冷藏一下； 较硬、难切的材料，可将蜡块在甘油：50%酒 精=1：1液中半浸泡数天再进行切片。
实验八石蜡切片法一
盐酸、蛋清、甘油。 • 3、材料 • 各类你感兴趣的固定标本。
.
4
四、实验步骤
• 1、取材 • 2、固定 • 3、漂洗 • 4、脱水 • 5、透明 • 6、透蜡 • 7、包埋 • 8、修块 • 9、切片 • 10、染色
实验八 石蜡切片法
.
1
一 、实验目的
• 学习石蜡切片法 • 了解组织染色原理
.
2
二、实验原理
• 用石蜡渗透固化组织；
• 用碱性染料如苏木精、碱性品红等，使细 胞核着色；
• 用酸性染料如伊红、酸性品红等，使细胞 中的嗜酸性成分着色，如蛋白质。
.
3
三 、实验用品
• 1、器材： • 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、
• 未注明时间的一律处理2-3min。
.
8
五、作业
• 简述石蜡切片过程，绘制你所观察到的细 胞形态。
• 提交一张你认为制作较好的玻片。
.
9
.
பைடு நூலகம்
5
取材到切片
• 取材——固定（Cannoy’s），材料厚度 2mm。
• 100%酒精——100%酒精——二甲苯:酒精 （1:1）——二甲苯——二甲苯——二甲苯: 石蜡（65℃ 1:1）——石蜡（65℃）——石 蜡（65℃），以上处理各10-30min，视材 料大小而定，最后一步石蜡20min 。
• 包埋——修块——切片——贴片
.
6
脱蜡与复水
• 二甲苯——二甲苯——二甲苯/无水乙醇 (1/1)——无水乙醇 ——无水乙醇——95% 乙醇——80%乙醇——70%乙醇——50% 乙醇——蒸馏水。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
生物显微技术 第一章 石蜡切片制作技术
三、包埋
是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起 倒入一定形状的容器内，并立即投入冷水中， 使它凝固成含材料的蜡块，以备切片。
从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋 用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，用温镊 子夹取材料平放于纸盒底部，使之排列整齐。 将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆 的水面，待石蜡的表面凝固，将 纸盒慢慢 浸入水中，待石蜡完全凝固（约30分钟） 后即可取出备用。
包埋前应先把必需的用具（恒温箱、温台、纸盒） 准备好。 包埋用的镊子要先放在温箱中预热。
第五节 切片、展片和贴片
一、切 片 是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。 实验程序 1. 切片前的准备工作 （1）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。 （2 ）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长
四、注意事项
1 透明的注意事项
使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中水 分进入； 更换透明剂，动作要迅速； 材料周围 出现白色雾状，应退回纯酒精中重新脱水。
2 透蜡的注意事项
动物材料常用的石蜡熔点为52-56ºC；植物材料 为54-60ºC。 透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；
3 包埋的注意事项
第一节 动物的选择、杀死和取材
一、动物的选择 根据实验目的选择合适的动物和组织 如：健康状况的选择 观察不同组织、器官选择不同的动物（如：
肥大细胞、肝小叶、环层小体等）
二、动物致死法 根据动物的大小、种类和观察目的不同，进
行适当的选择。 1、麻醉法 2、空气栓塞法 3、断头法 4、击头法 5、股动脉放血法 要求动作迅速、及时取材、迅速固定
一种叶片石蜡切片方法
