体内药物分析第四章方法的建立与验证分析讲解
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第四章 体内药物分析
方法的建立与验证
药学院药物分析教研室
2020/10/5
体内药物分析
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本章内容提要
分析方法的设计依据 分析方法建立的一般步骤 分析方法验证的内容与要求 体内药物分析应用示例
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体内药物分析
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【大纲要求】
1、掌握体内药物分析方法的评价 2、熟悉体内药物分析方法建立的思路、分 析方法建立的一般实验步骤
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体内药物分析
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第四章 分析方法的建立与验证
第二节 分析方法 建立的一般步骤
一、分析方法的选择 二、分析方法的建立
(一) 检测条件的筛选 (二) 分离条件的筛选
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体内ຫໍສະໝຸດ Baidu物分析
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一、分析方法的选择
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
体内药物分析方法的设计 生物样品中的药物浓度—决定分析方法的首要
一、待测药物的理化性质及体内存在状况
准确测定生物样品中的药物或其特定代谢 物通过一定的生物样品预处理使待测物从 结合物或缀合物中释放出来。故此，应首 先考虑样品预处理方法
待测药物的理化性质 药物在生物体内的存在状况 药物在生物体内的生物转化(代谢)途径
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
体内药物分析的目的—影响分析方法的应用
药代动力学—研究药物在体内吸收、分布、代谢和排
泄过程—血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢
产物
要求—同时测定原形药物和代谢产物
检 测 — 宽 线 性 范 围 (Cmax ～ Cmax 的 1/20) 、 高 灵 敏 度 (109g/ml)和高专属性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的
生物样品 分析方法的建立和验证过程是不可截然划分的 分析方法的建立步骤
采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术 —分析样品较为“干净”，可用HPLC检测 用RIA分析 —样品的预处理方法可较为粗放 —经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测 定
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四、实验室条件
第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
在设计体内药物分析方法时，还应充分 考虑到实验室现有的或有可能在其它实验 室使用的仪器装备，合理选择可行的分析 方法。
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http://dx.cqvip.com/index.asp
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http://www.cnki.net/index.htm
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http://www.sciencedirect.com/
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因素 生物样品中药物或其特定代谢产物的浓度低、
样品量少 —难以通过增加取样量提高方法灵敏度 —通过选择适当的分析方法适应样品分析需求 体内药物分析中常用分析方法—特点见表4-1
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二、分析方法的建立
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
➢分析方法建立之前 查阅文献资料—充分了解药物在体内的动 力学过程 —避免受到代谢产物的干扰，选择适用 于实际生物样品测定的方法
对热不稳定—避免高温蒸发溶剂
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
(二)待测药物的体内存在状态
与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 —分离萃取方法 蛋白结合较强—不宜直接采用溶剂萃取
体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 —分析检测技术 浓度较低（尤其有代谢产物共存） —代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 —采用LC-MS等分析检测技术
中毒患者的临床抢救
药物浓度极高
方法—不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性
和分析速度
— 大 多 采 用 色 谱 及 其 联 用 技 术 GC 、 GC-MS 、
RIA或EIA
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法—决定分析方法的应用 以血浆或血清为分析样品
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第四章 分析方法的建立与验证
第一节 分析方法的设计依据
建立分析检测方法的主要依据 ➢ 待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况 ➢ 分析测定的目的与要求 ➢ 生物样品的类型与预处理方法 ➢ 实验室条件
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
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http://www.tandf.co.uk/journals/ http://springer.lib.tsinghua.edu.cn/home/main.mpx
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http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=pubmed
分离)
方法—不必强调方法的简便、快速，大多采用色谱及其
脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测
有效治疗浓度范围内药物浓度
方法—尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的
测定，大多采用UV、RIA或EIA等。
(一)待测药物的理化性质
