生物制药课件(第十九章)1

（五）冻干 二、菌苗类制品和类毒素的制造方法 菌苗类制品和类毒素的制备，均由细菌培养开始， 但前者系用菌体作为进一步加工的对象，而后者则对 细菌所分泌的外毒素进行加工。 一般工艺流程：
第四节 生物制品的质量检定 一、理化性质检定 生物制品中的某些有效成分和不利因素，需要通过 物理化学和生物化学的方法才能检查出来，这是保证 制品安全和有效的一个重要方面。 （－）物理性状的检查 （1）外观 （2）真空度及溶解速度 （3）装量
B细胞
增殖
分化
浆细胞 IgA
抗原
细胞生长因子 分泌抗体
IgM IgG IgD IgE 细胞毒性T细胞 杀
T 细胞
增殖
分化 记忆细胞
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig） 免疫球蛋白 是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的 球蛋白。 抗体（antibody,Ab) 抗体 是B细胞识别抗原 细胞识别抗原后增殖分化为桨细胞 桨细胞所产 细胞识别抗原 桨细胞 生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中， 能与相应抗原特异性地结合，具有免疫功能。
（3）疫苗 由有关立克次体、病毒制成。 疫苗 （4）抗血清与抗毒素 经特定抗原免疫动物后，采来 抗血清与抗毒素 血分离血浆或血清制成 （5）类毒素 由有关细菌产生的外毒素 类毒素 （6）混合制剂 由两种以上菌苗 疫苗 类毒素 混合制剂 菌苗或疫苗 类毒素混合 菌苗 疫苗或类毒素 制成。 （7）血液制品 由人或动物的血液分离提取制成。 血液制品 （8）诊断用品 是用于检测相应抗原、抗体或机体免 诊断用品 疫状态的制品。 （9）其他新研制的不属于以上8类的制品。
（三）疫苗的灭活 不同的疫苗，其灭活的方法不同，有的用甲醛溶 甲醛溶 液 ;有的则用酚溶液 ;灭活温度和时间，需视病毒的 酚溶液 生物学性质和热稳定性质 热稳定性质而定。 生物学性质 热稳定性质 其原则 原则是要以足够高的温度和足够长的时间破坏 原则 疫苗的毒力，而以尽可能的最低温度和最短时间来 尽量减少疫苗免疫力的损失。 （四）疫苗的纯化 疫苗纯化的目的，是去除存在的动物组织，降低 疫苗接种后可能引起的不良反应。用细胞培养所获 得的疫苗，动物组织量少一下般不需特殊的纯化， 但在细胞培养的过程中，得用换液 换液的方法除去培养 换液 基中的牛血清 用动物组织所制成的疫苗 （要淘汰） 牛血清。用动物组织所制成的疫苗 要淘汰） 牛血清
第三节 生物制品的一般制备方法 一、疫苗制造方法 （一）毒种的选择和减毒 （1）毒种必须持有特定的抗原性，能使机体诱发特 ）毒种必须持有特定的抗原性， 定的免疫力。 定的免疫力。 （2）毒种应有典型的形态和感染特定组织的特性， ）毒种应有典型的形态和感染特定组织的特性， 并在传代过程中，能长期保持其生物学特性。 并在传代过程中，能长期保持其生物学特性。 （3）毒种易在特定的组织中大量繁殖。 ）毒种易在特定的组织中大量繁殖。 （4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素。 ）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素。 （5）无原致病力的现象。 ）无原致病力的现象。 （6）不被其他病毒所污染。 ）不被其他病毒所污染。
细胞融合后，可产生多种融合细胞，如脾一脾、 脾一瘤、瘤一瘤的融合细胞，而且还有许多未融合的 骨髓瘤细胞。 可再将融合后的细胞立即移人选择性培养基中进 行培养。常用的选择培养基为HAT培养基，它是用次 黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶（T）配 制的。 脾一瘤融合的杂交瘤细胞可利用HGPRT酶，用次 黄嘌岭（H）和胸腺嘧啶（T）合成DNA，使杂交瘤 细胞得以生长。筛选出产生抗体的阳性克隆。
补 体 是存在于人和脊椎动物血清与组织液中一组 经活化后具有酶活性 酶活性的蛋白质。 酶活性 一、补体活化的经典途径 二、补体活化的MBL途径 三、旁路途径
