体内药物分析
体内药物分析终极复习资料
1.体药物分析定义。
P1研究药物及其代物在生物体数量和质量变化规律的方法学科,获得药物在体吸收、分布、代排泄等各种动力参数，药物与大分子的相互作用，代产物、代途径等信息，对药物评价，为临床合理用药、研发新药等提供科学依据。
2.影响血药浓度的因素〔理解〕。
P3-5（1）机体因素：包括生理、病理、遗传因素（2）药物因素：包括剂型因素、药物相互作用（3）〔3〕其他因素：大气污染、食品、烟、酒、茶等药物进入体后，血液循环为药物体转运的枢纽。
大多数药物只有到达作用部位和受体部位，并到达一定的浓度后，才产生一定的药理作用。
多数药物的血药浓度与药理效应呈平行关系，局部药物的血药浓度与药效无明显相关关系。
3.体药物分析的生物样本及分析对象。
P8生物样本：但凡体液所到之处，如血液、尿液、唾液、毛发、各种器官、组织、呼出气体等都是取样对象，还包括细胞悬液，微粒体孵育液、器官灌流液等体外试验中的各种生物介质。
分析对象：母体药物、代产物、必要的源性物质或与之相关的其他药物。
4.体药物分析的特点（1）干扰杂质多（2）被测浓度低（3）供试样品量少（4）待测物的易变性（5）要求较快提供结果（6）要有一定的仪器设备（7）工作量大5.生物样品选择的根本原则。
常用的生物样品及其应用特点。
P19选择原则：（1）必须能反映浓度与药效的关系（2）易于获得（3）便于处理（4）根据不同目的要求选取常用生物样品及应用特点：血液优点：较好表达药物浓度与治疗的关系缺点：〔1〕损伤性取样，取样量有限制〔2〕需要专业人员操作尿液优点：〔1〕非损伤性取样〔2〕药物浓度高〔3〕收集方便缺点：〔1〕浓度变化大，与血药浓度相关性差〔2〕：不易采集，保存〔3〕：肾功能不全、婴儿不宜用此法唾液优点：〔1〕非损伤性取样〔2〕含蛋白浓度低，易处理〔3〕C S/C P较恒定时，可代替血样进展TDM及药物动力学研究缺点：〔1〕适用药少〔2〕取样量变化大毛发优点：〔1〕取样方便，可重复取样〔2〕通过测*特定代物区别滥用药、临床药〔3〕可获得长期用药信息缺点：〔1〕预处理繁杂，干扰多〔2〕分析对象含量低，需精细仪器6.血液样品的采集和制备.P21采集：通常用一次性针头插入静脉血管抽取，取下针头，转移到相应容器，不能用力推压以免血细胞破裂制备：〔1〕血浆：多以肝素作抗凝剂，取适量于离心管，旋转使均匀分布于管壁，倾去多余液体，枯燥试管；然后参加血样，离心后取上层黄色液体即可，其量约为全血的50%〔2〕血清：等血样中血块凝结，在室温25°下凝结速度较慢，可在37°水浴加快血清析出，离心后取上清液即可，其量约为全血的40%〔3〕全血：在血样中参加含有抗凝剂的试管，轻轻混匀即可。
体内药物分析
第一节 体内药物分析的目的和意义
1、生物样本分析方法的建立 2、生物样本的测定
3、药物的体内研究评价
第一节 体内药物分析的目的和意义
给药方案与效应关系
给药
药代动力学
药物
ADME
药效学
药物效 应与不 良反应
药物进入机体后，产生的两种不同的效应。
体内药物分析概述
二、体内药物分析的对象
临床人体 试验
(clinical）
非临床动 物试验 (preclinical
血液
药物代 谢物
尿液
常用样 本种类
唾液
头发
粪便
体内药物分析概述
三、体内药物分析特点
➢ 干扰物质多，内源性物质多，与药物有结合、缀合，需 经过分离、纯化。
➢ 样品浓度低，测定前需浓缩、富集。 ➢ 取样量少 ➢ 工作量大 ➢ 对仪器设备要求高（如需要样本冷贮、萃取、离心、富
特点
优缺点
• 优点: 样本易得，样品量 大; 尿液中药物浓度较高， 易于检测；无需去蛋白处 理。
• 缺点: 易受食物种类、饮 水多少、排汗情况等的影 响，个体差异常常很大。
• 直接测定，萃取 分离测定
• 采用化学方法或 酶解法游离缀合 状态药物。
尿样的 尿样的 制备 采集
• 自然排尿法
• 随时尿、晨尿、白天 尿、夜间尿、及特定 时间段尿液。
阐明药物在体内ADME过程和 特点，提供药动学参数，揭示 药物在体内动态变化的规律性
阐明代谢物的结构、转化途径 及其动力学
为药效学和毒理学评价提供重 要的线索
目的
药物研发过程中的体内药物试验和分析
体外PK/PD 动物PK/PD
毒性
体内药物分析
北京大学出版社 1998 浙大 化学工业出版社 2001 2002
思考题 1.什么是体内药物分析？与常规药物分析 相比，体内药物分析有哪些特点？ 2.影响血药浓度的因素有哪些？ 3.谈谈体内药物分析在药学领域中的意义 和任务。
谢谢！ 谢谢！
检测方法：GC—FID 检测方法：GC—NPD，计算机 检测方法：GC—MS，确证 — 检测方法：毛细管GC 检测方法：毛细管GC 检测方法：加HPLC，DAD 检测方法：加HPLC，DAD 检测方法：加HPLC，DAD, LC/MS
三、体内药物分析的对象
母体药物 1．从分析物分 代谢物 内源性物质 均匀样品 2．从生物样品种类分 非均匀样品 人体 3．从样品的来源分 实验动物
浓度(μg/mL) ) 浓度(μg/mL mL)
4 3.5
3 3 2.5 2 2
64 53 4 3 2
2 1
1.5 1 1 0.5 0 0
