管碟法测定抗生素效价

管碟法测定抗生素效价详解

4．放置钢管用钢管放置器，将干热灭菌的镊子或适宜方法将钢管装于玻璃管中，放于钢管放置器上，将双碟打开，放入双碟台上，托起双碟台，使钢管平稳落在培养基上，注意使各个钢管下落的高度基本一致，钢管放妥后，双碟静置 5 ～10 min, 使钢管在琼脂内稍下稳定后，再开始加抗生素溶液。 5．滴加抗生素溶液每批供试品取6~10个双碟，滴加溶液可调式移液器，在滴加之前须用滴加液洗2~3次。滴加溶液的顺序:SH→TH→SL→TL。滴加溶液至钢管口平满，注意滴加溶液间隔不可过长，因溶液的扩散时间不同影响测定结果。
• 结果判断 • 1. 可靠性测验结果认为可靠，方可进行效价和可信限率计算。 • 2.可信限率考核实验的精密度，除药典各论另有规定外，本法的可信限率不得超过5%。上述各项规定都能符合者，试验结果成立。 • 3. 实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的 110%，则检验结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。 • 4. 效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
• 结果的可靠性检验及效价测定：抑菌圈测量仪提供计算结果或手工计算结果。
记录与计算 1. 试验记录应包括抗生素的品种、剂型、标示量、生产厂、批号、检查目的、检验依据、检验日期、温度、湿度，标准品与供试品的称量、稀释步骤与核对人，抑菌圈测量结果。当用游标卡尺测量抑菌圈直径时，应将测试数据以框图方式顺双碟数记录。当用测量仪测量面积或直径时，应将电脑测试、计算、统计分析的打印纸贴附于记录中。 2. 计算注意事项：a、浓度比不等于1.000时，如标准品溶液（S）d的浓度为1005u/ml,而供试品溶液(T)的浓度995u/ml，D=S/T=1.0101；也可将D值设为1.000，而估计效价设为101.01% b、所测定的实际效价应在D值与估计效价乘积的90%和 110%范围内，超出就应重新估计效价。如估计效价为 100%，D=1.000，而测得的效价为115%，按110%重估效价再进行试验。 C、原料及不合格供试品，进行平行试验，配置两份标准品和两份供试品，一份标准品与一份供试品为一组滴样

抗生素的生物效价测定法(管碟法)

抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。

生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。

抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。

稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。

这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。

所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。

由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。

比浊法原理及操作大致与稀释法相同。

比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。

这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。

这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。

扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。

经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。

管碟法对抗生素药品效价的微生物检定

第9卷第3期延安大学学报（医学科学版）Vol.9No.3 2011年9月Journal of Yanan University（Med Sci）Sep.2011管碟法对抗生素药品效价的微生物检定王新霞1，宋雪玲2（1.延安大学附属医院；2.延安市药品检验所，陕西延安716000）摘要：目的减少实验过程中外界因素与人为因素给试验带来的误差，提高管碟法测定抗生素效价的准确性。

方法按药典操作步骤逐步分析，规范操作，并提出合理的解决方案。

结果得到清晰、圆整的抑菌圈。

结论可以提高测定结果的准确性。

关键词：抗生素效价；生物检定法—管碟法；抑菌圈中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：1672－2639（2011）03－0058－01抗生素是医疗上广泛使用的药品［1］。

由于抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌效力，利用抗生素对细菌（霉菌）的杀死或抑制的程度，作为客观指标来衡量抗生素的效力。

根据此原理，设定了抗生素效价的生物检定法—管碟法。

1基本原理管碟法是利用抗生素在琼脂培养内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

管碟法的特点是灵敏度高，能直接显示抗生素的抗菌效价，但操作步骤多，试验过程长。

影响试验结果的因素较多，需要从各个环节加以严格控制试验条件。

本文就对试验中各项影响因素的控制加以讨论。

2影响因素2.1抑菌圈圈正的控制在某些情况下，抑菌圈出现破裂，呈椭圆形，卵圆形等不正常形状，其原因［2］可能如下：（1）在滴加抗生素溶液至小管时，抗生素溶液从小管口或毛细滴管口溅出落在琼脂培养基表面上。