一种叶片石蜡切片方法叶片石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备植物叶片的组织切片，以便进一步观察和研究植物组织的细胞结构和生理特性。
下面我们将介绍一种常用的叶片石蜡切片方法。
首先，需要准备的材料和试剂包括植物叶片样品、石蜡、甲苯、乙醇，还有显微镜玻片和载玻片等。
1. 取一片健康的植物叶片，将叶片剪下并迅速放入甲醇中，以停止其代谢过程并保持组织形态。
2. 用甲苯进行脱水。
将样品在室温下脱水处理，首先使用70%乙醇浸泡5-10分钟，然后使用95%乙醇浸泡10-15分钟，最后使用100%乙醇浸泡2-3次，每次浸泡15分钟。
3. 渗透处理。
将脱水后的样品放入50%石蜡和50%甲苯的混合液中，放置于室温下，持续时间视样品大小而定，一般是数小时至一晚。
4. 嵌入处理。
将样品迅速移入100%石蜡中，然后放入预先加热的熔化石蜡中，保持温度在60-70摄氏度之间。
尽量避免石蜡中出现气泡。
5. 切片。
将嵌入好的组织块放入切片机中，用刀片切割组织块，厚度一般在5-15微米之间。
6. 切片浸泡。
用甲苯将切片从切片刀上漂移到预先加热的水浴中，水温一般为40-50摄氏度。
使切片完全展平。
7. 取片和上片。
使用显微镊子将切片从水浴中取出，放在显微镜玻片上，然后将载玻片轻轻覆盖在切片上。
用手轻轻压实，以确保切片紧密粘附在玻片上。
8. 干燥和嵌片。
将上片的载玻片放入150摄氏度的烘箱中干燥，直至石蜡完全固化。
使用橄榄油将玻片嵌入到显微镜玻片中，然后用适当的胶水封口。
以上就是一种常用的叶片石蜡切片方法。
通过这个方法制备的叶片切片可以用于各种显微技术，如细胞染色、原位杂交、免疫组化等，以进一步研究植物组织的细胞结构和生理特性。
石蜡切片法取材与固定
石蜡切片的主要步骤： 一、取材 三、洗涤 五、透明 二、固定 四、脱水 六、透蜡与包埋
七、切片
九、染色
八、贴片
十、封藏
一、实验原理： 1、取材
指从人体或实验动物体内取下所需观察的组织 材料的过程。 材料的选择是制作切片的第一步。 用于制片的动、植物材料应选择新鲜的，用陈腐 的材料制片往往不能反映材料的真正情况。
⑤ 固定材料的容器应注明固定液、材料来源、日
期、操作者签名等，以免与其他材料混淆。
⑥ 任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液
的容器必须密闭，以防挥发损伤器官和眼睛，
忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。
三、常用固定液的种类
（一）单一固定液 1、酒精（C2H5OH）：无色液体，可与水任意比例 混合，是一种还原剂，不可随意与重铬酸钾、铬 酸、锇酸等混合。酒精渗透力很强，易引起组织 收缩，固定用的适宜浓度一般为70％。
3醋酸冰醋酸ch3cooh4苦味酸三硝基苯酚c6h2no23oh5重铬酸钾k2cr2076铬酸三氧化铬水溶液h2cro47四氧化锇锇酸oso48氯化汞升汞或二氯化汞hgcl2二混合固定液1卡诺carrnoy氏固定液2faa固定液醋酸酒精福尔马林混合液3波恩bouin氏固定液4秦克zenker氏固定液5纳瓦兴nawashin氏固定液四实验步骤1动物取材
2、甲醛（HCHO）：无色气体，易挥发，具有强烈 的刺激性气味，37～40％的水溶液称为福尔马林。 甲醛也是一种强的还原剂，不可与铬酸、重铬酸 钾、四氧化锇等氧化剂混合。穿透力虽不如酒精， 但不会象酒精那样引起组织强烈收缩，两者混合 使用效果更好。常用于固定和保存标本的福尔马 林浓度为5～10％。
免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法（精髓版）
免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法（精髓版）免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法一、原理及应用免疫组化，简单说是用标记的抗体对组织中相应抗原进行定位、定性和部分定量的分析。
二、操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。
