实验12-微生物菌种常用简易保藏法
保藏微生物的方法
1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。
实验室菌种保藏的方法
实验室菌种保藏的方法菌种是主要的生物资源，也是食用菌生产首要的生产资料。
一个优良的菌种被选育出来以后，必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变，才不至于降低生产性能，能长期在生产中使用。
因此，菌种保藏在食用菌生产上具有重要的意义。
各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。
一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。
下面介绍几种常用的菌种保藏方法：1斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4。
C左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。
此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。
放线菌、霉菌和有芽匏的细菌一般可保存6个月左右，无芽抱的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。
如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4。
C冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。
这一改进可使菌种的保藏期延长。
此法由于采用低温保藏，大大减缓了微生物的代谢繁殖速度，降低突变频率；同时也减少了培养基的水分蒸发，使其不至于干裂。
该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。
其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。
2石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端IC明使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4。
C冰箱内保藏。
使用的液体石蜡要求优质无毒，化学纯规格，其灭菌条件是：150〜170。
C烘箱内灭菌Ih;或121。
C高压蒸汽灭菌60〜80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分。
关于菌种的保存方法
关于菌种的保存方法导言菌种的保存是保障微生物研究的重要环节。
微生物资源的丧失对生物科技研究以及工业发展都会带来严重的影响。
因此，科学有效地保存菌种对于保护和利用微生物资源至关重要。
本文将介绍常见的菌种保存方法和技术，旨在帮助科学家和研究人员更好地保存和利用菌种资源。
常见菌种保存方法常温冷冻保存法常温冷冻保存是一种方便简单、成本低廉的菌种保存方法。
常见的常温冷冻保存方法有以下几种：1. 菌种液体冷冻保存：将菌种培养物添加到一定浓度的甘油或乙二醇溶液中，并将其储存于-80的冷冻库中。
这种方法可使菌种长期保存，并保持较高的存活率。
2. 菌种冻干保存：将菌种培养物培养到稳定的菌落状态后，直接将其放入真空冷冻干燥机中，去除菌种中的水分，然后存放于常温下。
这种方法适用于一些耐冷冻干燥的菌种。
3. 菌种在琼脂平板上保存：将菌种制备成沉淀后，均匀涂布在琼脂平板上，经过一定的处理后存放于室温下。
这种方法适用于一些菌种，如革兰氏阳性菌。
低温冷冻保存法低温冷冻保存是较为常用的一种菌种保存方法。
常见的低温冷冻保存方法有以下几种：1. 液氮冷冻保存：将菌种培养物中的菌液通过快速冷冻的方法将其冻结成冷冻物，并储存在液氮罐中。
这种保存方式可以确保菌种较好地保存，并且存活率较高。
2. 低温保存箱保存：将菌种培养物制备成菌种沉淀后，将其存放于-20或-80的低温保存箱中。
这种方法适用于一些需要长期保存的菌种。
菌种保存技术无菌操作在菌种保存的过程中，无菌操作是非常重要的。
无菌操作可以有效避免细菌污染，确保保存的菌种的纯度和保存质量。
1. 工作台的消毒：在进行菌种保存操作之前，需要将工作台表面进行消毒处理，如用75%的酒精擦拭表面。
2. 实验器具的灭菌：将实验器具在高温或高压条件下进行灭菌处理，以确保无菌操作的进行。
3. 空气的灭菌：在无菌操作的环境下，可以通过紫外线灭菌等方法来净化空气，避免空气中的微生物污染。
菌种保存记录在菌种保存的过程中，正确记录菌种保存的相关信息非常重要。
常用菌种保藏方法
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所一、保藏方法大致可分为以下几种：1、传代培养保藏法细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5、冷冻保藏法-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
二、器材:细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与 100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
