食用菌栽培技术综合性实验
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4.培养
接种后，将种瓶（袋）置于适温下培养。菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。菌种袋根据气温可单层或多层叠放。隔4～5天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。
常检查：及时去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。
逐渐降温：当菌丝长至料深的1/2时，降温2～3℃，以免料温升高，并有壮丝作用。
将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存（1~2年）。
2.菌种复壮
（1）制备菌丝悬浮液 将待复壮菌种的菌丝体刮下，置入100ml有玻璃珠的无菌水三角瓶中，充分摇荡，使菌丝分散。吸取10ml菌丝液注入盛有90ml无菌水的小瓶中，摇匀备用。
（2）制混合平板 将融化的PDA培养基倒入无菌培养皿中，凝固后滴入2~3滴菌丝液，用无菌涂棒涂抹，使菌丝均匀分散于平板上。
配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。
配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸15～20min(熟而不烂，勿破皮)，捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。
②棉籽壳麦麸培养基
配方：棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。
配制：将棉籽壳、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边翻拌至含水量达60%～65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。
注意菌龄：原种约30～40天、栽培种约20～30天菌丝长满，再继续培养7～10天是使用的最好菌龄。
六、实验报告与实验汇报
及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题
1.记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？
2.比较原种与栽培种生产过程的异同点
3.颗粒为何要进行泡和煮？
4.菌种的表面有一块残留的琼脂块，证明该菌种是哪级菌种？
5.菌种表面有少许玉米粒或麦粒，证明该菌种是哪级菌种？
6.一批菌种在适宜条件下培养了十多天，发现有一瓶菌种块丝毫未萌动，请分析原因？
实验
一、实验教学目的
学会利用自然基质保藏菌种。掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。
三、所涉及的课程及知识点
在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（菌丝降解纤维素等，…）、仪器分析(……)，……
四、仪器设备及实验材料
1. 器具：菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、高压灭菌锅、接种箱、消毒药品等。
五、实验内容与方法
（一）实验内容
（一）制作发酵料
（二）袋栽
（三）排袋发菌 利用课余时间进行观察和管理
（二）方法步骤
1、发酵料的制作
（1）培养料配方籽壳96%，石灰2%，过磷酸钙1%，石膏1％。
（2）拌料提前一天将棉籽壳摊薄、撒石灰粉、洒水预湿。然后拌入石灰及石膏粉，过磷酸钙溶解少量水后拌入。最后加清水将培养料拌到含水量（挤出1~2滴水），调pH8.0~9.0 。（3）发酵建长形堆，纵横打料孔，顶部盖草被，四周围薄膜。料温升至65℃时保持一天翻堆，共翻2~3次堆。气温高时可在最后一次翻堆时喷0.1%多菌灵。发好的料呈咖啡色、有香味、pH7.0~7.5、含水量以指缝泌水而不下滴为宜。
三、所涉及的课程及知识点
在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（大型真菌的栽培等，…）、仪器分析(……)，……
四、仪器设备及实验材料
1.器具：聚乙烯栽培袋、线绳、铁锨、水桶、大盆、脸盆、喷雾器、大镊子等。
2. 材料：棉籽壳、石灰粉、过磷酸钙、栽培种、高锰酸钾等。
2. 材料：麦粒、麦麸、母种、三角瓶装的培养基等。
五、实验内容与方法
（一）实验内容
1、复壮
（1）制备菌丝悬浮液
（2）制平板
（3）培养
（4）转管
2、保藏
（1）制备自然基质
（2）高压灭菌
（3）接种
（4）培养
（5）保藏
（二）方法步骤
1.菌种保藏
（1）麸皮保藏法 将麸皮和自来水按1:1比例拌匀，装入试管，装量约占试管高度的1/3，洗净管壁，堵棉塞，扎捆后进行高压灭菌（152kpa、30min），经无菌检查后接入绿豆粒大的母种。在适温下培养至菌丝长满麸皮。
2.培养基的灭菌
原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1℃条件下，保持灭菌时间1～2h。若采用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，再闷1天或1晚。
3.接种
灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中，待料温降至约30℃，进行抢温接种。
（2）分装 原种培养基装入菌种瓶（或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。
栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。
2.装袋
用宽25～28×50cm聚乙烯袋，事先扎3道微孔线（中间及距两端6～7cm处各一道线）一端扎活结，层播法装袋（微孔线处放菌种），上端再扎活结。
两端用种量各占总用种量的2/5，中层1/5，多撒于四周。菌袋要装得外紧内松，光滑、饱满、充实。
3.排袋发菌
根据气温决定菌袋放置的场所及袋层高度。
管理要点是：
（1）接原种 用接种耙取蚕豆大母种（连同培养基），放于瓶中培养料的孔口处（1支母种约接5～8瓶原种）。斜面尖端及原来的母种块勿接入。
（2）接栽培种 用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上（若两端扎活结的菌种袋，每端都要接入原种）。1瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。去弃表面老化菌丝及老种块。堵棉塞或用线绳扎袋口。贴标签，注明菌种名称和接种日期。
二、实验基本原理
母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。原种和栽培种的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，由于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。
2．材料：棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。
五、实验内容与方法
（一）实验内容
1、培养料的配制
2、菌种瓶及菌种袋的分装
3、原种的接种
4、栽培种的接种
（二）方法步骤
两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。
1.培养基的配制
（1）配方与配制
①颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）
在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（真菌的保藏和复壮等，…）、仪器分析(……)，……
四、仪器设备及实验材料
1.器具：试管、棉塞、装100ml水的三角瓶（有玻璃珠）、装90ml水的试剂瓶、高压锅、接种环、接种箱、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管等。
喷水时，勿强水喷、硬风吹；勿喷珊瑚期以前的菇；勿喷后闷湿。通风时，勿通对流风与干热风，有风天气开背风窗。
六、实验报告与实验汇报
及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题
1.将自己装的菌袋进行管理，记录各期的生长情况，并对异常现象进行原因分析。
将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存（1~2年）。
源自文库（2）麦粒保藏法
保藏菌种的麦粒含水量宜低，大约在25％。
将籽粒饱满的麦粒洗净，浸泡约5h，加水煮沸15min，使麦粒熟而不破，捞出沥干表面明水，装入试管，装量约占试管高度的2/5。高压蒸汽灭菌（152kpa、1h）。经无菌检查合格后接入菌种，在适温下培养至菌丝长满麦粒。
2.培养料在发酵中出现变黑、发粘、发臭现象，是哪些原因导致的？
3.子实体生长期，若喷水过多及通风太强的易出现哪些问题？
（3）培养 适温下培养，使菌丝萌发生长。挑取健壮尖端菌丝转管。
（4）检测 通过菌丝形态特征的检查及出菇试验等项目测定，符合原菌种性状即可用于生产。
六、实验报告与实验汇报
及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
二、实验基本原理
创造低温、干燥、缺氧、少营养等不利于菌种生长的一切条件，使其代谢降到休眠状态。菌种经长期人工培养及保藏，难免引起某些优良性状的减弱或丧失，必须及时进行菌种复壮。菌种的使用、保藏、复壮应密切结合。保藏，复壮都是为使用服务的，不会保藏、复壮菌种，就容易使好种退化或者绝种。
三、所涉及的课程及知识点
植物生产国家级实验教学示范中心
《食用菌栽培技术综合性实验》
实验项目一览表
序号
实验名称
建议学时数
每组人数
必选/可选
1
原种、栽培种的培育
2学时
4人
必选
2
菌种保藏及复壮
2学时
4人
必选
3
平菇袋栽
4学时
4人
必选
实验一、原种、栽培种的培育
一、实验教学目的
能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作，用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。并通过培养观察，分析自己的接种结果。
七、思考题
1.记录菌种在麦粒和麦麸基质上的生长情况，并对出现的问题进行分析。
2.麦粒与麦麸在处理方法上有哪些不同？
3.本实验采用的菌种复壮法的原理是什么？
4.试设计一个防治菌种衰退的菌种使用方案
实验
一、实验教学目的
能制作优质发酵料，快速正确的进行袋栽。正确处理发菌过程中的异常现象。
二、实验基本原理
平菇目前广泛采用的是发酵料塑料袋栽培法。聚乙烯塑料袋具有保温湿、防虫菌、易成功、便管理、可移动、空间利用率高等优点。
防杂菌、害虫，料温20～25℃，光线暗，空气新（1周后逐渐加强通风），空气湿度60%～70％。7～10天倒换一次菌袋位置。直至白色菌丝长满菌袋，吃透培养料。
4.分化加大温差(8～10℃)、提高空气湿度（80%～85%）、加强通气及光照条件。