10 0 0 20 40 60 80 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20 40 60 80 100 120 140160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460460 480 500 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 480 500 0 20 40 60 80 100 120 140
2．国内情况
80年代初，药物分析工作者倡导，1980年版《药物 分析》教材中纳入部分内容，第二、三版增加体内药物 分析一章。第四版、第五版取消，各学校开设体内药物 分析课程。 80年代开始在医院进行临床药学工作，主要测定药 物浓度。
药物分析-体内药物分析
度及专属性要求较高 (3) 分析工作量大, 数据
处理和结果阐明繁杂
第一节
常用体内样品的制备与贮藏 1 体内样品的种类
2 体内样品的采集与制备 3 体内样品的贮藏与处理
一、体内样品的种类
体液
血液; 唾液
脑脊液;胃液; 胆汁;乳汁;精 液;泪液
组织
胃;肠;肝;肾;肺 ,脑;肌肉;头发
原形,代谢物及缀合物 药物浓度较高 收集量大(1~5L) 2. 尿样的采集 自然排尿 规定时间段(6-8h)(时间尿) 3. 尿样的贮藏 加入适当防腐剂
（三）唾液 TDM测定S代替P进行临床监测 1. 唾液的组成
腮腺, 舌下腺和颌下腺 2. 唾液的采集
漱口15min, 安静状态, 自然流出的唾液 物理或化学方法刺激 3. 样品的制备 3000r/min离心10min,上清液
(二) 去活性
采样后立即终止酶的活性 常用方法: 液氮速冻, 微波照射, 匀浆/沉淀, 加酶活性 阻断剂(氟化钠)或抗氧剂(VC), 煮沸
•血液是主要样品
体液或组织 •尿液,唾液,头发和脏器
概述
特点
体内药物分析的特点 主要来自于体内样品的特点
1. 体内样品的特点 (1) 采样量少: ml~µl级;
且不易重新获得 (2) 待测物浓度低:µg/ml
~ng/ml级, 甚至pg/ml (3) 干扰物质多: 尤其是
血样和组织中的蛋白质
2. 体内药物分析的特点 (1) 样品需经纯化浓集,
概述
体内药物分析
分析方法 样品制备 存在形式
体内样品
指体内样品（生物体液、器官或 组织）中药物及其代谢物或内源 性生物活性物质的定量分析。
体内药物分析实验
体内药物分析实验体内药物分析实验是一项非常重要的技术，它可以帮助研究人员了解药物在动物或人体内的代谢动力学和药物毒性，这对于药物的研发和使用都有非常重要的意义。
在本文中，我们将对体内药物分析实验进行详细的介绍，包括实验的原理、方法和应用等方面。
一、实验原理体内药物分析实验的原理是通过对药物在动物或人体内的代谢动力学和药物毒性进行分析，了解药物在体内的作用机制和性质。
通常，实验分析的对象是药物在动物或人体中的含量、代谢产物及毒性反应等，这些分析结果可以帮助研究人员判断药物是否安全和有效，从而指导其研发和使用。
二、实验方法体内药物分析实验是一个复杂的过程，需要涉及各种实验方法，下面我们将对这些方法进行介绍：1. 动物模型的制备在体内药物分析实验中，研究人员首先需要选择一个适当的动物模型，并对其进行制备。
动物模型可以是小鼠、大鼠、猪、狗甚至人类等，不同的模型在药物代谢和毒性方面具有不同的特点，因此需要选择合适的模型来进行研究。
同时，为了保证实验结果的可靠性，研究人员还需要对动物进行控制，包括饲养、喂食、运动、病理等方面的控制。
2. 药物给药药物给药是体内药物分析实验的关键步骤，研究人员需要确定合适的剂量和给药方式。
给药方式通常有静脉注射、腹腔注射、口服、皮下注射等。
药物的剂量需要根据动物体重和药物的药动学特性来确定。
3. 体内药物分析在药物给药后，研究人员需要采集动物的生物样本，如血液、尿液、粪便等，对其中的药物代谢产物等指标进行分析。
分析方法可以是生化分析、药物浓度测定、毒性指标检测等。
4. 数据处理和统计分析实验结束后，研究人员需要对采集的数据进行处理和统计分析，包括平均值、标准差、方差等的计算和统计推断。
三、实验应用体内药物分析实验的应用非常广泛，主要包括以下方面：1. 药物代谢动力学研究通过体内药物分析实验，研究人员可以了解药物在动物或人体内的代谢过程和代谢产物，从而对其药物动力学特性进行研究和评价。
体内药物分析概述
体内药物分析的任务：内源性物质检测
体内内源性物质如氨基酸、激素、儿茶酚胺、肌 酐、草酸、尿酸等。
喹诺酮类药物对致病菌的杀菌作用取决于药物血药浓 度的峰浓度，即药物浓度越高，杀菌作用越强。—— 浓度依赖性
时间依赖性——杀菌活性与药物浓度维持在MIC以上时 间的长短有关。β-内酰胺类、林可霉素类等抗生素。
乳酸左氧氟沙星（0.1g/片）
用法用量：
口服。成人常用量：
1. 支气管感染、肺部感染： 药物随着血液到各个组织
2.体内样品的种类、采集与贮存
2.1体内样品的种类与采集
血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液、胆汁、乳 汁、脑脊液等均匀生物样品
心、肝、脾、肺、肾、脑等非均匀生物样品 样品选取原则 （1）必须是能够反映出浓度与药物效应之间关系； （2）易于获得； （3）便于处理，适合于分析； （4）根据不同目的与要求进行选取。
