PCR试剂质检记录表

XXX院检验科PCR实验室图表(30项)

XXXXX院检验科PCR实验室图表实验室主要负责人简历表表格编号：PCR-TAB-01实验室工作人员基本信息一览表表格编号：PCR-TAB-025XXX院检验科PCR实验室仪器设备一览表表格编号：PCR-TAB-03XXX院检验科临床PCR检验流程表表格编号：PCR-TAB-04 检验日期：检验项目：扩增仪中保存文件名：使用说明：1.本记录表需严格遵循（①试剂准备区②样本处理区③扩增及产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。

2.各项工作执行后，在相应叙述签的“□”内打“√”。

XXX院检验科PCR室人员培训计划及培训记录表表格编号：PCR-TAB-058XXX院检验科PCR室仪器设备维修登记表表格编号：PCR-TAB-06XXX院检验科PCR实验室清洁消毒记录表表格编号：PCR-TAB-07XXX院检验科PCR实验室清洁消毒记录表表格编号：PCR-TAB-07注：如用10%次氯酸钠溶液、75%乙醇消毒、紫外线消毒，则在相应栏下打“√”XXX院检验科PCR实验室清洁消毒记录表表格编号：PCR-TAB-07注：如用10%次氯酸钠溶液、75%乙醇消毒、紫外线消毒，则在相应栏下打“√”XXX院检验科PCR室内温湿度记录表年月（1、2、3）区表格编号：PCR-TAB-08XXX院归档记录控制清单年表格编号：PCR-TAB-09XXX院消耗品进购记录表表格编号：PCR-TAB-10表格编号：PCR-TAB-11表格编号：PCR-TAB-12XXX院检验科PCR实验室试剂盒接收质检记录表表格编号：PCR-TAB-13检验者：审核者：说明：试剂接收外包装箱及试剂盒是否完整，完整请打“√”，如不完整，请联系供货商。

XXX院检验科PCR室室内质量控制失控报告表格编号：PCR-TAB-14XXX院检验科PCR实验室室间质评表表格编号：PCR-TAB-15表格编号：PCR-TAB-17XXX院检验科PCR实验室报告延迟处理记录表表格编号：PCR-TAB-18XXX院检验科PCR实验室标本接收及处理意见登记表表格编号：PCR-TAB-1922XXX院设备定期检定校准及核查记录表表格编号：PCR-TAB-20XXX院检验科PCR实验室仪器设备履历表表格编号：PCR-TAB-21XXX院检验科PCR实验室试剂报废申请表科室：表格编号：PCR-TAB-22XXX院检验科PCR实验室试剂报废申请表科室：表格编号：PCR-TAB-22XXX院检验科PCR实验室意外事件报告表格编号：PCR-TAB-23XXX院检验科PCR实验室意外事件报告表格编号：PCR-TAB-23XXX院检验科PCR实验室扩增仪使用维护记录年月表格编号：PCR-TAB-24XXX院检验科PCR实验室生物安全柜使用维护记录年月表格编号：PCR-TAB-25XXX院检验科离心机使用维护记录表年月型号：表格编号：PCR-TAB-26XXX院检验科PCR室传递窗使用维护记录年月表格编号：PCR-TAB-27XXX院检验科冰箱使用维护记录表年月（1、2、3）区表格编号：PCR-TAB-28XXX院检验科PCR实验室平面结构示意图编号：附图1XXX院检验科PCR实验室室内质控图编号：附图2。

PCR（一）实验室试剂质检记录表
试剂1项目：HBV （上海科华）试剂1批号:17010111
试剂2项目：HBV （上海科华）试剂2批号:17030111
检验科的试剂耗材进行验收实验时，要求同一种试剂耗材的新旧批号批间质量评估必须由同一个人进行实验，且要求在同一台设备、同一个时间内完成核酸扩增实验：选取至少5个旧批号检测过的样品，覆盖测量区间（包括阴性、临界值、低值、中值和高值），至少4个样品的测量结果偏倚<7.5%，其中阴性和临界值样品必须符合预期。