（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。
（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（4）0.5% Triton X-100通透（PBS配制），目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。
Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
当然了，如果检测的是膜抗原无需通透，忽略该步骤。
（4）抗原修复：使用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，微波炉微波高火 3min，之后转成低火 15-30min。
注：福尔马林或多聚甲醛固定，会导致蛋白交联，而解交联的过程称为抗原修复。
所以冰冻切片不需要抗原修复！！抗原修复方法有多种，一般包括两大类：酶抗原修复(胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K) 热抗原修复(高压蒸汽法、微波法、水浴加热法)。
微波法最为常用。
（5）1×PBS 洗涤3次，每次5min。
（6）3% H2O2，室温孵育30min，目的是灭活内源性过氧化物酶。
（7）1×PBS 洗涤3次，每次5min。
（8）使用1% BSA 进行室温封闭30min，用于封闭非特异性抗原表位。
（9）根据抗体说明书使用合适浓度的特异性一抗，4°C 湿盒中静置过夜孵育。
（10）次日取出切片，室温下复温30min。
（11）1×PBS 洗涤3次，每次5min。
（12）按照免疫组化二抗试剂盒说明书操作。
（13）DAB 显色：DAB 显色液按说明书配制，使用时滴加到血管组织上，显微镜下观察并计时，待目的蛋白显色呈棕黄色时结束显色。
快速石蜡切片法在活检组织及免疫组化中的应用
快速石蜡切片法在活检组织及免疫组化中的应用关键词快速石蜡切片病理诊断免疫组化石蜡切片是一种常规的制片方法，完成此过程一般需2d的时间。
因此，影响临床尽快的确认疾病，对患者也甚为不便。
为解决这一问题，我们近年来开展了一种快速石蜡切片技术，特别适用于临床活检，在2h内即可出片。
具体步骤如下：1、材料与方法整个过程需在水浴锅上完成。
⑴先将水浴锅调温至60℃-70℃备用；⑵组织取材，大小不限，厚度在0.1cm-0.3cm以内；⑶将取好的活检组织放入三角烧瓶，加入15-20倍的10%甲醛溶液，在酒精灯上加温5min-15min（以不沸腾起泡为宜）；⑷将活检组织取出放入无水乙醇中10min-25min；⑸移入丙酮中5min；⑹二甲苯透明（以组织透明为准）；⑺浸蜡10min-20min；⑻常规包埋，切片；⑼将切片放入水浴锅上烘烤数分钟（蜡化为止）；⑽脱蜡，脱苯，水洗；⑾苏木素染色，在酒精灯上适度加温，然后分化，返蓝，在数秒钟内完成；⑿伊红染色，加温数秒中，水洗；⒀逐级脱水，透明，封片。
2、讨论实践证明，此方法简便、速度快，只要掌握时间得当，做出的切片对临床诊断无影响，经光镜观察与常规石蜡切片相比较，并无细胞收缩不当的情况。
我们在实践中观察到，各种不同的活检组织在做快速石蜡切片的过程中，所用时间并不是千篇一律，而是差异很大。
我们仅以我们所做的400例不同临床活检组织材料的体会列表，说明各种组织以最短时间做出满意切片的参数（见附表）。
附表快速石蜡切片法在各种组织材料的老树盘根、脱水浸蜡所需时间(min)步骤息肉 (肠、喉、宫颈)胃镜妇科尖锐湿疣乳腺淋巴组织脂肪固定515110-1510脱水15151522520浸蜡1011022530综上所述，快速石蜡切片法是一种实用可行的技术方法，值得推广。
它可针对不同组织做特殊的时间处理，某种程度上优于在脱水筐内固定同步脱水、透明的组织材料。
常规石蜡切片在免疫组化中已大量应用，对于快速石蜡切片能否影响组化染色这一问题我们做了进一步的观察：随机取快速石蜡切片的蜡块，淋巴结2块（两例），平滑肌瘤2块（两例）为阳性对照。
实验十二、石蜡切片法(一)取材、固定、洗涤、脱水
五、思考题
1. 为什么切取病理材料时应加对照？ 2. 为什么固定液要以新配为好？