免疫细胞
粒细胞（中性、嗜酸性、嗜碱性） 单核-巨噬细胞、 髓系祖细胞 巨核细胞 树突状细胞 造血干细胞 红细胞的母细胞 T细胞 淋巴系祖细胞 B细胞 NK细胞 部分树突状细胞
分泌细胞因子
启动适应性免疫应答
抗原（antigen）是指能刺激机体免疫系统发生免疫应 抗原 答而产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与相应抗体 致 抗体或致 抗体 敏淋巴细胞在体内、外发生特异性结合 特异性结合的物质，或称 敏淋巴细胞 特异性结合 完全抗原。 完全抗原
抗原有两个特性 两个特性： 两个特性 （1）免疫原性 ）免疫原性，即能刺激机体产生免疫应答的能力； （ 2）免疫反应性 ） 免疫反应性，能与相应的免疫应答产物发生特 异性结合。 半抗原（ 半抗原（hepten）只有免疫反应性而无免疫原性的物 ） 质。 2、适应性免疫应答 、 T、B细胞经其细胞表面表达的抗原识别受体 受体，T、 受体 B细胞与抗原结合开始活化。
根据用途又可将生物制品分为预防类、治疗类 和诊断类三大类制品。 1、预防类 、 2、治疗类制品 、 3、诊断类制品 、
二、生物制品质量要求 世界卫生组织要求 要求各国生产的制品出须有专门检定机 要求 构负责成品的质量检定 质量检定，检定部门要有熟练的高级技 质量检定 术人员，精良的设备条件，以保证检定工作的质量。 未经专门检定部门正式发给检定合格证 检定合格证的制品，不准 检定合格证 出品使用。 安全性检定 检定 效力检定
一、吞噬细胞
中性粒细胞
来自百度文库
抗原处理及抗原提呈细胞
巨噬细胞将病原体吞噬，病原体成分被水 解，形成抗原 抗原分子——活化B细胞；或与MHC 抗原 分子结合，经APC提呈给T细胞，使T细胞活化。 郎格汉斯细胞-吞噬处理抗原-迁移至淋巴结 -分化为树突状细胞，失去吞噬能力而具有很强 提呈能力。
肺部巨噬细胞吞噬大肠杆菌
（二）病毒的繁殖 所有动物病毒，只能在活细胞中繁殖。若需大量 繁殖，首先要寻找能受感染的活细胞。在通常的情况 下，病毒可用下列几种方法繁殖。 1、动物培养 、 这种方法是将病毒接种动物的鼻腔、腹腔、脑腔 鼻腔、腹腔、 鼻腔 或皮下，使之在相应的细胞内繁殖。接种动物的种类、 或皮下 年龄和接种途径依病毒的种类而异。 2、鸡胚培养 、 这种方法是将病毒接种到7～14日龄鸡胚的尿囊腔、 卵黄囊或绒毛尿囊膜等处；接种的部位亦因病毒种类 的不同各异。
3、组织培养 、 从20世纪50年代开始，组织培养已广泛用于病毒 培养。目前，差不多所有人类和动物的组织都能在试 管中培养。 4、细胞培养 、 用于疫苗生产的主要有原代细胞培养 传代细胞 原代细胞培养和传代细胞 原代细胞培养 培养两种方法。 培养 原代细胞培养系将动物组织进行一次培养而不再传 原代细胞培养 代；常用的细胞有猴肾细胞、地鼠肾细胞和鸡胚细胞 等。 传代细胞培养系用长期传代的细胞株，常用的有 传代细胞培养 人胚肺二倍体细胞、非洲绿猴肺细胞等。
二、中枢免疫器官
骨髓 B淋巴细胞发育成熟的场所。 胸腺 由胸腺基质细胞和胸腺细胞组成。是T 淋巴细胞，尤其是αβ+T细胞发育的场所。
三、淋巴细胞再循环
淋巴细胞经淋巴循环及血液循环，运行并再 分布于全身各处淋巴器官及淋巴组织中。 淋巴细胞在各淋巴组织和淋巴器官中的定位 有一定特异分布性。取决于淋巴细胞表面黏附 分子种类及高内皮细胞小静脉（HEV）表达的 相应黏附分子受体。
（2）人工被动免疫 输入免疫血清（含特异性抗体） ） 使机体获得一定免疫力，以达到防治某些疾病目的者， 称为人工被动免疫 。 人工被动免疫 输入特异性抗体后，可立即发挥免疫作用。但由 于免疫力的产生不经自身免疫系统，因此维持时间常 较短暂。
三、生物制品的生物化学基础 （一）生物制品的蛋白质生化 研制纯化 纯化疫菌苗及人工合成的多价菌苗 多价菌苗，获得原 纯化 多价菌苗 虫的有效成分制造原虫疫苗等均为生物制品的发展趋 势。 （二）其他技术 （1）杂交瘤技术（ 单克隆抗体、抗体改造） ）杂交瘤技术（ 单克隆抗体、抗体改造） 制疫苗、 （2）基因工程技术 制疫苗、产抗体 ）基因工程技术(制疫苗 产抗体)
二、生物制品的免疫学基础
