动物实验的基本技术上

课程内容
一、动物的饲养 二、动物的管理 三、动物实验操作规范 （key point) 四、科研经验分享
动物实验的基本操作技术
二、管理
1、实验动物的一般管理要求
1）环境控制：GB14925.1-2001 2）建立定期消毒制度 3）建立严格的检验检疫制度 4）观察记录：摄食情况、饮水情况、精神状态、粪尿形态、皮肤被毛光
兔
1.一只手抓住兔的颈部皮毛，将兔提起， 2. 用另一只手托其臀，或用手抓住背部皮肤提起来
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兔
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犬
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猴
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❖ 蟾蜍、蛙类
其他实验动物
A
B
图3-2-1 青蛙(或蟾蜍)捉拿法
图3-2-2 青蛙(或蟾蜍)固定法
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动物实验的基本操作技术
课程内容
一、动物的饲养 二、动物的管理 三、动物实验操作规范 ( key point ) 四、科研经验分享
动物实验的基本操作技术
三、动物实验技术操作规范
（本期重点）
1、动物的选择（了解） 2、动物实验技术
1、实验动物的选择
1.1 与国际接轨——“3R” 1)减少(Reduction)：提高动物质量，减少试验用的动物数量
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2.1 实验动物的抓取和固定
基本原则：保证人员绝对安全，防止动物损伤，禁止 粗暴对待实验动物。
常用的抓取固定方式： 1.徒手抓取 2.麻醉后抓取 3.使用特殊的固定装置进行固定
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1. 右手提起尾巴
2. 粗糙平面，使 其伸展
3. 左手从后面靠 近小鼠，拇指、 食指按住颈后 部皮肤，抓起
实验生理技能培训之——
动物实验的 基本操作技术
临床医学（八年制） 陈淑英
机能学实验室
课程内容
一、动物的饲养 二、动物的管理 三、动物实验操作规范 ( key point ) 四、科研经验分享
动物实验的基本操作技术
一、饲养
一、 饲 养
1ห้องสมุดไป่ตู้饲料
1.1 饲料的一般要求 1）饲料应写明供应单位,而且供应单位必须取得实验动物配合饲料生产 许
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1、实验动物的选择
1.2 实验动物选择原则 1）从微生物学和寄生虫学标准去选择实验动物。
目的：使实验研究处于没有或很少外源干扰的情况下进行，使实验结果 正确可信。按微生物学和寄生虫学标准选择：普通级、清洁级、SPF动 物、无菌动物 2)从遗传学的观点来选择实验动物： 近交系动物、突变系动物 3)从效果上来选择实验动物： 效果比较就是要与人比较，是否接近与人的条件。一般说来实验动物愈 高等，进化程度愈高，其功能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类。 如诱发性动物的高血脂症或动脉粥样硬化，猴的病变与人相似。
体温调节中枢和扩张血管的作用）
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麻醉注意事项
使用全身麻醉剂的注意事项（详细补充）
1. 麻醉剂的用量，除参照一般标准外，还应考虑个体对药物的耐受性不 同,而且体重与所需剂量的关系也并不是绝对成正比的。一般说，衰弱 和过胖的动物，其单位体重所需剂量较小，在使用麻醉剂过程中，随 时检查动物的反应情况,尤其是采用静脉注射,绝不可将按体重计算出 的用量匆忙进行注射。
用量，做到既不浪费，又能较好地满足动物正常生长发育的需要。
3、饮水
1)清洁级以上动物饮用水应进行高压灭菌处理或过滤处理，并随时注意 水质变化，定期检测水质。
2)大中动物房舍内应设自动饮水设备，要让每只动物能饮到足够的水。 3)屏障动物房需用高压灭菌水或酸化水，也可超滤，但是要注意补充矿
物质。
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一、 饲 养
1.2 实验动物特殊需求
1）小鼠大鼠配合饲料：饲料要求有一定的硬度。正常饲育外， 通常定期补充蛋黄、黄豆等高蛋白物质和葵花子等物质。
2）兔配合饲料：对粗纤维要求含量高，可适当添加一些青绿饲 料或干绿饲料。
3）豚鼠配合饲料：自身不能合成VitC，需补充，通常通过添加 青菜来实现，也可在饮水中添加，可同时添加复合VitB。
2.2 实验动物编号、标记
意义：区分不同的动物个体 1）染色法：大、小鼠。 2）打孔法：兔、豚鼠。 3）剪缺口法：小型猪。 4）挂牌法：犬、猴、猫等大中动物。 5）烙印法：犬、兔（数字号码钳）
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1）染色法