二、试剂与器材 1. 试 剂：10%中性福尔马林固定液、各级乙醇（50% 70%、 50%、70% 50% 70% 85%、95%、100%） 2.器 材：解剖刀、解剖针、剪刀、镊子、解剖盘、 单面刀片、培养皿、吸管、指形管、 橡皮圈、软木塞、胶布、塑料脸盆。
三、实验程序 1．取材：用锋利的刀片切取材料。 2．固定：将已切好的材料放入10%的福尔马林溶液中 固定12-24小时。固定剂一般为组织块体积的10-15倍。 3．洗涤：材料自固定液中取出，放入指形管，加入 半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水 冲洗。流水冲洗时间一般需要12-24小时。 4．脱水：材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。 一般经50%、70%、85%、95%直至纯酒精。每级停留 约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中。
实验十二
石蜡切片法（一）取材、固定、洗涤、脱水
一、实验原理 • 取 材： 用于制片的动植物材料应选择新鲜的，用陈 腐材料制片，往往不能反映材料的真正情况。 • 固 定： 固定是借助化学药品的作用,使细胞组织的形 态保存下来,不使其改变形态和变质。
• 洗 涤:是洗去渗入细胞内部的固定液。因材料中的固 定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶，影响观 察；有的会继续作用，使材料变坏等。 • 脱 水：材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水 剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存。 因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的， 只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入。
石蜡切片法
2. 取材取材时，最好用徒手切片等方法，检查一下材料的内部结构是否适合需要，不理想时，再重新取材。
要点：（1）在符合观察要求的情况下，材料越小越好，体积尺寸一般不超过0.5cm。
（2）进行科研用的，材料样本数量要符合统计学的需要，并留有充分的余地。
（3）有特殊需要的材料，如茎尖纵切要看腋芽等结构的，要将材料作好标记——两侧削扁，切片时才有方向性。
（4）材料取下后要设法保持材料的新鲜。
材料取好后要立即固定。
3. 固定（FAA者可免）FAA固定液的配置：（50-70%乙醇90ml+冰醋酸5ml+37-40%甲醛（即福尔马林）5ml），常温下至少24hr或更长（视材料厚薄、大小而定）。
固定后一般的材料都可以在此液中于冰箱长期保存。
要点：①固定液的体积为材料体积的20-50倍；②固定液开始浸泡时，要对材料抽气，5. 脱水材料完成“冲洗”后，将材料上多余的水尽量除去，然后进入第一级脱水剂中。
脱水剂的浓度分为6-7级，从低到高逐级进行，每级脱水约2小时。
材料小和嫩的脱水时间可以缩短，材料大和硬（木质化程度高的）脱水的时间可以长一些，需要多总结经验。
脱水过程长，尤其是在高浓度脱水剂中的时间长，材料会变脆，不利于切片。
见下表。
注意：用FAA固定的材料，因不经“冲洗”，可以直接从2级脱水剂开始脱水。
注意：脱水剂用量不少于材料体积的5倍。
叔丁醇脱水所要求的温度，以叔丁醇不凝固材料进入无水的脱水剂中后，若脱水剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到7. 浸蜡（透蜡）材料从叔丁醇脱水后进入装有适量融化的叔丁醇（恒温箱最好从36-40度缓慢升到56-60℃，透蜡的效果才好）的蜡管中，在蜡管中逐渐多次加入碎蜡（熔点48-50℃），直至与叔丁醇等体积为止（每次加蜡后都将透明剂瓶盖上，以免透明剂过渡蒸发），然后在56-60℃温箱中4-8小时或过夜。
此时必须盖紧蜡管塞，以免叔丁醇蒸发。
浸蜡用石蜡的熔点应该低于包埋用石蜡的熔点、逐渐增加石蜡的浓度、逐渐增加透蜡的温度，才能使石蜡易于慢慢透入材料。
实验十四、石蜡切片法(三)切片、贴片
（二）贴片