防止方法：毛细滴管内不得有气泡，毛细滴管口避免太细，毛细滴管离小管口距离不要太高，适当调节，使液滴下滴时不致溅出。

（2）小管两端面不够平，使抗生素溶液漏出，破坏了均匀扩散现象。

必须使用加工相同的小钢管。

如都用二端面平面的，或都使用二端面圆的。

（3）玻璃双碟、小钢管、钢管放置器被微量抗生素（或其他杀菌剂）污染，使抑菌圈破裂。

管碟法抗生素效价测量实验

管碟法抗生素效价测量实验实验简介在管碟法抗生素效价测量实验中需要注意的影响因素分析及对策如下：管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。

但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。

根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。

实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。

可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。

小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。

如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。

1.2 实验器材的清洗抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。

由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素（庆大霉素、争光霉素、链霉素等）或者被清洗用的杀菌剂（如新洁而灭、洗洁精、去污粉等）污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。

因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。

160℃干热灭菌2h后备用。

配制试验所需的样品及药品2.1 样品与标准品溶液的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。

供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。

称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。

标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。

天平中的干燥剂应保持经常注意更换。

称量结束后，加入超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。

稀释时，都应采用容量瓶，每一步稀释取样量不得少于2mL。

用刻度吸管吸取溶液前，要用待稀释液冲洗吸管2～3次，吸取溶液后，要用滤纸把刻度吸管外壁多余液体擦去，再从起始刻度开始放溶液。

抗生素微生物检定管碟法

抗生素微生物检定管碟法抗生素微生物检定管碟法抗生素微生物检定法可分为：（1）稀释法；（2）比浊法；（3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）。

各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。

管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。

此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。

原理：利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，依据量反应平行线原理并采用交叉实验设计方法，在相同实验条件下通过比较标准品（已知效价）和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈（直径或面积）大小，来测定供试品效价的一种方法。

管碟法的操作步骤：1、预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16～17.5mm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15～18mm。

2、试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。

3、双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟放入35～37℃培养箱中，待用。

4、供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。

5、菌层的制备：注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。

6、滴加抗生素溶液：注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。

7、双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层为宜。

管碟法抗生素效价测量实验

管碟法抗生素效价测量实验抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准，具有与应用原理相一致、用量少和灵敏度高等优点。

管碟法是琼脂扩散法中的一种，已被各国药典广泛采用，作为法定的抗生素生物检定方法。

当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。

因此，当抗生素浓度达到或高于mic（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。

根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。

实验简介在管碟法抗生素效价测量实验中需要注意的影响因素分析及对策如下:管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。

但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。

根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。

实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。

可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。

小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。

如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。

1.2 实验器材的清洗抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。

由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素(庆大霉素、争光霉素、链霉素等)或者被清洗用的杀菌剂(如新洁而灭、洗洁精、去污粉等)污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。

因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。

160℃干热灭菌2h后备用。

配制试验所需的样品及药品2.1 样品与标准品溶液的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。

抗生素效价

用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。

链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。

抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。

除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。

第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。

用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。

临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。

藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。

大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。

管碟法测定抗生素

缺点：(1)实验过程中需要严格的无菌操作环境，对实验条件要求较高；(2)不同批次、不同来源的敏感菌可能对实验结果产生一定影响；(3)对于某些具有特殊作用机制的抗生素，可能需要采用其他方法进行效价测定
管碟法测定抗生素
总结与展望
管碟法是一种经典的抗生素效价测定方法，具有操作简便、直观等优点，广泛应用于药物研发、生产和质量控制等领域。然而，随着科学技术的不断进步和新药的不断涌现，管碟法也面临着一些挑战和改进的空间。未来，可以通过改进实验条件、优化操作流程和提高数据分析能力等方式，进一步提高管碟法的准确性和可靠性，为抗生素的研究和应用提供更加准确可靠的依据
操作规范：实验过程中应严格遵守无菌操作规范，避免杂菌污染干扰数据分析：在数据分析过程中，应采用适当的统计方法对实验数据进行处理和分析，以获得准确可靠的实验结果
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素的优缺点
优点：(1)操作简便、直观，可快速获得实验结果； (2)适用于多种抗生素的效价测定，具有较好的通用性；(3)可同时比较不同抗生素的ຫໍສະໝຸດ 菌效果，方便进行药物筛选和质量控制
-
管碟法测定抗生素
A
管碟法是一种常用的抗生素效价测
定方法，其原理是将抗生素溶液置
于含有敏感菌的培养基中，通过测
定抗生素的抑菌圈大小来确定其效
价
B
下面将对管碟法测定抗生素的步骤、注意事项和优缺点进行详细介绍
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素的步骤
培养基制备：将基础培养基加热溶解，灭菌后冷却至50℃左右，加入适量敏感菌悬液，摇匀后倒入无菌培养皿中，待凝固后备用抗生素溶液制备：将待测抗生素溶解于适宜溶剂中，制备成不同浓度的溶液放置管碟：在培养皿上放置无菌管碟，轻轻按压使管底与培养基紧密接触滴加抗生素溶液：用微量移液器将不同浓度的抗生素溶液滴加到管碟上，每个浓度至少做3个平行试验培养：将培养皿放入恒温培养箱中培养一定时间(一般为16-24小时)，使敏感菌在培养基上生长