检测人：乔元昊
时间：20170705
PCR实验室耗材质检记录表。

PCR实验记录表

PCR实验记录表PCR实验室检验流程表检验日期：检验项目：确认试剂在有效期内。

确认生物安全柜的滤膜在使用有效期内。

确认离心管、带滤芯吸头已经经过质检合格。

实验前准备：打开通风设备。

确认扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内。

确认消毒溶液在有效期内。

操作者：试剂准备区（1区）：实验台面清洁，用水或70%酒精擦拭。

冷冻室（-18℃±2℃）温度为：____℃，相对湿度允许范围为30%~70%。

冰箱温度：冷藏室（2~8℃）为：____℃。

实验室温度为：____℃，允许范围为10~30℃。

确认PCR试剂来源及本次试验用量。

实验后：清洁实验室台面、地面、加样器，并进行紫外线照射30分钟以上。

处理实验废弃物。

操作者：检验日期：标本制备区（2区）：打开通风设备。

实验台面清洁，用水或70%酒精擦拭。

冰箱温度：冷藏室（2~8℃）为：____℃，冷冻室（-18℃±2℃）为：____℃。

实验室温度为：____℃，允许范围为10~30℃，相对湿度允许范围为30%~70%。

确认阳性室内质控物来源、浓度及批号，以及扩增位置。

确认阴性室内质控物来源、批号及扩增位置。

确认所提取的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置。

核酸提取及加样过程：按sop进行。

仪器设备使用：确认生物安全柜正常并使用。

确认恒温仪温度校准正常。

确认离心机正常并使用。

确认振荡器正常并使用。

试验后：清洁实验室台面、地面及仪器设备。

处理实验室废弃物。

操作者：。

新冠核酸检测PCR性能验证表格

验证目的：试剂厂家：试剂名称：医疗器械注册证编号:试剂批号：扩增仪器：仪器编号：验证参考文献：验证指标：一、符合率验证验证方案：要求：阴性样本：阳性样本：XXX医院XXX科新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）性能验证报告新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测程序常规应用前，对经确认的符合预期用途的检验程序进行验证，保证检验质量，满足临床需要CNAS-GL039 分子诊断检验程序性能验证指南符合率、检出限、抗干扰能力、交叉反应选取阴性样本 5 例，阳性样本 10 例，采用参比方法和候选方法平行检测，将所有检测结果按下表汇总填表，计算符合率相关符合率应不低于试剂说明书声明新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）ABI7500PCR实时荧光定量PCR仪5例正常人鼻咽拭子样本3例窒间质评阳性样本，3例不同稀释度阳性参考品二、检出限验证验证方案：要求：标准物质浓度：稀释液：稀释浓度：厂家声明检出限：三、抗干扰能力验证验证方案：要求：干扰物质1：加入量：生理盐水200copies/mL5次结果均为阳性，检出率100%使用定值标准物质（如：国际参考品、国家参考品、厂家参考品），梯度稀释至厂家声明的检出限浓度，重复测定 5 次根据临床需求及实际情况，选取相应干扰物质，适量加入到待测弱阳性样本中，按常规样本操作流程，重复测定 3 次3次检测结果均为阳性，验证通过人全血0.5ml干扰物质2：加入量：四、交叉反应验证验证方案：要求：加入病原体1：加入病原体2：验证日期：操作者：复核者原始数据保存位置：原始数据文件名：原始数据附图：XX鼻腔喷雾剂0.2ml乙型流感病毒取一定浓度与新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸可能存在交叉反应的病原体加入样本保存液或经确认为阴性的样本中，按常规样本操作流程，重复测定3次3次检测结果均为阴性，验证通过SARS 冠状病毒。