1．取一清洁的载玻片，滴一小滴粘片剂于玻片中央， 用手指涂抹均匀。 2．滴1-2滴蒸馏水于已涂粘片剂的载玻片上。 3．用刀片割一小段蜡带，放在水面上。注意蜡片光面 贴于玻片上。并使之偏玻片的一端，另一端贴标签。 4．把玻片标本置于展片台上（温度保持在40-45ºC）， 直到蜡片伸展摊平。 5．展片后把玻片标本编好记号，放在平盘上。
蜡带盘、 载玻片、 镊子、 滴瓶、展片台。
三、实验程序 （一）切片 1. 切片前的准备工作 （1）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或 长方形，组织四周留下2—3mm宽的石蜡。点燃酒精 灯，然后用烤热的蜡铲放在台木和蜡块之间，利用蜡 铲的温度熔化两者的蜡，把蜡块粘附在台木上。 （2 ）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。
切片机切片机的式样很多一般常用的为轮转式切片机这种切片机的夹物部分是上下移动前后推进的而夹刀部分则固定不动
实验十四 石蜡切片法（三） 切片、贴片 一、实验原理 切 片 是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的 切片带。 贴 片 是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便 于染色。
二、试剂与器材 1.试 2.器 剂：Haupt’s明胶粘片剂。 材：切片机、 切片刀、 单面刀片、 酒精灯、 蜡铲、台木、 毛笔、
四、注意事项 1.要严格按照操作程序进行切片。 2.切片刀刀口锋利，应用时切忌手指触及刀口,并 且防止切片刀跌落桌上或地面，以免发生刀伤事 故。 3 .切片机工作完毕，应将大手轮处于锁紧状态， 此时机头在最 上端，将护刀盖推至合并位置。 4. 及时清除废蜡，保持设备清洁。
五、思考题 1. 为什么切片分离不能形成蜡带？ 2 .为什么切出的蜡带弯曲？ 3. 哪些原因会引起蜡带上卷，切过刀口即破裂？应 如何解决？
Hale Waihona Puke 2.切片机 切片机的式样很多，一般常用的为轮转式切片机，这 种切片机的夹物部分是上下移动，前后推进的，而夹刀 部分则固定不动。通过调整控制刀片厚度的微动装置就 可以切出不同厚度的连续切片。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都是质谱成像分析中常用的技术。
它们各自具有优点，可以根据实验需求进行选择。
石蜡切片法是将组织样本固定在石蜡块中，然后用切片机切成非常薄的切片(通常在20-50微米之间)。
这种方法的优点在于其切割厚度均匀，可以提供高质量的细胞和组织的图像。
此外，由于使用的是石蜡作为固定剂，因此可以得到长期保存的切片。
石蜡切片也有其缺点。
石蜡本身是一种有机物质，可能会对某些生物分子产生影响。
石蜡切片需要经过一系列复杂的处理步骤，包括脱水、包埋、切片等，这可能增加实验的复杂性和时间成本。
相比之下，冰冻切片法则是在冷冻状态下快速切割生物组织并立即冻结以保留其完整性。
这种方法的优点在于它可以提供实时观察的活体细胞和组织结构，对于研究动态过程非常有用。
此外，冰冻切片不需要使用石蜡或其他固定剂，因此不会对生物分子产生影响。
然而，冰冻切片也有其挑战。
由于是在冷冻状态下进行切割，因此切片的质量可能受到冷冻损伤的影响。
此外，冰冻切片需要在极短的时间内完成，这可能对切片机的性能要求较高。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析，选择哪种方法取决于具体
的实验需求。
如果需要长期保存的高质量图像，或者需要研究静态结构和三维形态，那么石蜡切片可能是更好的选择。
而如果需要实时观察活体细胞和组织结构，或者对时间敏感，那么冰冻切片可能更合适。
石蜡切片的操作方法
石蜡切片的操作方法石蜡切片是一种常用的组织切片制备方法，用于细胞学和组织学的研究。
下面是石蜡切片的操作方法：1. 收集样本：选择要制备切片的组织样本或细胞样本。
样本可以是动物组织、植物组织或细胞培养物。
2. 选择合适的浸渍剂：石蜡切片需要将样本浸渍在石蜡之中，以固定和保护样本。
常用的浸渍剂包括甲醇、乙醇和二甲苯。
3. 固定样本：将样本固定在固定剂（如甲醛）中，以保持其形态结构。