0.3-0.4g/日
2. 急性单纯性下尿路感染： 0.2g/日 药物通过尿液排泄在下尿路发挥治疗作用
3. 细菌性前列腺炎： 0.4g/日 药物随着血液到前列腺组织
测定血液、尿液甚至
组织中的药物浓度
1.概述
1.1体内药物分析的定义
体内样品（生物体液、器官或组织）中药物 及其代谢产物或内源性生物活性物质的定性、 定量分析。
CuSO4-Na2WO4
ZnSO4-NaOH
每1容积血浆加入沉淀剂容积
0.2
第五章体内药物分析
一）最佳选择题．体内药物分析中，最常用地体内样品是．血浆．尿液．唾液．胃．十二指肠．血浆占全血量地比例是. -- 文档来自于网络搜索．常用地去蛋白质地试剂是．醋酸．冰醋酸，甲醇．盐酸．硫酸．在体内药物分析方法地建立过程中，实际生物样品试验主要考察地项目是．方法地定量限．方法地检测限．方法地定量范围．代谢产物地干扰．内源性物质地干扰．使用唾液作为治疗药物监测样本，应满足地条件是．血浆中药物浓度足够大．唾液中药物浓度够大．足够大．下列研究目地中，体内分析使用毛发样品地是．生物利用度．药物剂量回收．药物清除率．体内微量元素测定．以上均不是．用加权最小二乘法计算回归方程时，权重因子（形）一般选用地是..1Ci.．血浆样品地稳定性考察内容通常不包括地试验是．血浆样品地室温放置．血浆样品冰冻保存．血浆样品冻一融循环．经处理后溶液地冰冻保存．经处理后溶液地室温或特定温度放置．在体内药物分析方法地建立过程中，用空白生物基质试验进行验证地指标是．方法地定量范围．方法定量下限（）．方法地特异性．方法地精密度．方法地准确度.当采用液，液萃取法测定血浆中碱性药物（）时，血浆最佳是（二）配伍选择题[]．血清．尿液．头发．心脏．粪便下列试验目地宜选用地体内样品是.临床治疗药物监测.药物体内代谢类型研究[—]．准确度．精密度．定量下限．样品．提取回收率.用于评价样品处理方法将体内样品中待测物从生物介质中提取出来地能力.用于分析过程中，对分析方法进行质量监控.是指在确定地分析条件下测得地体内样品浓度与真实浓度地接近程度（三）多项选择题.去除血浆中蛋白质，可采用地方法有．加入甲醇．加入异丙醇．加入硝酸.加入氢氧化钠.加热至90C.在体内药物分析方法地建立过程中，分离条件地筛选时应做地试验有.空白溶剂试验.空白生物介质试验.模拟生物样品试验.实际生物样品测试.检测灵敏度试验.在体肉药物分析方法地建立过程中，用样品进行验证地项目有.检测波长.方法地准确度.方法地专属性.方法地提取回收率.方法地精密度.生物样品预处理地目地有.使药物从结合物中释放.提高检测灵敏度.延长仪器使用寿命.使药物从缀合物中释放.改善方法特异性.血药浓度测定地种类有.游离型和结合型药物总浓度地测定.游离型药物浓度地测定.药物活性代谢物地测定.结合型药物地测定.内源性活性物质地测定.血样分析应用地目地有.生物利用度地评价.药物动力学地研究.临床药物监测.有关物质地检查.内源性活性物质地测定.生物样品制备时应考虑地问题有．被测组分地理化性质．被测组分地浓度范围．测定地目地．生物祥品种类．试验药品地辅料组成.在体内药物分析方法验证中，表示方法精密度地项目(内容)有．日内精密度．日间精密度．批内精密度．批间精密度．准确度.在体内药物地分析法中，确定方法特异性时要考惠地干扰物质包括．药物制剂地辅料．内源性物质．代谢产物．药物中地杂质．任用地其他药物(四)是非判断题.血浆样品经乙腈去蛋白后，上清液显酸性() .生物样品经前处理后能够降低分析时地背景噪声() .甲醇和乙腈是常用地与水相混溶地除蛋白溶剂(). 生物样品分析中，以标准曲线地最低点作为定量下限().在生物样品分析方法验证中，精密度用实际样品测定() .在用乙腈去蛋白时，血浆样品与沉淀溶剂地体积比应为：() .在分析方法验证中，实际生物样品用于考察代谢物是否干扰药物地测定() .在分析方法验证中，精密度用相对标准偏差表示().提取回收率地验证要考察高、中、低三个浓度地样品((五)简答题.简述体内药物分析中常用地去蛋白质法及其特点么？.与常规药物分析相比，生物样品有哪些特点？体内药物分析地特点是什.简述体内药物分析方法验证与体外药物分析方法验证地区别.。
体内药物分析
数据分析和解释
通过统计学和模型建立等方 法，对分析结果进行解释和 评估。
体内药物分析的未来发展趋势
随着技术的不断进步，体内药物分析将更加精准和高效。人工智能和大数据分析将在药物研发和个体化 用药中起到重要作用。
结论和总结
体内药物分析是现代药物研发和临床实践中不可或缺的一部分。通过准确评 估药物的代谢和药代动力学，可以实现个体化治疗和提高治疗效果。
常用的体内药物分析方法
液相色谱法
通过分离和测定药物成分，快速和准确地分析 药物浓度。
质谱法
通过分析药物的质谱图谱，检测药物的代谢产物。
免疫分析法
利用抗体和抗原的特异性反应，检测药物的含 量和浓度。
药动学分析
通过建立数学模型，研究药物在体内的吸收、 分布、代谢和排泄。
体内药物分析的应用领域
1
药物研发
体内药物分析
体内药物分析是研究药物在人体内的分布、代谢和排泄的过程。它在制药行 业和临床实践中起着至关重要的作用。
药物分析的定义
分析药物成分
通过分离和定量测量药物的化学成分，确定 药物的纯度和质量。
检测药物浓度