5.育菇现原基时解口或划口，保持光照及85%~90％空气湿度，随菇体的长大加强通气条件，直至菌盖边缘变薄时成丛扭收或割收。
接种后，将种瓶（袋）置于适温下培养。菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。菌种袋根据气温可单层或多层叠放。隔4～5天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。
常检查：及时去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。
逐渐降温：当菌丝长至料深的1/2时，降温2～3℃，以免料温升高，并有壮丝作用。
将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存（1~2年）。
2.菌种复壮
（1）制备菌丝悬浮液 将待复壮菌种的菌丝体刮下，置入100ml有玻璃珠的无菌水三角瓶中，充分摇荡，使菌丝分散。吸取10ml菌丝液注入盛有90ml无菌水的小瓶中，摇匀备用。
（2）制混合平板 将融化的PDA培养基倒入无菌培养皿中，凝固后滴入2~3滴菌丝液，用无菌涂棒涂抹，使菌丝均匀分散于平板上。
配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。
配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸15～20min(熟而不烂，勿破皮)，捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。
②棉籽壳麦麸培养基
配方：棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。
配制：将棉籽壳、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边翻拌至含水量达60%～65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。
注意菌龄：原种约30～40天、栽培种约20～30天菌丝长满，再继续培养7～10天是使用的最好菌龄。
六、实验报告与实验汇报
及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题
1.记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？
2.比较原种与栽培种生产过程的异同点
3.颗粒为何要进行泡和煮？
4.菌种的表面有一块残留的琼脂块，证明该菌种是哪级菌种？
5.菌种表面有少许玉米粒或麦粒，证明该菌种是哪级菌种？
6.一批菌种在适宜条件下培养了十多天，发现有一瓶菌种块丝毫未萌动，请分析原因？
实验
一、实验教学目的
学会利用自然基质保藏菌种。掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。
三、所涉及的课程及知识点
在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（菌丝降解纤维素等，…）、仪器分析(……)，……
四、仪器设备及实验材料
1. 器具：菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、高压灭菌锅、接种箱、消毒药品等。
五、实验内容与方法
（一）实验内容
（一）制作发酵料
（二）袋栽
（三）排袋发菌 利用课余时间进行观察和管理
（二）方法步骤
1、发酵料的制作
（1）培养料配方籽壳96%，石灰2%，过磷酸钙1%，石膏1％。
（2）拌料提前一天将棉籽壳摊薄、撒石灰粉、洒水预湿。然后拌入石灰及石膏粉，过磷酸钙溶解少量水后拌入。最后加清水将培养料拌到含水量（挤出1~2滴水），调pH8.0~9.0 。（3）发酵建长形堆，纵横打料孔，顶部盖草被，四周围薄膜。料温升至65℃时保持一天翻堆，共翻2~3次堆。气温高时可在最后一次翻堆时喷0.1%多菌灵。发好的料呈咖啡色、有香味、pH7.0~7.5、含水量以指缝泌水而不下滴为宜。
三、所涉及的课程及知识点
在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（大型真菌的栽培等，…）、仪器分析(……)，……
四、仪器设备及实验材料
1.器具：聚乙烯栽培袋、线绳、铁锨、水桶、大盆、脸盆、喷雾器、大镊子等。
2. 材料：棉籽壳、石灰粉、过磷酸钙、栽培种、高锰酸钾等。
2. 材料：麦粒、麦麸、母种、三角瓶装的培养基等。
五、实验内容与方法
（一）实验内容
1、复壮
（1）制备菌丝悬浮液
（2）制平板
（3）培养
（4）转管
2、保藏
（1）制备自然基质
（2）高压灭菌
（3）接种
（4）培养
（5）保藏
（二）方法步骤
1.菌种保藏
（1）麸皮保藏法 将麸皮和自来水按1:1比例拌匀，装入试管，装量约占试管高度的1/3，洗净管壁，堵棉塞，扎捆后进行高压灭菌（152kpa、30min），经无菌检查后接入绿豆粒大的母种。在适温下培养至菌丝长满麸皮。
2.培养基的灭菌
原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1℃条件下，保持灭菌时间1～2h。若采用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，再闷1天或1晚。
3.接种
灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中，待料温降至约30℃，进行抢温接种。
（2）分装 原种培养基装入菌种瓶（或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。
栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。
2.装袋
用宽25～28×50cm聚乙烯袋，事先扎3道微孔线（中间及距两端6～7cm处各一道线）一端扎活结，层播法装袋（微孔线处放菌种），上端再扎活结。
两端用种量各占总用种量的2/5，中层1/5，多撒于四周。菌袋要装得外紧内松，光滑、饱满、充实。
3.排袋发菌
根据气温决定菌袋放置的场所及袋层高度。
管理要点是：
（1）接原种 用接种耙取蚕豆大母种（连同培养基），放于瓶中培养料的孔口处（1支母种约接5～8瓶原种）。斜面尖端及原来的母种块勿接入。
（2）接栽培种 用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上（若两端扎活结的菌种袋，每端都要接入原种）。1瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。去弃表面老化菌丝及老种块。堵棉塞或用线绳扎袋口。贴标签，注明菌种名称和接种日期。
二、实验基本原理
母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。原种和栽培种的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，由于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。
2．材料：棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。
五、实验内容与方法
（一）实验内容
1、培养料的配制
2、菌种瓶及菌种袋的分装
3、原种的接种
4、栽培种的接种
（二）方法步骤
两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。
1.培养基的配制
（1）配方与配制
①颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）
在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（真菌的保藏和复壮等，…）、仪器分析(……)，……
四、仪器设备及实验材料
1.器具：试管、棉塞、装100ml水的三角瓶（有玻璃珠）、装90ml水的试剂瓶、高压锅、接种环、接种箱、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管等。
喷水时，勿强水喷、硬风吹；勿喷珊瑚期以前的菇；勿喷后闷湿。通风时，勿通对流风与干热风，有风天气开背风窗。
六、实验报告与实验汇报
及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
七、思考题
1.将自己装的菌袋进行管理，记录各期的生长情况，并对异常现象进行原因分析。
将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存（1~2年）。
源自文库（2）麦粒保藏法
保藏菌种的麦粒含水量宜低，大约在25％。
将籽粒饱满的麦粒洗净，浸泡约5h，加水煮沸15min，使麦粒熟而不破，捞出沥干表面明水，装入试管，装量约占试管高度的2/5。高压蒸汽灭菌（152kpa、1h）。经无菌检查合格后接入菌种，在适温下培养至菌丝长满麦粒。
2.培养料在发酵中出现变黑、发粘、发臭现象，是哪些原因导致的？
3.子实体生长期，若喷水过多及通风太强的易出现哪些问题？
（3）培养 适温下培养，使菌丝萌发生长。挑取健壮尖端菌丝转管。
（4）检测 通过菌丝形态特征的检查及出菇试验等项目测定，符合原菌种性状即可用于生产。
六、实验报告与实验汇报
及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。
二、实验基本原理
创造低温、干燥、缺氧、少营养等不利于菌种生长的一切条件，使其代谢降到休眠状态。菌种经长期人工培养及保藏，难免引起某些优良性状的减弱或丧失，必须及时进行菌种复壮。菌种的使用、保藏、复壮应密切结合。保藏，复壮都是为使用服务的，不会保藏、复壮菌种，就容易使好种退化或者绝种。
三、所涉及的课程及知识点
植物生产国家级实验教学示范中心
《食用菌栽培技术综合性实验》
实验项目一览表
序号
实验名称
建议学时数
每组人数
必选/可选
1
原种、栽培种的培育
2学时
4人
必选
2
菌种保藏及复壮
2学时
4人
必选
3
平菇袋栽
4学时
4人
必选
实验一、原种、栽培种的培育
一、实验教学目的
能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作，用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。并通过培养观察，分析自己的接种结果。
七、思考题
1.记录菌种在麦粒和麦麸基质上的生长情况，并对出现的问题进行分析。
2.麦粒与麦麸在处理方法上有哪些不同？
3.本实验采用的菌种复壮法的原理是什么？
4.试设计一个防治菌种衰退的菌种使用方案
实验
一、实验教学目的
能制作优质发酵料，快速正确的进行袋栽。正确处理发菌过程中的异常现象。
二、实验基本原理
平菇目前广泛采用的是发酵料塑料袋栽培法。聚乙烯塑料袋具有保温湿、防虫菌、易成功、便管理、可移动、空间利用率高等优点。
防杂菌、害虫，料温20～25℃，光线暗，空气新（1周后逐渐加强通风），空气湿度60%～70％。7～10天倒换一次菌袋位置。直至白色菌丝长满菌袋，吃透培养料。
4.分化加大温差(8～10℃)、提高空气湿度（80%～85%）、加强通气及光照条件。
5.育菇现原基时解口或划口，保持光照及85%~90％空气湿度，随菇体的长大加强通气条件，直至菌盖边缘变薄时成丛扭收或割收。