管碟法测定抗生素效价详解

管碟法的操作步骤
预试验→试验准备→ 双碟底层的制备→
供试品、标准品溶液的制备→菌层的制备
→滴加抗生素溶液→双碟的培养→ 抑菌圈
的测量→结果的可靠性检验及效价测定
• 预试验：
确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：高剂量浓度溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm。高剂量与低剂量的抑菌圈直径之差最好不小于2mm。高低剂量之比为2:1（如高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用4:1的剂量比率）。
• 试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。
• 供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。
1. 称量称量前，将标准品从冰箱取出，使与温室平衡；供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。供试品与标准品应用同一天平；吸湿性较强的抗生素，在称量前1～2 ｈ更换天平内干燥剂。标准品与供试品的称量最好一次取样称取，不得将已取出的标准品或供试品倒回原容器内，标准品称量不可少于 20mg，取样后立即将称量瓶及被称物盖好，以免吸水。样品的称样量最好不少于50mg。
一、试验前准备
• 双碟的挑选
内径约90mm，硬质玻璃或塑料培养平皿，水平透明，无色斑气泡
• 物品的清洗、灭菌
培养皿、钢管、刻度吸管清洗后160℃干热灭菌2小时或 121℃高压蒸汽灭菌30min，放置室温备用；陶瓷瓦盖要定期清洗干燥。
牛津杯的挑选
内径（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外径（7.8±0.1）菌的来源：检定菌种由中监所所提供的冷冻干燥品。检定菌的传代和接种：芽胞杆菌3～6个月（其他细菌每个月）用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用（阳性对照）菌种。传代和接种在菌种接种室内按无菌操作要求进行。

管碟法测定抗生素效价方法的优化研究

管碟法测定抗生素效价方法的优化研究

摘要:以实验室发酵的抗生素、杆菌肽为测试品,通过用管碟法测定其效价,从而得到管碟法测定抗生素效价的较优化的一般方法。研究结果表明,上层培养基 8 源的成分以骨蛋白胨、鱼蛋白胨、胰酪蛋白胨较好,培养基的厚度影响显著；其次是指示菌的浓度和上层培养基的酸碱度对测定结果影响较大。

1.1.3杆菌肽标准品!

美国 &7590FG离心机（湘仪），电子天平），多功能微生物自动测量仪），高压灭菌锅，酸度计，培养皿，牛津杯，振荡培养箱，生化培养箱，细菌过滤器，取液器。
1.2 方法
1 材料与方法

1.1 材料 1.1.1 指示菌及发酵菌菌种来源! 指示菌金黄色葡萄球菌，发酵试验菌地衣芽孢杆菌均由重庆师范大学应用微生物研究所提供。
1.1.2 培养基成分!
固体培养基。下层培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂10g、 H2O1000ml, pH7.2、 121℃灭菌 30min。上层培养基：牛肉膏3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 8g、 H2O1000ml , pH7.2、 121℃灭菌 30min。蛋白胨水培养基。牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g 、 H2O1000ml, pH7.5。
测定抗生素效价的国际常用方法是管碟法，是利用抗生素在特定实验菌的琼脂培养基内的扩散作用，形成一定浓度的含抗生素的球型区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈，将已知效价的标准溶液和未知效价的供试样品溶液在相同条件下进行培养，比较两者的抑菌圈的大小，利用各种不同的计算原理，就可以准确地测定出供试样品的效价。但是在使用标准样品比较时，由于各种因素的影响使得抑菌圈在相同剂量下偏小，不规则，且对低剂量的效价难于测定，使效价测定的误差更大。为此，本实验通过对影响测定抑菌圈大小的各种因素进行比较试验及分析，得出杆菌肽效价测定的最佳条件。