PCR检测记录表

基因扩增荧光定量检测记载表
试验日期：检测项目：Linegene 保管文件名：
应用解释：
1.严厉按单一流向进行试验,即试剂预备区（1区）→样本处理区（2区）→扩增剖析区（3区）,严禁逆向.本记载表的流向亦遵守此流程;
2.各项目履行后在响应项今朝的方框内打√;
3.试验室内温度为15～30℃为及格规模;
4.试验后对试验室的干净与消毒办法拜见“PCR试验室干净程序”,试验后次日封闭通风装备和移动紫外灯;
5.试验停止后,将标本的检测成果登记至标本记载本上以备查询.本记载表保管在归档文件夹中,存放在试验室文件柜中,保管2年;
6.Linegene 扩增仪中成果保管于D盘对应试验日期的文件夹中,如2004年4。

031PCR室内质控记录表

备注：
PCR 室内质控记录表
年月质控项目
质控日期
均值或靶值 (拷贝/ml)
1
2
4
5
6
7
8
9
10
11
12Байду номын сангаас
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
质控要求测定值 (拷贝/ml)
操作人签名
室内质控图
检测实验室: PCR 实验室实验项目：血清来源：
起止日期: 20 年月日至 20 年月日
方法:
仪器型号：ABI PRISM 7000 型核酸扩增荧光检测仪
血清批号：
血清定值： X
S.D
C.V
%
X
日期测定值
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
使用说明
1. 图中的 X 是血清定值或本室测定的靶值, 并请用红线在图中划出 ±2S.D 线。用蓝线在图中划出±3S.D 线。 2. 在图左侧标尺上注明靶值 X，±2S.D，± 3S.D 的数值。 3. 图中日期是实际操作日期，未做测定的星期日和节假日等，请留出空格并划出日期号。 4. 备注栏内注明超限原因及处理情况。

PCR检测记录表

PCR检测记录表XXX FormXXX Date:XXX:XXX File Name:ns:1.Strictly follow the single n of the experiment。

that is。

reagent n area (Zone 1) → sample processing area (Zone 2) → n analysis area (Zone 3)。

and reverse n is strictly prohibited。

The flow of this record form also follows this process;2.Check the corresponding box before each project is executed;3.XXX 15-30℃;4.After the experiment。

refer to the "PCR Laboratory XXX and move the UV lamp the day after the experiment;5.After the experiment。

record the test results of the samples in the sample record book for future reference。

This record form is saved in the archive folder and stored in the laboratory file。

for 2 years;6.XXX are stored in the corresponding experiment date folder in the D drive。

For example。

the results of April 2004 are saved in "D:\2004\04\"。

临床PCR检验流程记录表

口按实验室清洁程序（SOP编号）清洁实验室台面、地面、及仪器设备，并进行紫外线照射30分钟以上；
口按实验室废弃物处理程序（SOP编号）处理实验废弃物。
操作者：____________
扩增区（3区）
实验前：口打开通风设备口实验台面清洁（水或75%酒精擦拭）
口实验室温度：____℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度____（允许范围：30%~80%）
扩增仪操作：口开机自检及运行正常；
口按扩增仪操作（sop编号）sop进行编程、参数、设定；
室内质控结果：________________ 口填写室内质控记录、描质控图
是否失控：口是口否
实验结果失控原因与处理：（失控标准参照室内质量控制SOP程序）
实验结果：见所附扩增仪打印结果。
实验后：口填写相关记录表；
口按实验室清洁程序（SOP编号）清洁实验室台面、地面，并进行紫外线照射30分钟以上；
口按实验室废弃物处理程序（SOP编号）处理实验废弃物。
操作者：____________
检测日期：____________
口正常口不正常
口实验室温度：____℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度____（允许范围：30%~80%）
PCR试剂来源：（深圳匹基公司）批号：____________
检验项目：_________ 本次实际用量：_______人份
具体配置内容______________________________________________________
仪器设备的使用：
离心机：口正常口不正常振荡器：口正常口不正常
实验后：口移动器调至最大量程刻度并复位；
口填写相关记录表；
口按实验室清洁程序（SOP编号）清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外线照射30分钟以上；