微生物菌种常规保藏技术规程
微生物菌种常规保藏技术规程一、前言微生物菌种的保藏是微生物研究中非常重要的一环，它对于保障菌种的长期保存和研究使用具有重要的意义。
本技术规程旨在规范微生物菌种的常规保藏技术，确保其安全、稳定和可持续使用。
二、常规保藏技术1. 冻干法（Lyophilization）：将培养的微生物菌株悬液在前冷冻过程中给予低温、高真空条件，使其中的水分直接从冰态升华为气态，从而避免了常规冻存法中由于结冰时水晶体的生成对菌体的危害，从而达到保存微生物菌株的目的。
操作步骤：a. 微生物培养物经适当稀释后应当倒入试管中，滴入约1ml 20%乳糖溶液在表面形成一层薄膜，待乳糖凝固后，在加入4ml 0.5-0.7%匀浆的2%干燥乳铁粉液，将试管摇匀，再灌入16ml混合液保持无气泡，放置于冰浴上。
b. 待培养物温度达到0摄氏度，再清洗喷雾器，灌入76％露醇20ml，培养物放入冷板上，适当时间后将试管封口放入冷板上经杀菌后真空泵连接，把真空泵打开，通过真空泵提供的条件慢慢降低压强，一般12小时后真空泵关闭。
c. 提供适当温度下作干燥处理，通常使用倍耐安减压干燥器空干40-80小时，干燥后的干燥灸试管，将试管放入吸气瓶中后置入-40—-50摄氏度低温冷冻管内低温保存(一般保存温度为—40摄氏度或更低)，备用空干矿温度—20摄氏度或更低。
2. 酶解冻存法（Enzymatic freezing）：在培养基中添加蔗糖，结合酶解冻存方法，经冻干后的菌种耐冻性和储存时间明显提高。
操作步骤：a. 将微生物分别接种于琼脂平板上，预培养24小时，取2-3份储备品。
菌液于冻干菊花瓶中进行前冷冻，真空抽气消耗20分钟。
b. 平均地用EP管管接受，采用3次“起冻—冷冻”的方法完全冻干，最后0.1至0.3ml真菌液在5摄氏下冷冻6小时，然后在5摄氏下还原18小时。
c. 移除冻存，延长试验保存时间。
必须在-80摄氏下保存。
3. 液氮冻存法（Liquid nitrogen freezing）：液氮冷冻法是现在应用最广泛的冷冻保存方法，在液氮的作用下，微生物菌种在-196摄氏度下冷冻，保持良好的生物活性。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。
菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。
(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理菌种保藏的方法很多。
其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。
使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。
依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。
一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。
3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。
3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。
在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。
在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。
5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。
5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。
这种方法一船可保藏三个月至半年。
5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。
菌种保存方法
菌种保存方法菌种保存是微生物学研究中非常重要的一环，它可以保证菌种的长期保存和稳定性，为科研工作提供了可靠的保障。
下面将介绍几种常见的菌种保存方法。
首先，冷冻保存是最常见的菌种保存方法之一。
冷冻保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物在-80℃以下的低温条件下保存。
在保存前，需要将菌种悬浮液加入一定比例的保护剂，如甘油或DMSO，以增加菌种的冷冻耐受性。
冷冻保存不仅简单易行，而且保存时间长，可以保存数年甚至更长时间。
其次，干燥保存也是一种常用的菌种保存方法。
干燥保存是指将培养好的菌种用干燥剂或者真空干燥的方法将菌种完全脱水，然后保存在低温、低湿的条件下。
这种方法保存的菌种可以在常温条件下保存，并且保存时间也相对较长。
另外，液氮保存也是一种非常有效的菌种保存方法。
液氮保存是指将培养好的菌种悬浮液或培养物直接存放在液氮罐中保存。
由于液氮的温度极低，可以有效地阻止微生物的代谢和生长，因此保存效果非常好。
但是在使用液氮保存时需要注意安全问题，操作人员要具备相关的安全知识和技能。
最后，冷冻干燥保存也是一种常见的菌种保存方法。
冷冻干燥保存是将培养好的菌种在低温条件下冷冻，然后通过真空干燥的方法将菌种脱水保存。