常用的涂染化学药品有： 红色：0.5％中性红或品红溶液 黄色：3％～5％苦味酸溶液
动物神经干阻滞麻醉，也可用0.25％～0.5％溶液 作局部浸润麻醉。
2.常用全身麻醉剂： 1） 盐酸氯胺酮 2） 乙醚/异氟醚（Isoflorane） 3） 苯巴比妥钠 4） 戊巴比妥钠（常用浓度1%～５％） 5） 乌拉坦（常用浓度10% ～2５％） 6） 水合氯醛 7） 舒泰(Zoletil)
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生理反射
猫、兔 900~1000mg/kg （V&P） 大、小鼠 1300mg/kg （M） 以上仅供参考 猫、兔 80mg/kg
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2.3 实验动物的麻醉方法
1、局部麻醉 2、全身麻醉
（1）吸入麻醉法 多选用乙醚作麻药。 优点：易于调节麻醉的深度和较快 的终止麻醉 缺点：中、小型动物较适用，对大 型动物的吸入麻醉操作复杂，通常 不用。
妥钠 统无显著抑制作用。
要求
狗、猫、兔 30mg/kg （V&P） 大、小鼠 45mg/kg （V&P）
导致较持久的浅麻醉，对呼吸无明显影响。家兔急
乌拉坦 对兔的麻醉作用较强，对猫和狗则奏效较 性实验
慢，在大鼠和兔能诱发肿瘤。
常用
V：静脉注射 P：腹腔注射 M：肌肉注射
水合氯 安全度大，导致较持久的浅麻醉，对植物 要求保留
捏动物皮肤，若反应灵敏，则麻醉过浅；若反应消失， 则麻醉程度合适。
麻醉过深，呼吸抑制，仍有心跳： 抢救：人工呼吸（手人工呼吸、连接呼吸机）
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麻醉注意事项
➢ 麻醉前应禁食 ➢ 麻醉前应准确称体重 ➢ 注意麻醉剂量 ➢ 麻醉过程中注意观察动物的反应情况 ➢ 注意保温 ➢ 静脉注射时必须缓慢 ➢ 在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平（麻醉剂有抑制
4）犬配合饲料：VitA需求量大，要求粗脂肪含量高，通常可以 补充一些煮熟的动物内脏或脂肪来实现。
5）实验猴配合饲料：自身不能合成VitC，应补充VitC，多给一 些水果、蔬菜及玉米等。
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一、 饲 养
2、饲喂
1)定时定量喂养。 2)专人喂养，以便更好地掌握每个动物群体的食量变化，控制好饲料的
消化道系 统
胃肠解痉药 催吐药
利尿药或抗利尿药研究
豚鼠 犬、猫、或大鼠 豚鼠 雄性小鼠、兔或猫 大鼠、豚鼠、家兔 犬、猫、鸽 犬、大鼠或兔
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2、动 物 实 验 技 术
2.1 实验动物的抓取和固定 2.2 实验动物的编号 2.3 实验动物的麻醉方法 2.4 实验动物的给药方法 2.5 实验动物的液体样品采集方法 2.6 实验动物的处死、剖检与取样 2.7 尸体、废弃物的处理
可证；（生产合格） 2）饲料应清洁干净、新鲜、无杂质、无异味、无霉变、无发酵、无虫蛀
及鼠咬。不得加入抗生素、驱虫剂、防腐素、色素、促生长剂以及激素 等添加剂； （品质合格） 3）实验动物饲料中营养成分指标应满足不同动物需求 （满足不同需求） 4）饲料应定期监测，主要包括营养成分的测定和微生物的检测。 5）购买饲料时，需要分清楚饲料的种类：维持饲料与生产、繁殖饲料。
药物排泄试验 药物动力学参数测定
大鼠 犬、猴等大动物，可多次采样
一般药理研究
小鼠、大鼠、猫、狗、性别不限。但观察循 环和呼吸系统时一般宜用小鼠和兔
神经系统 的药物
镇静催眠药研究 解热药研究
小鼠，便于分组实验 首选家兔，其对热原质极为敏感
心血管系 统的药物
抗心律失常药物 降压药物
呼吸系统 的药物
镇咳药筛选 祛痰药物
2. 动物在麻醉期体温容易下降，要采取保温措施。 3. 静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反
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判断麻醉程度的指标
① 呼吸：加快或不规则，麻醉过浅；规则且平稳，达到麻 醉深度。动物呼吸变慢，且以腹式呼吸为主，说明麻醉 过深，有生命危险。
② 反射活动：角膜反射灵敏，则麻醉过浅；反射迟钝，麻 醉程度适宜；反射消失，伴瞳孔散大，则麻醉过深。
③ 肌张力：亢进，麻醉过浅；全身肌肉松弛，麻醉合适。 ④ 皮肤夹捏反应：麻醉过程中可随时用止血钳或有齿镊夹
2、实验动物从业人员个人 防护要求
1）在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服。 2）在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动
