丹参酮的提取及应用进展
丹参提取制备实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习和掌握丹参提取制备的基本原理和操作方法。
2. 提高对丹参中有效成分丹参酮的提取纯化技术的认识。
3. 了解薄层扫描法和高效液相色谱法（HPLC）在丹参酮含量测定中的应用。
二、实验原理丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是中药材中常用的活血化瘀药，其主要有效成分为丹参酮类化合物。
本实验采用溶剂提取法从丹参药材中提取丹参酮，并通过薄层扫描法和HPLC法对丹参酮A进行含量测定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：丹参药材、甲醇、石油醚、氯仿、正己烷、硅胶薄层板、HPLC色谱柱、紫外检测器等。
2. 实验仪器：分析天平、超声波清洗器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、高效液相色谱仪等。
四、实验方法1. 丹参酮提取（1）称取干燥的丹参药材粉末5.0g，置于50mL具塞锥形瓶中。
（2）加入20mL甲醇，超声提取30分钟。
（3）过滤，收集滤液，旋转蒸发浓缩至近干。
（4）用适量石油醚溶解残渣，转移至分液漏斗中。
（5）依次用氯仿、正己烷萃取，合并萃取液。
（6）旋转蒸发浓缩至近干，用适量甲醇溶解残渣，转移至10mL容量瓶中，定容至刻度。
2. 薄层扫描法测定丹参酮A含量（1）制备硅胶薄层板，用氯仿-甲醇（8:2）为展开剂。
（2）取适量丹参酮A对照品溶液和提取样品溶液，点样于薄层板上。
（3）展开，取出晾干。
（4）用紫外灯（254nm）照射，观察斑点。
（5）用薄层扫描仪测定斑点面积，计算丹参酮A含量。
3. HPLC法测定丹参酮A含量（1）色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-水（80:20），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm。
（2）样品制备：取适量丹参酮A对照品溶液和提取样品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，进样。
（3）测定：记录峰面积，计算丹参酮A含量。
五、实验结果与分析1. 丹参酮提取通过实验，成功从丹参药材中提取出丹参酮。
采用薄层扫描法测定，丹参酮A平均回收率为99.8%，RSD为2.15%。
丹参酮药理作用及临床应用研究进展
・综述与专论・丹参酮药理作用及临床应用研究进展△华西医科大学附属第一医院血液内科(成都610041) 梁 勇X 羊裔明 袁淑兰摘 要 从中药丹参中提取的有效成分丹参酮不仅具有天然抗氧化、心血管药理作用及抗菌消炎作用,而且还具有明显的抗肿瘤作用。
丹参酮在临床非肿瘤领域已得到广泛应用。
关键词 丹参酮 药理作用 临床应用 从1934年至1976年间,国内外对丹参进行了大量研究工作,先后从中分离得到15种成分,测定了结构式,并依次命名为丹参酮(tanshino ne,T an)Ⅰ、ⅡA、ⅡB,隐丹参酮,异丹参酮Ⅰ、ⅡA,异隐丹参酮,羟基丹参酮ⅡA,丹参酸甲酯,m iltirone,salviol,二氢丹参酮Ⅰ,丹参新醌甲、乙和丙[1]。
研究表明,丹参酮类均含有邻醌或对醌结构。
由于醌类成分易被还原为二酚类衍生物,后者再被氧化又易转变为醌,在转变过程中起电子传递作用;同时,它们在生物体内的代谢产物容易参与机体的多种生物化学反应,并作为生物反应的辅酶对某些生化反应起促进或干扰作用,因此表现出多种药理作用,如抗癌、抗菌、抗病毒等[2],笔者拟对这方面的研究现状作一综述。
1 Tan的药理活性1.1 天然抗氧化作用:TanⅡA是一种新的有效的细胞内脂质过氧化产物与DNA相互作用的抑制剂。
它对DNA的保护作用很可能是通过消除脂类自由基而阻断脂质过氧化的链式反应,抑制DNA 加成物的生成,从而减少了后者的细胞毒性[3]。
T an 能消除心肌线粒体膜脂质过氧化过程中产生的脂类自由基,使线粒体呼吸功能不受影响[4]。
1.2 心血管药理作用1.2.1 抗动脉粥样硬化作用:采用原位杂交技术探讨了T anⅡA磺酸钠(简称DS-201)对血管平滑肌细胞增殖相关基因c-myc表达的影响,发现巨噬细胞源性生长因子可明显促进平滑肌细胞c-myc高表达,导致平滑肌细胞增殖,而DS-201能阻止这种作用,使c-myc表达水平下降,抑制平滑肌细胞增殖。
丹参酮的临床研究进展
高玉桂等 采 用小 白鼠作实验 证 明丹参 酮局 部应 用
有明显 的抗炎作用 ； 动物 模型 经灌 胃给 丹参 酮 ， 用 结果 显 示丹参酮对急性 和亚急性炎症有 良好 的治疗作用 ， 对慢 而
作用 。
抗作用 。高玉桂等 用精 囊 和前 列腺重 量法证 明丹 参酮 有抗丙酸睾丸酮作 用。利用 丹参 酮抗雄 激素 作用来 控制 皮脂腺活性 ， 减少皮脂产生 ， 是其 治疗 痤疮 机理 之一Ｌ １ 。
４ 心血 管方面作用 ４ １ 抗动脉粥样硬化作用 ．
１３ 抗 真菌作用 ．
咸宁学院学报 （ 医学版 ）０ ８ ２０ 年第 ２ 卷第 ６期［ｏ ａｏＸａ ｉ ｎ ｅｉ（ ｅ ｃ ｉ ｃ ） ２ Ｊ ｒ ｎ ｎ Ｕｉｒｔ Ｍ ｄ ａＳ ｅ ｅ ］ ｕ ｌ ｆ ｉ ｎ ｇ ｖｓ ｎ ｙ ｉｌｃ ｎ ｓ
５３ ４
丹 参 酮 的 临床 研 究 进展
朱春 霞 白育庭 ， （． 宁学 院附属 第 一 医院妇 产科 ， 北 成 宁 ４ ７０ ；． 宁学 院附 属第 一 医院外科 ） １咸 湖 ３ １０ ２ 成
内的代谢产物容易参 与机体的多种生物化学 反应 ， 作为 并
生物反应 的辅酶对某些 生化反应起促进或干扰 作用 ， 表现 出以抗菌作用 为主 ， 有抗 炎 、 兼 性激 素作 用 。近 年其 在心
研 究发现 ： 定浓度（ Ｏ ｇ ｍ 以上 ） 一 １ ｎ／ ｌ 丹参酮能 有统计学 意 义 地抑制 白细胞化学运动 。由此可 以推测 ， 参酮抗 炎效 丹 应是 通过这种抑制作用 阻止 白细胞过度 的游 出和集聚 ， 防 止 溶酶体酶 、 氧化代谢 产物过多释放 ， 从而减轻 组织损伤 ， 以控 制炎症发展 ， 一步证实了丹参酮的抗炎效应。 进
丹参脂溶性有效成分丹参酮研究进展
摘 要 ： 为 了获 得 高纯度 、 高品质 的 丹参 酮 ， 使 其更 好 地发 挥 药理 活性 ， 在 查 阅 国 内外 近 １ ０年有 关丹 参
２ ０１ ５正
河 北大 学 学报 （ 自然 科 学版 ）
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ（ Ｎａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ）
２ ０１ ５
第 ３ ５卷
Hale Waihona Puke 第 ２期 ｏ ｆ ｍｏ ｄｅ ｒ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏｇ ｙ， ｉ ｎ ａ ｄｄ ｉ ｔ ｉ ｏｎ， ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｗａ ｓ ｅ ａ ｓ ｙ ｔ Ｏ ｏｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎｄ ｔ ｈｅ ｃ ｏ ｎｄ ｉ ｔ ｉ ｏｎｓ ｗａ ｓ ｅ ａ ｓ ｙ ｔ Ｏ ｃ ｏｎ ｔ ｒ ｏ１ ． Ａｍ ｏ ｎｇ ｔ ｈｅ ｍ， ｎｏ ｎ ｉ ｏｎ ｉ ｃ ｓ ｕｒ ｆ ａｃ ｔ ａ ｎｔ ａ ｓ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏｎ， ｓ ｕｐ ｅ ｒ ｃ ｒ ｉ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ａ ｒ ｂｏ ｎ — ｄ ｉ ｏｘ ｉ ｄｅ ｅ ｘｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏｎ， ｕ ｌ ｔ ｒ ａ — ｓ ｏｎ ｉ ｃ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｈｉ ｇｈ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｕ ｒ ｅ ａ ｓ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｃ ｏ ｎｏ ｍｉ ｃ ， ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ， ｇｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ—
丹参酮的提取及应用进展
丹参酮的提取及应用进展摘要:丹参是一种中国传统草药, 丹参酮IIA是丹参的主要活性成分之一,是发挥药理活性的基础。