这种方法既兼具冷冻保存和干燥保存的优点，保存效果非常好，被广泛应用于微生物学研究中。
综上所述，菌种保存方法有很多种，选择合适的保存方法需要根据具体的实验要求和条件来确定。
无论采用何种保存方法，都需要严格按照操作规程来进行，以确保菌种的保存质量和稳定性。
希望本文介绍的菌种保存方法对大家有所帮助。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。
微生物菌种的保存方法
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传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的`。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
三、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。
菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。
(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理菌种保藏的方法很多。
其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。
使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。
依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。
一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。
3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。
3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l 毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。
在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。
在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。
5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。
5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。
这种方法一船可保藏三个月至半年。
5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在一定的条件下，以确保其持久的存活和繁殖能力。
微生物菌种的保藏可以用于科学研究、工业应用和生物资源保护等领域。
本文将介绍微生物菌种保藏的原理和方法。
微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保藏、干燥保藏和液氮冷冻保藏等。
冷冻保藏是将微生物菌种保存在低温条件下，常见的温度为-70℃或-80℃。
低温可以减缓微生物的新陈代谢过程，降低细胞内酶的活性，从而延缓细胞的老化和死亡。
冷冻保藏的关键是要使用适当的保藏液，如冻干保藏液、甘油保藏液等，以保护细胞在冷冻过程中的完整性和活力。
干燥保藏是将微生物菌种保存在无水或低水分条件下。
干燥可以通过脱水或真空干燥等方法实现。
干燥保藏的原理是通过降低细胞内水分含量，使微生物处于休眠状态，从而延缓细胞的代谢活动和老化过程。
干燥保藏的关键是要选择适当的干燥剂，如硅胶、脱水剂等，以吸附和吸收细胞内的水分。
液氮冷冻保藏是将微生物菌种保存在液氮温度下，常见的温度为-196℃。
液氮冷冻保藏的原理是通过极低的温度和极低的氧气浓度，使微生物处于极度低温和低代谢状态，从而延缓细胞的老化和死亡。
液氮冷冻保藏的关键是要使用适当的冷冻容器，如液氮罐、冷冻管等，以确保微生物菌种的长期保存。
微生物菌种保藏的方法包括冻干法、冷冻法、液氮冷冻法等。
冻干法是将微生物菌种培养物冻干后保存。
冻干法的步骤包括培养微生物菌种、制备冻干保藏液、将菌种混合冻干保藏液后冻干、密封保存。
冻干法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。
冷冻法是将微生物菌种保存在低温条件下。
冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备冷冻保藏液、将菌种混合冷冻保藏液后冷冻、保存在低温条件下。
冷冻法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。
液氮冷冻法是将微生物菌种保存在液氮温度下。
液氮冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备液氮保藏液、将菌种混合液氮保藏液后保存在液氮温度下。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下，以保证其长期存活和遗传特性的保持。
微生物菌种的保藏有着重要的科研意义和应用价值，可以用于微生物学研究、新药研发、环境修复等领域。