PCR检测记录表参考模板

基因扩增荧光定量检测记录表
实验日期：检测项目：Linegene保存文件名：
使用说明
1、严格按单一流向进行实验，即试剂准备区（1区）→样本处理区（2区）→扩增分析区（3区），严禁逆向。

本记录表的流向亦遵循此流程；
2、各项目执行后在相应项目前的方框内打√；
3、实验室内温度为15～30℃为合格范围；
4、实验后对实验室的清洁与消毒方法参见“PCR实验室清洁程序”，实验后次日关闭通风设备和移动紫外灯；
5、实验结束后，将标本的检测结果登记至标本记录本上以备查询。

本记录表保存在归档文件夹中，存放在实验室文件柜中，保存2年；
6、Linegene扩增仪中结果保存于D盘对应实验日期的文件夹中，如2004年4月的结果保存于“D：\2004\04\”中，每月底将当月资料备份于软盘中，保存2年。

PCR实验记录表

PCR 实验室检验流程表检验日期：检验项目：实验前准备试剂在有效期内扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 □生物安全柜的滤膜在使用有效期内消毒溶液在有效期内离心管、带滤芯吸头已经经过质检合格操作者：试剂准备区（1区）实验前：实验后：清洁实验室台面、地面、加样器，并进行紫外线照射30分钟以上。

处理实验废弃物。

操作者：打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）冰箱温度：冷藏室（2~8℃）： ℃ 冷冻室（-18℃±2℃）： ℃实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）相对湿度：（允许范围：30%~70%） PCR 试剂来源：批号：检验项目：本次试验用量：人份剩余量：人份标本制备区（2区）检验日期：检验项目：实验前：核酸提取及加样过程：按sop 进行仪器设备使用：生物安全柜：正常不正常恒温仪温度校准：正常不正常离心机：正常不正常振荡器：正常不正常试验后：清洁实验室台面、地面及仪器设备。

处理实验室废弃物。

操作者：打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）冰箱温度：冷藏室（2~8℃）： ℃ 冷冻室（-18℃±2℃）： ℃ 实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）相对湿度：（允许范围：30%~70%）阳性室内质控物来源：浓度及批号：扩增位置：阴性室内质控物来源：批号扩憎位置：扩增及产物分析区（3区）检验日期：检验项目：扩增仪保存文件名：实验前：失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析）实验结果：实验后：清洁实验室台面、地面及仪器设备。

处理实验废弃物。

操作者：打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）相对湿度：（允许范围：30%~70%）扩增仪操作：开机自检及运行正常进行编程、参数设定室内质控结果：结果：是否失控：否是。

26!检验科PCR实验室试剂质检记录表

26!检验科PCR实验室试剂质检记录表试剂质检记录表文件编号：SYZY-PCR-BG-01版生效日期：部门：基因扩增实验室验收人：验收时间：试剂名称批号有效期规格数量1 检查试剂是否处于冻存状态：是□ 否□2 核对试剂的品种和数量：无误□ 有误□3 核对完后及时转入-18℃以下的冰箱保存：是□ 否□4 在上批试剂存量尚可维持一周时对新批号试剂进行校验实验：是□ 否□5 校验实验设置：空白对照，阴性对照，阳性对照各一；新旧试剂的对比实验同时做5个标本（选择1个阴性，2个弱阳性，2个强阳性标本）6 实验结果。

日期序号空白对照阴性对照阳性对照标本1 标本2 标本3 标本4 标本5项目校验实验采用旧批次试剂结果原始结果对比结果采用新批次试剂结果原始结果对比结果新试剂批号7 80%的测量结果相符是□ 否□8 批间有无差异：有□ 无□9 最终判断试剂是否合格：合格□ 不合格□质检结论：本批次试剂：符合质检要求□ 不符合质检要求□XXX的基因扩增实验室使用PCR室作业指导书中的试剂质检记录表。