该文章就近5年来有关丹参酮的提取、含量测定和生物活性的研究成果和药理研究现状及其在临床上的应用进行综述，为全面开发利用丹参提供参考。
关键词: 丹参酮IIA；提取及测定；临床应用；药理作用Abstract：Salvia is a traditional Chinese herbal medicine, Tan IIA is one of the main active ingredient in Salvia, is to play a fundamental pharmacological activity. This article summarize about the extract of Tan、content determination、the research results of biological activities and pharmacological status quo for clinical application related to the nearest five years, To provide a reference for the comprehensive development and utilization of Salvia.Keywords: Tan; extract measurement; clinical application; pharmacologic action丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrh iza Bge。
的干燥根及根茎,主产于河北、安徽、江苏、四川等地。
其化学成分分为脂溶性和水溶性两部分,前者以丹参酮型的二萜类化合物为主,主要有丹参酮I、丹参酮IIA ( tan IIA )、丹参酮IIB、隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参羟甲酯、二氢丹参酮I,以及异丹参酮I、异丹参酮II、异隐丹参酮、二氢异丹参酮I;后者主要为酚酸类化合物, 包括丹参素(丹参酸甲), 原儿茶醛, 丹参酸乙、丹参酸丙、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等[ 1 ]。
丹参酮药理作用及临床应用研究进展
和 -5 量的 5 ( # @Z [ 0 ( # @Z [ 0 6 7+ -/ 3 -/ M \Q M \Q 处理 后 ) 细 胞 形 态 趋 向 良 性 分 化) 生 长 减 慢) 集落形
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降低心肌耗氧量有利于缺 % J E J . 降低心肌耗氧量 K 血性冠心病的治疗 , 阻断狗冠状动脉血流后 + 对照组
参酮类均含有邻醌或对醌结构 , 由于醌类成分易被 还原为二酚类衍生物 + 后者再被氧化又易转变为醌 + 在转变过程中起电子传递作用 D 同时 + 它们在生物体 内 的代谢产物容 易 参 与 机 体 的 多 种 生 物 化 学 反 应 + 并作为生物反应的辅酶对某些生化反应起促进或干 扰作用 + 因此表现出多种药理作用 + 如抗癌 * 抗菌 * 抗 病毒等 笔者拟对这方面的研究现状作一综述 , + F G H I的药理活性 % J % 天然抗氧化作用 K 9 2 3; < 是 一 种 新的 有 效 的 细胞内脂质过氧化产物与 L M< 相 互 作 用 的 抑 制
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丹参总黄酮的提取工艺及应用研究进展
丹参总黄酮的提取工艺及应用研究进展摘要：丹参具备活血化瘀、清心除烦等效用，是一种具有广泛药理活性的传统中药材。
黄酮类化合物在次生代谢中是一种重要的产物且具有显著的抗氧化功能，可抑制毛细血管通透性增加、降血脂等作用，是许多中草药的有效成分。
丹参总黄酮不仅是强有力的抗氧化剂，还能有效改善血液循环，在临床各个领域上具有广泛应用。
本文将查阅得到的研究内容进行合理的归纳和总结，对丹参总黄酮的提取工艺方面研究、应用研究方面进行综述，以便为对其深入研究提供有力的科学理论依据，从而进一步综合应用于医药和开发新型保健品提供参考。
关键词：丹参；总黄酮；提取工艺；抗氧化；临床应用一、引言丹参在植物分类科属方面属于双子叶植株且为唇形科，该植物干燥状态下的根和根茎，主要治疗瘀血所致的各种疼痛、心悸失眠等症状，具有痛经止痛、凉血消痈等效果。
结合现代药理学以及临床研究结果可以得知，丹参对于人体血液系统、消化系统等方面作用非常显著，其次还有防治胃溃疡、促进肝组织再生、抗菌消炎、抗肿瘤等作用。
据记载，当前已经有100多种中成药是将丹参作为主要原料，丹参在我国已经经历了多年的发展，最初是在《神农本草经》当中有所记载，列为上品。
从古至今对其进行描述的文献也有很多，比如：《图经本草》、《本草新编》、《药物出产辨》、《名医别录》等。
在《名医别录》当中曾经有如下记载：“生桐柏山谷及泰山”（也就是如今河南和湖北交界的区域）；在《本草品汇精要》当中也有如下记载：“道地随州”（今湖北随州）；在《药物出产辨》当中也有所提及：“产四川龙安府为佳”（今四川平武）。
历代对丹参的道地性叙述多有不同，导致其质量不一直接影响临床用药疗效。
二、丹参总黄酮的提取工艺（一）超声波提取法黄酮类化合物主要使用超声波进行提取，该种方法在当下应用特别普遍，主要原理为：充分运用液体当中的超声波，就可以实现空化的效果，由此就可以在较短的时间内实现对有效成分的稳定提取，同时还可以充分运用其次效应，比如击碎、机械振动等，也能够使成分进行快速释放和扩散。
丹参的有效成分提取分离方法研究进展
丹参的有效成分提取分离方法研究进展丹参是一种常见的中药材，其有效成分主要包括丹参酮、丹酚酸B和丹酚酸A等。
这些成分具有抗炎、抗血栓、心肌保护和抗氧化等多种药理活性，因此具有广泛的临床应用前景。
为了提高丹参的药效和药品质量，开展丹参有效成分的提取与分离研究具有重要意义。
丹参有效成分的提取方法包括传统的水煎提取、超音波辅助提取、微波辅助提取、超临界流体萃取等。
水煎提取是最常用的方法，其优点是简单易行。
然而，水煎提取时间长，繁琐，且溶剂用量大，易造成有效成分的破坏和损失。
超音波辅助提取和微波辅助提取利用超声波和微波的物理效应，能够加速丹参有效成分的溶解和扩散，提高提取效率。
超临界流体萃取则是将CO2等作为溶剂，利用其溶解力和物理性质的变化，在超临界条件下进行提取，可避免传统有机溶剂对环境的污染。
丹参有效成分的分离方法主要包括液相色谱技术、薄层色谱技术、气相色谱技术和高效液相色谱技术等。
液相色谱技术是最常用的方法，如高效液相色谱、逆向离子色谱、超高效液相色谱等，其中超高效液相色谱技术由于其高分离能力和灵敏度，成为丹参有效成分分离的主流方法。
薄层色谱技术虽然简单易行，但分离能力较低，通常用于快速初步分析和鉴别。
气相色谱技术适用于揭示丹参有效成分的挥发性组分，但无法处理不挥发的成分。
此外，还可利用超滤、纳滤、离心等膜分离技术对丹参有效成分进行分离，其中超滤技术适用于分离较大的有机酸类成分，纳滤技术适用于分离较小的多酚类成分。
目前，研究人员致力于开发新的提取分离方法，如超声辅助超临界流体萃取、固相微萃取和离子交换膜萃取等。
超声辅助超临界流体萃取将超临界流体和超声波相结合，能够提高提取效率和提取选择性。
固相微萃取是将固相材料与样品接触，利用纯净水等溶剂进行脱附，可避免有机溶剂的使用。
离子交换膜萃取则是利用离子交换膜的选择性吸附特性，对丹参有效成分进行选择性分离。
总之，丹参有效成分的提取分离方法研究已取得了一定的进展。
丹参提取实验报告
一、实验目的本实验旨在通过提取丹参中的有效成分——丹参酮，了解丹参的提取方法，掌握提取过程中各步骤的操作要点，并对提取效果进行评价。
二、实验原理丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科植物，其根茎富含多种生物活性成分，其中以丹参酮为主要的有效成分。
丹参酮具有扩张血管、降低血脂、抗凝血、抗肿瘤等药理作用。
本实验采用有机溶剂萃取法提取丹参中的丹参酮，通过薄层扫描法和高效液相色谱法（HPLC）对丹参酮进行含量测定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料- 丹参根茎：新鲜，经清洗、晾干后备用。
- 甲醇、氯仿、正己烷：分析纯。
- 石油醚：分析纯。
- 薄层层析板、硅胶G薄层板。
- 硅胶G：色谱用。
- 标准品：丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹参酮III、丹参酮IV。
2. 实验仪器- 薄层扫描仪。
- 高效液相色谱仪。
- 分析天平。
- 热水浴锅。
- 漏斗、滤纸、滴管、试管等。
四、实验方法1. 丹参酮的提取（1）称取一定量的干燥丹参根茎，用甲醇回流提取2小时，过滤，滤液减压浓缩至干，残渣用石油醚溶解，转移至分液漏斗中。
（2）将分液漏斗中的溶液与氯仿混合，静置分层，取氯仿层，再用少量氯仿洗涤水层，合并氯仿层。