固定时间根据样本的类型和大小而定，一般在4C下静置数小时或过夜。
4. 脱水：在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中，将固定的样本从水中脱水，使其逐渐转移到纯度较高的乙醇中。
5. 渗透：将脱水的样本浸渍在二甲苯或其他有机溶剂中，使其渗透并置换乙醇。
浸渍时间根据样本的大小和组织特性而定，一般在一到数小时之间。
6. 包埋：将渗透后的样本置于石蜡中，使其完全浸润。
石蜡块可以预先加热至液态，然后将样本放入其中，或者将样本以及适量的石蜡放入模具中，然后通过加热使其固化。
7. 切片：将制备好的石蜡块放入石蜡切片机中，使用旋转切片刀将其切成薄片。
切片厚度一般为4-10微米。
8. 取片：用切片刀或镊子将切好的石蜡切片取出，并放置在清洁的显微镜载玻片或切片架上。
9. 脱脂：将石蜡切片置于加热的二甲苯或其他脱蜡剂中，使其脱去石蜡。
10. 染色：根据需要，可对石蜡切片进行染色，例如常用的血液和组织标本染色方法如伊红染色(H&E染色)。
11. 干燥：将染色的切片在室温下晾干或在加热台上加热至干燥。
最后，将切片用显微镜载玻片覆盖，并封口保存。
以上就是石蜡切片的一般操作方法，每个实验室可能会根据具体需求进行微调。
在操作过程中要注意安全，避免接触有毒溶剂和使用锋利的刀片时的切割操作。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
石蜡切片法在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前,必须根据植物材料的特性,采用不同的方法,对植物材料进行处理,把材料制成透明的玻片标本.根据材料的性质和制作法的不同,常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类,前者常用的有徒手切片法,冰冻切片法,火棉胶切片法,石蜡切片法,冷冻切片法等,其中以石蜡切片法最为常用.后者包括整体封藏法,涂布法,压片法等.石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法.石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.取材用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定.取材的注意事项如下:(1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料.(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的.雌,雄蕊一般不需分割.(3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞分裂活动较明显.(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低.(二)固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定.材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签.良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色.常用固定液:简单固定液以一种化学药品配制的固定液.⑴乙醇为凝固型固定剂.常用无水乙醇或95%乙醇.⑵甲醛为非凝固性固定剂.具强烈刺激性气味.纯净的甲醛为无色透明液体.固定用的浓度为4%-10%.⑶醋酸为凝固型固定剂.为无色透明的液体,刺激性极强,低温下凝结成冰,故又名冰醋酸.2.混合固定液:由几种试剂,适量配制而成.混合遵循原则:①优缺点互补;②膨胀与收缩相互平衡;③强氧化剂与还原剂应分别配置.常用混合固定液有下列几种:⑴FAA固定液(福尔马林-冰醋酸-乙醇)广泛适用于根,茎,叶,花药,子房的组织切片,所以又称为万能固定液.一般固定时间不低于24h.该固定液优点是在较低温度下(10℃左右)适用于材料的长期保存,可兼作保存液.并且固定的材料,不妨碍染色,但用于细胞学上的固定效果较差.