微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保存和冷冻干燥保存两种方法。
冷冻保存是将微生物菌种存放在低温环境下，通过降低菌种代谢活动的速度来保持其存活和遗传特性。
冷冻保存的主要步骤包括选择合适的保藏液、培养菌种、制备冷冻物等。
保藏液一般是由无菌培养基和一定浓度的甘油或蔗糖组成，可以提供菌种所需的养分和保护菌体免受冷冻引起的损伤。
培养菌种时需要选择处于活跃生长期的菌株，通过适当的培养条件来使其保持较高的活力。
制备冷冻物时，可以将菌株转移到保藏液中，并在超低温环境下迅速冷冻。
冷冻干燥保存是将微生物菌种冻结后，通过真空干燥的方法除去水分，将菌种转变为无水状态，以提高其耐久性和保存时间。
冷冻干燥保存主要包括培养菌种、冻干物制备和密封保存等步骤。
培养菌种的方法与冷冻保存类似，选择合适的培养基和培养条件来培养活跃菌株。
冻干物制备时，将菌株转移到含有保护剂的培养基中，并通过冻结和真空干燥的过程除去水分，形成冻干物。
最后，将冻干物密封保存，避免受潮和污染。
微生物菌种保藏在实际操作中需要注意一些关键技术和管理要求。
首先，要确保保存的微生物菌株是原始菌株的纯种，并且具有所需的遗传特性。
其次，保藏液或冻干物储存容器应该具备良好的密封性能，以防止水分的进入和菌株的污染。
另外，保存的温度应该稳定在低温，通常为-80℃或更低的温度，以保证菌株的长期存活。
此外，对于长时间保存的菌株，应定期进行复苏培养，以确保其存活和活力。
总之，微生物菌种保藏是一项重要的技术，为微生物资源的保存和利用提供了有效的手段。
通过冷冻保存和冷冻干燥保存等方法，可以长期保留微生物菌种的遗传特性和活力，为微生物学研究和应用提供了可靠的资源。
在实际操作中，应遵循正确的步骤和管理要求，以确保菌种的质量和保存效果。
微生物实验菌种保藏方案
一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
常用菌种保藏方法
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
素而设计的。
一、保藏方法大致可分为以下几种：1、传代培养保藏法2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5、冷冻保藏法6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
二、器材:细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
三、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。
微生物菌种的保存方法
微生物菌种的保存方法微生物菌种如何保存呢?下面是小编收集整理的微生物菌种的保存方法，希望对您有所帮助!一、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如*奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产*菌种，则应在培养基中添加少量碳*钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传*状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原*、形成生理活*物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。
二、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳*杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)，置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。
(完整word)实验12-微生物菌种常用简易保藏法
实验15 微生物菌种保藏方法一、实验原理为了保持微生物菌种原有的各种优良特征及活力，使其存活，和丢失,不污染，不发生变异。
根据微生物自身的生物学特点，通过人为的创造条件,使微生物处于低温、干燥、缺氧的环境中，以使微生物的生长受到抑制，新陈代谢作用限制在最低范围内，生命活动基本处于休眠状态，从而达到保藏的目的。
常用简易保藏法包括常规转接斜面低温保藏法、半固体穿刺保藏法、液体石蜡保藏法、含甘油培养物保藏法及沙土管保藏法等。
由于这些保藏方法不需要特殊实验设备，操作简便易行，故为一般实验室及生产单位所广泛采用。
常规转接斜面低温保藏法和半固体穿刺保藏法是将在斜面或半固体培养基上已生长好的培养物置于4—5℃冰箱中保藏，并定期移植。
这两种方法都是利用低温抑制微生物生长繁殖，从而延长保藏时间。
液体石蜡保藏法是在新鲜的斜面培养物上,覆盖一层已灭菌的液体石蜡,再置于4—5℃冰箱中保藏。
液体石蜡主要起隔绝空气的作用,使外界空气不与培养物直接接触,从而降低对微生物氧的供应量。
培养物上面的液体石蜡层也能减少培养基水分的蒸发。
故此法是利用缺氧及低温双重抑制微生物生长，从而延长保藏时间。
含甘油培养物保藏法是在液体的新鲜培养物中加入15%已灭菌的甘油，然后再置于—20或-70℃冰箱内保藏。