（3）将氯仿层减压浓缩至干，残渣用甲醇溶解，转移至容量瓶中，定容至刻度。
2. 薄层扫描法测定丹参酮含量（1）制备薄层层析板：将硅胶G均匀涂布于薄层板上，晾干后备用。
（2）点样：取丹参提取液适量，点于薄层板上，重复3次。
（3）展开：将薄层板放入展开缸中，用氯仿-甲醇（体积比8:2）为展开剂，展开至距底边2cm处。
（4）显色：取出薄层板，晾干后，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃烘箱中加热5分钟。
（5）扫描：将薄层板放入薄层扫描仪中，进行扫描，测定丹参酮的含量。
3. 高效液相色谱法测定丹参酮含量（1）色谱条件：色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（体积比80:20）；流速：1.0ml/min；检测波长：272nm。
丹参酮提取工艺研究
丹参酮提取工艺研究
丹参酮提取工艺研究王忠东丹参酮的不稳定性导致提取过程中有效成分的降解，根据其成分的特性（热分解）和丹参酮存在于根部表皮的特点，我们试用95％乙醇（丹参酮易溶于热乙醇）提取，加热温度不超过75℃（80℃丹参酮加速降解），仅提取一次，根的表皮就变成灰色，TLC检测提取过的丹参（展开剂：石油醚：乙酸乙酯85：15，吸附剂：硅胶H），检测结果表明：90％的丹参酮已被提取。
为使提取完全，再加五倍量的95％乙醇70℃加热30分钟，过滤，滤液作为第二批提取溶媒。
我们的经验和体会是：
1、丹参药材不要用水浸泡切片，直接用药材提取，尽量减少药材的含水量（水能促使丹参酮的降解）。
2、加五倍量的95％乙醇73±3℃恒温提取2小时（从温度升到70℃开始记时）。
3、75℃减压回收乙醇至稀膏状，放至室温开始冷冻12小时，过滤。
4、沉淀物室温易干燥。
没必要烘干。
5、母液加入第二批提取。
我们用此工艺提取丹参共4吨，每批2吨，两次提取，收率均在2％（干粉）以上，提取物丹参酮IIA含量在10％以上，不冷冻过滤，丹参酮IIA含量在30％以上，收率在1％左右。
丹参酮提取物收率与原料有关，产地不同丹参酮IIA的含量不尽相同，放置年限不同丹参酮IIA的含量也不尽相同，以当年产含量高。
丹参酮提取物收率与温度和时间有关，温度越高，丹参酮IIA降解越快；加热时间越长，丹参酮IIA降解越多。
真空回收比常压回收丹参酮IIA的含量高。
丹参酮提取物收率与乙醇浓度有关，95％乙醇提取比75％乙醇提取率高（丹参酮IIA含量）。
丹参中丹参酮IIA的含量与生长年限有关，一年生比二年生含量高。
丹参酮药用进展分析_严荣
严 荣
（ ） 泰和县人民医院 ， 江西 泰和 ３ ４ ３ ７ ０ ０
摘 要： 丹参酮是丹参的主要成分之一 ， 是一种黄 酮 类 物 质 。 分 析 研 究 丹 参 酮 的 药 理 作 用 及 临 床 应 用 ， 、 、 得出丹参酮具有抗菌消炎 抗氧化 性激素样活性作 用 和 抗 肿 瘤 作 用 ， 已广泛应用于临床多种疾病的治 疗； 另外 ， 丹参酮对心脑血管疾病 、 糖尿病及肝硬化等治疗也有重要作用 。 对丹参酮药用进展进行阐 述 ， 。 以期更好地服务于临床 关键词 ： 丹参酮 ； 药理作用 ； 临床应用 ； 进展 ： （ ） 中图分类号 ： 文献标识码 Ｒ ２ ８ ４ Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ３ ２ １ ９ ７ ２ ０ １ ３ １ ２ ０ ０ ８ ５ ０ ２ － － －
７ 结语
丹参酮具有诸多药理作用 ， 如 其 抗 菌 消 炎、 抗氧化等均 已应用于临床 ， 并取得了很好 的 临 床 疗 效 ， 但其它大部分药 理机制的研究仍 停 留 在 体 外 细 胞 学 或 动 物 实 验 ， 虽然均已 但对应用于人体的实验 尚 未 大 量 开 展 ， 随着实验技术 证实 ， 实验方法的不断 完 善 ， 对丹参酮的研究定会更 的不断发展 ， 加深入 ， 更加广泛地被应用于临床 ， 以使更多患者受益 。 参考文献 ：
４ 性激素样活性作用及应用
痤疮的发病原因复杂 ， 受多 种 因 素 影 响 ， 多认为主要与 皮 脂 腺 分 泌 亢 进 等 有 关。 丹 参 患者体内雄激 素 水 平 上 升 、 酮是一种重要制 剂 ， 具 有 消 炎、 抗 氧 化 等 作 用， 还具有抗雄 可以使 痤 疮 患 者 血 清 中 黄 体 生 成 素 和 卵 泡 刺 激 激素作用 ， 素的水平上升至正常 ， 并使睾 酮 水 平 下 降 ， 可明显改善痤疮 患者的症状 。 丹参 酮 避 免 了 应 用 雌 激 素 治 疗 痤 疮 ， 干扰患 从多方面 改 善 了 痤 疮 的 临 床 症 状 ， 适应 者体内代谢的缺点 ， ６］ ６］ 。 李佑钊等 ［ 研究证实丹参酮治疗寻常型痤疮 范围更广 ［ 有效率可达 ７ 明 显 高 于 应 用 美 他 环 素 治 疗 组， 且无 ８． ６ ９％ ， 丹参酮还具有类雌激素样的生物活 明显不良反应 。 此 外 ， 性， 在治疗更年期综合征时有 较 好 的 临 床 疗 效 ， 且绝经期妇 女配合钙剂使用可预防骨质疏松发生 。
丹参酮的药理作用研究进展
,
亡 的保护方 面有 一定价值
,
、
。
最 近研 究 发现 丹 参 还 能抑制 和 清
, , ,
,
。
除 白细 胞 与细静脉 内皮细胞 的 猫附 改善血 管 通透 性 扩 张微 动脉 加快血 液流速 增加流量 从而调节微循环 障碍
2 2 . 。
。
降血 脂 抗动脉粥 样硬 化作 用
有显 著差异 认为丹参酮 l A 可 能通 过诱导调 亡 而 抑制肝 癌细 胞 的生长 体外实验证 明 丹参酮 n A 处理 人 卵巢癌细胞 株
。 ,
。
抗肿瘤作用 1. 1 对肿摘细 胞的杀伤作用
罗 厚蔚等1研 究 证 实丹 参酮对细 胞毒性作用的基 础是 它的
.2 g L , 浓度 下 不 同的丹 参 酮 成分对 小 研 究 了在 0 5 . 鼠类淋巴 细胞 白血 病细胞 P3 8 作用 结果 显示 丹 参酮 有相当
s o d a
问
强 的细胞杀伤作用
失常 (D S
一 0 2
,
保 护 心 肌 等功 能
) 1 ,
。
王 蓉报 道 l N
,
丹参 酮 n A 磺 酸钠
部血 管病理 损伤和血 管机 能异 常随着 体内血 脂升 高 粥样 硬 化
斑 块形 成 使体 内 自由基 产生 与 消除失去 平 衡 使 自由基 清除
, ,
,
P C )缩小心 肌 梗死面 积和 不 仅能增强 缺血 预 适应组 (I
, 。
,
高脂 血 症是指血 浆总胆 固醇 (T C )和 / 或甘油三 酷 (TG )异
常升高 长期 的高脂血 症时 脂质在动脉内膜 中沉积 引起 巨噬
细胞及平滑肌细胞吞噬 反应 纤 维化 粥样斑 块形成 最 终致管 壁增 厚变硬 管腔狭窄 发生 动脉 粥样硬化 (A s ) 大量的研究 A S 证 明丹参酮具有 降血 脂抗 作用 炎症反 应 过程 中 丹 参酮
丹参酮的提取实验报告
丹参酮的提取实验报告丹参为唇形科鼠尾草属植物,具有活血化瘀、理气止痛之功效,是我国传统重要中药。
丹参的主要成分为脂溶性的丹参酮和水溶性的原儿茶醛、丹参素等。
近年来,市场对丹参的脂溶性活性成分丹参酮,特别是丹参酮ⅡA的需求量不断增大,丹参的提取工艺研究引起制药行业的极大关注。
首先建立了薄层扫描法测定丹参中丹参酮ⅡA含量的实验方法,通过与HPLC法比对,得到该测定方法简便、快速、准确灵敏,丹参酮ⅡA平均回收率99.8%,RSD2.15%,不仅可作为丹参酮提取工艺研究中评价指标丹参酮ⅡA含量的测定方法,同时也为其他药物制剂中丹参酮含量的测定提供了可借鉴的经验和理论依据。
利用正交实验法对丹参中丹参酮传统的醇提工艺进行了条件优化,得到优选工艺为采用6倍量的70%乙醇回流提取3次,每次2h,丹参酮ⅡA提取率为82.1%,含量为1.49%。
用8%碳酸钠溶液洗涤后得到含19.23%丹参酮ⅡA的浸膏。
以丹参酮ⅡA为指标成分,重点探讨了超临界CO2萃取丹参中丹参酮的工艺条件,对影响萃取效果的各种因素进行了全面的考察。
通过正交实验得到以95%乙醇浸润40目丹参1h,在萃取压力25MPa、温度45℃、CO2流量25L/h、萃取时间3h,95%乙醇作夹带剂,其用量为与物料质量比3：1的条件下,丹参酮ⅡA萃取率达到84.9%,萃取物中丹参酮ⅡA与隐丹参酮含量为53.56%。
与传统醇提工艺相比,该方法不仅耗时少、提取率高,而且得到的丹参萃取物呈红褐色,品质好,无需进一步纯化,其有效成分总丹参酮的含量就能达到新药申报规定的要求。
还应用硅胶柱层析技术对超临界CO2萃取物中丹参酮ⅡA与隐丹参酮进行了分离,选取石油醚-乙酸乙酯(7：2，7：1)为洗脱剂,经两次洗脱,分离得到了丹参酮ⅡA与隐丹参酮。
不仅为丹参酮的工业化提取工艺设计和含量测定提供了可借鉴的经验,而且为丹参的进一步开发及其产业现代化提供了理论依据。
丹参提取与分析研究进展
实用中 医药杂志 ２ Ｏ Ｏ ８年 １ 第 ２ ２月 ４卷 １ ２期 （ 总第 １ １期 ） ９
田 Ｓ Ｍ ＤＩ Ｅ ＣＤ ２ ｏ １ ２ ． ２ Ｅ ｏ ８ Ｖ０ ． ４ ＮＯ １