测定血浆或尿液中的药物浓度，评估药物的 吸收、分布和排泄。
研究药物代谢
追踪和测量药物在体内的转化和代谢途径， 了解药物的药代动力学。
监测治疗效果
评估药物治疗效果和安全性，为个体化用药 提供依据。
体内药物分析的重要性
1 个体差异
不同个体对药物的代谢和反应有所不同，体内药物分析可以实现个性化治疗。
2 疗效优化
通过监测药物浓度，调整剂量和给药方案，最大限度地发挥药物疗效。
3 安全性评估
体内药物分析方法(精选)
体内药物分析方法(精选)体内药物分析方法(精选)随着现代医学的发展，药物在疾病治疗中起到了至关重要的作用。
对于新药物的研发、药物代谢的了解以及用药的个体化，需要使用合适的体内药物分析方法。
本文将介绍几种常用的体内药物分析方法。
一、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）液相色谱-质谱联用法（LC-MS）是一种将液相色谱（LC）和质谱技术（MS）结合起来的分析方法。
它通过将待测样品进行分离，利用质谱技术对分离后的成分进行快速、准确的鉴定和定量。
LC-MS在药物代谢动力学研究、药物相互作用分析、药物残留检测、药物中间体的筛选等方面具有广泛的应用。
二、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）气相色谱-质谱联用法（GC-MS）是一种将气相色谱（GC）和质谱技术（MS）结合起来的分析方法。
它通过将待测样品在高温条件下蒸发，然后在气相色谱柱上进行分离，最终通过质谱技术对分离后的物质进行鉴定和定量。
GC-MS在药物代谢研究、毒物学研究、药物滥用检测以及环境污染物分析等方面具有重要的应用价值。
三、原子吸收光谱法（AAS）原子吸收光谱法（AAS）是一种通过测量原子在特定波长的光束中吸收光的强度来定量分析样品中金属元素的方法。
AAS广泛用于测定药物中的微量金属元素。
例如，铁、锰、铜、锌等微量金属元素在生物体内被广泛应用。
AAS具有灵敏度高、准确性好等优点，成为体内药物分析中的重要技术手段。
四、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法（HPLC）是一种将液相色谱技术与高压技术结合起来的分析方法。
它通过将待测样品在高压下通过色谱柱进行分离，然后通过检测器对分离后的组分进行定性和定量。
HPLC广泛应用于药物代谢、药物溶出度的测定、药物杂质的分析等方面。
五、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）是一种将电感耦合等离子体技术与质谱技术结合起来的分析方法。
它利用高温等离子体对待测样品中的元素进行电离和激发，然后通过质谱技术进行分析。
体内药物分析方法验证主要有哪些
体内药物分析方法验证主要有哪些体内药物分析的方法有很多，归纳起来主要有以下5类：
1、色谱分析法：
体内药物分析中，色谱技术（Chromatography）一直是研究体内药物及其代谢物最强有力的手段，其在体内药物分析中的应用始于上世纪八十年代。
2、联用分析法：
目前使用较广泛的为色谱联用分析法和色谱与核磁共振联用分析法。
3、免疫分析法：
免疫分析法（Immunoassay，IA）的原理是利用抗原-抗体的特异反应来测定体内药物的含量。
它将分析方法与免疫原理相结合，进行超微量分析，具有灵敏度高、选择性强、操作简便、快速用量少、样品一般不需进行预处理等优点。
4、光谱分析法：
光谱分析法（SpectroscopicAnalysis）包括比色法（COL）、紫外分光光度法（UV）、荧光分光光度法（FLUOR）和原子吸收分光光度法。
5、电化学分析法：
电化学分析法（ElectrochemicalAnalysis）是一类基于电池内发生电化学反应而建立起来的方法。
测定时，通过选择适当的电极组成化学电池，以测定电压、电流、电阻、电量等电信号强度变化来对
药物进行定性和定量分析。
该类方法的特点是仪器设备简单、操作方便，易于实现测试的连续化和自动化。
体内药物分析
一 体内样品的种类 二 体内样品的采集与制备 三 体内样品的贮存与处理
一 体内样品的种类
血液、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、 脑脊液、泪液、胆汁、胃液、淋巴液、粪便等 尿液——主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生
物利用度等研究，以及测定代谢物类型等
脑脊液——怀疑药物损血脑屏障
二 体内样品的采集与制备
（一）冷藏与冷冻
取样后最好立即进行分析，不能立即分析的，则短期内冷
藏(4℃)，长期冰冻(-20℃或-80～70℃) 。
全血未经分离，不宜直接冷冻保持。 尿液是很好的细菌生长液，若需收集24小时或更长时间的 样品或不能立即测定的，应置冰箱冷藏或加防腐剂（1%甲苯、 过饱和氯仿等）保存。 注意：避免将样品反复解冻-冷冻-解冻 ——冷冻前分装成若干小份贮存
采取：动物应在代谢笼中进行，通过笼下漏斗接收。
药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物形式从尿中
排出。尿中药物大多呈缀合状态，测定前要将缀合的药物游离。