物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须 洗手。 3）在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必 须洗手。 4）为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害， 必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。 5）严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。 6）不得在实验室内穿露脚趾的鞋。 7）禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。 8）禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。 9）在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。
泽等 5）做好疾病的预防与控制，严格隔离治疗。如犬的免疫制度：
❖ 初次免疫（首免）：出生5-6周，接种六联苗或七联苗； ❖ 二次免疫（二免）：首免2周后，接种六联苗或七联苗； ❖ 三次免疫（三免）：二免2周后，接种六联苗或七联苗； ❖ 种犬免疫（1岁以上）：每年两次（春、秋）注射疫苗。
动物实验的基本操作技术
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2.3 实验动物的麻醉方法
（2）腹腔和静脉给药麻醉法 腹腔给药麻醉：多用于大小鼠和豚鼠。 静脉给药麻醉：多用于较大的动物如兔、狗等。
注意事项：在注射麻醉药物时，先用麻醉药总量的三分之二， 密切观察动物生命体征的变化，如已达到所需麻醉的程度， 余下的麻醉药则不用，避免麻醉过深抑制延脑呼吸中枢导致 动物死亡。
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❖ 1+5＝６
5
4
23
50 40
20 30
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2）打孔或剪缺口法
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2.3 实验动物的麻醉方法
（一）常用的麻醉药 1.常用局部麻醉剂：
1）普鲁卡因：毒性小，见效快，用时配成0.5％～2％； 利多卡因：见效快，组织穿透性好，常用1％～2％溶液作为大
在不影响实验质量的前提下，应选择最易获得、最经 济、最易饲养管理的动物
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1、实验动物的选择
1.3 具体考虑到： 种属、品系、个体（性别、年龄、生理状态、健康状况）
如半数致死量测定---昆明种小鼠 雌雄各半 20~25g
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1、实验动物的选择
判断哺乳动物健康状况的外部特征： 1.一般状态：发育良好，眼睛有神，爱活动，反应灵活，食欲良好。 2.头部：眼结膜补充血，瞳孔清晰。眼鼻部均无分泌物流出。呼吸均匀，
4. 固定尾巴
拉-按-抓
小鼠
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大鼠
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豚鼠
方法步骤： 1、先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。 2、顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其
颈部。 3、用右手轻轻托住其臀部，
即可将豚鼠抓取保定。
一般不要抓腰腹部位， 否则易造成肝破裂而引起死亡。
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常用麻醉药
麻醉
特点
药
适用
用法与用量
乙醚
优点：麻醉深度易于掌握，比较安全，麻 醉后苏醒快。
缺点：需要专人管理，在麻醉初期常出现 强烈兴奋现象，对呼吸道有较强的刺激作 用。
时间短 的手术 过程或 实验
吸入麻醉
麻醉时间不是很长，一次给药有效时间可 适合一
戊巴比 延续1~2h，给药后对动物循环和呼吸系 般实验
无罗音，无鼻翼扇动。不打喷嚏。 3.皮毛：皮毛清洁柔软而有光泽，无脱毛，无蓬乱现象。皮肤无真菌感染
表现。 4.腹部：不膨大，肛门区清洁无稀便，无分泌物。 5.外生殖器：无损伤，无脓痂，无分泌物。 6.爪趾：无溃疡，无结痂。
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常见医药学中实验动物的
选择
药物及研究方向
常用动物
药物代 谢实验
和试验的次数，获得同样多的信息。 2)替代（Replacement）：尽可能采用可以替代实验动物的
替代物。如：细胞组织培养、计算机模拟、物理、化学方 法、细胞芯片 3)优化（Refinement）：人道主义管理，提倡实验动物福利 保护，严禁粗暴对待或虐待实验动物，减少动物在实验过 程中的痛苦与不安。