丹参提 取与分析研 究进展
纯 品 。ｌ４ 年 ， 洁证 实丹 参酮 Ⅱ 丹参 酮 Ⅱ 和丹 参 ９ １ 龙浦 是 Ａ 酮 ⅡＢ混合物 ， 但需将丹参酮 Ⅱ的苯溶液通过氧化铝柱时 可 分 的两 个色 带 ， 下层 丹参酮 Ⅱ 上 层丹参 酮 ⅡＢ 分别 用 Ａ， ， 氯仿 提取 ， 苯重 结 晶得到丹 参 酮 ⅡＡ和 丹参 酮 ⅡＢ 这 是 经 ， 人类 历史 上第 一次从 丹参 中提取 到单 体化 合 物 。ｌ７ 年 ， ９６ 房其年等从丹参根粉 中用乙醚渗滤 ， 渗滤液经 ５ ％碳酸钠 溶液 处 理 ， 到 中性 和 碳 酸钠 提 取 两部 分 ， 经硅 胶 柱 层 得 在 析和制备 薄层层析分离 ， 用苯洗脱， 中性部位得到丹参 从 酮 Ｉ， 隐丹参 酮 ， 丹参 酮 ⅡＡ， 参 酮 ⅡＢ等 。１７ 房 其 丹 ９８年 年利用 分光 光 度 法 测 定 总 丹 参 酮 中隐丹 参 酮 含 量 。１９ ９０
层析 ３种方 法测定 了丹参 的各 个 组分 、 发 现 了一种 新 的 并 成分 。
Ｉ 新隐丹参酮 ， ， 去羟新 隐丹参酮 ， 去甲丹参酮。现就丹参 药用成分丹参酮提取与分析进展综述如下。 在３ Ｏ年代初， 中尾万三等从丹参的乙醇或乙醚提取物 中分离得到 ３ 红色结 晶， 种 命名为丹参酮 Ｉ、 丹参酮 Ⅱ和 丹 参酮 Ⅲ 。丹 参酮 Ｉ 用丙 酮 和 二 甲苯 先后 重 结 晶 ， 可得 到
ｚ ） ａ 的干燥根及块根。丹参有祛瘀 止痛， ｅ 活血通经 、 清心除 烦的功效。对心血管系统可增加冠脉流量、 降低心肌兴奋
丹参酮药理研究及临床应用进展
１ ． ５ 抗肿瘤作用
１ ． ５ ． １ 诱 导 分 化 作 用
丹 参 酮 Ⅱ Ａ对 人宫 颈 癌 细胞 株 ＭＥ １ ８ ０有 体 外诱 导 分化 作 用 。经无 毒剂量 的丹 参酮 Ⅱ Ａ （ Ｏ ．５ ｇ／ｍ１ ） 处理 后 ，细 胞 形 态 趋 向 良性 分 化 ，生 长 减 慢 ，集 落 形 成 率 和 ３ Ｈ— Ｔ ｄ Ｒ 掺 人率 明显 降低 ，在裸 鼠上 的成瘤 时间延长 ，成瘤能 力 明显
１ ． ２ ． ２ 缩小 心肌 梗 死 面 积
实 验 表 明 ，丹 参 酮 Ⅱ Ａ对 小 鼠和 大 鼠体 外 血 栓 形 成 、 血 小 板 聚集 功 能均 有 抑 制作 用 ； 丹参 酮 ⅡＡ 能剂量 性 地 抑 制 凝 血酶 诱 导入 血 小板 表 面 Ｃ Ｄ ６ ２ Ｐ的表 达 ，明显 降低 全 血 血小板分子 Ｃ Ｄ ４ １和 Ｃ Ｄ ６ ２ Ｐ的表 达 。丹 参酮 Ⅱ Ａ能 抑 制 血 管 中醛 固酮合 酶 Ｃ ＹＰ Ｉ Ｉ Ｂ ２ ｍＲ Ｎ Ａ的表 达而抑 制醛 固酮合成 。 丹 参 酮 Ⅱ Ａ还 能 明显 抑制 高 钾 引起 的钙 内流 ， 同时对 静 息 状 态 下 红细 胞 内钙 的 浓度 也 有影 响。丹 参 酮 Ⅱ Ａ可通 过 抑 制 交 感 神 经节 细 胞 ，使 交感 神 经 的 紧张 性 降低 ，而 使 这些 神 经所 支配 的血管平 滑肌松 弛 、血管扩 张 。 １ ． ３ 对肝脏 的保护作用 丹 参 酮 Ⅱ Ａ能 降 低 实 验 性 肝 纤 维 化 大 鼠 血 清 中升 高 的 ＡＬ Ｔ 、ＡＳ Ｔ、ＮＯ 、ＨＡ、Ｌ Ｎ水 平 和 肝组 织 中过高 的 Ｈ ＹＰ 、 ＭＤ Ａ含量 。病 理组 织 学检查 表 明 ，丹 参 酮 Ⅱ Ａ能明显 改善
其广泛 。
丹参酮IIA药理作用研究进展
丹参酮IIA药理作用研究进展摘要】目的：丹参酮IIA(TanshinoneIIA，TS)是从唇形科植物丹参中提取分离出的一种脂溶性化合物，属二萜醌类化合物。
丹参酮IIA药效明确，药理活性强，药理作用广泛。
大量实验表明，丹参酮IIA具有改善冠状动脉血循环，血管内皮细胞修复，抗动脉粥样硬化（AS），抗心肌肥厚，防治糖尿病的并发症，抗癌、抗炎镇痛等药理作用。
【关键词】丹参酮IIA；药理作用【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）12-0009-02Tanshinone type IIA research progressZhang Zhirong, Qiu Furong (corresponding author). Shuguang Hospital Affiliatedto Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 【Abstract】 Tanshinone type IIA (TanshinoneIIA, TS) is extracted from salvia miltiorrhiza labiatae plants a fat-soluble compounds isolated from the genus diterpene quinone compounds. Tanshinone type IIA efficacy of clear, strong pharmacological activities, widely pharmacological effects. Experiments show that tanshinone type IIA has improve coronary arterial blood circulation, vascular endothelial cell repair, resistance of atherosclerosis (AS), resisting myocardial hypertrophy, prevention and treatment of the complications of diabetes, anti-cancer, anti-inflammatory and analgesic pharmacological effects.【Key words】 Tanshinone type IIA; Pharmacological effects丹参是唇形科植物丹参的干燥根及茎，始载于《神农本草经》为常用中药之一，列为上品，以后历代本草均有收载。
丹参酮在临床应用的新进展
角化异 常及毛囊 内痤疮 丙 酸杆菌增 殖相关 【 】 ］ 。丹参 酮胶 肤 新 陈代 谢 。 故丹参 酮 治 疗瘀 积 性皮 炎 与云 南 白药 相 囊主要有效成分 为隐丹参 酮 ，它有广谱 抗菌作用 ，对 痤 比 ，除具有治疗 作用全 面 ，疗效好 ，无明显副作 用等优 疮丙酸杆菌有较 强 的抗 菌活性 ，尚有温 和 的雌激 素样抗 点 外 ，还 能 减少 该 病 的复 发 ，明显提 高 了该 病 的远 期 雄性 激素 作用 和抗 皮脂 腺分泌 作用 ［ ２ ］ 参性微 寒 、味 Ｉ 。丹 临床治 愈 率 。本 组结 果 显 示 ，丹 参酮 治疗 组 的复发 率 苦 、无 毒 ，有活 血通络 、凉血 、消肿 的作用 ，可 以改 善 （ ２ ％），明显低于云南 白药组 （ ６ ％）， ＜ ． １ １． ５ ５． ５ Ｐ Ｏ０ 。 ０ ＿ ７ ］ 皮肤微循环 ，促进皮肤 新陈代谢 。结果表 明 ，丹参酮 治 提示丹参酮是一种治疗瘀积性皮炎较好的药物。【
疗 以炎性 、脓 疮为主 的痤疮治疗 作用全 面 ，疗 效 乙型肝炎 慢性 乙型
副作用少 且轻 ，疗效 明显优于对 照组 ，故丹参 酮是治疗 肝炎是 Ｉ 临床上常见 的疾 病 ，应 用甘利欣合 并丹参 注射液
以炎性 、脓疮 为主 的痤疮较 好 的药 物 ，值得 Ｉ 推广 。 临床
囊 ，４ ／ ，３ ｄ 粒 次 ７ ，当病 情基本控 制后 ，改 为３ 次 ， ￣／ 粒／
全 ，尤其 是在交通 静脉或深静 脉有瓣膜 功能不全 时 ，深
２￣ ｄ ７ ／，共观察 １周 ；对照组 口服美满霉素５ ｍｇ ，１ ． ２ ０ ／ 次 次 部静脉 血栓形成 ，造成瓣膜 系统 的毁坏 而不能行使其 功
丹参酮的临床应用进展
ｄ 。２周 后治 疗组 大部 分趋 于痊 愈 ， 而对 照 组一 部 分病 人仍 有反 复 。治疗后 治疗组 总 积分值 为 １２ ．５±１ ２ ．０ ， 例 ， 转 ４例 ， 好 无效 ０例 ， 有 效 率 为 ８．０ ， 照组 总 ６７％ 对 为 ４ ．０ ％ 。两 组 疗效 有 显 著性 差 异 （ ６ ７ Ｐ＜０ ０ ） 治 ． １， 疗 组疗 效 明显优 于对 照组 。本研究 证 明丹 参酮 具有 抗
丹参 酮对 于多 种 致病 菌有 抑 制 作 用 ， 对 葡 萄 球 对 照组 为 ７ ８±３ ９ 治疗 组 痊 愈 １ 如 ．３ ．１。 ０例 ， 效 １ 显 ６ 菌、 痤疮 丙酸棒状 杆 菌 、 枝杆 菌及 某些 真 菌有 强 大 的 分 抑制作用 ， 尤其 对革 兰 阳性 球菌 有 明显 的抑 制 作用 ， 对 痊愈 ５例 ， 显效 ９例 ， 转 １ 好 ５例 ， 效 １例 ， 有效 率 无 总