（三）唾液：
优点：样品易得，取样无痛苦，尤易为儿童接收。
缺点：药物浓度变化大
采取：漱口15分钟，收集自然流出或经舌在口内搅动流出
的唾液。也可采取物理、化学方法刺激使唾液流出。
制备：采取后，立即测量除去泡沫部分的体积。
分层→离心→取上清液
（四）组织：
药物动物实验、服用药物过量中毒死亡时使用组织
常用的脏器组织有：胃、肝、肾、心、、肺、脑等 制备：组织样品在测定之前，需先加入一定量水或缓冲液匀浆 均匀化。 处理：沉淀蛋白、酸水解或碱水解 、酶水解（枯草菌溶素）
三、体内样品的贮存
（三）分离与浓集
目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分 方法：
2024-药物分析第九章
血浆的制备： 采集的静脉血液置含有抗凝剂的试管中，混
合后，以2500～3000r/min离心5～10min使 与血球别离，所得淡黄色上清液即为血浆。
抗凝剂—最常用的是肝素，其它抗凝剂EDTA、 枸橼酸盐、草酸盐等
血清的制备 采集的静脉血液置试管中，于37℃或室温放 置30min～1h。血液凝固后，用细竹棒或玻璃 棒 轻轻剥去试管壁上的血饼，再在2500～3000 r/min离心5～10min，上层淡黄色液体即为血 清
之间的关系； ③样品易于获取，便于处理、分析。 样品的贮存和稳定性
一、样品的采集
生 物
脏器组织
样 品
体液
血液、尿液、唾液、毛发、乳汁、 精液、脑脊液、泪液、胆汁、
胃液、胰液、淋巴液、粪便等
血液(血浆、血清)—表达药物浓度和治疗作用之间的关系 ——最常用的生物样本
〔一〕血样 因血液中药物浓度可以较好地表达药物浓度
被测定的药物和代谢物的浓度或活性极低； 样品复杂，干扰物多，大多需要别离和净化； 样品量少，不易重新获得； 在毒物学检测中要求能很快地提供结果； 分析方法具有类型多样化和综合性。
分析方法的新要求
药物服用的剂量越来越小、体液中药物浓度越来越低，对体内药物分析方法提出 了新的要求： 1. 检测方法的高灵敏度——最低检测量10-9-10-7g或10-15-10-12g 2. 别离方法的高选择性、高专属性。为满足各项要求，最常用的分析方法有 ①光谱法——比色法、紫外分光光度法、荧光分光法、原子吸收分光光度法 ②色谱法——TLC、GC、HPLC〔柱切换、手性药物〕、HPCE〔high-performance capillary electrophoresis高效毛细管电泳法 〕 ③免疫分析法——RIA放射免疫法、EIA酶免疫法、化学发光酶免疫、荧光免疫分析 ④联用技术——GC-MS、LC-MS
5体内药物分析z
1．从分析物分
代谢物
内源性物质
2．从生物样品种类分
均匀样品 非均匀样品
3．从样品的来源分
体内药物分析
人体 实验动物
11 2021/8/4
体内药物分析的对象
研究对象
评价药物的安全性（临床前研究）—动物
评价药物的有效性（临床研究）—人体 （健康志愿者或患者）
用药的安全、有效与合理—人体（患者 TDM ）
体内药物分析
2 2021/8/4
药物进入体内后
—— 经过吸收、分布、代谢和排泄等动力学过程 —— 化学结构和存在状态都可能发生变化 —— 在不同个体中存在差异（个体差异） —— 进而直接影响到药物在不同个体中的治疗效 应和毒副作用
需对生物体内药物及其代谢物进行研究分析
体内药物分析
3 2021/8/4
体内药物分析
33 2021/8/4
四 何时需要进行治疗药物监测
临床治疗中的常规血药浓度监测是指测 定规律服用某药物 5 个半衰期后已达稳定的 血药浓度
用一般剂量或超过一般剂量仍不能控制 病情时，通过监测可以了解病人是否规律用 药、代谢率是否加快、有无耐药现象等
体内药物分析
34 2021/8/4
① 治疗药物监测的核心目的是实现合理的 给药方案个体化
② 协助诊断和处理药物过量中毒，及进行 其临床药理学研究
③ 了解患者是否遵医嘱用药，提高用药依 从性
体内药物分析
30 2021/8/4
治疗药物监测与临床药代动力学研究的区别
① 血药浓度结果用于调整剂量，设计个体化 给药方案
② 一般只监测一次血药浓度，不测药物经时 变化浓度
药物服用的剂量越来越小、体液中药物浓度越 来越低，对体内药物分析方法提出了新的要求：
体内药物分析（1）
体内药物分析（1）2.治疗药物监测：以药动学药效学为理论为基础，应用现代分析技术，测定体液中的药物浓度，研究药物浓度和与疗效和毒性之间的关系，为临床给药方案个体化提供科学依据。
8.质控样品QC：是指在空白生物介质中加入已知量待测物标准物质制成的样品，用于监测生物分析方法的重复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性。
10.分析批：包括待测样品、适当数目的标准样品和QC样品的完整系列。
12.定量下限：是指符合准确度和精密度要求的生物样品中药物的最低定量浓度，其反映了方法的灵敏度。
13:高效液相色谱法：是在经典液相色谱的基础上，以高压泵输送流动相，采用高效微粒型固定相及高灵敏度检测器，发展而成的现代分离分析技术。
14.等度洗脱：在同一分析周期内流动相组成比例保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。