在收到试剂后，首先要测试试剂是否处于冻存状态。

然后，核对试剂的品种和数量，核对无误后及时转入-18℃以下的冰箱保存。

在上批试剂存量尚可维持一周时，对新批号试剂进行校验实验。

校验实验设置包括空白对照、阴性对照和阳性对照各一，同时做新旧试剂的对比实验，选择1个阴性、2个弱阳性和2个强阳性标本。

实验结果需要记录在试剂质检记录表中，包括采用旧批次试剂结果、原始结果对比结果、采用新批次试剂结果和原始结果对比结果。

最终判断试剂是否合格，如果合格则标记在试剂质检记录表上。

PCR检测记录表之欧阳科创编

基因扩增荧光定量检测记录表
实验日期：检测项目：Linegene 保存文件名：
使用说明：
1、严格按单一流向进行实验，即试剂准备区（1区）→样本处理区（2区）→扩增分析区（3区），严禁逆向。

本记录表的流向亦遵循此流程；
2、各项目执行后在相应项目前的方框内打√；
3、实验室内温度为15～30℃为合格范围；
4、实验后对实验室的清洁与消毒方法参见“PCR实验室清洁程序”，实验后次日关闭通风设备和移动紫外灯；
5、实验结束后，将标本的检测结果登记至标本记录本上以备查询。

本记录表保存在归档文件夹中，存放在实验室文件柜中，保存2年；
6、Linegene 扩增仪中结果保存于D盘对应实验日期的文件夹中，如2004年4月的结果保存于“D：\2004\04\”中，每月底将当月资料备份于。

PCR实验室原始记录

PCR实验室原始记录
实验项目：登革热病毒基孔肯雅热病毒诺瓦克病毒季节性流感病毒甲型H1N1流感病毒H7N9流感病毒中东呼吸症病毒甲肝病毒乙肝病毒丙肝病毒人乳头状瘤病毒（HPV）伤寒杆菌霍乱弧菌疟原虫抗原检测甲、乙型流感病毒痢疾杆菌
试剂厂家（批号）：上海之江/
核酸类型：DNA/RNA
采样时间：
样本类型：全血血浆血清漱口水胸水腹水脑脊液尿液粪便咽拭子
实验方法：荧光PCR法
样本编号：
实验类型：定量/定性
实验时启时间：
生物安全柜：时分
全自动核酸提取仪：时分
ABI7500：时分
离心机：时分
仪器状态：
故障/良好/其它
故障/良好/其它
故障/良好/其它
故障/良好/其它
阳性对照
Ct值：
UNDET.
阴性对照
Ct值：
UNDET.
实验判读结果：
样本结果：
阴性样本编号：
阳性样本（Ct值）：
备注：

PCR检测记录表

基因扩增荧光定量检测记录表
实验日期：检测项目：Linegene保存文件名：
使用说明
1、严格按单一流向进行实验，即试剂准备区（1区）→样本处理区（2区）→扩增分析区（3区），严禁逆向。

本记录表的流向亦遵循此流程；
2、各项目执行后在相应项目前的方框内打√；
3、实验室内温度为15～30℃为合格范围；
4、实验后对实验室的清洁与消毒方法参见“PCR实验室清洁程序”，实验后次日关闭通风设备和移动紫外灯；
5、实验结束后，将标本的检测结果登记至标本记录本上以备查询。

本记录表保存在归档文件夹中，存放在实验室文件柜中，保存2年；
6、Linegene扩增仪中结果保存于D盘对应实验日期的文件夹中，如2004年4月的结果保存于“D：\2004\04\”中，每月底将当月资料备份于软盘中，保存2年。