推动现代生命科学前进的三架马车 分子生物学（Molecular Biology） 免疫学（Immunology） 细胞生物学（Cell Biology）
（一）、基本概念： ）、基本概念： 基本概念 免疫： 免疫：系指机体对感染有抵抗能力，而不患疾病或 传染病。 组织和器官 免疫系统 细胞 活性分子 免疫学是研究免疫系统的结构与功能，理解其对 免疫学 机体有益的防卫功能和有害的病理作用及其机制， 以发展有效的免疫学措施，实现防病、治病的目的。
毒性试验； 防腐剂试验； 安全性检定 热原质试验； 安全试验； 有关安全性的特殊试验 特殊试验 浓度测定（含菌数或纯化抗原量） 活菌率、或病毒滴度测定 效力检定 动物保护率试验 免疫抗体滴度测定 稳定性试验
第二节 制造生物制品的生物学基础 生物制品主要是细菌、病毒等微生物本身 细菌、病毒 本身或其代谢 生物制品 细菌 本身 代谢 产物，或用它们免疫动物所得抗血清 抗血清制成。 产物 抗血清 一、生物制品的微生物学基础 1、细菌的代谢产物 、 （1）热原质 ：代谢合成的多糖 ，G-细菌细胞壁中的 ） 脂多糖 。 内毒素和外毒素 （2）毒素 ：细菌产生的毒素有内毒素 外毒素 ） 内毒素 外毒素。 内毒素是脂多糖 ；外毒素是蛋白质 脂多糖 蛋白质，产生外毒素的 蛋白质 细菌大多是革兰氏阳性菌，但少数革兰氏阴性菌也能 产生外毒素 。
第四节 免疫病理与免疫性疾病
超敏感反应病 反应过高 免疫缺陷病 免疫功能低下或缺失 自身免疫性疾病 对自身抗原应答所致 免疫耐受是机体对抗原刺激表现为“免疫不 应答”的现象
（一）人工免疫 人为地给机体输入抗原以调动机体的免疫系统， 或直接输入免疫血清，使获得某种特殊抵抗力，用以 预防或治疗某些疾病者，称为人工免疫 。 人工免疫 有两种人为方式，可使机体获得有效的免疫力， 即自动免疫 被动免疫 自动免疫和被动免疫 自动免疫 被动免疫。 （1）人工自动免疫 是给机体输人抗原物质，使免 ） 疫系统因抗原刺激而发生类似感染时所发生的免疫过 程，从而产生特异性免疫力。 用于人工自动免疫的抗原性制剂 抗原性制剂，大部分用病原 抗原性制剂 微生物直接制成称为疫苗 疫苗；亦可取微生物毒素去毒而 疫苗 制成，称为类毒素 类毒素。 类毒素
（二）蛋白质含量测定 目前常用的有以下4种①凯氏定氮法，②双缩脲 法，｜⑧酚试剂法（Lowry氏法），④紫外吸收法。 （三）纯度检查及鉴别试验 血液制品、抗毒素和类毒素等制品，需要进行纯度 检查或做鉴别试验，为此，常用区带电泳、免疫电 泳、凝胶层析、超速离心等技术进行分析。 （四）分子量或分子大小测定 （五）防腐剂含量测定 生物制品在制造过程中，为了脱毒、灭活或防止杂 菌污染，常加入苯酚、甲醛、氯仿、硫柳汞等试剂 作为防腐剂或灭活剂。
第十九章 生物制品 第一节 生物制品的基本概念 生物制品（biological products）是指用微生物 微生物（包 生物制品 微生物 括细菌、噬菌体、立克次体、病毒等）、微生物代谢 微生物代谢 产物、动物毒素、人或动物的血液或组织等经加工 产物、动物毒素、 制成，作为预防、治疗、诊断特定传染病或其他有关 制成 疾病的免疫制剂 免疫制剂。 免疫制剂 一、生物制品的分类 生物制品据其所用材料 制法 用途 材料、制法 用途，可分类如下： 材料 制法或用途 （1）菌苗 由有关细菌、螺旋体制成。 菌苗 （2）噬菌体 由特定宿主菌的噬菌体制成。 噬菌体
非特异性免疫：皮肤、粘膜屏障，细胞分泌抑菌、 非特异性免疫 杀菌物质，吞噬细胞、NK细胞、补体作用。 特异性免疫 ：针对某一特定抗原物质而起作用， 具有特异性。 (二)免疫应答 固有性免疫应答 免疫应答 适应性免疫应答 T、B细胞活化 迅速起防卫作用
1、固有性免疫应答 、 吞噬（识别多糖） 病原体 皮肤 黏膜 NK细胞 杀伤 释放细胞因子 血管扩张 炎症 巨噬渗出
中性粒细胞、血小板等
自然杀伤细胞
NK细胞一经识别病毒感染细胞后，即可发挥 杀伤作用，与T、B淋巴细胞不同。
人T淋巴细胞攻击母细胞瘤细胞
淋巴组织 骨髓 免疫系统 中枢淋巴器官 胸腺 淋巴器官 淋巴结 外周淋巴器官 脾 扁桃体
免疫组织与免疫器官
一、外周淋巴器官及组织
淋巴结 淋巴结内T细胞约占75%，B细胞占 25%。