抗生素效价测定实训报告

一、实训目的1. 掌握抗生素效价测定的原理和方法。

2. 熟悉管碟法测定抗生素生物效价的相关操作步骤。

3. 提高实验操作技能和数据分析能力。

二、实训时间2023年11月X日三、实训地点实验室四、实训内容本次实训采用管碟法测定抗生素的生物效价，以青霉素为例进行实验。

五、实验原理抗生素的效价是指在一定条件下，抗生素对特定微生物的抑制作用。

抗生素效价测定通常采用微生物学方法，其中管碟法是目前国际上通用的方法。

管碟法的基本原理是：在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管，管内放入标准品和检品的溶液，经过恒温培养后，抗生素在菌层培养基中扩散，形成抑菌圈。

抑菌圈的大小与抗生素的浓度呈线性关系，通过比较标准品和检品的抑菌圈大小，可以计算出抗生素的效价。

六、实验步骤1. 准备工作- 准备实验所需材料：无菌平板、牛津杯、青霉素标准品、青霉素样品、产黄青霉、琼脂、生理盐水等。

- 将青霉素标准品和样品分别稀释成不同浓度的溶液。

2. 制备琼脂平板- 将产黄青霉接种于琼脂平板，培养至适宜的生长状态。

3. 放置牛津杯- 在琼脂平板上均匀放置牛津杯，每个平板放置4个。

4. 加入溶液- 在牛津杯中分别加入不同浓度的青霉素标准品溶液和样品溶液。

5. 培养- 将平板放入恒温培养箱中，培养16-18小时。

6. 观察和测量- 观察抑菌圈的形成情况，测量抑菌圈的直径。

7. 数据处理- 根据抑菌圈直径，计算青霉素标准品和样品的效价。

七、实验结果与分析1. 实验结果- 青霉素标准品在不同浓度下，抑菌圈直径与浓度呈线性关系。

- 青霉素样品在不同浓度下，抑菌圈直径与浓度呈线性关系。

2. 数据分析- 通过比较青霉素标准品和样品的抑菌圈直径，可以计算出青霉素样品的效价。

八、实验总结1. 通过本次实训，掌握了抗生素效价测定的原理和方法，熟悉了管碟法测定抗生素生物效价的相关操作步骤。

2. 提高了实验操作技能和数据分析能力，为今后的科研工作打下了基础。

抗生素生物效价测定(详细参考)

实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。

【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。

管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。

管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。

管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。

因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。

根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。

常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。

后二法已经列入药典。

二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。

取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。

先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。

（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。

管碟法抗生素微生物检定法讲座

因标准品与供试品同质，最低抑菌浓度 c＇相同，又在同一双碟上培养 Logc＇4πDTH
相等，所以②-①得：
M2＇
1
Logθ＝ Log─── ＝ ──── ( T22 - S22)
Ⅰ
M2
9.21DT
其中θ为供试品与标准品效价比率。
同理可推算出低剂量反应式：
M1＇
1
Logθ＝ Log─── ＝ ─── ( T12 - S12)
原因是相邻的小钢管之间的距离过小或形成的抑菌圈过大，相邻两小钢管扩散的抗生素溶液
互相叠加，超过该抗生素溶液对试验菌的最低抑菌浓度而形成卵圆或椭圆形抑菌圈。防止方
法有：使用钢管放置器安置钢管，使各钢管之间的距离均匀一致而避免过小；控制抑菌圈大
圈直径在 18～22mm 之间。
⑥培养温度不均匀，此操作会导致形成卵圆或椭圆形抑菌圈。其原因是温度影响细菌的
②小钢管底部二端面不平，此操作会导致形成卵圆或椭圆形抑菌圈。其原因是抗生素溶液在琼脂培养基上扩散速度不一致。操作时使用加工相同的小钢管可防止此现象的发生。
③双碟、小钢管或其它器具被抗生素或其它杀菌剂污染。此操作会使抑菌圈破裂，有时甚至使试验菌大部或全部被抑制，无法形成抑菌圈。因此，操作时一定要防止材料、器具、环境被抗生素污染。
⑸试验菌也是影响抑菌圈直径的一重要因素。及时更换试验菌，使用新鲜菌液，可提高试验的灵敏度，增大抑菌圈直径。例如，使用新开启的枯草芽孢杆菌测定乙酰螺旋霉素效价时形成的抑菌圈大圈直径比使用旧的试验菌(2 年以上)提高 1～2mm。
⑹通过控制培养基中菌的浓度来控制抑菌圈直径。例如，乙酰螺旋霉素、泰乐菌素、螺旋霉素形成的抑菌圈较小，为了提高抑菌圈直径，培养基中菌的浓度为 0.1～0.2％，需要时还可以把原菌液稀释 3～5 倍。盐霉素、麦白霉素形成的抑菌圈较大，为了降低抑菌圈直径，可以把菌液浓度提高至 2～3％。三、抑菌圈清晰度的控制：