此法是利用甘油作为保护剂，甘油透入细胞后，能强烈降低细胞的脱水作用，而且，在-20或—70℃条件下，可大降低细胞代谢水平，但却仍能维持生命活动状态，达到延长保藏时间的目的。
沙土管保藏法，将待保藏菌种接种于适当的斜面培养基上，经培养后，制后孢子悬浮液，无菌操作将孢子悬浮液滴入已灭菌的沙土管中,孢子即吸附在沙土上，将沙土管置于真空干燥器中，通过抽真空达到吸干沙土管中水分，然后将干燥器置于4℃冰箱中保存。
此法利用干燥、缺氧、缺乏营养、低温等因素综合抑制微生物生长繁殖，从而延长保藏时间.二、操作步骤(一）斜面传代保藏法l．贴标签取各种无菌斜面试管数支,将注有菌株名称和接种日期的标签贴上,贴在试管斜面的正上方，距试管口2～3cm处。
微生物菌种保藏原理与方法
3干燥保藏法
硅胶保藏法—丝状真菌。 方法：制备硅胶 制备菌液 加菌液 干 燥 收藏 恢复培养 麸皮保藏法—产孢子的丝状真菌。 制备麸皮培养基 培养菌种 干燥 收藏 恢复培养
4冷冻真空干燥保藏法
该法集中了菌种保藏中低温、缺氧、干燥和添 加保护剂等多种有利条件，是微生物代谢处于 相对静止状态。 该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、 （除少数不产孢子或只产生丝状体真菌外）、 酵母菌及病毒的保藏。 该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一般可 达10~20年），存活率高，是目前最有效的菌 种保藏方法之一。
贴标签 穿刺接种：将菌种直刺入直立柱中央 培养：同传代保藏法 收藏：待菌长好后，用浸有石蜡的无菌软木塞 或橡皮塞代替面塞并塞紧，置4 ℃冰箱中保藏， 保藏0.5~1年。
1.3石蜡油封法
石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超过总体 积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸汽灭菌（121 ℃ ，30min），连续灭菌2次。然后在40 ℃温箱中放置2 周或置105~110 ℃烘箱中烘2h，除去石蜡油中的水分。 培养 加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中，加入量 以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约1cm为宜。 收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种管直立 放置于4 ℃冰箱中。 放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌及不 产芽孢细菌可保1年。
2 甘油保藏法
方法步骤： 无菌甘油的制备：80%的甘油在121℃灭菌 20min 保藏培养物的制备：活化 纯化 性能检测 制备 菌种培养物 保藏菌悬液的制备：液体法 菌苔法 -20 ℃保 藏 快速冷冻；乙醇-干冰 液氮 超低温保藏：-70 ℃ 一般细菌、酵母保存期为 3~5年。
2 甘油保藏法
微生物保存方法
微生物保存方法
1.冷冻保存法：将细菌、酵母等微生物培养物混合冻存剂，放入冰箱中保存。
适用于保存一年及以下的微生物。
2. 低温保存法：将微生物培养物放入液氮中，降低温度进行保存。
适用于保存多年以上的微生物。
3. 干燥保存法：将微生物培养物在低温下冷冻干燥，然后放入密封袋中保存。
适用于保存一年及以下的微生物。
4. 真空保存法：将微生物培养物放入真空容器中，降低压力进行保存。
适用于保存一年及以下的微生物。
5. 加糖保存法：将微生物培养物加入糖溶液中，然后冷冻保存。
适用于保存酵母等微生物。
以上是常见的微生物保存方法，不同的保存方法适用于不同种类的微生物。
在选择保存方法时，需要考虑微生物的特性及实验需求。
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实验15 微生物菌种保藏方法
一、实验原理
为了保持微生物菌种原有的各种优良特征及活力，使其存活，和丢失，不污染，不发生变异。
根据微生物自身的生物学特点，通过人为的创造条件，使微生物处于低温、干燥、缺氧的环境中，以使微生物的生长受到抑制，新陈代谢作用限制在最低范围内，生命活动基本处于休眠状态，从而达到保藏的目的。
常用简易保藏法包括常规转接斜面低温保藏法、半固体穿刺保藏法、液体石蜡保藏法、含甘油培养物保藏法及沙土管保藏法等。
由于这些保藏方法不需要特殊实验设备，操作简便易行，故为一般实验室及生产单位所广泛采用。
常规转接斜面低温保藏法和半固体穿刺保藏法是将在斜面或半固体培养基上已生长好的培养物置于4-5℃冰箱中保藏，并定期移植。
这两种方法都是利用低温抑制微生物生长繁殖，从而延长保藏时间。
液体石蜡保藏法是在新鲜的斜面培养物上，覆盖一层已灭菌的液体石蜡，再置于4-5℃冰箱中保藏。
液体石蜡主要起隔绝空气的作用，使外界空气不与培养物直接接触，从而降低对微生物氧的供应量。
培养物上面的液体石蜡层也能减少培养基水分的蒸发。
故此法是利用缺氧及低温双重抑制微生物生长，从而延长保藏时间。
含甘油培养物保藏法是在液体的新鲜培养物中加入15%已灭菌的甘油，然后再置于-20或-70℃冰箱内保藏。
此法是利用甘油作为保护剂，甘油透入细胞后，能强烈降低细胞的脱水作用，而且，在-20或-70℃条件下，可大降低细胞代谢水平，但却仍能维持生命活动状态，达到延长保藏时间的目的。