耐药金黄色葡萄球 菌仍有很好 的抑制作用 ， 且长期使 用 不产生 耐药性 … 。 １１ 治疗 皮肤科 感染 性疾病 ． １ １ １ 寻 常痤疮 门诊 轻 、 ．． 中度 寻 常性 痤 疮 患 者 １９ ０ 例， 随机 分 组 ， 疗 组 ５ 治 ３例 ， 口服丹 参 酮 胶 囊 ４粒 ， ３ 次／ ； 照组 ５ ｄ对 ６例 ， 口服 盐酸 四环 素片 ０５ｇ２次／ ， ． ， ｄ４ 周 后减 为 ０ ２ ，／ ， 为 １个疗程 。疗 程结 束后 进 ．５ｇ２ ｄ８周 行疗 效评估 ， 参 酮对 以炎 性 丘 疹 、 疱 为 表 现 的 轻 、 丹 脓 中度 寻常 性痤 疮疗 效 较 显著 ， 组差 异 有显 著性 （ 两 Ｐ＜ ００ ） ．５ 。本研 究证 实丹参 酮治疗 轻 、 中度 寻常 性痤 疮 疗 效确 切 ， 耐药性及 明显 毒 副作用 。丹 参 酮具 有抗 菌 、 无
丹参脂溶性有效成分丹参酮研究进展
丹参脂溶性有效成分丹参酮研究进展李建恒;乔亚君;侯力峰;贺学礼【摘要】为了获得高纯度、高品质的丹参酮,使其更好地发挥药理活性,在查阅国内外近10年有关丹参酮研究文献的基础上,对其提取纯化、合成制备、药理作用等研究成果进行系统综述.结果显示,应用现代技术手段提取纯化得到的丹参酮纯度较高、品质较好,且易于操作,条件容易控制,其中非离子表面活性剂辅助提取、超临界CO2萃取、超声提取、超高压辅助提取等是应用前景较广的经济、有效、绿色的提取方法.高效逆流色谱法是效果较好的纯化方法.目前丹参酮类物质的生物合成技术也取得了瞩目的成就.此外丹参药理活性的研究主要集中于抗肿瘤、天然抗氧化、抗菌消炎、治疗心脑血管疾病等方面,且取得了很好的临床效果.这些研究为丹参的全面开发利用提供了参考.【期刊名称】《河北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(035)002【总页数】8页(P217-224)【关键词】丹参酮;脂溶性成分;正交设计;药理活性;抗菌【作者】李建恒;乔亚君;侯力峰;贺学礼【作者单位】河北大学药学院,河北保定071002;河北大学生命科学学院,河北保定071002;河北大学药学院,河北保定071002;河北大学药学院,河北保定071002;河北大学生命科学学院,河北保定071002【正文语种】中文【中图分类】R282第一作者:李建恒(1964-)，男，河北徐水人，河北大学教授，主要从事天然植物有效成分研究.E-mail:******************.cnKey words：tanshinone;fat-soluble components;orthogonal design;pharmacological activity;antibacter ial丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)属双子叶唇形科植物，主产于河北、安徽、江苏、四川等地，始载于《神农本草经》，能够起到活血通络、凉血消痈、祛瘀止痛、清心除烦等作用.自20世纪30年代以来，有关学者对丹参的药用成分和临床应用进行了深入研究，并分离得到了许多化学成分.丹参的化学成分分为脂溶性和水溶性两部分，丹参酮(tanshinone,Tsn)是丹参中脂溶性松香烷型二萜类化合物，又称为总丹参酮，是丹参根部的主要提取物，具有广泛的药理作用，受到医药学家的高度关注.总丹参酮按照结构分类为丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、二氢丹参酮I、羟基丹参酮、隐丹参酮、异丹参酮、丹参酮甲酯等药用成分，它们的相同点是具备邻醌或对醌结构，且能够被还原为二酚类衍生物，氧化后又转化为醌，在此过程中起到传递电子的作用；而且它们的体内代谢产物也能够促进或干扰机体的多种反应，所以具有抗癌、抗菌、抗病毒等临床药理作用.近年来国内外对丹参的研究已经突破其化学成分的性质及传统药理作用,且丹参酮的临床应用也已经非常广泛，需求量不断增大.所以目前更多的研究旨在探索如何高效获取丹参酮并使其发挥更大的药理作用，在生态学、化学、药学工作者的密切配合和努力下，丹参酮的提取纯化、生物合成、药理作用各个方面的研究都取得了巨大的成就.总丹参酮的提取、分离纯化工艺虽然发展较早，但过去主要以有机溶剂提取为主，容易导致溶剂残留量大、环境污染等问题，且提取物纯度较低.因此，探寻一种高效的提取纯化总丹参酮的方法，对促进丹参酮药理作用的研究具有很大的应用价值，现将目前常用的提取方法概括如下.1.1.1 非离子表面活性剂辅助提取非离子表面活性剂辅助提取是一种经济、有效、绿色的提取方法.Bi等[1]根据目标化合物的化学结构和稳定性，选择0.8 mol/L聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)作为提取的非离子表面活性剂，料液比1∶70(g∶mL)，提取时间100 min，得到隐丹参酮和丹参酮Ⅰ分别为0.208，0.147 mg/g.然后过滤提取物并采用浊点萃取浓缩.在pH=5.1，NaCl质量分数15%，平衡温度65 ℃，平衡时间10 min条件下，得到表面活性剂中隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的质量浓度分别为45.7，40.6 g/mL.此外该方法还可以较好地应用于其他含苯环疏水性化合物的提取.1.1.2 超临界CO2萃取刘延上[2]以丹参酮ⅡA为指标成分，重点探讨了超临界CO2萃取丹参酮的工艺条件，对影响萃取效果的各种因素进行了全面考察.通过正交实验得到以体积分数为95%乙醇浸润40目(粒度420 μm)丹参1 h，在萃取压力25 MPa、温度45 ℃、CO2流量25 L/h、萃取时间3 h，体积分数为95%的乙醇作夹带剂，料液比3∶1(g∶mL)的条件下，丹参酮ⅡA萃取率达到84.9%，萃取物中丹参酮ⅡA与隐丹参酮质量分数为53.56%.与传统的醇提工艺相比，该方法耗时少、提取率高，而且得到的丹参提取物呈红褐色，品质好，其有效成分的质量分数能达到新药申报规定的要求.本文还应用硅胶柱层析技术对萃取物中丹参酮ⅡA与隐丹参酮进行了分离，选用石油醚-乙酸乙酯作洗脱剂，体积比为7∶2和7∶1，2次洗脱，分离得到了丹参酮ⅡA与隐丹参酮.这一实验结果不仅为丹参酮的工业化提取和含量测定提供了可借鉴的经验，而且为丹参的进一步开发利用及其产业现代化提供了理论依据.1.1.3 湿式超微粉碎提取贺建东等[3]通过比较静置提取、回流提取与超微粉碎技术对丹参脂溶性成分提取率的影响，发现超微粉碎提取率最高，因此采用3因素3水平正交实验对乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间进行研究，得到最佳工艺：以体积分数为80%乙醇作为提取剂，料液比1∶8(g/mL)，提取10 min.其中提取时间对提取效果的影响最为显著(P<0.05)，乙醇浓度对提取效果没有显著影响(P>0.05)，生产中考虑到成本，一般选用体积分数为70%乙醇提取.1.1.4 超声提取法贲永光等[4-5]通过多因素正交实验对丹参酮ⅡA的双频复合超声提取工艺进行优选，得到各因素对丹参酮ⅡA提取率影响次序为：乙醇体积分数>物料粒径>固液比>提取时间>提取温度，最佳工艺参数为体积分数95%的乙醇，物料粒径80~100目(粒度150~178 μm)，料液比1∶20(g∶mL)，提取时间35 min，提取温度55 ℃，在此条件下提取3次，得到丹参酮ⅡA平均质量分数为89.47%.但是此方法过分破坏植物细胞壁，可能导致一些大分子物质析出，增加了纯化的难度.1.1.5 微波提取法张力[6]利用微波辅助法提取丹参酮ⅡA，并采用高效液相色谱对丹参提取物中丹参酮ⅡA进行分离测定，比较了提取剂体积分数、加热温度和时间、微波功率、液固比等对产率的影响，得到体积分数为80%乙醇，料液比1∶9(g∶mL)，微波功率600 W，加热温度70 ℃，4 min时丹参酮ⅡA产率较高.然后提取物经D3520型大孔吸附树脂纯化，丹参酮ⅡA质量分数提高到53%.实验还将微波辅助提取工艺与传统加热回流提取方法进行了比较，得到微波提取工艺可大幅度缩短提取时间，节省生产成本，降低能源消耗，同时可以提高产率，且该方法的优越性还体现在符合环保的要求.1.1.6 超高压辅助提取Liu等[7]采用离子液体薄层制备技术的超高压辅助提取丹参中5种丹参酮类物质，并与热回流萃取、超声波提取作了比较，然后通过显微镜观察超高压处理之后的丹参根组织.结果表明：选用0.5 mol/L[C8-MIM][PF6]离子液体的乙醇溶液作为提取剂，压力300 MPa，提取时间2 min，料液比1∶20 (g∶mL)，得到二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和丹参新酮质量浓度分别为4.06，9.30，20.3，37.4，0.593 mg/g.经HPLC分析采用热回流法萃取丹参酮的产率较低；超声波提取虽然产率较高，但是提取时间长，综合考虑超高压提取技术用时短且在室温下就可以完成，是一种高效的提取方法.扫描电镜显微图显示经高压处理之后，丹参根组织遭到严重破坏，细胞壁破损，这也从根本上解释了该方法提取率较高的原因.