25-PCR室耗材验收质检记录表

取20只合格离心管加半量生理盐水12000转/分离心10分钟，观察有无漏液或爆管现象有无
3.八连管
任取5列目测合格的八联管加50µL生理盐水在PCR仪器上运行一次新型冠状病毒核酸检测程序，观察爆管、变形、漏液等现象。合格不合格
生物性能
抑制物检测
耗材名称
预期结果
检测结果
是否合格
离心管
阴性
阴性阳性
是否
阳性（500cop）
PCR室消耗性材料验收质检记录表
质检日期：年月日
外包装检查
耗材品种
数量
耗材厂家
规格
耗材批号
接收日期
外包装完整厂家名称完整无损批准文号完整无误
内包装检查
包装袋无破损数量核对无误
物理性能
1.带滤芯吸头：
任取20只目测无破损滤芯吸头，采用超纯水检验严密性合格不合格
2.离心管
任取20只目测合格离心管加半量生理盐水置于100℃水浴10分，观察有无爆管现象有无
阳性（104cop）
阴性阳性
阳性（105cop）
阴性阳性
结论
该批耗材测定质检结果为：合格不合格
检验者:审核者:
阴性阳性
阳性（103cop）
阴性阳性
阳性（104cop）
阴性阳性
阳性（105cop）
阴性阳性
带芯吸头
阴性
阴性阳性
是否
阳（103cop）
阴性阳性
阳性（104cop）
阴性阳性
阳性（105cop）
阴性阳性
八连管
阴性
阴性阳性
是否
阳性（500cop）
阴性阳性
阳性（103cop）
阴性阳性

临床PCR实验室记录及记录表格的设计

临床pcr实验室记录及记录表格的设计
临床PCR实验室记录及记录表格的设计
卫生部临床检验中心李金明
临床实验室记录的类型
l外界推动型（患者、检查、认可、验收等）
l内在需求型
实验记录及其管理程序存在的问题
l ①对日常检验中工作人员应记录的基本内容没有规定或规定不详细。
l ②没有规定实验记录者的签名方式，即是否要手签、是否要签全名等。
•男 •女
以上标本编号从
至
以上标本编号从
至
以上标本编号从
至
月日时
月日时
•全血 •
，送检人（签字）：，送检人（签字）：，送检人（签字）：
接收人（签字）接收人（签字）接收人（签字）
标本状态 •正常 • •正常 • •正常 • •正常 • •正常 • •正常 •
•正常 •
临床PCR实验室标本拒收记录
l 实验室要想很快追溯到某一份《室内质量控制记录》及《室内质控图》，则需对这些《室内质量控制记录》及《室内质控图》进行区分，为追溯和区分的方便，可给每一份《室内质量控制记录》及《室内质控图》一个惟一性“编号”，该惟一性编号可含有记录发生的年月日的信息，如2008年12月9日发生的一份《室内质量控制记录》，其编号可为“08-12-9”。
实验前准备
ÿ 试剂在有效期内
ÿ 扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内
ÿ 生物安全柜的滤膜在使用有效期内 ÿ 消毒溶液在有效期内
ÿ 洗眼器内无菌生理盐水在有效期内 ÿ 离心管、带滤芯吸头已经过质检合格
操作者：
试剂准备区（1区）
实验前： ÿ 打开通风设备 ÿ 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）
ÿ 冰箱温度：冷藏室（2~8℃） ℃；冷冻室（-18℃±2℃） ℃

PCR荧光定量检测记录

PCR荧光定量检测记录编号：RE-ZL-TY-082 NO: 1、样本信息乙型肝炎病毒(HBV)检测使用仪器PCR仪器：；高速离心机：；恒温金属浴：；5-50μL移液枪：；20-200μL移液枪：；100-1000μL移液枪：；试剂盒来源：中山大学达安基因股份有限公司；批号：；将待测样本与阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品、阳性定量参考品进行同步处理。

在 1.5ml 的无菌离心管内加入200µl 样品；再加入450µl DNA提取液，盖紧管盖，漩涡振荡 15 秒以充分混匀，瞬时离心数秒，100℃ 10±1 分钟恒温处理。

取出后12000转离心5分钟；离心管内即为病毒核酸溶液，吸取样本及阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品、阳性定量参考品核酸溶液各20µl加入到PCR反应管中，盖紧管盖，8,000rpm 离心数秒后转移至扩增区检测，以循环扩增条件：93℃ 2分钟；93℃ 45秒→55℃ 60秒，10个循环；93℃ 30秒→55℃ 45秒（收集荧光），30个循环进行扩增。