抗生素效价测定(管碟法)缺项的补救

抗生素效价测定(管碟法)缺项的补救引言:抗生素效价测定是评价抗生素抑制细菌生长能力的方法之一。

管碟法是一种常用的抗生素效价测定方法，但在实施过程中可能会出现缺项的情况。

本文将探讨抗生素效价测定(管碟法)缺项的补救方法。

一、缺项的原因抗生素效价测定(管碟法)中出现缺项的原因可能有多种，如实验操作失误、实验材料不足、数据记录错误等。

缺项会导致测定结果的不准确性，因此需要及时采取补救措施。

二、补救方法1. 重新进行实验如果只是个别的缺项，可以考虑重新进行实验。

在重新实验时，要注意核对试验操作步骤，确保实验的准确性和可靠性。

同时，还要确保实验材料的充足性，避免再次出现缺项的情况。

2. 数据插补如果缺项较多，或者实验条件无法重现，可以考虑进行数据插补。

数据插补是根据已有数据的规律和特点，通过一定的方法估计缺项的数值。

常用的数据插补方法有平均值插补、线性插补、多项式插补等。

选择合适的插补方法需要根据实际情况进行判断。

3. 参考文献补充如果实验中出现的缺项与文献中的数据相符，可以考虑参考文献中的数据进行补充。

在参考文献补充时，需要确保所选文献的可靠性和相关性，避免引入错误数据。

4. 数据分析与推测对于无法进行实验和数据插补的情况，可以通过数据分析和推测来补充缺项。

通过对已有数据的分析，可以获得一些相关规律和趋势，进而推测出缺项的数值。

数据分析与推测需要基于一定的统计方法和模型，确保推测结果的可靠性。

5. 结果说明与限制在补救缺项的过程中，需要对实验结果进行说明和限制。

说明实验中出现缺项的原因，以及所采取的补救方法和补充数据的可靠性。

同时，还要明确补救后结果的可靠程度和适用范围，避免误导他人。

三、注意事项1. 实验操作的准确性和规范性是避免缺项的关键。

在进行抗生素效价测定(管碟法)实验前，需要仔细阅读实验方法和操作要点，确保操作正确无误。

2. 实验材料的充足性和质量是保证实验可靠性的基础。

在进行实验前，需要检查实验材料的存储条件和有效期，确保实验材料的可靠性。

抗生素生物效价测定

抗生素生物效价测定实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。

【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。

管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。

管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。

管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径± mm，外径± mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。

因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。

根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。

常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。

后二法已经列入药典。

二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。

取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。

先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。

（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式V=（UH+UL）-（SH+SL）(式式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。

抗生素效价计算过程

USP Cylinder-plate assay 美国药典管碟法---（标准曲线法）1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。

除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。

待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：图1：标准及样品管碟放置方式图例2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例：下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：表2：抗生素效价检测测量结果表Replicate1Replicate2Replicate3Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；U1表示待测样品1。

2.1 进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。

例如：15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值2.2 变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。

例如：标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *1002.3 进行平板间的差异校正：计算公式如下。

X C = X S– (X R– P)X C = 标准品平均值的校正值X S = 原始的标准品的平均值X R = 对照值的平均值P = 校正值例如：14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.1452.4 建立标准曲线：标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。