15.梯度洗脱：是在一个分析周期内程序控制改变流动相的组成比例，适合于分析组分数目多，性质差别较大的复杂试样。
16.提取回收率：系指从生物样本基质中回收得到分析物质的响应值与标准物质的响应值之比，也称萃取回收率或绝对回收率。
18.非临床药代动力学：通过对动物体内、外和人体外研究方法，揭示药物在体内的动态变化规律，获得药物的基本药代动力学参数，阐明药物的吸收，分布，代谢和排泄的过程和特点。
19.临床药代动力学：阐明药物在人体内的吸收，分布，代谢和排泄的动态变化规律。
20.生物等效性：是指一种药物的不同制剂在相同的实验条件下，给以相同的剂量，其活性成分吸收速率和程度的差异无统计学意义。
21.群体药代动力学：通过定量考察群体患者中血药浓度和效应的决定因素，研究给予标准剂量药物时个体间血药浓度、药物效应的变异性。
22.治疗窗：把最低有效浓度作为治疗浓度的下限，最小中毒浓度作为治疗的上限，这个范围称为治疗窗。
23.室内质控：是指在实验室内部针对某一监测药物，采用同一质控样品反复进行测定，对其误差作长期连续的评价和监督，以达到使分析结果在实验室内部保持最小偏差。
体内药物分析测定前生物样品的预处理及定量分析方法
宴游之乐(醉人)
心情：禽鸟乐——人之乐——乐其乐 与民同乐(醉情)
可取之处
重视朗读，有利于培养学生的文言语感，并通过节奏划分引导学生理解文意，突破了仅按注释疏通文义的桎梏，有利于引导学生自主思考；不单纯关注“直译”原则，同时培养学
之”是总起词语，故应从其后断句。【教学提示】引导学生在反复朗读的过程中划分朗读节奏，在划分节奏的过程中感知文意。对于部分结构复杂的句子，教师可做适当的讲解引导。目标导学三：结合注释，
翻译训练1．学生结合课下注释和工具书自行疏通文义，并画出不解之处。【教学提示】节奏划分与明确文意相辅相成，若能以节奏划分引导学生明确文意最好；若学生理解有限，亦可在解读文意后把握节
到贬谪的除了范仲淹和滕子京之外，还有范仲淹改革的另一位支持者——北宋大文学家、史学家欧阳修。他于庆历五年被贬谪到滁州，也就是今天的安徽省滁州市。也是在此期间，欧阳修在滁州留下了不逊
于《岳阳楼记》的千古名篇——《醉翁亭记》。接下来就让我们一起来学习这篇课文吧！【教学提示】结合前文教学，有利于学生把握本文写作背景，进而加深学生对作品含义的理解。二、教学新课目标导
易
三、体内药物分析测定前生物样品的预处理
样品种类 常用的样品的种类包括血样,唾液和尿液 血样是指全血、血浆或血清,一般情况下血浆分 离快、易得,故最常用 唾液是由腮腺、颌下腺、舌下腺及口腔黏膜内 腺体分泌的 尿药浓度测定主要用于剂量回收、药物代谢和 生物利用度等研究 脏器组织，除非特别需要，在临床治疗药物监 测中很少使用
1．在把握作者复杂感情的基础上朗读文本。2．反复朗读，请同学说说本文读来有哪些特点，为什么会有这些特点。(1)句法上大量运用骈偶句，并夹有散句，既整齐又富有变化，使文章越发显得音调铿锵，
形成一种骈散结合的独特风格。如“野芳发而幽香，佳木秀而繁阴”“朝而往，暮而归，四时之景不同，而乐亦无穷也”。(2)文章多用判断句，层次极其分明，抒情淋漓尽致，“也”“而”的反复运用，形
体内药物分析方法验证与体外区别
体内药物分析方法验证与体外区别一、药物分析方法验证与体外区别体内药物分析方法验证和体外有些许不同。
1、药物分析方法验证：是指把体内药物分析方法进行实验，以及检查过程中出现的异常情况并改正，以及在实验过程中遇到的问题，这个过程可能会产生很多错误的实验结果。
2、体外样本采集：也就是将样本从人体外采集并送到实验室内进行检测，也可以采用从人体内部采集样本，如胃液或者血液等。
3、体内样本采集：也叫细胞培养法。
就是将身体各个部位或者组织、器官切下来，在实验室里做一个培养皿来保存样本。
2、药物分析方法验证：是指把体内药物分析方法进行实验，以及检查过程中出现的异常情况并改正，以及在实验过程中遇到的问题，这个过程可能会产生很多错误的实验结果。
体内药物分析方法验证需要考虑样品采集和提取的难易程度，药物浓度，用量和保存方式。
需要在给药途径上做好考虑。
3、药物分析方法验证和生物样本采集相似，区别在于，样品是由人体内部获得的，所以最终检测结果更加准确。
因为人体含有丰富的细胞、组织等样品类型。
其他同生物学研究一样，也是有局限性的。
二、体内药物分析方法验证和体外药物分析方法验证的主要区别在哪里？首先我们要弄清楚，体内药物分析方法验证和体外药物分析方法验证的目的。
体内药物分析方法验证的目的在于，验证体内药物分析方法的合理性、可靠性，评价体内药物分析方法的特异性。
而体外药物分析方法验证的目的在于对体内药物分析方法进行验证，验证其准确性和灵敏度。
最后，生物样本和体内药物分析方法验证目的虽然不尽相同，但是这两种不同的方法都应该得到同等重视。
这两种方法对于医药工作者都非常重要。
1、生物样本：生物样本是指任何生物，包括微生物、动植物等生物。
其他医药研究实验也可以称为生物样本，但是它们并不完全等同于生物样本。
它们之间的区别有以下几点：①生物样本的使用范围很广泛，不仅仅局限于人体内部；②生物样本的种类有很多，除了人体内部还包括人体各个部位或者组织；③生物样本检测时间比较长，至少要等三天以上才能够得出结论。