⑵纳瓦兴(Navaschjn's)固定液1912年首创.适用于细胞学与组织学研究的切片观察.但渗透慢,不能长期保存;主要用于显示分裂相.(三)抽气植物材料内部多由于含有空气,导致固定液不能完全深入.材料投入固定液后需要立即抽气.以便让固定液有效透入材料组织中,并排除材料内气泡的干扰.一般抽气时间为20-30min.抽过气的材料在停止抽气,应沉入底部.(四)洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶,影响观察;有的还会继续作用,使材料变质等.因此,在使用材料时,需根据固定液的种类,用水,缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液.如:用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次.如用水洗涤,可将材料自固定液中取出,放入指形管,加入半管水,用纱布将管口扎紧,置于水槽内,进行流水冲洗.流水冲洗时间一般为12-24h.(五)脱水材料经洗涤后含有部分水分,会使材料分解.而且透明剂与水是不相混合的,不利于材料的透明和包埋等后期处理.因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分,以便让石蜡渗透进细胞.所以,脱水是制片的关键环节.脱水剂要求能与水混合,而且能与其他有机溶剂互相替代.脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行,防止吸收空气中的水分;在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料,以免损坏材料.(六)透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质,可以将材料中的脱水剂置换出来,使石蜡能顺利进入材料中.二甲苯是目前应用最广的透明剂,作用迅速,但易使材料变脆..(七)浸蜡是指逐步清除材料中的透明剂,以使石蜡充分渗透于材料内部的过程.这样,材料的各部分都能保持原来的结构与位置,切片不致发生破裂或其他变形.浸蜡是一个渐进的过程,常用的正丁醇.每次浸蜡的时间,视材料大小而调节.(八)包埋材料经过足够时间的浸蜡后,需包入蜡块,以备切片.操作方法:根据切片材料大小,确定所需纸盒的尺寸,用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒.(九)切片即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带.(十)贴片是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上,以便于染色和观察.常用的粘片剂有下列二种:(1)明胶黏片剂(2)蛋清黏片剂(十一)染色即根据植物细胞中不同的化学性质,用染料分别进行染色,以利于观察切片中细胞与组织的形态与构造及其内含物等.染色基本程序为脱蜡,染色,分色封片.染色方法可分为下列几类:①单染只用一种染料染色.②双重染色两种染料染色,如番红--固绿;苏木精---曙红.③多重染色多种染料染色,如番红—固绿—桔红G;酸性品红—苯胺蓝—桔红G等.(十二)封藏封藏于中性树胶中,使材料能在显微镜下清晰地显示出来,并能长期保存.方法:将含材料的载玻片放在吸水纸上(切片一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(必须在二甲苯干燥前进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触,然后再缓慢地放下,避免产生气泡.补充：注意事项：１、制片是一个连续的操作过程，往往要连续几天才能完成，因此，事先一定要制订工作日程计划，应按顺序进行工作。
这样可避免和其它工作发生冲突，也不会因前后顺序颠到或超过了规定的时间，给工作带来不必要的损失。
２、制片的各个步骤都是互相关联的，如脱水不彻底就会影响到透明的程度，以至影响蜡块的质量。
为此，必须对任何一个步骤，都要细致、严格进行操作。
３、每张切片都是来之不易的，因此，应倍加爱护，不要损坏。
24其他回答(2)家，港湾。