药物的pKa值、亲脂性、溶解度、分配系数等—预 处理及检测方法
具有亲脂性—在适当的pH值下用溶剂萃取
具有强极性或亲水性—沉淀蛋白、固相萃取、
离子对萃取或衍生化后萃取等
具有挥发性—GC测定法
具有光谱或电化学特性—分析检测方法
药物的稳定性—萃取浓缩技术
对酸碱不稳定—避免使用强酸或强碱性溶剂
Medline
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http://pubs.acs.org/
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二、分析方法的建立
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
➢ 初步拟定分析方法后 进行一系列试验工作—选择最佳分析条件 同时验证分析方法的可行性—确认是否适用于实际
方法的建立与验证
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本章内容提要
分析方法的设计依据 分析方法建立的一般步骤 分析方法验证的内容与要求 体内药物分析应用示例
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【大纲要求】
1、掌握体内药物分析方法的评价 2、熟悉体内药物分析方法建立的思路、分 析方法建立的一般实验步骤
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第四章 分析方法的建立与验证
第二节 分析方法 建立的一般步骤
一、分析方法的选择 二、分析方法的建立
(一) 检测条件的筛选 (二) 分离条件的筛选
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一、分析方法的选择
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
体内药物分析方法的设计 生物样品中的药物浓度—决定分析方法的首要
一、待测药物的理化性质及体内存在状况
准确测定生物样品中的药物或其特定代谢 物通过一定的生物样品预处理使待测物从 结合物或缀合物中释放出来。故此，应首 先考虑样品预处理方法
待测药物的理化性质 药物在生物体内的存在状况 药物在生物体内的生物转化(代谢)途径
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
体内药物分析的目的—影响分析方法的应用
药代动力学—研究药物在体内吸收、分布、代谢和排
泄过程—血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢
产物
要求—同时测定原形药物和代谢产物
检 测 — 宽 线 性 范 围 (Cmax ～ Cmax 的 1/20) 、 高 灵 敏 度 (109g/ml)和高专属性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的
生物样品 分析方法的建立和验证过程是不可截然划分的 分析方法的建立步骤
采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术 —分析样品较为“干净”，可用HPLC检测 用RIA分析 —样品的预处理方法可较为粗放 —经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测 定
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四、实验室条件
第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
在设计体内药物分析方法时，还应充分 考虑到实验室现有的或有可能在其它实验 室使用的仪器装备，合理选择可行的分析 方法。
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因素 生物样品中药物或其特定代谢产物的浓度低、
样品量少 —难以通过增加取样量提高方法灵敏度 —通过选择适当的分析方法适应样品分析需求 体内药物分析中常用分析方法—特点见表4-1
2020/10/5
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二、分析方法的建立
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
➢分析方法建立之前 查阅文献资料—充分了解药物在体内的动 力学过程 —避免受到代谢产物的干扰，选择适用 于实际生物样品测定的方法
对热不稳定—避免高温蒸发溶剂
2020/10/5
体内药物分析
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
(二)待测药物的体内存在状态
与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 —分离萃取方法 蛋白结合较强—不宜直接采用溶剂萃取
体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 —分析检测技术 浓度较低（尤其有代谢产物共存） —代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 —采用LC-MS等分析检测技术
中毒患者的临床抢救
药物浓度极高
方法—不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性
和分析速度
— 大 多 采 用 色 谱 及 其 联 用 技 术 GC 、 GC-MS 、
RIA或EIA
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法—决定分析方法的应用 以血浆或血清为分析样品
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第四章 分析方法的建立与验证
第一节 分析方法的设计依据
建立分析检测方法的主要依据 ➢ 待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况 ➢ 分析测定的目的与要求 ➢ 生物样品的类型与预处理方法 ➢ 实验室条件
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
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分离)
方法—不必强调方法的简便、快速，大多采用色谱及其
脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测
有效治疗浓度范围内药物浓度
方法—尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的
测定，大多采用UV、RIA或EIA等。
(一)待测药物的理化性质
药物的pKa值、亲脂性、溶解度、分配系数等—预 处理及检测方法
具有亲脂性—在适当的pH值下用溶剂萃取
具有强极性或亲水性—沉淀蛋白、固相萃取、
离子对萃取或衍生化后萃取等
具有挥发性—GC测定法
具有光谱或电化学特性—分析检测方法
药物的稳定性—萃取浓缩技术
对酸碱不稳定—避免使用强酸或强碱性溶剂
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二、分析方法的建立
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
➢ 初步拟定分析方法后 进行一系列试验工作—选择最佳分析条件 同时验证分析方法的可行性—确认是否适用于实际