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25
2．药物代谢的途径
第一相反应：在酶作用下发生的氧化、还原、水解， 使极性增加，水溶性增强
第二相反应：药物或经一相反应后的代谢物与葡萄 糖醛酸、硫酸盐结合等，使分子极性进一步加大，有利 于从尿中排出，结合过程通常使药物灭活。
体内药物分析
Biopharmaceutical analysis
1
第一章 体内药物分析概述
一、体内药物分析的定义 狭义：利用现代分析仪器和分离手段对人和动物血
液、尿和组织等样品进行定性定量的分析 广义：通过体内药物浓度的分析，了解药物在体内
的数量和质量的变化，获得药代动力学参数，为药品 的生产、临床应用作出评价
2
二、体内药物分析的意义
（一）在新药评价 和开发中的意义 1．全面质量控制 2．新药报批 3．为设计新药提供信息 ①从代谢产物中开发新药 保泰松→羟基保泰松（作用强、副作用小） 非那西丁→扑热息痛 ②前药设计 ③新剂型的研究，缓控释、经皮制剂等 以上内容必须通过测定体内药物浓度得以解决
3
（二）临床合理用药中的意义
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（2）超滤法
❖ 原理 ❖ 计算 ❖ 注意事项
a．装置 50μl→5ml，选择不同型号超滤膜，保湿。 b．速度与时间 3000~10000r/min 5~15min c．温度 37℃，25℃，4℃ ❖ 影响因素 a．膜吸附 b．超滤液的体积 超滤液/总体积≈0.3~0.6 c．超滤膜温度
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三、药物与血浆蛋白结合对体内药物分析的影响
16
二、药物与血浆蛋白的结合
1．游离型药物与结合型药物（非特异性的结合） ①在血浆、组织中均存在游离型和结合型的药物 ②尿液中含微量P，血浆中含大量P，唾液中P为血浆1/10 ③与药物 结合的蛋白主要有白蛋白，a1-酸性糖蛋白、脂
蛋白 弱酸性药物主要与白蛋白结合 弱碱性药物与白蛋白、a1-酸性糖蛋白结合 ④药物与蛋白质的结合通过共价键（氢键，离子间静电 力等）
38
（3）影响提取率的因素 ①pH 碱性药物在碱性pH 酸性 酸性pH ②提取溶剂 相似相溶原理 沸点低，不影响
检测,性质稳定，不起化学反应 ③离子强度 加入中性盐 增加离子强度，与
水结合强，便于有机溶剂提取
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（4）离子对提取
对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提 取
①原理
②应用
阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵
β-葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶 混合酶 pH4.5-7.0 37℃ 3．溶剂解 某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发生分解， 同时提取有机溶剂中
37
（五）生物样品的萃取
1．液-液萃取
（1）优点：①与杂质分离 ②简便
③浓集
④提取率高
（2）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比 值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一 次萃取， >70%重现性
17
2．血浆蛋白结合率
Df+P
Db
K= [P]·[Df] Db
血浆蛋白结合率：
Β= Db =
1
Db+Df
1+K/np+Df/np
解离常数
18
结合力强的药物可以置换结合力弱的药物，通过竞 争蛋白是药物相互作用类型之一。 由此可见，K、np是影响β的重要因素
np↓ β↓
K↓ β↑ 药物在足够高浓度时使结合部位饱和，浓度再增高， 多余的药物均呈游离状态，结合部分比率降低，药物血 浆蛋白结合率是药代动力学的重要参数之一。
与蛋白质结合 c. 温度与平衡时间
37℃ 16~48h 注意防腐剂加入，药物的分解 d. 透析袋
渗漏检测 3%三氯醋酸 e. 搅拌 保持动态平衡
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④影响因素
a. 药物膜上吸附 b. Donnan效应
由于电荷的影响，可造成平衡时半透膜两侧游离药浓 不同，donnan效应，加入中性盐可消除。 c. 空白值增加 d. 缓冲液体积变化，水分进入血浆 游离药浓↑ 此法用于测定药物时，耗费时间太长，一般少采用
1．血浆不同对体内药物分析的影响 2．平衡状态不同对体内药物分析的影响 3．平衡状态受破坏对体内药物分析的影响 4．游离与结合同时出现时对体内药物分析的影响
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四、药物代谢
1．研究药物代谢的意义 ➢了解药物在体内的命运及相互作用，保证临床用药安全
有效 ➢研究药物代谢途径、药物结构与药理作用关系，寻找新