3级2009-09-14实验七石蜡切片法——固定与包埋一、实验目的掌握石蜡切片法中固定、透明与包埋的基本操作步骤及要点。
二、实验材料党参、秦艽或其它药材的根三、实验用具及试剂福尔马林-酒精-醋酸混合固定液(简称FAA)、各级酒精溶液、二甲苯、石蜡（熔点52～54℃）、恒温箱、电热板、解剖针等。
四、实验内容与步骤1．取材取培养在花盆中或药用植物园中的党参根或秦艽根，用水冲去附在其上的木屑或泥土，切成5mm长的小段(亦可用带侧根的部分)。
2．固定FAA固定液中固定24h以上。
3．脱水将FAA固定液倒出后，转入70%酒精中浸泡1h后，再顺次转入83%和95%酒精中各2h，然后转入纯酒精中2～3h（中间换一次)。
4．透明等量纯酒精及二甲苯中2h，二甲苯2h(中间换一次)。
5．透蜡将已经透明的材料和二甲苯一起倒入包埋用的小杯中，此时可把写好的标签投入二甲苯中，然后轻轻倒入溶解的石蜡(熔点为52～54℃)，这样，石蜡就在二甲苯的上层凝固起来。
小杯放在35～37℃的熔蜡炉内，使石蜡徐徐溶解到饱和为止，约需l～2d。
6．包埋先将小杯移入56～60℃的恒温箱内(温度宜较石蜡熔点高3℃)，待石蜡熔化后，倒去含二甲苯的石蜡，换以熔化的纯石蜡，以后每隔lh左右换纯蜡一次，材料在恒温箱中的时间视不同材料而异，约为2～5h，共换纯蜡2～3次，即可进行包埋。
包埋时，先用道林纸摺成适当大小的纸盒，放在已经加热的电热板上。
然后右手持解剖执针，左手从温箱中取出盛满石蜡的小杯，随手将温箱关好，迅速把石蜡连同材料和标签一起倒入纸盒中，再用烤热的解剖针轻轻拨动材料使之排列整齐。
如发现材料附近有石蜡的凝块，则需用热针熔去，同时使标签上有字的一面朝外，以便识别。
稍停，待盒中石蜡凝到不致动摇材料时，就将纸盒轻轻放入冷水中使它迅速凝固。
半h后，即可取出贮藏备用。
五、实验注意事项1．在材料选择和切割时应注意下列问题：（1）选取新鲜、无病虫害并具代表性的材料；（2）先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料，立即固定；（3）注意按季节和植物生长发育不同阶段取材；（4）材料大小要适当。
2．固定时应注意的问题：（1）标签的填写必须将标签纸贴于标本瓶上，并写上以下内容：编号、采集时间、地点、处理者姓名。
另外，在实验记录本上表明编号的详细情况：何种植物的何种器官，是横切还是纵切，用的是何种固定液等等。
（2）固定液的选择根据所用材料的不同，选择不同的固定液。
一般，各种器官，不论是根、茎、叶，还是花和果实，其组织切片均用FAA固定液，而根尖、茎尖、花药等材料的压片（非切片法）用卡诺固定液。
（3）材料体积的影响对于微小材料可直接投入固定液，对于较大材料，则须将其先解剖成较小材料，再迅速投入固定液。
若材料外部超过固定液上线，达不到固定作用时，应须立即放入渗透力很强的固定液中，如醋酸酒精溶液；或利用超声波发生器处理数min。
（4）多毛芽或根茎的固定对多毛的芽或根茎固定时，须先投入渗透能力很强的醋酸酒精溶液中数分钟，然后再投入其它固定液中固定。
必要时配合抽气装置，其意义在于使固定液尽快渗入材料内部，并排除材料内气泡的干扰。
3．脱水时的注意事项（1）脱水从低浓度开始逐渐替换高浓度酒精，否则发生细胞收缩。
（2）从同浓度（保存液中）酒精开始。
例FAA从70%或50%酒精开始。
注意要加盖，各级酒精停留时间因材料而定。
4．透明时的注意事项（1）使用时材料必须脱尽水分，否则发生乳状混浊。
（2）要避免材料收缩六、作业1．编制石蜡切片法中从固定到包埋的时间进程安排表；2．包埋盒的制作；3．就你自己在实验过程中遇到的问题进行分析与讨论。
实验八石蜡切片法——固定与包埋一、实验目的掌握石蜡切片法中切片及染色的基本操作步骤及要点；二、实验材料党参、秦艽或其它药材的根三、实验用具及试剂各级酒精溶液、二甲苯、1%番红水溶液、0.1%的固绿酒精溶液、蛋白粘片剂、加拿大树胶、单面保安刀片、毛笔、镊子、电热板、台木、旋转切片机、染色缸等。
四、实验内容与步骤（一）固着与修整取保存的材料，卸下纸盒，将蜡块沿材料之间切适当的深沟，用手分裂蜡块，然后切去材料四周的蜡，仅留一少部分不使材料暴露并成为适当大小的方块，材料四周的蜡面一定要平正，用烧热的解剖刀使蜡块底部及蜡座上面的石蜡稍熔化，而将蜡块粘在金属盘或台木的蜡座上。