检验日期：复核日期：丙型肝炎病毒(HCV)检测使用仪器PCR仪器：；高速离心机：；恒温金属浴：；5-50μL移液枪：；20-200μL移液枪：；100-1000μL移液枪：；试剂盒来源：中山大学达安基因股份有限公司；批号：；将待测样本与阴性质控品、HCV强阳性质控品、HCV临界阳性质控品进行同步处理。

在1.5ml 的无菌离心管内加入50µl 的蛋白酶 K；取样本200 µl 加入离心管中；再加入200 µl 的裂解工作液（即已含 Carrier RNA 的病毒裂解液），盖紧管盖，漩涡振荡 15 秒以充分混匀，高速离心 10 秒（防止温育时产生气泡），72℃ 10 分钟。

同时可将洗脱液置于 72℃预热；再加入250µl 无水乙醇，盖紧管盖，振荡 15 秒；将混合液全部吸至离心柱，室温下 12,000rpm 离心 1 分钟，将离心柱装至新的收集管；将500µl 的抑制物去除液加入离心柱，室温下 12,000rpm 离心 1 分钟，将离心柱装至新的收集管；将500µl 的去离子液加入离心柱，室温下 12,000rpm 离心 1 分钟，将离心柱装至新的收集管；再次将 500µl 的去离子液加入离心柱，室温下 12,000rpm 离心 1 分钟，将离心柱装至新的收集管；将离心柱-收集管于室温下 14,000rpm 离心 3 分钟以除去残余的乙醇；将离心柱取出，放置于新的 1.5ml 离心管。

实用pcr流程表

临床PCR检验流程记录表检验日期：检验项目：HBV-DNA 扩增仪中保存文件名使用说明：①严格按单一流向进行实验，即试剂准备区→标本制备区→扩增区，严禁逆向移动。

本记录表的流向亦遵循此流程；②各项工作执行后在相应项目前的方框内打“√”；③本记录表最后归档保存在PCR实验室扩增区的专用文件夹中，以备查找。

检验日期：检验项目：HBV-DNA检验日期：检验项目：HBV-DNA1. 操作步骤：1.2.1取n个1.5ml的灭菌离心管，作好标记。

（n=样本数+1管HCV阴性对照+1管HCV强阳性对照+1管HCV临界阳性对照）1.2.2向上述离心管中分别加入25ul蛋白酶溶液。

1.2.3分别加入待测样本、HCV阴性对照、HCV临界阳性对照和HCV强阳性对照各200ul.1.2.4加入200ul新鲜配制的裂解液工作液，盖上盖子，振荡15秒，充分混匀。

（注意：不要把蛋白酶溶液直接加入裂解液工作液中）。

1.2.556摄氏度温浴15分钟。

瞬时离心，以去除管盖上的滴液。

1.2.6加入250ul无水乙醇，盖上盖子，彻底混匀（振荡15秒）。

在室温下静置5分钟（15-25摄氏度）。

注意：如果环境温度超过25摄氏度，无水乙醇需预冷。

瞬时离心，以去除管盖上的滴液。

1.2.7将n个核酸提取柱放入收集管中，小心地将步骤1.2.6中的液体移入核酸提取柱中。

盖上盖子，6000*g离心1分钟。

倒掉收集管中的废液，将提取柱重新放入收集管中。

（如果离心后核酸提取柱中仍有部分液体，以更高的速度再次离心，确保提取柱中无残余的液体）1.2.8小心的打开核酸提取柱的盖子，加入500ul洗液1，盖上盖子，6000 *g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将提取柱重新放入收集管中。

1.2.9小心的打开核酸提取柱的盖子，加入500ul洗液2，盖上盖子，6000 *g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将提取柱重新放入收集管中。

1.2.10小心的打开核酸提取柱的盖子，加入500ul无水乙醇，盖上盖子，6000*g离心1分钟，丢弃收集管，将提取柱放入新的收集管中。