且该方法可以较迅速、均匀地作用于提取材料，又不易引起物质发生化学变化，是一种值得推广的高效提取方法.1.2.1 高速逆流色谱法Sun等[8]采用高效逆流色谱法(HSCCC)，以石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比为6∶4∶6.5∶3.5作为2相溶剂系统对丹参酮类提取物进行分离纯化，实验首先使用乙酸乙酯回流萃取丹参酮类物质，然后经高效逆流色谱分离，多分子层螺旋柱(上层)作固定相，2相溶剂(下层)作流动相，进样量5 mL，分离温度25 ℃，对丹参酮类物质进行分离纯化，结果显示从400 mg丹参提取物中得到8.2 mg二氢丹参酮I，5.8 mg 1,2,15,16-四氢丹参酮，26.3 mg隐丹参酮，16.2 mg丹参酮I，25.6 mg甘西鼠尾新酮A，68.8 mg丹参酮ⅡA和9.3 mg次甲丹参醌，质量分数分别为97.6%，95.1%，99.0%，99.1%，93.2%，99.3%，98.7%.与屈燚[9]研究结果一致.表明高效逆流色谱法对于分离组成复杂的样品具有重要意义，尤其适用于天然植物成分的分离.1.2.2 大孔树脂法高媛等[10]选用D101型大孔树脂作为纯化树脂，采用料液比1∶8(g∶mL)，体积分数为90%乙醇回流提取2次，每次1 h，并探索丹参酮的最佳纯化条件如下：样品质量分数为40%，吸附速度为3 BV/h，开始吸附柱用5 BV水以除去糖类，最后吸附柱用6 BV，体积分数为 90%乙醇，流速为5 BV/ h.结论：通过最佳纯化条件得到的总丹参酮含量较高，而且技术简单，适合现代生产.随着研究方法和技术的不断提高，丹参中有效成分的分离提取技术得到快速发展，但传统的提取方法所用溶剂量大，提取时间长，有效物质产率较低；此外丹参酮为热敏性和光敏性物质，提取过程中易被破坏，所以如果能通过生物学以及化学手段合成丹参酮，对丹参酮的应用将有深远意义.杨东风[11]的研究阐述了丹参酮类在植物体内合成途径分为细胞质中的甲羟戊酸(mevalonate,MVA)途径以及质体中的2C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP)途径，二者的不同点是制得异戊烯基焦磷酸酯(isopentenyl diphosphate,IPP)的机理、位置、前体以及产物不同.其中MVA途径选择乙酰辅酶A来做前体合成IPP，进而形成甾体、倍半萜和三萜等.限速酶是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)，使甲羟戊酸经催化不可逆生成.MEP途径选用5-磷酸脱氧木酮糖和2C-甲基4-磷酸-4D-赤藓糖醇来做前体合成IPP，再经缩合形成单萜、二萜和四萜.限速酶是1-去氧木糖-5-磷酸还原酶(1-deoxy-D-xylulose5-phosphate reductoisomerase,DXR)，经催化使得1-脱氧-木酮糖-5-磷酸(1-deoxy-D-xyulose5-phosphate,DXP)可逆形成MEP，专一抑制剂是磷甘霉素(fosmidomycin,FOS).且该研究深入探讨了总丹参酮的体内合成机制. 日前中国中医科学院中药资源中心的黄璐琦等[12]采用合成生物学策略，通过MVA途径人工合成丹参酮.该课题组分析了用来合成次丹参酮二烯的2个酶(SmCPS和SmKSL)，采用的技术方法为功能基因组学技术.同时，构建了合成高产丹参酮前体的酵母工程菌株，然后进行一系列生物修饰，使得次丹参酮二烯的产量达到365 mg/L.在基因表达、体外酶活性筛选指导下，发现丹参酮二烯经(CYP76AH1)基因催化转化生成铁锈醇，丰富了异源合成萜类化合物的认识，奠定了丹参酮下游相关基因发掘、微生物合成丹参酮的基础.李春苗[13]在实验室合成了1-氧次丹参酮，该化合物具有很好地抑制癌细胞的作用.实验主要针对1-氧次丹参酮的全合成进行探索，尝试了3条路线.第1条设计路线最关键的步骤是利用[4+2]反应构建A/B/C 3个环系，在尝试了很多方法后仍未拿到同时含有A/B/C 3个环系的化合物，所以设计了第2条路线.该路线中格氏反应的中间体不宜分离，且重铬酸吡啶鎓(pyridinium dichromate,PDC)氧化转位产率较低，故进行第3条路线，集第1条和第2条路线优点，以简单易得的3-甲基-2-丁酮和丙烯酸叔丁酯为原料首先合成含有角甲基的二酮化合物，再进行Suzuki交叉偶联反应、格氏反应、合环等反应得到目标产物.该路线的优点是在格氏反应后用酸处理就可以得到第2条合成路线PDC氧化转位得到的产物，简化了合成路线并提高了产率.通过生物合成技术得到丹参酮可以避免自然环境的干扰，生产较规范，时间较提取种植的药材短，质量优，产量稳定，但是距离大规模的推广生产仍有一定距离，需要科研工作者的继续努力，此外考虑到生产成本等因素，探寻高效简单的提取方法仍具有重要意义.相信随着研究的不断深入，丹参酮的分离提取以及生产合成技术必将得到进一步完善.丹参酮的药理作用极其广泛，近些年在抗肿瘤方面的研究不断深入，取得显著成果，此外还具有心脑血管药理作用、天然抗氧化作用及抗菌消炎作用等.近年来弓建华等[14]研究表明，隐丹参酮对肿瘤细胞有细胞毒作用，不仅能阻碍肿瘤细胞增殖，而且可以诱导肿瘤细胞分化和促进肿瘤细胞程序性死亡，从而在一定程度上阻碍肿瘤细胞侵袭和防止其向远处转移.Li等[15]使用改进的MTT法检测丹参酮对K562和Raji细胞的生长抑制作用，并用荧光显微镜和流式细胞仪评估了丹参酮诱导细胞凋亡的能力.然后采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化.MTT实验结果显示，这些丹参酮以浓度依赖性和时间依赖的方式抑制细胞增殖.流式细胞仪分析表明，这些丹参酮以浓度依赖性的方式诱导K562凋亡，总的来说，二氢丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA和隐丹参酮对血液恶性肿瘤细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用.并且大量研究显示，总丹参酮对高转移性肺癌PGCL3细胞以及低转移人肺腺癌PAa细胞、白血病HL-60和K562细胞、人肝癌细胞株HepG2均有诱导其分化、凋亡的作用，所以丹参酮类有望成为高效低毒的新型抗肿瘤药物.3.1.1 对肿瘤细胞的杀伤作用吴杲等[16]证实菲醌结构在丹参酮类物质中广泛存在，导致其可以产生细胞毒作用，其中DNA分子与菲环结构结合，呋喃环、醌类结构生成自由基阻碍肿瘤细胞DNA的合成.尤其是其A环(芳环)对小鼠淋巴白血病细胞具有细胞毒性，B环的1,2-邻萘醌结构也有较高的细胞毒性.杨丽萍等[17]分别采用不同浓度丹参酮ⅡA对Wistar雄性大鼠灌胃处理，得到含药血清，再用其进行胃癌细胞的培养，倒置显微镜和流式细胞仪观察结果表明，丹参酮ⅡA的含药血清使胃癌细胞在增殖过程中不进入或延迟进入S期(即DNA合成期)，停止于G0-G1期，阻碍DNA合成.3.1.2 对肿瘤细胞的诱导分化作用丹参酮具有诱导肿瘤细胞分化的作用.郭庆寅等[18]研究了丹参酮ⅡA与全反式维甲酸(all-trans retinoid acid,ATRa)及三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞分化在细胞形态学、免疫表型和对PML-RARα融合基因及其蛋白影响的比较.结果表明,丹参酮ⅡA能抑制NB4细胞生长，诱导分化，使NB4细胞PML蛋白异常分布重新定位、NBs结构恢复、PML-RARα融合蛋白降解.3.1.3 对肿瘤细胞的诱导凋亡作用在基因调控下细胞程序化死亡(programmed cell death)的过程称为细胞凋亡(apoptosis)，即在特定生理病理情况下，维持稳定的正常细胞增殖、分化以及凋亡情况，但是癌细胞无限制增殖、分化受阻；诱导凋亡.隐丹参酮通过诱导肿瘤细胞凋亡显示了显著的抗肿瘤作用[19].Chiu等[20]研究表明通过MTT分析测定丹参酮ⅡA在A549细胞的细胞毒性，用流式细胞仪检测丹参酮ⅡA对细胞周期、细胞线粒体膜电位(MMP)、钙和A549细胞释放的活性氧(ROS)的影响.Western印迹法检测p53，Bax，Bcl-2和β-肌动蛋白在A549细胞中的蛋白表达.丹参酮ⅡA对计量和时间的依赖方式明显地抑制了A549细胞的增殖率.流式细胞仪的结果表明，当A549细胞培养在不同质量浓度的丹参酮中(对照组，2.5，5和10 g/L)48 h，亚G1期细胞增加.丹参酮ⅡA诱导活性氧的产生、钙离子和MMP的下降.Western印迹结果表明，在丹参酮ⅡA质量浓度为5 μg/mL中培养6，12和24 h后， p53和Bax蛋白表达增加，但原癌基因bcl-2显著下降.丹参酮ⅡA抑制了肺癌A549细胞的增殖，可能通过降低MMP或者Bax/Bcl-2感应率的升高诱导细胞凋亡.3.2.1 抗动脉粥样硬化作用易成[21]建立家兔动脉粥样硬化模型，比较正常组、AS组及丹参酮ⅡA组动脉粥样硬化斑块形成的变化，比较各组血清脂质水平、斑块面积，免疫组化分析Bcl-2，Bax及MCP-1在粥样硬化斑块中的表达.