色谱法
+++
+++ HPLC GC
免疫法
++++
++ 疫交叉反应，重现性
根据药物理化性质，结构特征，药物浓度，干扰成分大
小，实验目的
48
二、分析方法的设计依据
方法的建立
原始方法改进→创新 创立方法
49
1．做好文献总结
2．充分了解药物特征及体内状况
pH、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、药动学参数、 体内代谢情况
（2）装样 过载 突破性试验 已知浓度样品液 ① 小体积上柱→洗脱回收百分率 ②加大体积→洗脱回收百分率 ③绘图 当回收率下降时为过载
46
Байду номын сангаас
（六）生物样品的组分浓集 （七） 衍生化处理
GC衍生化 HPLC衍生化
47
第四章 体内药物分析方法的建立与评价
一、分析方法
灵敏度 专属性
光谱法
+
+
刚开始应用较多双波长，导数
发展迅猛，新仪器不断涌现
书籍出版
《Drug Level Monitoring》
1980
《Therapeutical Drug Monitoring》
1981
《Textbook of Biopharmaceutic Analysis》
1981
12
2．国内情况
80年代初，药物分析工作者倡导，1980年版《药物 分析》教材中纳入部分内容，第二、三版增加体内药物 分析一章。第四版、第五版取消，各学校开设体内药物 分析课程。
31
（二）样品的贮藏
1．血样（血浆、血清）及时分离→冷藏， -70℃加入稳 定 剂NaF 2．尿样
①尿中水、无机盐、尿素等细菌的生长， 4℃保存 ②加入防腐剂 a．1%甲苯 b．饱和氯仿 c．pH改变 3．唾液：同血样
32
二、生物样品的预处理
（一）预处理的目的 ①存在形式的多样性 游离 结合 代谢物 ②浓度低，杂质多（分离浓缩） ③出现浑浊和沉淀 ④与试剂起反应 ⑤影响色谱柱寿命
19
3．血浆蛋白结合的测定 平衡透析法、超滤法、凝胶过滤法、光谱法等。 （1）平衡透析法
①原理 ②计算 β= 袋袋内内药-袋物外×100% =Ct-Cf/Ct×100%
20
③注意事项
a. 蛋白质溶液 新鲜血浆 pH7.4，至少三个浓度测定 b. 缓冲液 0.13mol/L磷酸盐缓冲液，因为Na3PO4 抑制酸性药物
浙大
2001
张君仁《体内药物分析》 化学工业出版社 2002
14
3．学科前沿
❖ 游离药物浓度测定 ❖ 直接进样方法研究 ❖ 代谢物测定 ❖ 对映体分析
15
第二章 体内药物存在的状态与 体内药物分析的关系
一、药物的体内变化
吸收→分布→代谢→排泄 ADME过程 发生两种变化 物理变化 可逆变化 化学变化 结构和数量发生变化
42
（7）药物的吸附 ①玻璃容器吸附 1%三甲一氯硅烷 10%二甲二氯
硅烷 ②血浆
43
2．液固萃取
固相萃取[solid phase extraction SPE] 针管式 抽空减压 加压 过滤
44
（1）固相萃取步骤
①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理
阳离子：NH2+
反离子烷基或芳基磺酸盐
（5）提取技术
一般在试管中进行 有机相与水相比1:1或2:1
40
（6）乳化问题 措施
①轻缓振摇 ②含有分散度大或不溶物应过滤掉 ③避免在高pH条件下，从水中提取药物 ④避免使用易发生乳化的溶剂 ⑤萃取剂水中加入少量NaCl
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破孔方法 ①机械法 ②加入少量高级脂肪醇 改变表面张力 ③改善混合溶剂比例，增加分散相分数
3．明确测定目的、要求
目的
药浓监测 药代动力学研究 母体药物和代谢物
4．结合实验室条件 设备条件 预处理方法
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三、分析方法的建立
1．纯品进行测定 确定线性范围、灵敏度、反应条件（pH、t、T）
2．空白样品测定 确定空白样品是否有干扰
3．以水代替空白样品，加标准液后测定 了解提取率、检测浓度 确定萃取条件、pH、挥发浓缩等
33
（二）处理方法选择的一般原则
1．药物理化性质 pKa 亲脂性 挥发性 溶解度 光谱特征 稳定性
2．浓度范围 灵敏的方法 3．测定的目的 定性 定量 母体 代谢 4．生物样品的种类 5．样品处理与分析方法的选择
① 专一性 ② 灵敏性
34
（三）生物样品去蛋白处理
1．加入与水能混溶的有机溶剂及中性盐 甲醇 乙腈 甲醇1:2 乙腈1:1.5 （NH4）2SO4 NaCl
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❖ 氧化反应 ❖ 还原反应 ❖ 水解反应 ❖ 结合反应
a．葡萄糖醛酸结合 b．硫酸酯化 c．谷胱甘肽缀合 d．乙酰化结合 e．氨基酸结合
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五、药物代谢与体内药物分析的关系
1．样品的保存 样品可能会分解，如血浆酯酶可使酯类药物水解，
酶类可使药物继续代谢，加入酶抑制剂和冷藏保存。 2．分析方法选择 光谱法 色谱法 免疫法 3．样品的提取、分离法