沙土管保藏法，将待保藏菌种接种于适当的斜面培养基上，经培养后，制后孢子悬浮液，无菌操作将孢子悬浮液滴入已灭菌的沙土管中，孢子即吸附在沙土上，将沙土管置于真空干燥器中，通过抽真空达到吸干沙土管中水分，然后将干燥器置于4℃冰箱中保存。
此法利用干燥、缺氧、缺乏营养、低温等因素综合抑制微生物生长繁殖，从而延长保藏时间。
二、操作步骤
(一) 斜面传代保藏法
l．贴标签取各种无菌斜面试管数支，将注有菌株名称和接种日期的标签贴上，贴在试管斜面的正上方，距试管口2～3cm处。
2．斜面接种将待保藏的菌种用接种环以无菌操作法移接至相应的试管斜面上，细菌和酵母菌宜采用对数生长期的细胞，而放线菌和丝状真菌宜采用成熟的袍子。
3．培养细菌37℃恒温培养18～24h，酵母菌于28～30℃培养36～60h，放线菌和丝状真菌置于28℃培养4～7d。
4．保藏斜面长好后，可直接放入4℃冰箱保藏。
为防止棉塞受潮长杂菌，管口棉花应用牛皮纸包扎，或换上无菌胶塞，亦可用熔化的固体石蜡熔封棉塞或胶塞。
保藏时间依微生物种类而不同，酵母菌、霉菌、放线菌及有芽抱的细菌可保存2～6个月，移种一次；而不产芽孢的细菌最好每月移种一次。
此法的缺点是容易变异，污染杂菌的机会较多。
(二) 液体石蜡保藏法
l、液体石蜡灭菌在250mL三角烧瓶中装入100mL液体石蜡，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，12l℃湿热灭菌30min，于105～110℃烘箱中lh，以除去石蜡中的水分。
2、接种培养同斜面传代保藏法。
3、加液体石蜡用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌种斜面上，加入量以高出斜面顶端约1cm为宜。
4、保藏棉塞外包牛皮纸，将试管直立放置于4℃冰箱中保存。
利用这种保藏方法，霉菌、放线菌、有芽孢细菌可保藏2年左右，酵母菌可保藏1～2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。
5、恢复培养用接种环从液体石蜡下挑取少量菌种，在试管壁上轻靠几下，尽量使油滴净，再接种于新鲜培养基中培养。
由于菌体表面粘有液体石蜡，生长较慢且有粘性，故一般须转接2次才能获得良好菌种。
(三) 沙土管保藏法
l、沙土处理
(1)沙处理：取河沙经40目过筛，去除大颗粒，加10%HCl浸泡(用量以浸没沙面为宜)2～4h(或煮沸30min)，以除去有机杂质，然后倒去盐酸，用清水冲洗至中性，烘干或晒干，备用。
(2)土处理：取非耕作层瘦黄土(不含有机质)，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性，然后烘干，粉碎，用100目过筛，去除粗颗粒后备用。
2、装沙土管将沙与土按2:1，3:1或4：1(W/W)比例混合均匀装入试管中(10mm ×100mm，装置约7cm高，加棉塞，并外包牛皮纸，12l℃湿热灭菌30min，然后烘干。
3、无菌试验每10支沙土管任抽一支，取少许沙土接入牛肉膏蛋白胨或麦芽汁培养液中，在最适的温度下培养2～4d，确定无菌生长时才可使用。
若发现有杂菌，经重新灭菌后，再作无菌试验，直到合格。
4、制备菌液用5mL无菌吸管分别吸取3mL无菌水至待保藏的菌种斜面上，用接种环轻轻搅动，制成悬液。
5、加样用1mL吸管吸取上述菌悬液0.1～0.5mL加入沙土管中，用接种环拌匀。
加入菌液量以湿润沙土达2/3高度为宜。
6、干燥将含菌的沙土管放入干燥器中，干燥器内用培养皿盛P
2O
5
作为干燥剂，
可再用真空泵连续抽气3～4h，加速干燥。
将沙土管轻轻一拍，沙土呈分散状即达到充分干燥。
7、保藏沙土管可选择下列方法之一来保藏：
(1) 保存于干燥器中；
(2) 用石蜡封住棉花塞后放入冰箱保存；
(3) 将沙土管取出，管口用火焰熔封后放入冰箱保存；
等干燥剂的大试管中，塞上橡皮塞或木塞，再用蜡封
(4) 将沙土管装入有CaCl
2
口，放入冰箱中或室温下保存。
8．恢复培养使用时挑取少量混有孢子的沙土，接种于斜面培养基上，或液体培养基内培养即可，原沙土管仍可继续保藏。
此法适用于保藏能产生芽孢的细菌及形成孢子的霉菌和放线菌，可保存2年左右。
但不能用于保藏营养细胞。
(四) 含甘油培养物保藏法
1、首先将甘油配为80%浓度
2、将80%甘油按1ml/瓶的量分装到一甘油瓶(3ml)中，121℃灭菌20分钟。
3、将要保藏的菌种接种到新鲜的斜面(也可用液体培养基振荡培养成菌悬浮液)。
4、在培养好的斜面中注入少量无菌水，刮下斜面的培养物振荡，使细胞充分分散成均匀的悬浮液，并且细胞浓度约为108-1010/ml。
5、将菌悬液吸取1ml于上述装好的甘油的无菌甘油瓶中，充分混匀后，使甘油终浓度为40%，然后置-20℃(-80℃)保存，液体培养的菌液到对数期直接吸取1ml 于甘油瓶中。
三、实验报告
1、微生物菌种保藏的目的是什么？
2．试述上述菌种简易保藏法的优、缺点。
16周微生物菌种常用简易保藏法
试验准备：
斜面4支，甘油1瓶，液体石腊1瓶
17周微生物试验考试一
准备内容：
显微镜，中内点接法接种放线菌、酵母菌、细菌培养物各2个平板，霉菌平板6个，棉兰染液，吸水纸、擦镜纸、接种针，酒精及酒精灯，盖玻片、载玻片，标签纸
18周微生物试验考试二
准备内容：
霉菌、细菌菌种5各支、接种针，酒精及酒精灯，标签纸，PDA试管斜面培养基50支，无菌室，恒温培养箱等。
张镜
2005-6-6。