结果：丹参酮ⅡA组血清TG水平和斑块面积比例低于AS组(P<0.01)；免疫组化显示AS组Bcl-2，Bax及MCP-1阳性细胞表达与丹参酮ⅡA组有显著性差异(P<0.05).结论：丹参酮可抑制动脉粥样硬化斑块的形成.Gao等[22]采用新兴的实验研究和临床实验已经证明，丹参酮能够防止动脉粥样硬化和心肌损伤肥大.对于动脉粥样硬化，丹参酮ⅡA能够抑制低密度脂蛋白氧化，使单核细胞粘附于血管内皮细胞，促进平滑肌细胞迁移和增殖，以及巨噬细胞中胆固醇的积累、促炎性细胞因子的表达和血小板聚集.丹参酮ⅡA具有稳定动脉粥样硬化斑块活性的潜能，其心脏保护作用主要与抗氧化和抗炎作用有关.3.2.2 抗心肌缺血缺氧丹参酮ⅡA已被证实在心肌梗死(MI)后能够抑制miR-1，同时减少心律失常.Zhang等[23]研究证明，在结扎乳鼠左前降支前(LAD)，将丹参酮ⅡA平均每天给药，结扎之后，再持续给药3个月，并将其心肌细胞持续24 h暴露在O2与N2的混合气体条件下，来模拟体内缺血细胞.用Western Blot检测蛋白质表达，同时通过PCR定量评价 miR-1的水平.结果表明，丹参酮ⅡA能够通过改善心脏功能解除缺血损伤.此外，在缺血缺氧的心肌细胞中，丹参酮ⅡA能够抑制活化的p38 MAPK和心脏的特殊转录因子SRF与Mef2.预处理的p38 MAPK抑制剂SB203580(10 μm)，显著缓解缺氧诱导miR-1的增量，并恢复其下游Cx43蛋白的表达.实验数据表明，丹参酮ⅡA发挥作用保护心肌细胞免受缺血缺氧损伤.这种作用是通过p38 MAPK信号通路抑制miR-1的表达.这可能为缺血性心肌保护提供了新的目标.3.2.3 改善微循环，增加血流量隐丹参酮能够改善微循环，增加血流量.Francis等[24]研究发现隐丹参酮对大鼠的冠状动脉有舒张作用，在血管平滑肌细胞中Ca2+内流被抑制，并且在介导此作用中发挥了最为关键的作用，质量浓度为30 μg/mL的隐丹参酮拮抗由Ca2+诱导的血管收缩可达59%，从而改善血液流变学.3.2.4 对脑血管的影响VEGF及其受体(VEGFR)系统在发生脑缺血后可被低氧激活，来加强血管增生和新生血管的形成，促进受累组织供氧量及血流灌注，降低神经元凋亡率，进而缓解脑损伤程度.缺血与再灌注间大脑皮层内激素-1基因的表达被丹参酮部分抑制，这也许是在大脑局部缺血与再灌注之间形成一个保护机制.张文建等[25]通过培养纯化的主要人类大脑微血管内皮细胞(HBMVEC)建立了BBB 模型来研究丹参酮ⅡA对人体血脑屏障 (BBB)的白细胞相关缺氧复氧损伤的体外影响.结果显示，BBB 模型对HRP下丘脑调节性多肽比融合性的HUVECs有较高的TEER 和较低的渗透性.对于HRP BBB的渗透性通过缺氧复氧被加强，同时在复氧前增加活化白细胞上清液也能增强.但是在缺氧前添加丹参酮ⅡA后这样的影响被颠倒.而且，丹参酮ⅡA能够降低血清MMP-9，TNF-α，IL-1α，IL-2，IFN-γ和白细胞活性氧水平.总之丹参酮ⅡA通过减弱白细胞活化和抑制白细胞产品的损伤能够保护BBB免受白细胞相关缺氧复氧损伤.因此丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤可能是一种新的治疗剂.王昕[26]发现丹参酮ⅡA能够有效抑制细胞内脂质过氧化产物与 DNA 的相互作用.通过消除脂类自由基从而阻断脂质过氧化的链式反应来保护DNA，对DNA加成物的生成有抑制作用，进而降低其细胞毒性.心肌线粒体膜脂质过氧化途径中生成的脂类自由基，可以被丹参酮有效消除，保护了线粒体的呼吸作用.革兰氏阳性细菌能够被隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参酸甲酯、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡB5种丹参酮类成分显著抑制.强喆等[27-28]选用大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌等几种常见致病菌作为实验用菌种，测定总丹参酮包合物对各实验菌株的抑制效果，并采用杯碟法测定体外抑菌活性，琼脂稀释法测定最小抑菌质量浓度(MIC).结果表明，总丹参酮包合物对各实验菌株均有不同程度的抑制效果，其中金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌和停乳链球菌的抑制效果显著，此外实验将丹参总脂溶性成分的提取物制备成包合物水溶液，更大程度上发挥了丹参酮的抑菌活性，为丹参抗菌制剂的进一步开发奠定基础.唐涛等[29]选用在小鼠腹腔内的巨噬细胞系RAW264.7刺激靶细胞，采用不同剂量的丹参酮ⅡA刺激RAW264.7细胞系，于24，48 h后，采用MTT比色和半定量RT-PCR测定经过刺激处理后的细胞.结果显示，产生炎症细胞的增殖明显受到丹参酮ⅡA的抑制，半抑制浓度(IC50)为43.2 μmol/L；半定量RT-PCR检测表明，磷脂酶A2受到丹参酮ⅡA的抑制，进而缓解炎症.同时隐丹参酮也具有抗炎作用.Jiang等[30]研究指出PF2401-SF(丹参标准化质量分数)：丹参酮Ⅰ(11.5%)，丹参酮ⅡA(41.0%)，和隐丹参酮(19.1%)在体内和体外均具有潜在的抗炎作用，并证实PF2401-SF在RAW264.7细胞中对脂多糖(LPS)诱导的一氧化氮(NO)产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达显示出消炎效力.此外，还评估PF2401-SF能显著降低右旋糖酐诱导的大鼠急性关节炎的炎症.从药用植物中筛选药物是新药开发的主要手段之一.丹参酮是丹参的有效成分之一，除具有传统的活血调经、祛瘀止痛、养心安神功效外，近年来对其抗氧化、抗菌、抗炎、治疗心脑血管疾病、抗肿瘤等药理作用的研究日趋深入，使其拥有非常广阔的应用前景.目前，中药药材长期粗放式种植导致产量和化学成分逐年下降，质量得不到保证，因此要保证丹参酮的产量须全面考察不同种植条件对丹参药用成分含量及品质的影响，普及中药现代化种植，并且加强对丹参提取纯化，合成制备技术的研发，以期更好地利用丹参的药理作用，建立丹参酮的系统研究.【相关文献】[1]BI W T,TIAN M L,ROW K H,et al.Extraction and concentration of tanshinones in salvia milti orrhiza Bunge by task-specific non-ionic surfactant assistance[J].Food Chem,2011,126(4):1988.[2] 刘延上.丹参中丹参酮的提取工艺研究[D].成都:西南交通大学,2010.LIU Yanshang.Studied on the tanshinone extraction from radix salviae miltiorrhizae[D].Che ngdu:Southwest Jiaotong University, 2010.[3] 贺建东,付廷明,郭立玮.丹参脂溶性成分的湿式超微粉碎提取[J].时珍国医国药,2008,19(11):2690.HE Jiandong,FU Tingming,GUO Liwei.Extraction of fat-soluble components 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丹参酮的提取及应用进展摘要:丹参是一种中国传统草药, 丹参酮IIA是丹参的主要活性成分之一,是发挥药理活性的基础。
该文章就近5年来有关丹参酮的提取、含量测定和生物活性的研究成果和药理研究现状及其在临床上的应用进行综述，为全面开发利用丹参提供参考。
关键词: 丹参酮IIA；提取及测定；临床应用；药理作用Abstract：Salvia is a traditional Chinese herbal medicine, Tan IIA is one of the main active ingredient in Salvia, is to play a fundamental pharmacological activity. This article summarize about the extract of Tan、content determination、the research results of biological activities and pharmacological status quo for clinical application related to the nearest five years, To provide a reference for the comprehensive development and utilization of Salvia.Keywords: Tan; extract measurement; clinical application; pharmacologic action丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrh iza Bge。
的干燥根及根茎,主产于河北、安徽、江苏、四川等地。
其化学成分分为脂溶性和水溶性两部分,前者以丹参酮型的二萜类化合物为主,主要有丹参酮I、丹参酮IIA ( tan IIA )、丹参酮IIB、隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参羟甲酯、二氢丹参酮I,以及异丹参酮I、异丹参酮II、异隐丹参酮、二氢异丹参酮I;后者主要为酚酸类化合物, 包括丹参素 (丹参酸甲 ), 原儿茶醛, 丹参酸乙、丹参酸丙、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等[ 1 ]。
其中丹参酮IIA是脂溶性成分的代表, 集中分布在丹参根的皮部, 木质部的分布甚微或没有, 通过韧皮部纵向运输, 不能横向运输到木质部中去[ 2,]。
本文就近年来国内外对丹参酮IIA的研究现状及药理作用以及临床应用作一综述,为丹参的进一步开发利用提供理论依据。
1、丹参酮 IIA 的提取参酮IIA 的充分浸出提取是含量准确测定的前提,因此提取方法的研究对于丹参酮IIA的含量测定非常重要, 但是有关提取方法的系统研究报道尚不多见。
现将主要的提取方法概括如下。
1.1 醇提法：由于丹参酮IIA不溶于水,多用乙醇提取,包括乙醇渗滤法和回流法。
①渗滤法: 黄琳等[3]采用正交实验考察4因素 (乙醇浓度、浸泡时间、提取时间和温度)对丹参酮IIA提取率的影响,提取温度、浸泡时间、提取时间、醇浓度( 70% ~ 90% )和乙醇用量对提取率均有影响。
使用高浓度( 90% )的醇溶剂、加温 ( 80 ~ 87 ) 、浸泡时间延长(6h)可相应缩短提取时间(2h),可获得丹参酮IIA。
但因丹参脂溶性成分对热不稳定,醇提后处理工序(贮放、回收乙醇、浓缩、干燥 )是丹参酮IIA热降解损失的主要工序, 因此加热时间范围内应控制在2~ 4h[4]。
②回流法: 于纯淼等[5]采用乙醇加热回流法,通过单因素实验和正交实验获得提取丹参酮的最佳提取条件为:丹参粉碎后过4号筛, 乙醇浓度为75%,提取温度为65,提取时间为2.5h,料液比为124。
杨广德等[6]通过正交实验确定了最佳提取溶剂倍量、回流时间和回流次数。
考察试验中,由于溶剂用量超过7倍后,丹参酮IIA提取量无显著差异,考虑到大规模生产时的成本与资源利用等因素,选择用7倍量溶剂进行提取较为合适。
1.2 超声提取法:超声能产生空化效应,具有粉碎、搅拌等特殊作用,使丹参根植物组织在溶剂中瞬时产生的空化泡崩溃,而使组织中的细胞破裂,有利于溶剂渗透进植物细胞内部,使细胞中的有效成分进入溶剂中,加速相互渗透、溶解, 提高溶解度。
超声提取丹参酮,称取6份5g丹参粉,加入75%乙醇溶液120 ml称重,分别用40KHz超声波提取10，20，30，40，50和60 min。
实验结果表明,利用超声波法 (1次,30min)从丹参中提取丹参酮IIA的提取率比加热回流法(1次,150min)的提取率高约l1% ,且无需加热。
用甲醇为提取液,超声提取40min,平均回收率为99.3%,RSD = 1.2%。
王猛等[7]用正交实验法分别考察3种提取方法 (冷浸法、热回流法、超声法 )对丹参药材提取液中丹参酮IIA含量的影响, 优选出丹参酮IIA的最佳提取工艺: 4倍量95%乙醇超声2次,30 min /次,丹参酮IIA 在25. 2~ 126μg /ml范围内良好线性关系。
本法具有实验设备简单,操作方便,提取无需加热、时间短,提取率高、污染少等特点,优于传统的醇提法,可增加药材的利用率。
1.3 索氏提取法:将丹参粉末用滤纸包好放进索式提取器里,再将一定量的苯放入圆底烧杯中,在水浴加热下将苯蒸出 ,通过索式提取器冷凝后, 热的苯溶液流入索式提取器中,浸泡装有药品的滤纸包,重复操作,直至索式提取器里的热苯溶液为无色。
用旋转蒸发器将溶液中的苯蒸出,残留物为丹参酮IIA。
1.4 微波提取法:微波提取是一项新兴的技术,加热升温快、能耗低、选择性好,应用于中药提取具有穿透力强、选择性高等显著特点。
称取已粉碎的丹参药材10g,加入6倍量95%乙醇微波提取30min,微波功率320W进行微波回流提取然后按照药典法醇提。
1.5 超临界CO2萃取( SFECO2萃取):超临界CO2流体萃取技术是近 20年来发展起来的在分离域出现的一种新技术,它与常规溶剂萃取的区别是选用一种称为超临界流体(SF)的物质代替有机溶剂作为萃取剂。
它是利用在临界点四周,体系温度和压力的微小变化可导致物质溶解度发生几个数量级的突变的特性实现物质的分离。
该法具有无毒、快速、廉价、低温操作等优点。
宋启煌等[ 8 ]采用超临界CO2萃取法提取了丹参酮IIA，讨论了压力、温度、时间、乙醇流量对丹参酮IIA 提取收率的影响。
优化最佳条件为:萃取压力25MPa, 萃取温度40℃ , 萃取时间2 h,乙醇流量1.0 ml/min, 并得出超临界CO2萃取法优于乙醇提取法的结论。
2、药理作用及作用机制2.1 抗肿瘤作用2.1.1 抑制肿瘤细胞的增殖肿瘤细胞具有持续的增殖能力, 抗增殖能力是抗肿瘤药物的一个重要作用靶点。
王修杰等[9]用0.5μg/ml的Tsn II A 作用于SMMC- 7721细胞4 d后, 结果显示,丹参酮可将细胞阻滞于G0/G1期,抑制细胞进入S期和DNA合成期,从而抑制细胞生长增殖。
Mosaddik MA研究了在0.25 g L- 1质量浓度下4种不同的丹参酮成分对小鼠类淋巴细胞白血病细胞(P388)的作用。
结果显示,丹参酮IA和丹参酮IIA对P388细胞的生长抑制率为86.76%和56.05%,具有很强的细胞杀伤作用,而结构在C15上不饱和的隐丹参酮和二氢丹参酮I,对P388细胞的生长抑制率仅分别为13.7% 和39.21%。
王冬等[10]采用体外宫颈癌细胞培养方法以0 ~ 8.0μg/mL浓度的丹参酮IIA作用Hela细胞,72 h后观察细胞生长抑制情况,发现0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μg/mL不同浓度的丹参酮II A对细胞生长的抑制率分别17.23%、24.27%、31.75%、39.37%和55.45%,与对照组差异有显著性(P < 0. 01 )。
表明丹参酮II A对宫颈癌细胞生长有明显的抑制作用。
2.1.2 诱导肿瘤细胞的分化诱导分化(inducing differentiation)治疗恶性肿瘤是肿瘤治疗的新途径,主要是通过诱导剂的作用使肿瘤的恶性表型受到控制,甚至逆转为正常的细胞表型,恢复细胞的某些正常功能,同时对正常细胞无杀伤作用,且少有骨髓抑制等副作用。
以0.5mg /L丹参酮IIA处理APL细胞株NB4细胞作为阳性对照,将耐维甲酸的APL细胞株MR2细胞与1.0mg/L丹参酮IIA在体外共同培养4d,观察细胞生长状况、形态变化,检测药物作用前后细胞四氮唑蓝(NBT)还原能力及细胞增殖周期、cmyc、bcl-2、p53、c-fos、CD33及CD11b表达水平。
丹参酮IIA处理后,MR2、NB4细胞形态趋于成熟粒细胞,表现为细胞体积变小,核浆比例缩小,染色质变粗糙,核仁消失,细胞质内嗜苯胺蓝颗粒消失,核形态不规则,可见晚幼粒细胞,且丹参酮IIA处理NB4 细胞后可见杆状核粒细胞。
NBT还原实验显示,丹参酮IIA处理MR2、NB4组阳性率分别为(95.30±0.76)% 、( 93.20±1.04)% ,而相应空白对照组分别为( 3. 50±1.32)% 、( 2. 80±0.29)% ,处理组高于对照组(P < 0.01)。
流式细胞术( FCM )分析发现,丹参酮IIA处理MR-2、NB4细胞后CD33表达下降, CD11b表达升高;处理后的细胞G0/G1期比例增高,S期细胞降低,细胞增殖指数下降(P < 0 01 ); p53、c-fos基因蛋白表达升高, bc-l2、cm -yc基因蛋白表达降低(P < 0.01 )。
结果表明, MR-2细胞生长受到明显抑制(P < 0.01), 抑制率为73.5% ; 0.5 mg /L丹参酮IIA能抑制NB4细胞生长(P < 0.01),抑制率为67.7%,丹参酮IIA对两者的抑制作用无统计学差异(P >0.05)。
其机制可能是调控MR-2细胞与增殖、分化相关的癌基因表达,抑制DNA合成,从而抑制细胞生长,诱导细胞分化。
2.1.3 促进肿瘤细胞的凋亡细胞凋亡(apoptosis)是基因调控下细胞程序化死亡(programmed cell death),即在一定的生理或病理条件下,保持正常细胞的增殖、分化和凋亡的平衡, 而肿瘤细胞无限增殖、分化受阻、凋亡被抑制。
刘伟等[ 11 ]研究丹参酮 A对人卵巢癌细胞株 (CAOV3)增殖和凋亡的作用,MTT实验显示丹参酮IIA对CAOV3细胞增殖有明显抑制作用,免疫沉淀法显示丹参酮IIA可抑制ERK活性,流式细胞术显示丹参酮IIA可诱导CAOV3细胞凋亡,免疫印记法显示丹参酮IIA上调Bax,同时降低bcl-2表达,使Bax /bcl-2比值增加。